Chuẩn bị mẫu nghiên cứu
Mẫu nghiên cứu được xử lý theo quy trình được trình bày trong Hình 2.2
Hình 2.2: Quy trình chuẩn bị mẫu nghiên cứu Thuyết minh quy trình
Rửa
Mục đích: loại bỏ bụi bẩn, tạp chất.
Cách tiến hành: Vỏ thanh long sau khi bỏ ruột sẽ được rửa bằng nước sạch.
Cắt nhỏ
Mục đích: Giảm kích thước của vỏ thanh long, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình sấy loại ẩm.
Cách tiến hành: Vỏ thanh long được cắt nhỏ với kích thước khoảng 0.5×0.5×0.5 cm. Vỏ thanh long Rửa sạch Cắt nhỏ Sấy khô Nghiền mịn Bột vỏ thanh long
Sấy khô
Mục đích: Loại ẩm
Cách tiến hành: Vỏ sau cắt được sấy bằng tủ sấy đối lưu qua đêm ở nhiệt độ 50ºC, đến khi khối lượng không đổi.
Nghiền mịn
Mục đích: Làm mịn vỏ thành dạng bột, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình trích ly.
Cách tiến hành: Vỏ sấy khô được nghiền bằng máy nghiền bột mịn.
Rây
Mục đích: Đồng nhất kích thước bột vỏ thanh long.
Cách tiến hành: Bột thô được rây qua sàng rây có đường kính 200 mm, chiều cao 50 mm, kích thước lỗ 0.125 mm.
Đóng gói – lạnh đông
Mục đích: bảo quản bột vỏ.
Cách tiến hành: Bột mịn sau khi rây được đóng trong từng túi zip nhỏ và lạnh đông bằng tủ đông -18ºC.
Bột vỏ thanh long bảo quản lạnh đông được sử dụng cho các thí nghiệm trích ly ở quy trình tiếp theo Hình 2.3.
Quy trình trích ly
Quy trình trích ly betacyanin và pectin từ vỏ thanh long bằng phương pháp trích ly hai pha nước được thực hiện theo quy trình trong Hình 2.4
Hình 2.4: Quy trình trích ly betacyanin và pectin từ vỏ thanh long Thuyết minh quy trình
Trích ly
Mục đích: Hòa trộn các hóa chất cần thiết, nguyên liệu để tạo thành hệ hai pha nước. Cách tiến hành: Cân muối amonium sulfate, PEG 6000, bột vỏ thanh long theo tỷ lệ khảo sát, thêm nước cất để định mức hỗn hợp đến 100% (w/w). Sau đó, hỗn hợp được lắc trên máy lắc vòng trong 15 phút để trộn đều dung dịch (Hình 2.5).
Hình 2.5: Hỗn hợp được tiến hành lắc trên máy lắc
Tách pha với phễu chiết
Mục đích: phân lập được betacyanin và pectin
Cách tiến hành: Sau khi lắc, cho hỗn hợp dung dịch vào phễu chiết, quan sát sự tách pha của hỗn hợp. Hỗn hợp sẽ tách thành hai pha như Hình 2.6. Với pha trên chứa betacyanin và pha dưới chứa pectin. Lần lượt thu dịch chiết pha trên và pha dưới. Ghi nhận thể tích của pha trên và pha dưới, xác định hàm lượng betacyanin trong từng pha ở bước sóng hấp thụ 538 nm.
Đối với pha trên chứa betacyanin
Ngâm chloroform
Mục đích: Loại bỏ PEG 6000 ra khỏi dung dịch.
Cách tiến hành: Bổ sung chloroform với một lượng bằng với thể tích dịch trích pha trên sau quá trình thích ly rồi lắc nhẹ trong vòng 30 giây và để yên trong vòng 15 phút. Hỗn hợp sẽ tách thành 2 pha, với pha trên chứa betacyanin và pha dưới chứa chloroform và PEG 6000. Sau đó dùng phễu chiết tách lấy phần trên chứa betacyanin để chuẩn bị cho bước tiếp theo.
Ngâm ethanol 99.5%
Mục đích: Loại bỏ muối amonium sulfate trong dung dịch.
Cách tiến hành: Bổ sung một lượng ethanol tuyệt đối gấp đôi thể tích vào pha trên chứa betacyanin vừa thu được từ quá trình ngâm chloroform, để yên qua đêm ở nhiệt độ 4oC trong bóng tối. Amonium sulfate kết tinh dưới đáy dung dịch. Lọc dung dịch bằng giấy lọc để loại bỏ muối và thu phần dịch lỏng chứa betacyanin (Chethana & cộng sự, 2007).
Cô đặc
Mục đích: Loại bỏ ethanol ra khỏi dung dịch, cô đặc dịch trích.
Cách tiến hành: Thu hồi dung môi ethanol bằng máy cô quay ở 55oC, áp suất giảm.
Đối với pha dưới chứa pectin
Ly tâm
Mục đích: Tách hoàn toàn lớp cặn ra khỏi dung dịch, làm tăng độ trong cho dung dịch, tránh dẫn đến sai số khi xác định lượng pectin thu được.
Cách tiến hành: Lấy dung dịch pha dưới chứa pectin cho vào hai ống ly tâm riêng biệt, sau đó ly tâm với tốc độ 4000 vòng/phút trong thời gian 10 phút.
Ngâm chloroform
Mục đích: Loại PEG 6000 ra khỏi hỗn hợp.
Cách tiến hành: Cho một lượng chloroform bằng với thể tích l dịch trích thu được ở pha dưới sau khi ly tâm, rồi lắc nhẹ trong vòng 30 giây. Hỗn hợp sẽ tách thành 2 pha, với pha trên chứa pectin và pha dưới chứa chloroform và PEG 6000. Sau đó dùng phễu chiết tách lấy phần trên chứa pectin để chuẩn bị cho bước tiếp theo.
Ngâm ethanol 80% và lọc
Cách tiến hành: bổ sung một lượng ethanol 80% gấp đôi lượng dịch trích thu được sau khi ngâm chloroform và để trong vòng 4 giờ. Sau đó được lọc lại để thu huyền phù. Tiếp tục ngâm và lọc, với tần suất 3 lần, 4 giờ/1 lần.
Sấy
Mục đích: Loại bỏ ethanol và ẩm, tạo điều kiện cho quá trình bảo quản
Cách tiến hành: Sau quá trình ngâm – lọc, pectin được sấy khô bằng tủ sấy đối lưu với nhiệt độ 60ºC, đến khối lượng không đổi.