Đối với nhiều lại cây trồng để nhân giống người ta sử dụng những lát mỏng cắt từ những mơ cịn non như đoạn thân non, thịt quả non, củ v.v...
Thí nghiệm cho thấy trong nhiều trường hợp phương pháp này cho kết quả rất tốt. Một trong những trường hợp như vậy là đối với vảy hành của cây Huệ tây, hay cây Lys (Lilium longiflorum). Chúng ta hãy làm quen với phương pháp này.
Vật liệu nuơi cấy là những củ lys đã thành thục thu từ những cây khỏe mạnh khơng cĩ các triệu chứng nhiễm virus.
Sau khi rửa sạch củ, tách các vảy lớp ngồi và khử trùng bằng chloramin 5%, HgCl2 0,1% hay một chất khử trùng bất kỳ thường được dùng trong kỹ thuật nuơi cấy mơ. Sau đĩ rửa lại nhiều lần bằng nước cất vơ trùng. Mỗi vảy được đặt vào một đĩa Petri vơ trùng trong tủ cấy đang hoạt động và cắt theo chiều ngang thành nhiều lát dày 1 – 3 mm và cấy vào mơi trường với tư thế vảy nằm ngửa (mặt trong của vảy hướng lên trên). Cần lưu ý rằng tư thế của mẫu cấy ảnh hưởng rất lớn đến khả năng tái sinh cây con của lát cắt. Thí nghiệm cho thấy các tư thế khác của mẫu cấy cĩ khả năng tái sinh cây con thấp hơn nhiều. Mỗi mẫu được cấy vào một ống nghiệm. Nếu dùng bình tam giác 250ml thì mỗi bình cĩ thể cấy 10 – 15 mẫu.
trường MS. Tất cả các mơi trường đa lượng này đều cần được bổ sung vi lượng Heller, vitamin Morel, 100mg/l inositol, 20g/l saccharose và 10g/l agar. Điều kiện thuận lợi nhất cho tái sinh và sinh trưởng của cây Lys trong ống nghiệm là nhiệt độ 18 – 20oC và chế độ chiếu sáng 2500 – 3000 lux 16 giờ mỗi ngày.
Sau khi cấy khoảng 15 ngày mẫu cấy chuyển dần sang màu lục và trên mẫu cấy bắt đầu xuất hiện các khối u. Những khối u này lớn dần, sau khoảng 30 ngày từ chúng hình thành các củ dạng hành li ti và cuối cùng những củ này phát triển thành cây hồn chỉnh. Trong nhiều trường hợp các tế bào của khối u phát triển thành các cụm chồi. Cĩ thể tách và cấy chuyền nhiều lần những cụm chồi này để tạo ra một số lượng lớn cây con. Trong trường hợp này để tăng khả năng nhân cụm chồi cần bổ sung vào mơi trường dinh dưỡng 2,0mg/l 2,4D hoặc một trong các tổ hợp phytohormone sau đây: 1/ 1,0mg/l 2,4D + 15% V dịch chiết chuối xanh; 2/ 1,0mg/l 2,4D + 0,5mg/l BAP; 3/ 2,0mg/l NAA + 0,5mg/l BAP.
Hình 3.Sơ đồ quy trình nhân giống Lys trong ống nghiệm
Để thúc đẩy sinh trưởng cây con, các cụm chồi nên được cấy chuyền sang mơi trường đa lượng MS + vi lượng Heller + vitamin Morel và một trong 4 loại phytohormone sau đây: 1/ 0,1mg/l 2,4D; 2/ 0,5mg/l NAA; 3/ 1,0mg/l BAP; 4/ 5% V dịch chiết chuối xanh.
Việc cấy chuyền cũng cĩ thể thực hiện với các vảy hành lấy từ các cây con tái sinh trong ống nghiệm.
Sau khoảng 2 tháng cĩ thể thu được các cây con hồn chỉnh để đem ra trồng ngồi vườn ươm trên mơi trường giàu mùn để lấy củ giống cấp một. Những cây con này cần được trồng trong điều kiện che nắng 50%, hàng ngày tưới dung dịch Knop 50% và áp dụng chế độ phịng trừ sâu bệnh thích hợp. Sau một số thế hệ trồng ngồi đồng sẽ thu được các củ đủ lớn dùng để sản xuất hoa thương phẩm.
Sơ đồ quy trình nhân giống Lys trong ống nghiệm được trình bày trong hình 3.