2.5.8.1. Mục đích
Việc bố trí thời gian thích hợp nhằm để tận thu được lượng sinh khối nấm men cao nhất, đồng thời cũng nhằm tiết kiệm thời gian và chi phí lên men.
2.5.8.2. Cách tiến hành
Chuẩn bị 4 mẫu thí nghiệm.
Lên men ở cùng điều kiện: - Khối lượng mẫu: 5g.
- Tỷ lệ nấm men thích hợp cho lên men ethanol (KQTN 6). - Nhiệt độ lên men: nhiệt độ phòng.
- pH môi trường thích hợp cho lên men ethanol (KQTN 7).
Cân 5 g rong Nâu khô đã được xử lý, xay nhỏ. Cho vào bình tam giác 250ml. Sau đó cho thêm 100ml nước cất, 2 ml dung dịch acid H2SO4 đậm đặc. Tiến hành bọc kín bình, đem thủy phân trong nồi thanh trùng ở nhiệt độ 1200C , trong thời gian 120 phút, sau đó trung hòa, điều chỉnh pH = 4.5, bổ sung 12ml enzyme viscozyme, đem thủy phân ở nhiệt độ 55 0C/ 45h. Tiếp đó lọc loại bã và trung hòa lượng acid trong dịch bằng dung dịch NaOH 20% với chỉ thị là dung dịch phenolphtalein 1%. Rồi điều chỉnh pH môi trường bằng dung dịch đệm CH3COOH/CH3COONa có pH thích hợp xác định ở thí nghiệm 2. Tiếp theo, bổ sung nấm men với tỷ lệ tương ứng kết quả thí nghiệm 1. Đem mẫu lên men ở nhiệt độ phòng với thời gian lên men tương ứng là 2; 3; 4; 5; 6 ngày. Chú ý phải khuấy đảo dịch lên men trong 24h đầu. Sau đó đem mẫu đi chưng cất ethanol bằng thiết bị cô quay chân không với số vòng quay 30 vòng/phút, nhiệt độ 500C, áp suất <100 mbar và thời gian cô quay là 60 phút. Tiến hành xác định thể tích dịch thu hồi, xác định hàm lượng đường khử còn còn lại. Sau khi có kết quả đánh giá, lựa chọn mẫu cho hàm lượng đường còn lại thấp nhất.
2.5.8.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Hình 2.13. Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian lên men etanol thích hợp.
Chưng cất Điều chỉnh pH
Kiểm tra lượng đường còn lại
Lên men Bổ sung nấm men
2 ngày 3 ngày 4 ngày 5 ngày 6 ngày
Thời gian lên men thích hợp
Dịch rong Nâu sau thủy phân đã trung hòa
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN