5. Khử lưu huỳnh, sinh H2S (cĩ màu đen)
Hình 5.6.Thử nghiệm indol
Trên môi trường LDC, Salmonella phát triển sẽ làm đục và chuyển màu môi trường sang tím hay đỏ tía[LDC (+)], LDC (-) khi môi trường có màu vàng.
Thử nghiệm urea
Thực hiện trên mơi trường urea lỏng RSU chứa chỉ thị đỏ phenol, chuyển màu từ vàng sang đỏ (vùng chuyển màu là pH 6,8 - 8,4). Cĩ thể sử dụng mơi trường urea thạch cơ bản cĩ bổ sung urea.
Lấy đầy một que cấy vịng từ khuẩn lạc trên mơi trường TSA vào ống chứa 3ml-5ml mơi trường RSU vơ trùng, lắc nhẹ ống để trộn đều vi khuẩn và ủ ở 37oC trong 48 giờ.
Salmonella khơng phân giải urea nên khơng làm thay đổi pH mơi trường; nếu phản ứng dương tính, việc phân giải ure sẽ giải phĩng NH3 làm đổi màu phenol red sang màu hoa hồng và sau đĩ chuyển sang màu đỏ tím.
Thử nghiệm VP
Hịa một vịng que cấy đầy từ khuẩn lạc trên mơi trường TSA vào các ống mơi trường MR-VP ủ ở 37oC trong 24 giờ.
Sau thời gian ủ, lấy 0,2 ml dịch cấy vào 01 ống nghiệm, thêm 02 giọt creatin, 06 giọt dung dịch 1- naphthol trong cồn, sau đĩ thêm 02 giọt KOH 40%, việc xuất hiện màu hồng đến màu đỏ tươi trong vịng 15 phút là phản ứng dương tính
Salmonella cho phản ứng âm tính với thử nghiệm VP, khơng đổi màu trên bề mặt mơi trường. Thử nghiệm VP (+) khi cĩ màu đỏ trên bề mặt mơi trường.
Thử nghiệm indol
Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống nghiệm chứa 5 ml mơi trường TW, nuơi37oC ± trong 24 giờ.
Sau nuơi, thêm 1 ml thuốc thử Kovacs. Phản ứng dương tính khi cĩ vịng đỏ trên bề mặt mơi trường.
Thử nghiệm β-galactosidase
Hịa một vịng que cấy đầy từ khuẩn lạc nghi ngờ vào ống nghiệm cĩ 0,25ml nước muối 0,85%, thả một đĩa giấy ONPG vào ống nghiệm, đặt ống nghiệm vào nồi cách thủy
37 ± 1 oC, để yên vài phút, đọc kết quả. Phản ứng dương tính đổi màu mơi trường sang vàng
Thử nghiệm kháng huyết thanh
VP (-) VP (+)
Hình 5.5. Thử nghiệmVP
Urea (-) Urea (+) Hình5.4. Thử nghiệm Urea
Cho một giọt dung dịch nước muối sinh lý lên một phiến kính đã rửa sạch. Dàn đều khuẩn lạc cần thử nghiệm trong giọt dung dịch sao cho thu được một thể huyền phù đục đồng nhất. Lắc nhẹ phiến kính trong 30-60 giây.
Quan sát kết quả trên nền tối, tốt nhất nên dùng kính lúp.
Nếu các vi khuẩn vĩn lại thành các đơn vị ít nhiều cĩ kết dính thì chủng này được coi là tự kết dính và khơng cần phải thử tiếp vì việc phát hiện kháng nguyên khơng thể thực hiện được.
+ Kiểm tra kháng nguyên O:
Sử dụng một khuẩn lạc thuần khiết khơng tự ngưng kết, tiến hành như phương pháp kiểm tra sự tự kết dính ở trên, bằng cách thay một giọt kháng huyết thanh O thay cho dung dịch nước muối.
Nếu xuất hiện dính kết, phản ứng được coi là dương tính. Sử dụng tuần tự một kháng huyết thanh đa giá và đơn giá.
+ Kiểm tra kháng nguyên Vi:
Tiến hành như phương pháp kiểm tra sự tự kết dính bằng cách thay một giọt huyết thanh Vi thay cho dung dịch nước muối.
Nếu xuất hiện dính kết, phản ứng coi là dương tính. + Kiểm tra kháng nguyên H:
Cấy từ 1 khuẩn lạc khơng tự dính kết thuần khiết lên thạch dinh dưỡng thể nữa đặc (phần dính kèm), ủ ấm 18-24 giờ, 37±1oC.
Dùng giống này để kiểm tra kháng nguyên H, tiến hành như phương pháp kiểm tra sự tự dính kết, nhưng sử dụng một giọt kháng huyết thanh H thay cho dung dịch nước muối sinh lý.
Nếu xuất hiện dính kết, phản ứng coi là dương tính.
LƯU Ý
Cĩ thể sử dụng kháng huyết thanh đa giá OMA, OMB để phát hiện sự cĩ mặt của các kháng nguyên Salmonella. Trên 98% các chủng Salmonella cho phản ứng ngưng kết với một trong hai kháng huyết thanh OMA, OMB. Do vậy khi thấy cĩ sự dính kết với một trong hai kháng huyết thanh đa giá trên cĩ thể kết luận là Salmonella.
5.3.4.Kết quả
Với quy trình kiểm nghiệm này cho phép kết luận cĩ hay khơng cĩ Salmonella được phát hiện trong 25g mẫu
5.4.Câu hỏi ơn tập
1. Nêu các bước trong quy trình phân tích Salmonella
2. Vai trị của mơi trường tăng sinh BPW ?
6. Giải thích tại sao khuẩn lạc Salmonella cĩ thể cĩ tâm đen?
7. Trình bày các phản ứng sinh hĩa dùng trong phân tích Salmonella: tên mơi trường, hĩa chất, kết quả, giải thích kết quả.
6. PHÂN TÍCH STAPHYLOCOCCUS AUREUS