Cặp mồi PM3 được Feng thiết kế theo kết quả giải trỡnh tự gen hormon sinh trưởng gà của Tanaka và cộng sự (1992). Mồi xuụi bắt đầu từ nucleotid
-189 và mồi ngược bắt đầu từ nucleotid +391. Do vậy đoạn gen được nhõn lờn sẽ cú chiều dài 580 bp. Nhưng kết quả thu được cho thấy đoạn gen được nhõn lờn bằng cặp mồi PM3 của cỏc giống gà: Ri, Mớa, ỏc, Hồ đều cú kớch thước khoảng 770 bp, lớn hơn kớch thước dự đoỏn gần 200 bp. Kết quả nhõn đoạn gen hormon sinh trưởng gà bằng cặp mồi PM3 được thể hiện trờn hỡnh 3.1.
M 1 2 3 4 5 6 M
Hỡnh 3.1: Kết quả nhõn đoạn gen hormon sinh trưởng gà bằng cặp mồi PM3
M: marker 5, x 174 cắt bằng HincII 1-2 gà Ri; 3 - 4 gà Mớa; 5 gà ỏc; 6 gà Hồ
Kết quả này phự hợp với kết quả nghiờn cứu của Mou và cộng sự (1995) [79]. Mou và cộng sự, sử dụng mồi xuụi bắt đầu từ nucleotid -236 và mồi ngược từ nucleotid +391 để nhõn đoạn gen hormon sinh trưởng của 2 dũng gà thịt và 3 dũng Leghorn trắng đó thu được đoạn cú kớch thước lớn hơn dự đoỏn khoảng 200 bp. Sau khi giải trỡnh tự ở một dũng gà thịt, Mou và cộng sự đó phỏt hiện ra đoạn gen được nhõn lờn cú kớch thước lớn hơn 196 bp và nú chốn vào nucleotid +308.
Theo kết quả nghiờn cứu của cỏc tỏc giả Fotouhi (1993); Kuhnlein (1994, 1997) và Mou (1995) thỡ trong đoạn gen này của cỏc dũng gà hướng thịt cũng như hướng trứng của nước ngoài chỉ cú một điểm cắt đa hỡnh MspI ở nucleotid +173 và một điểm cắt khụng đa hỡnh ở nucleotid +48 [50], [69], [68], [79]. Như vậy nếu cắt đoạn gen này bằng MspI thỡ tối đa cú thể thu được 4 băng trong trường hợp dị hợp tử và tối thiểu là 2 băng trong trường hợp đồng hợp tử khụng cú điểm cắt đa hỡnh. Kết quả được miờu tả ở hỡnh 3.2.
-189 +48 +173 +391 5’ 3’ a) 237 bp 343 bp b) 237 bp 125 bp 218 bp c) 237 bp 125 bp 218 bp 343 bp
Hình 3.2: Các băng dự kiến thu đ-ợc khi cắt đoạn gen hormon sinh tr-ởng gà nhân lên bằng cặp mồi PM3 bởi enzym MspI
a: Đồng hợp tử không có điểm cắt đa hình b: Đồng hợp tử có điểm cắt đa hình
c: Dị hợp tử
Nh-ng kết quả thu đ-ợc khi sử dụng MspI cắt đoạn gen đ-ợc nhân lên bằng cặp mồi PM3 của các giống gà Việt Nam là rất đa hình.
Nh- vậy khả năng đoạn gen hormon sinh tr-ởng nhân lên từ cặp mồi PM3 của các giống gà Việt Nam không chỉ lớn hơn kích th-ớc dự đoán, mà trong đoạn gen này có thể còn xuất hiện một số điểm cắt đa hình khác. Kết qủa này phù hợp với kết quả nghiên cứu của Leung và cộng sự (1999) khi phân tích intron 1 của gen hormon sinh tr-ởng ở các giống gà địa ph-ơng của Trung Quốc bằng enzym MspI thấy mức độ đa hình rất cao [74].
Qua những kết quả trên cho thấy để có thể xác định đ-ợc các kiểu gen hormon sinh tr-ởng bằng cách sử dụng enzym giới hạn cắt sản phẩm PCR thì phải giải trình tự đoạn gen đ-ợc nhân lên bằng cặp mồi PM3 của các giống gà Việt Nam để xác định chính xác độ dài của đoạn gen này.
D-ới đây là kết quả giải trình tự đoạn gen đ-ợc nhân lên bằng cặp mồi PM3 của các giống gà nội.