II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U
3.5.1.Kết quả tinh chế kháng nguyên virus
Từ 6 chủng virus được lựa chọn và từ phương pháp trình bày như trên chúng tôi đã tiến hành tinh chế kháng nguyên virus bằng máy siêu ly tâm và gradient đường Saccarose. Kết quả đã thu được protein kháng nguyên của 6 chủng virus khác nhau. (Ảnh minh hoạ)
Hình 30. Chuẩn bị kháng nguyên tinh chế
Hình 31. Tạo gradient đường saccarose
Hình 32. Chuẩn bị mẫu cho siêu ly tâm
Hình 33. Máy siêu ly tâm
Việc tinh chế kháng nguyên virus có ý nghĩa quan trọng đối với việc chế tạo kháng thể vì kháng nguyên càng tinh khiết bao nhiêu thì kháng thể tạo ra càng đặc hiệu bấy nhiêu. Các chủng virus mà chúng tôi phân lập được được
73
nhân lên trong môi trường tế bào chính vì vậy không tránh khỏi các thành phần của tế bào, nếu được đưa vào cơ thể sống thì nó cũng như một kháng nguyên sẽ kích thích cơ thể sản sinh kháng thể. Đồng thời việc sử dụng gradient đường kết hợp ly tâm tốc độ cao cho phép tách các thành phần có độ
lớn khác nhau và cho phép thu được protein kháng nguyên của virus Care ở
một vị trí nhất định trên cột gradient. Tạo được protein kháng nguyên tinh khiết sẽ là cơ sở cho bước gây miễn dịch để chế kháng thể có độđặc hiệu cao.
Để kiểm tra kết quả tinh chế protein kháng nguyên, chúng tôi tiếp tục tiến hành định lượng protein kháng nguyên thu được bằng máy Quang phổ nhiệt khả kiến ở bước sóng 200nm đến 560nm và thu được hàm lượng protein kháng nguyên cao.
Bảng 3.15. Kết quả tinh chế kháng nguyên virus Chủng
virus Nguồn gốc TCID50 Đặnuôi cc tính ấy Vtrong cây sinh ị trí phân loại học phân tử Nồng độ kháng nguyên (mg/ml) CDV1P Cần Thơ 6,67x104 Ổn định Asia 1 1 CDV6H TP HCM 6,67x104 Ổn định Asia 1 1 CDV13R Âu cơ -Thụy Khuê Hà Nội 6,67x104 Ổn định Asia 1 1 CDV16H Thái Bình 6,67x104 Ổn định Classic 0.5 CDV19P Hanvet – Hà Nội 6,67x104 Ổn định Classic 2 CDVVX Onderstepoort 6,67x104 Ổn định vacxin 1.5
Các kháng nguyên tinh chếđược có hàm lượng tương đối cao và ổn định qua các lần thí nghiệm khác nhau. Như vậy các chủng virus được lựa chọn tinh chế kháng nguyên có hiệu giá virus cao cho hiệu quả tinh chế tốt và hàm lượng protein kháng nguyên cao. Quy trình tinh chế kháng nguyên như trên là thích hợp cho việc tinh chế kháng nguyên của virus CDV.
74