Phương phỏp HPLC

- Nhiệt độ khớ vào 55oC.

3.1.2. Phương phỏp HPLC

A. Khảo sỏt tớnh tương thớch của hệ thống

Tiến hành tiờm lặp lại 6 lần dung dịch glipizid chuẩn hỗn hợp đó chuẩn bị ở trờn, ghi lại cỏc giỏ trị về thời gian lƣu, diện tớch pic. Độ lặp lại của hệ thống đƣợc biểu thị bằng độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD. Kết quả đƣợc ghi trong bảng 3.10.

Bảng 3.10. Kết quả kiểm tra sự phự hợp của phương phỏp sắc ký

STT

Glipizid

Thời gian lƣu Diện tớch pic Hệ số bất đối xứng tR (phỳt) Spic (mAU) (T) 1 3,77 5313641,00 1,59 2 3,78 5357148,00 1,60 3 3,80 5323048,00 1,60 4 3,81 5545611,00 1,61 5 3,77 5534229,00 1,59 6 3,79 5358367,00 1,59 TB 3,78 5405340,67 1,60 SD 0,01 105828,11 0,01 RSD (%) 0,39 1,96 0,51

Nhận xột: Từ kết quả cho thấy, RSD của thời gian lƣu và diện tớch pic đều nhỏ hơn 2%. Điều kiện HPLC cho độ lặp lại tốt về thời gian lƣu, diện tớch pic và hệ số bất đối xứng đối với cả 2 thành phần phõn tớch. Hệ thống tƣơng thớch với qui trỡnh định lƣợng.

B. Thẩm định qui trỡnh phõn tớch * Tớnh đặc hiệu

Chạy sắc ký đồ của mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử, ghi lại diện tớch pic và thời gian lƣu của cỏc pic của glipizid, kết quả đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.11.

40

Bảng 3.11. Khảo sỏt tớnh đặc hiệu của phương phỏp định lượng glipizid

Glipizid

Diện tớch pic (mAU) Thời gian lƣu (phỳt) Hệ số bất đối xứng (T)

Mẫu chuẩn 5372007,30 3,78 1,61

Mẫu thử 5290014,70 3,77 1,62

Hỡnh 3.8. Sắc ký đồ: a – mẫu trắng, b- mẫu chuẩn, c – mẫu thử

Nhận xột: Trờn sắc ký đồ ta thấy pic tỏch hoàn toàn, cỏc pic cõn đối, thời gian lƣu của glipizid là 3,8 phỳt, điều này cho phộp định lƣợng dựa vào diện tớch pic là phự hợp, xỏc định chớnh xỏc hàm lƣợng dƣợc chất trong mẫu thuốc.

* Tớnh tuyến tớnh,

Pha dóy dung dịch chuẩn glipizid cú nồng độ lần lƣợt là 0,5,1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20g/ml. Chạy sắc ký với pha động nhƣ trờn và đo diện tớch pic. Kết quả đƣợc trỡnh bày ở bảng 3.12 và hỡnh 3.9.

a.

b.

41

Bảng 3.12. Sự phụ thuộc tuyến tớnh giữa nồng độ và diện tớch pic.

Nồng độ

(àg/ml) Diện tớch pic(mAU) Nồng độ

(àg/ml) Diện tớch pic (mAU)

0,5 300159,3 8 4332575,7

1 555935,0 10 5297945,7

2 1087499,3 12 6292494,3

4 2131288,3 15 8190341,0

6 3167359,3 20 10687658,3