- Hình thái vi thể thận:
b. Định tính alcaloid bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoạ
3.3.4.5. pH: 5, 0 7,0 (dung dịch 1% trong nước).
3.3.4.6. Định tính:
* Mẫu nghiên cứu: Lấy khoảng 0,4 g bột cao khô Phụ tử, cho vào bình
nón dung tích 50 ml có nút mài, thấm ẩm bằng amoniac đặc. Sau 10 phút
thêm 20 ml ether ethylic (TT), lắc đều, nút kín và để yên 30 phút, thỉnh thoảng lắc. Gạn lấy lớp ether, làm khan bằng natri sulfat khan, lọc, bốc hơi dịch lọc trên cách thuỷ tới khô được cắn. Hoà tan cắn thu được bằng 5 ml dung dịch H2S04 10%, cho vào 3 ống nghiệm. Định tính bằng TT Mayer, TT Bouchardat và TT Dragendorff.
* Kết quảđịnh tính alcaloid bằng phản ứng hoá học cho thấy: các mẫu nghiên cứu đều cho phản ứng dương tính với 3 thuốc thử chung của alcaloid.
b. Định tính alcaloid bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại
* Mẫu nghiên cứu:
Lấy khoảng 1 g bột cao khô Phụ tử, thêm 30 ml ether và 5 ml dung dịch amoniac, lắc trong 20 phút, lọc. Dịch lọc cho vào bình gạn, thêm 20 ml dung dịch H2SO4 0,5 N lắc mạnh, để yên cho tách lớp, gạn lấy dịch acid. Lấy 1 ml dịch chiết acid pha loãng đến vừa đủ 10 ml; hoà tan aconitin chuẩn trong dung dịch H2SO4 0,5 N với nồng độ thích hợp. Quét phổ hấp thụ tử
ngoại của các dung dịch chuẩn và thửở bước sóng từ 200 – 300 nm. Kết quả phổ tử ngoại của cao khô Phụ tửđược ghi ở Hình 3.34
273.4231.8 231.8 200 250 300nm cao kho PT 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 Abs
Hình 3.34. Phổ UV của alcaloid trong cao khô Phụ tử
Kết quả ở Hình 3.34 cho thấy: Phổ tử ngoại của alcaloid cao khô Phụ
tử cho hấp thụ cực đại ở bước sóng 231 và 274 nm.
Căn cứ kết quả nghiên cứu, cao khô Phụ tử phải cho phản ứng dương tính với thuốc thử chung của alcaloid và phổ hấp thụ tử ngoại của alcaloid có hấp thụ cực đại ở bước sóng 231 và 274 nm.
3.3.2.7. Giới hạn diester alcaloid:
Căn cứ kết quả nghiên cứu hàm lượng diester alcaloid trong cao khô Phụ tử 0,18±0,02%, chế phẩm được quy định chứa không quá 0,40% diester alcaloid theo aconitin tính trên chế phẩm khô kiệt.
3.3.2.8. Giới hạn aconitin:
Định lượng aconitin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Sắc ký đồđịnh lượng aconitin trong cao khô Phụ tửđược nêu ở Hình 3.35
Hình 3.35.Sắc ký đồđịnh lượng aconitin trong cao khô Phụ tử
Căn cứ kết quả nghiên cứu hàm lượng aconitin trong cao khô Phụ tử
bằng không, Chế phẩm được quy định chứa không quá 0,025% aconitin tính trên chế phẩm khô kiệt
3.3.2.9. Định lượng:
Căn cứ kết quả định lượng alcaloid toàn phần trong cao khô Phụ tử
2,39±0,05%, Chế phẩm phải chứa ít nhất 1,5% alcaloid toàn phần theo aconitin (C34H47NO11) tính trên chế phẩm khô kiệt.
3.3.2.10. Giới hạn nhiễm khuẩn: Đạt yêu cầu mức 4 - phụ lục 10.7, DĐVN III. III.