4. Thời gian thực hiện
3.3. Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng adenine sulfate đến thành thục hóa tiền
không sử dụng NAA trong môi trường nuôi cấy. Trong các dòng khảo sát thì dòng 31, 54 đáp ứng tốt nhất với sự phối hợp 1mg/l BA, không có mặt NAA trong môi trường.
Trong nuôi cấy mô thực vật, auxin và cytokinin cần thiết cho sự phân chia tế bào. Auxin kích thích sự dãn của tế bào, sự hình thành mô sẹo và rễ bất định. Cytokinin kích thích sự phân chia tế bào và quyết định sự phân hoá chồi. Sự phối hợp giữa NAA và BA cũng cho kết quả tốt trong việc tạo chồi trong nuôi cấy mô. Khi nuôi cấy giống lai ở Ornithogalum nhận thấy số chồi tăng lên đáng kể khi sử dụng kết hợp NAA 0,5 mg/l và BA 1,5 ng/l (Jeung-Keun Suh và cs, 2005). Khi nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ và cách phối hợp hormon trong cảm ứng mô sẹo và tạo chồi ở cây ba gạc Ấn độ (Rauwolfia serpentina L.) hiệu quả của sự phối hợp NAA với BA cũng được ghi nhận. Cảm ứng tạo mô sẹo tỉ lệ cao khi nuôi cấy khúc cắt mắt invitro trên môi trường MS có bổ sung 2mg/l NAA và 0,5 mg/l BA. Mô sẹo này sẽ tạo chồi bất định khi cấy sang môi trường MS có bổ sung 2 mg/l BA và 0,2 mg/l NAA.
3.3. Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng adenine sulfate đến thành thục hóa tiền phôi tiền phôi
Sử dụng môi trường LVM cho quá trình thành thục hoá tế bào tiền phôi, bổ sung thêm Adenine sulfate theo các nồng độ như bảng 2.3. Kết quả thu được như sau:
Dòng số 2
Bảng 3.13. Số lượng phôi soma trung bình của dòng 2 dưới ảnh hưởng của các nồng độ adenine sulfate (các chữ cái a, b là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ adenine sulfate (mg/l)
Số phôi soma trung bình/ đĩa cấy 0 6,67 ± 0,88 a 20 7,33 ± 0,88 a 40 10,33 ± 0,88 ab 60 12,00 ± 1,16 b 80 11,67 ± 1,76 b 100 9,67 ± 1,20 ab Dòng số 6
Bảng 3.14. Số lượng phôi soma trung bình của dòng 6 dưới ảnh hưởng của các nồng độ adenine sulfate (các chữ cái a, b là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ adenine sulfate (mg/l)
Số phôi soma trung bình/ đĩa cấy 0 4,67 ± 0,88 a 20 5,33 ± 0,88 a 40 6,33 ± 0,67 ab 60 6,67 ± 0.33 ab 80 8,33 ± 0,33 b 100 5,33 ± 0,33 a Dòng số 29
Bảng 3.15. Số lượng phôi soma trung bình của dòng 29 dưới ảnh hưởng của các nồng độ adenine sulfate (các chữ cái a,b là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ adenine sulfate (mg/l)
Số phôi soma trung bình/ đĩa cấy 0 5,33 ± 0,67 a 20 6,33 ± 1,20 a 40 6,00 ± 1.16 a 60 6.67 ± 0.88 a 80 9,33 ± 0,33 b 100 6,00 ± 0,58 a
Adenin sulfate là một base purine, có tác dụng như cytokinin đối với thực vật: kích thích tổng hợp DNA, tăng cường phân chia tế bào. Adenine sulfate có thể kích thích tế bào phát triển và tăng cường khả năng hình thành rễ, kích thích sự biệt hóa của mô sẹo.
Qua số liệu trong các bảng 3.13, 3.14 và 3.15 cho thấy khi có bổ sung vào môi trường nuôi cấy adenine sulfate với các nồng độ thay đổi từ 20 – 100 mg/l thì hiệu quả tạo phôi ở các dòng tốt hơn là không có bổ sung. Trong các nghiêm thức thì nồng độ sử dụng từ 60 – 80 mg/l sẽ cho hiệu quả tạo phôi cao ở các dòng khảo sát. Sự khác biệt này so với các nghiệm thức còn lại là có ý nghĩa về mặt thống kê (phụ lục 14, 15 và 16). Nồng độ adenine sulate 80mg/l có vẻ phù hợp hơn là 60 mg/l trong hiệu quả tạo phôi ở các dòng. Khi tăng dần lượng adenine sulfate từ 20 mg/l lên tới 80 mg/l thì số phôi thu được gia tăng theo. Nếu tăng lượng adenine sulfate lên tới 100 mg/l thì hiệu quả tạo phôi không tăng mà còn có xu hướng giảm lại.
Khi nghiên cứu ảnh hưởng của adenine sulfate đến nhân nhanh cây lát hoa (Chukrasia tabularis A. Juss) in vitro cho thấy bổ sung 3mg/l adenine sulfate vào môi trường MS kích thích phát sinh chồi có thân lá phát triển trong môi trường nuôi cấy không bổ sung nước dừa (Lê Xuân Ái và cs, 2007).
Trong nghiên cứu tạo phôi vô tính từ Mussaenda erythrophylla L: sử dụng môi trường MS bổ sung 8,9 µM BA + 0,57µM IAA +10 mg/l ABA. Phôi vô tính
phát triển và tạo thành cây trên môi trường MS ½ bổ sung 37 µM adenine sulphate với 2% (w/v) sucrose. Adenin sulphate kết hợp với BA làm giảm số lượng rễ (Das và cs, 1993).