4. Thời gian thực hiện
3.2.Thí nghiệm 2: Nghiên cứu hiệu quả NAA, BA đến tăng sinh khối tế bào tiền
tiền phôi
Sử dụng môi trường LVM để tăng sinh khối có bổ sung NAA kết hợp BA theo các nồng độ tương ứng của từng nghiệm thức. Kết quả thu được về sự gia tăng sinh khối tế bào tiền phôi ở các dòng khảo sát như sau :
Dòng số 6
Bảng 3.7. Sinh khối tăng trung bình của dòng 6 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e, f là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg) 0 0 437,78 ± 3,23 c 623,33 ± 6,00 d 1 0 392,22 ± 2,77 b 590,00 ± 2,88 c 1 1 458,89 ± 4,23 d 660,00 ± 3,72 e 3 1 571,11 ± 4,84 f 688,89 ± 3,09 f 5 1 470,00 ± 2,88 e 515,56 ± 3,37 b 7 1 354,44 ± 9,45 a 426,67 ± 4,08 a Dòng số 31
Bảng 3.8. Sinh khối tăng trung bình của dòng 31 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg)
1 0 365,56 ± 5,30 e 616,67 ± 5,27d 1 1 250 ,00 ± 2,88 c 293,33 ± 2,88c 3 1 238,89 ± 3,09 c 256,67 ± 2,35b 5 1 180,00 ± 3,72b 208,89 ± 3,09 a 7 1 211,11 ± 4,54 a 218,89 ± 3,88 a Dòng số 44
Bảng 3.9. Sinh khối tăng trung bình của dòng 44 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg)
0 0 301,11 ± 3,09 a 322,22 ± 2,77 a 1 0 393,33 ± 3,33 e 400,00 ± 2,35 e 1 1 382,22 ± 3.64 d 393,33 ± 4,08 de 3 1 348,89 ± 2,60 b 356,67 ± 3,33 b 5 1 364,44 ± 3,76 c 366.67 ± 2,88 c 7 1 375,56 ± 5,30 d 384,44 ± 3,76 d
Dòng số 54
Bảng 3.10.Sinh khối tăng trung bình của dòng 54 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e, f là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg)
0 0 406,67 ± 3,72 e 582,22 ± 4,00 e 1 0 566,67 ± 4,41 f 881,11 ± 4,54 f 1 1 376,67 ± 4,08 d 411,11 ± 4,23 d 3 1 332,22 ± 2.77 c 343,33 ± 2,35 c 5 1 312,22 ± 4,64 b 332,22 ± 3,23 b 7 1 277,78 ± 2,77 a 283,33 ±1,66 a Dòng số 2
Bảng 3.11. Sinh khối tăng trung bình của dòng 2 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg)
0 0 215,56 ± 3,76 c 220,00 ± 3,33 d 1 0 407,78 ± 2.77 d 408,89 ± 3,09 e 1 1 207,78 ± 4,64 c 208,89 ± 3,51 c 3 1 176,67 ± 2,35 b 184,44 ± 2,94 b 5 1 172,22 ± 3.23 ab 175,56 ± 1,75 a 7 1 165,56 ± 3,37 a 168,89 ± 2,60 a
Dòng số 29
Bảng 3.12. Sinh khối tăng trung bình của dòng 29 khi khảo sát hiệu quả của BA và NAA (các chữ a, b, c, d, e là mức độ sai khác có ý nghĩa thống kê ở mức 95%).
Nồng độ BA (mg/l)
Nồng độ NAA (mg/l)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 1 tuần nuôi cấy (mg)
Khối lượng tiền phôi tăng trung bình sau 2 tuần nuôi cấy (mg)
0 0 425,56 ± 2,42 d 447,78 ± 2,22 d 1 0 464,44 ± 2,94 e 482,22 ± 3,23 e 1 1 394,44 ± 2,42 c 393,33 ± 2,88 c 3 1 392,22 ± 2,22 c 392,22 ± 2,77 c 5 1 324,44 ± 3,76 b 330, 00 ± 3,72 b 7 1 276,67 ± 2,35 a 281,11 ± 2,60 a
Qua các số liệu thu được trong các bảng 3.7, 3.8, 3.9, 3.10, 3.11và 3.12 khi khảo sát các dòng cho thấy khi bổ sung BA (1m/l) kết hợp không bổ sung NAA thì đạt hiệu quả tăng sinh khối cao nhất ở đa số các dòng sau một tuần nuôi cấy. Sang tuần thứ 2, sinh khối tế bào trong nghiệm thức này tiếp tục tăng so với tuần đầu tiên. Sự khác biệt giữa nghiệm thức này và các nghiệm thức còn lại là có ý nghĩa về mặt thống kê (phụ lục 8, 9,10,11,12 và 13). Tuy nhiên, điều này không phải xảy ra ở tất cả các dòng, có dòng tăng sinh khối cao nhất khi bổ sung vào môi trường nuôi cấy 3 mg/l BA và 1 mg/l NAA (dòng số 6). Sự khác nhau này có thể là do sự phản ứng khác nhau của mỗi kiểu gen ở từng dòng. So với nghiệm thức đối chứng thì bổ sung các auxin (NAA) và cytokinin (BA) thì không phải là luôn luôn có hiệu quả hơn. Hầu hết các dòng ( 2, 29, 31, 54) khi có mặt đồng thời NAA và BA sự tăng sinh khối tế bào kém hơn là không có cả hai trong môi trường.
Khi đã cố định nồng độ auxin NAA là 1mg/l lúc đó thấy rằng nếu tăng dần nồng độ của cytokinin BA lên trong các nghiệm thức tiếp theo thì hiệu quả tăng
sinh khối của tế bào sau 1 tuần có xu hướng giảm lại. Sang tuần thứ 2 khối lượng tế bào trong các nghiệm thức này hầu như không tăng thêm hoặc tăng không đáng kể.