4. Thời gian thực hiện
2.2.Vật liệu, dụng cụ và hóa chất
2.2.1 Vật liệu
Tiền phôi của 6 gia đình thông nhựa (Pinus merkusii jungh et de Vries ) được phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học thuộc Phân viện nghiên cứu khoa học Lâm nghiệp Nam Bộ cung cấp.
2.2.2. Dụng cụ thí nghiệm - Cân phân tích
- Cân điện tử
- Máy đo pH môi trường
- Máy lọc nước Direct-Q3 Millipore - Máy khuấy từ
- Đĩa petri - Ống flacon
- Ống corning 15 ml, 50 ml
- Micropippet 20 – 200 µl, 200 – 1000 µl và đầu típ các loại - Tủ cấy class II
- Nhíp 25 cm - Phễu Buchner
- Giấy lọc Whatman No.2 để cấy mẫu, giấy bạc hấp vô trùng. - Các dụng cụ thủy tinh phòng thí nghiệm.
2.2.3. Hóa chất
Hóa chất cơ bản cần thiết môi trường LVM (Livay và cộng sự, 1998): NH4NO3 820 mg.l-1, KNO3 950 mg.l-1, MgSO4 925 mg.l-1, KH2PO4 17 mg.l-1,
CaCl2 1,1 mg.l-1, KI 4,15 mg.l-1, H3BO3 31 mg.l-1, MnSO4 21 mg.l-1, ZnSO4 43 mg.l-1, Na2MoO4 1,25 mg.l-1, CuSO4.5H2O 0,5 mg.l-1, CoCl2 .6H2O 0,13 mg.l-1, 4 g/l Fe – EDTA, thiamine 0,1 mg.l-1, nicotine acid 0,5 mg.l-1, pyridoxyl 0,1 mg.l-1,
myo - inositol 10 mg.l-1.
Các hoá chất khác bổ sung vào môi trường cơ bản nuôi cấy và khảo sát như đường maltose, sucrose (Duchefa – Hà Lan), cas amino acid (Difco – Mỹ). PEG 8000 (Đài Loan), L- L- glutamine, than hoạt tính.
Các hormon sinh trưởng thực vật dùng trong các thí nghiệm: 2,4 –D (2,4- diclorophenoxyacetic ), BA (6- benzyl adenine), NAA (Naphthalene acid acetic), Adenine sulfate, ABA (Abscisis acid).