C 12H22O –H 2 O 12H20O10 –H 2 O 12H18O9 –H 2 O 36H50O25 Trùng hợp –H 2 O
c. Hóa chất sử dụng
2.4.2.2. Thao tác cấy nấm men và điều kiện nuôi cấy, xác định số lượng tế bào nấm men
nấm men
Hình 2.6: Sơ đồ bố trí thí nghiệm nuôi tăng sinh khối nấm men
Lấy 100ml môi trường đã chuẩn bị được chuyển vào bình tam giác 250ml. Tiến hành cấy nấm men của 1 ống giống vào môi trường này. Tiến hành nhân giống trong điều kiện:
• Nhiệt độ nuôi cấy là 25oC.
• Thời gian nhân giống khảo sát từ 4÷36 giờ. • Có sục khí oxy
Trong quá trình nuôi, ta phải định kì kiểm tra số lượng nấm men tăng sinh được với tần suất 4h/lần. Thao tác kiểm tra như sau: hút 5ml dịch nuôi cấy (chú ý hút ở đáy bình, vì ở đây lượng nấm men tập trung cao nhất), mang đi ly tâm ở tốc
Chọn thời gian thích hợp nhất để nuôi tăng sinh nấm men: khi nấm men đạt số lượng cao nhất và ở trạng thái cân bằng thì dừng.
Kết quả thu được.
Định kỳ kiểm tra số lượng nấm men với tần suất 4h/lần.
Cấy nấm men vào môi trường nuôi tăng sinh
Nuôi ở nhiệt độ thường có sục khí oxy Môi trường nuôi cấy nấm men.
độ 3000 vòng/phút trong 15 phút. Gạn lọc phần nước ở trên và cho nước cất vào để tiếp tục ly tâm, ly tâm đến khi lớp nước ở trên trong là được. Lần gạn nước cuối cùng, ta bổ sung nước cất sao cho bằng với thể tích ban đầu hút đi ly tâm. Sau đó tiến hành đếm dưới kính hiển vi nhờ buồng đếm.
Quy tắc đếm trên buồng đếm như sau:
X X
X
X X
Hình 2.7: Cấu tạo của buồng đếm
Buồng đếm gồm 25 ô lớn bằng nhau nhưđã vẽở trên, trong mỗi ô lớn có 16 ô nhỏ. Khi đếm, ta tiến hành đếm 5 ô đã được đánh dấu , sau đó lấy giá trị trung bình. Nếu số lượng nấm men quá nhiều, các tế bào nấm men nằm sát và chồng lên nhau, ta không đếm được thì tiến hành pha loãng bậc 10 đểđếm.
•Kết quả sau khi đếm được tính như sau: ) / ( 1000 * * ml tb V F A X = Trong đó:
X: Số tế bào nấm men trong 1ml dịch (tb/ml). F: Hệ số pha loãng.
V: Thể tích dịch hút đi ly tâm (ml).