+ Hút 1ml dịch tuỷ hoặc máu ngoại vi vào ống eppendorf + Ly tâm 3000v/p ì5 phút. Loại bỏ dịch nổi
+ Thêm 1ml dung dịch hủy hồng cầu, trộn đều bằng pipet 4-5 lần + Ly tâm 3000v/p ì5 phút. Loại bỏ 1ml dịch nổi
+ Lặp lại b−ớc 3-4 hai lần
+ Loại bỏ dịch nổi, chỉ để lại khoảng 100àl. Thêm 175àl đệm tách ADN SV RNA Buffer lysis. Trộn đều bằng pipet để hoà tan và phân giải tế bào
+ Thêm 350àl SV RNA Dilusion Buffer. Trộn đều 3-4 lần + ủ ở 700C/ 3’
+ Ly tâm ở 12 000-14 000v/p ì10 phút + Chuyển dịch nổi sang 1 ống nghiệm khác
+ Thêm 200àl etanol 95% vào dịch chiết và trộn kỹ bằng pipet + Chuyển hỗn hợp vào Spin Basket assembly và ly tâm trong vòng
1 phút, bỏ dịch nổi
+ Thêm 600àl dung dịch rửa ARN (+ethanol). Ly tâm trong 1’, bỏ dịch nổi
+ Chuẩn bị ADNase theo bảng sau
Dung dịch Thể tích (àl) Số mẫu = Tổng số (cho 1 mẫu) (n)
Yellow core buffer 40 40ìn MnCl2 0.09M 5 5ìn ADNase 5 5ìn
Trộn đều bằng pipet, không vortex. Đặt ADNase I trên đá khi thao tác
• Nhỏ 50àl ADNase, ủ ở nhiệt độ phòng trong 15 phút
• Nhỏ 200àl SV dung dịch ngừng ADNase (+ethanol). Ly tâm trong 1 phút
• Nhỏ 600àl dung dịch rửa ARN, ly tâm 1 phút. Loại bỏ dịch nổi
• Nhỏ 250àl dung dịch rửa ARN, ly tâm 2 phút. Chuyển Spin Basket sang ống chuyên dụng.
• Nhỏ 50àl n−ớc cất. Ly tâm 1 phút để hoà tan ARN. Bảo quản ở –700C cho đến khi sử dụng