- Biến nạp plasmid vào E. ictaluri::pKD46 như trong mục 2.2.3.3.2.2.5.7. Tạo dòng E. coli SM10 Ằpir chứa plasmid tái tổ hợp 2.2.5.7. Tạo dòng E. coli SM10 Ằpir chứa plasmid tái tổ hợp
pGP704::HTK
a. Chuẩn bị tế bào E. coli SM10 Ằpir theo phương pháp hóa biến nạpTế bào khả nạp được chuẩn bị như đối với tế bào E. coli DH5a trong mục 2.2.1.4. Tế bào khả nạp được chuẩn bị như đối với tế bào E. coli DH5a trong mục 2.2.1.4.
b. Biến nạp plasmid tái tổ hợp pGP704::HTK vào E. coli SM10 Ằpir
Plasmid pGP704::HTK được tách chiết sử dụng bộ kit của Quiagen. Biến nạp đượcthực hiện như trong mục 2.2.1.5. Tế bào biến nạp được trãi trên môi thực hiện như trong mục 2.2.1.5. Tế bào biến nạp được trãi trên môi trường LB chứa ampicillin (50 pg/ml), kanamycin(50 pg/ml) và ủ ở 37oC trong 16 giờ.
c. Kiểm tra dòng biến nạp bằng PCR khuẩn lạc
Các bước được thực hiện như trong phần e của 2.2.5.6.d. Kiểm tra dòng biến nạp bằng phản ứng cắt giới hạn d. Kiểm tra dòng biến nạp bằng phản ứng cắt giới hạn
2.2.5.8. Tạo chủng E. ictalruri đột biến gen wzz bằng phương pháp tiếp hợp
Tiếp hợp (Joshua Lederberg và Edward Tatum khám phá vào năm 1946) là sự vận chuyển vật liệu di truyền giữa vi khuẩn cho đến vi khuẩn nhận thông qua sự tiếp xúc tế bào, chuyển gen theo liệu di truyền giữa vi khuẩn cho đến vi khuẩn nhận thông qua sự tiếp xúc tế bào, chuyển gen theo hướng nằm ngang cũng giống như biến nạp và tải nạp, mặc dù phương pháp biến nạp và tải
nạp không có sự tiếp xúc tế bào vớitếbào. bào.
Để thực hiện được tiếp hợp, chủng cho phải có các yếu tố di truyền di động, thường là một yếu tố tiếp hợp, plasmid di động hoặc transposon. yếu tố tiếp hợp, plasmid di động hoặc transposon.
- Chủng vi khuẩn E. coli SM10 Xpir là chủng có các kiểu gen sau: kmR, thi- 1, thr, leu, tonA, lacY, supE, recA::RP4-2-Tc::Mu, Xpir. lacY, supE, recA::RP4-2-Tc::Mu, Xpir.