b. Nấm bệnh
3.1.2.Nguyên liệu
Giống thuần của nấm Bào ngư xám (Pleurotus sajor – caju) được cung cấp từ DNTN Nấm Việt.
Mạt cưa cao su được thu mua tại Bình Phước, bụi xơ dừa (mụn dừa) được thu mua từ trại Hoa Kiển Ba Du, đường Nguyễn Văn Cừ, quận Ninh Kiều, Tp. Cần Thơ.
Cám gạo và bột bắp được thu từ cơ sở thức ăn gia súc Hồng Phước, đường 30/4 quận Ninh Kiều, Tp. Cần Thơ.
Vôi bột (CaCO3) và phân DAP được thu mua từ Đại lý Bảo vệ thực vật Hoàng Nguyễn (phường Long Hòa, quận Bình Thủy, Tp. Cần Thơ).
Hình 8. Phân DAP Hình 9. Cám gạo Hình 10. Bột bắp 3.1.3. Thiết bị-dụng cụ và hóa chất
- Thiết bị vô cơ hóa mẫu, thiết bị chưng cất đạm (Đức), lò nung cao độ Nabertherm (Đức), tủ sấy, tủ cấy, bình hút ẩm, nồi khử trùng, lò khử trùng , cân điện tử, chai thủy tinh, kẹp, dao cấy, túi nilon, thun, nút nhựa, …
- Hóa chất: H2SO4 đậm đặc, H2SO4 0.1N, NaOH 40%, H3BO3, Se, Bromocresolgreen, metyl đỏ,...
3.2. Phương pháp nghiên cứu
3.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của việc thay thế cơ chất mạt cưa cao su bằng mụn dừa đến sự phát triển và chất lượng của nấm bào ngư xám Nhật mụn dừa đến sự phát triển và chất lượng của nấm bào ngư xám Nhật
Mục đích thí nghiệm: tìm ra tỷ lệ cơ chất tối ưu nhất cho việc trồng nấm có năng suất cao và chất lượng tốt.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí như trong Bảng 10. Có 5 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức là một tỷ lệ phối trộn của hai thành phần cơ chất mạt cưa cao su và mụn dừa với một mức bổ sung chất dinh dưỡng giống nhau cho 5 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại ba lần mỗi lặp lại là 6 bịch phôi.
Bảng 10. Bảng bố trí tỷ lệ cơ chất và thành phần dinh dưỡng bổ sung
Nghiệm thức 1 2 3 4 5 Cơ chất Đối chứng 100% mạt cưa cao su 70% mạt cưa + 30% mụn dừa 50% mạt cưa + 50% mụn dừa 30% mạt cưa +70% mụn dừa 100% mụn dừa Thành phần
Quy trình thực hiện:
Hình 11. Quy trình trồng nấm bào ngư xám Nhật (Pleurotus sajor – caju)
(*Nguồn: quy trình của Lê Duy Thắng, 2006 có điều chỉnh)
Để nuôi trồng nấm bào ngư xám Nhật (Pleurotus sajor – caju) cần phải có giống nấm, giống nấm bao gồm tất cả các dạng mang sinh khối của nấm. Điểm quan trọng là giống cấy phải thuần, không bị lẫn tạp bởi vi trùng, vi khuẩn, nấm mốc hay các loài nấm khác.
Các bước tiến hành được thực hiện theo quy trình của Lê Duy Thắng (2006) và tham khảo kỹ thuật trồng Nấm sò (Pleurotus sp.) của Nguyễn Bá Hai (2009).
Thu hoạch
Mạt cưa cao su xử lý với nước vôi (1%); mụn dừa (3%), vôi được pha với nước tưới đều lên cơ chất.
Ủ đống: mạt cưa cao su 1 ngày và mụn dừa khoảng 2 tuần. Sau đó phối trộn 2 thành phần cơ chất này lại.
Đóng bịch, khử trùng 950C, 10 giờ.
Giống thuần được cung cấp từ DNTN Nấm Việt
Giống cấp 1
Giống cấp 2
Cấy giống vào bịch phôi
Ủ 30 ± 50C đến khi tơ đầy bịch phôi
a. Chuẩn bị giống cấp 1
Tùy theo các loài nấm khác nhau mà thành phần dùng để nhân giống cấp 1 cũng khác nhau, ở đây chọn môi trường lúa là môi trường dùng nhân giống nấm bào ngư xám Nhật (Pleurotus sajor – caju).
- Một kg lúa phơi khô, loại bỏ hạt lép, ngâm nước khoảng 3 giờ, sau đó nấu đến khi hạt lúa vừa nở, đổ ra và để ráo đến độ ẩm thích hợp bổ sung cám gạo với tỷ lệ 2% so với lúa, cho hỗn hợp vào chai thủy tinh, đậy bằng nút gòn và đậy phủ đầu chai lại bằng giấy báo, sau đó khử trùng ở 1210C trong 90 phút. Khử trùng xong lấy ra để nguội và quan sát sự nhiễm vi sinh vật ở các chai sau 2 – 3 ngày, loại bỏ các chai đã bị nhiễm.
- Bước tạo giống cấp 1 được thực hiện trong tủ cấy vô trùng. Dùng dao inox khử trùng trên ngọn lửa đèn cồn, làm nguội và cắt miếng agar chứa sợi tơ nấm thuần thành từng miếng nhỏ; dùng kẹp gắp và cho vào chai lúa đã được chuẩn bị ở bước trên, đậy nút gòn lại và phủ đầu chai bằng giấy báo. Sau đó ủ ở nhiệt độ 26 - 280C cho đến khi sợi tơ nấm phát triển tốt và lan sâu vào môi trường hạt thóc. Quan sát và loại bỏ các chai bị nhiễm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
b. Chuẩn bị giống cấp 2
Chọn cây khoai mì làm môi trường nhân giống cấp 2.
- Thân cây khoai mì được gọt sạch vỏ, tách đôi hoặc tách làm bốn và cắt thành từng đoạn nhỏ khoảng 12cm, phơi khô. Sau đó đun với vôi (tỷ lệ vôi 1%) thời gian đun kể từ lúc sôi khoảng 4 giờ, tiếp tục ngâm 24 giờ, rửa sạch và để ráo nước. Sau đó bổ sung thêm 1% đường pha chung với nước, tưới cho đều và đủ độ ẩm, bổ sung thêm 2% cám gạo. Cho hỗn hợp vào chai thủy tinh, đậy bằng nút gòn và đậy phủ đầu chai lại bằng giấy báo, khử trùng ở 1210C trong 90 phút. Sau khi khử trùng xong lấy ra để nguội và quan sát sự nhiễm vi sinh vật ở các chai sau 2 – 3 ngày, loại bỏ các chai đã bị nhiễm.
- Bước tạo giống cấp 2 được tiến hành trong tủ cấy vô trùng. Dùng muỗng inox nhỏ khử trùng thật kĩ trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội và múc khoảng 3 muỗng giống cấp 1 (từ môi trường lúa đã thực hiện từ bước trên và đã lên tơ hoàn chỉnh) cho vào chai khoai mì đã được chuẩn bị, đậy bằng nút gòn và đậy phủ đầu chai lại bằng giấy báo. Ủ ở nhiệt độ từ 26-280C cho đến khi sợi nấm phát triển tốt và trắng cả chai khoai
mì tạo thành giống cấp 2, quan sát và loại bỏ các chai bị nhiễm.
c. Sản xuất bịch phôi Xử lý nguyên liệu Xử lý nguyên liệu
Mụn dừa được xử lý với nước vôi 3% để diệt vi khuẩn và trung hòa pH . Trộn đều để đạt độ ẩm thích hợp (không quá ướt cũng không quá khô) trong khoảng 40- 65%, sau đó ủ đống (khoảng 2 tuần) và đậy kín bằng màng phủ nilon.
Mạt cưa cao su được ủ đống với 1% nước vôi trong 1 ngày sau đó sàn để loại bỏ các thành phần tạp chất.
Sau quá trình ủ là quá trình cân phối trộn tỷ lệ cơ chất theo các nghiệm thức đã thiết kế và bổ sung dinh dưỡng theo ở bảng 11 (riêng đối với phân DAP có thể bổ sung vào bằng cách ngâm với nước 2 ngày rồi tưới vào cơ chất hoặc là làm nhuyễn và trộn ủ với cơ chất 1 ngày trước khi vào bịch), trộn đều (có thể bổ sung thêm nước nếu hàm lượng ẩm chưa đạt 40 – 65%). Sau đó phân phối mụn dừa và mạt cưa cao su đã trộn cho vào bịch nilon. Khối lượng mỗi bịch là 1,2kg, bịch phôi phải có độ rắn vừa phải, không nên nén chặt bịch quá, đóng nút, đậy gòn và đậy phủ đầu bằng giấy báo, cố định bằng dây thun. Sau đó đem chất vào lò khử trùng ở 92 – 98oC trong 10 giờ.
Cấy giống nấm vào bịch phôi
Bịch phôi sau khi khử trùng để nguội 1 ngày, sau đó tiến hành cấy giống cấp 2. Việc cấy giống được tiến hành trong tủ cấy vô trùng. Dùng kẹp đã khử trùng thật kỹ trên ngọn lửa đèn cồn gấp que khoai mì (trong chai giống cấp 2) cho vào bịch phôi đã được khử trùng (có thể dùng thanh sắt nhọn đã khử trùng để sơm lại nếu cần), đậy nút gòn lại, đậy phủ đầu nút gòn bằng giấy báo và cố định bằng dây thun. Sau khi cấy xong thì vận chuyển bịch phôi ra nhà trồng và chất lên kệ. Theo dõi sự phát triển của nấm.
d. Kỹ thuật trồng và chăm sóc nấm Điều kiện nhà trồng Điều kiện nhà trồng
Nhà trồng nấm phải sạch sẽ, cao ráo, thoáng khí, thoát nước và giữ được độ ẩm. Thiết kế nhà trồng tốt nhất là nhà lá, phủ cát phía dưới nền và che màng xung quanh để giữ ẩm cho tốt. Tùy mỗi loại nấm mà có khoảng nhiệt độ và độ ẩm thích hợp khác nhau. Ngoài ra, khoảng nhiệt độ và độ ẩm của từng loài nấm cũng khác nhau trong từng giai đoạn sinh trưởng của nấm. Tuy nhiên, nhìn chung thì nhiệt độ thích hợp của
nhà trồng nấm bào ngư xám (Pleurotus sajor – caju) khoảng 25-30oC, độ ẩm 70-95% (Lê Duy Thắng, 2006), phải bảo đảm thoáng khí cho nhà trồng và ánh sáng nhẹ để hệ sợi nấm phát triển tốt. Điều kiện nhà trồng ảnh hưởng quan trọng đến sự sinh trưởng của hệ sợi nấm cũng như năng suất nấm. Các bịch phôi được chất lên kệ, theo hàng, mỗi hàng gồm 8 kệ, mỗi kệ chất được 28-30 bịch phôi (nhà trồng nấm của DNTN Nấm Việt ).
Trồng và chăm sóc nấm
Lúc mới đem bịch phôi vào nhà trồng không được tháo nút bông và không được tưới nước trực tiếp vào bịch phôi. Chỉ tưới nước dưới nền để giữ độ ẩm không khí (tùy theo điều kiện tự nhiên có thể tưới khoảng 1 lần/ngày hoặc không).
Quan sát và ghi nhận sự biểu hiện của bịch phôi (biểu hiện của bịch bị nhiễm, tốc độ tăng trưởng của tơ nấm, độ dày của tơ nấm) đến khi nào hệ sợi nấm phát triển tốt và lan khắp khối cơ chất (kéo tơ có màu trắng đồng nhất và có thể có cả các bào tử đen hình thành). Khi tơ nấm đã phát triển và lan khắp khối cơ chất, đồng thời không bị nhiễm nấm mốc hay tạp khuẩn thì tiến hành tưới rửa bịch phôi, sau đó 1 ngày tháo nút bông ở cổ bịch phôi và chỉ tưới dưới nền để giữ độ ẩm cho nhà trồng, 2 ngày sau khi tháo nút bông mới được tưới phun sương trực tiếp lên bịch. Lúc đầu thì chỉ tưới trực tiếp lên bịch phôi khoảng 1 lần/ngày, đến khi quả thể nấm xuất hiện và phát triển ra phía ngoài bịch thì tăng cường tưới trực tiếp lên bịch khoảng 2-4 lần/ngày tùy thuộc vào điều kiện thời tiết. Việc tưới nên tưới lúc sáng sớm, trưa và chiều mát, nếu buổi trưa nắng nóng quá thì có thể tưới 2 lần.
Quan sát sự phát triển của nấm, nếu quan sát phía sau bịch phôi có sự xuất hiện của các nụ nấm (nhỏ) thì tiến hành rạch bịch phía trước đầu nụ nấm khoảng 2cm để cho nụ nấm chui ra và phát triển. Cũng có thể rạch 2 bên thân bịch phôi, chiều dài từ 1-2cm, nhưng việc rạch bịch nhiều quá làm cho tai nấm có kích thước nhỏ và thời gian thu hoạch nấm càng rút ngắn. Chú ý, việc rạch bịch phải tiến hành trước khi tưới hoặc sau khi tưới bịch phôi ít nhất là 3 giờ.
Nhận biết một số bịch phôi nhiễm nấm lúc trồng
Các bịch phôi bị nhiễm nấm mốc, nấm gió, ấu trùng ruồi non, nấm nhầy hoặc tạp khuẩn có thể quan sát bằng mắt thường thì không được tháo nút gòn ra mà phải loại bỏ những bịch phôi đã bị nhiễm để tránh lây nhiễm cho những bịch phôi còn lại.
e. Thu hoạch nấm
Thu hoạch nấm khi tai nấm chuyển từ dạng phễu sang dạng lá thì tiến hành thu hoạch, dùng tay nắm lấy phần cuống nấm kéo nhẹ và lấy hết cả chân nấm. Sau khi thu hoạch xong phải loại bỏ hết phần chân nấm còn sót lại trên bịch phôi để nấm có thể ra quả thể tốt hơn ở các lần tiếp theo.
Mỗi loại nấm có thời gian và cách thu hoạch khác nhau và có thể chia làm nhiều đợt (thông thường khoảng 2-3 đợt, đôi khi là 4-5 đợt). Tuy nhiên, năng suất của lần sau sẽ không bằng lần trước trên cùng một bịch phôi (quả thể ra nhỏ hơn, sản lượng và khối lượng ít hơn).
f. Các chỉ tiêu theo dõi và phương pháp đánh giá
- Số ngày lan tơ: ghi nhận và so sánh số ngày lan tơ của bịch phôi ở mỗi tuần và thời gian bắt đầu thu hoạch quả thể giữa các nghiệm thức.
Phương pháp:
Theo dõi và ghi nhận ngày cấy giống vào bịch phôi và ủ. Theo dõi sự phát triển của tơ nấm hằng ngày, ghi nhận độ lan tơ bằng cách đo chiều dài sự lan tơ quanh khối cơ chất (chiều dài tính từ đầu bịch phôi) mỗi tuần tính từ lúc cấy giống vào bịch phôi, tính giá trị trung bình và so sánh giữa các nghiệm thức với nhau. Ghi nhận thời gian tơ nấm lan trắng hoàn toàn bịch phôi và thời gian bắt đầu thu hoạch nấm ở mỗi nghiệm thức (tính từ lúc cấy giống vào bịch phôi).
- Năng suất nấm: ghi nhận năng suất đợt 1, 2, 3... so sánh năng suất và tính hiệu suất sinh học giữa các nghiệm thức.
Phương pháp:
Thu hái nấm và ghi nhận trọng lượng nấm theo từng ngày và theo từng bịch riêng ở các nghiệm thức. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tính hiệu suất sinh học (Biological Efficiency - B.E): năng suất nấm tươi/1kg cơ chất khô (Chang et al., 1981).
- Chất lượng nấm: Nấm được thu hoạch vào lúc sáng sớm, trước khi tưới nấm sau đó khảo sát một số chỉ tiêu như:
Độ ẩm bằng phương pháp sấy khô ở 105o
C (Phụ lục 2 )
Hàm lượng đạm tổng, hàm lượng protein tổng bằng phương pháp Kjeldalh (Phụ lục 2)
Hàm lượng tro (Phụ lục 2 )
- Hiệu quả kinh tế: tính hiệu quả kinh tế ở mỗi nghiệm thức
3.2.2. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu
Số liệu thu thập được xử lý bằng phần mềm Excel và phân tích thống kê bằng phần mềm Minitab 16.1
Trọng lượng khô của cơ chất (g) Trọng lượng tươi của nấm (g)
Chương 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 Ảnh hưởng của thành phần cơ chất đến sự tăng trưởng và phát triển của tơ nấm bào ngư xám Nhật nấm bào ngư xám Nhật
4.1.1 Sự lan tơ của nấm
Bảng 11. Chiều sâu lan tơ trung bình của các bịch phôi (cm)
Nghiệm thức Sau 14 ngày Sau 21 ngày
NT 1 2,20 a 4,65 a
NT 2 1,96 ab 4,11 ab
NT 3 2,05 a 4,07 ab
NT 4 1,50 b 3,74 b
NT 5 0,78 c 2,66 c
Ghi chú: NT 1 = Nghiệm thức đối chứng 100% cơ chất mạt cưa cao su; NT 2 = Nghiệm thức 70% cơ chất mạt cưa cao su +30% cơ chất mụn dừa; NT 3 = Nghiệm thức 50% cơ chất mạt cưa cao su + 50% cơ chất mụn dừa; NT4 = Nghiệm thức 30% cơ chất mạt cưa cao su + 70% cơ chất mạt mụn dừa; NT 5 = Nghiệm thức 100% cơ chất mụn dừa. Trong cùng một cột, các giá trị trung bình có ký tự theo sau giống nhau thì khác biệt không có ý nghĩa thống kê ở mức 5%
Qua kết quả Bảng 11 cho thấy chiều sâu độ lan tơ của nấm bào ngư xám Nhật khác biệt có ý nghĩa qua phân tích thống kê ở mức 5% giữa các nghiệm thức có tỷ lệ khác nhau. Kết quả cho thấy chiều sâu lan tơ trung bình của các bịch phôi ở nghiệm thức có tỷ lệ mạt cưa cao su cao thì có chiều sâu lan tơ lớn hơn so với các nghiệm thức có tỷ lệ mụn dừa cao ở cả 2 giai đoạn khảo sát. Ở giai đoạn 14 ngày sau khi cấy, qua kết quả phân tích thống kê cho thấy chiều sâu lan tơ giữa các nghiệm thức đối chứng 100% cơ chất mạt cưa cao su (NT 1) với NT 2 và NT 3 không có sự khác biệt ý nghĩa về mặt thống kê (1,96-2,2cm) nhưng lại có sự khác biệt ý nghĩa thống kê so với NT 4 NT5. Tuy nhiên, NT 2 (1,96cm) lại không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê đối với NT 4 (1,50cm), NT5 (0,78cm) 100% cơ chất là mụn dừa là nghiệm thức có chiều sâu lan tơ thấp nhất và khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức. Ở giai đoạn 21 ngày sau khi cấy qua phân tích thống kê thì giữa ba nghiệm thức NT 1, NT 2, NT 3 không có sự khác biệt ý nghĩa về mặt thống kê, chiều sâu lan tơ trung bình là tương đương nhau (4,07-4,65cm), trong đó NT 1 100% cơ chất là mạt cưa cao su là nghiệm thức có tốc độ lan tơ nhanh nhất. Giữa các NT 2, NT 3, NT 4 cũng không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê giữa ba nghiệm thức (3,74-4,11cm) riêng NT 5 là nghiệm thức 100% cơ chất là mụn dừa có chiều sâu lan tơ thấp nhất (2,66cm).
cưa cao su cao thì lan tơ nhanh hơn các nghiệm thức có tỷ lệ mụn dừa cao là do trong mụn dừa tuy có khả năng giữ ẩm tốt, nhưng lại có dinh dưỡng thấp, nhiều lignin (58,69%), ít cellulose, đồng thời chứa nhiều tanin là hợp chất ester được xem là chất kháng khuẩn vì chúng kết hợp với protein và cellulose trong mụn dừa làm cho những