a. Phương pháp sơ chế thảo dược
Thảo dược được thu hái, sau đó được rửa sạch, loại bỏ phần thối hỏng, để ráo nước, cắt ngắn hoặc thái lát.
b. Phương pháp chế biến, bảo quản * Phương pháp sấy khô
Thảo dược sau khi sơ chế được sấy khô ở 500C trong từ 3-5 ngày để đạt độ ẩm từ 8 đến 13%. Sau đó, thảo dược khô được được ghi nhãn, bảo quản trong túi nilon kín ở nhiệt độ phòng. Trước khi dùng để trộn thức ăn hoặc chiết dịch thử hoạt tính, thảo dược được nghiền nhỏ bằng máy nghiền với mắt sàng kích thước 0,5mm.
* Phương pháp ngâm cồn 70%
Thảo dược sau khi sơ chế được ngâm với cồn 70% theo tỷ lệ 1/1 (g/ml). Dịch ngâm này được bảo quản trong các bình thủy tinh, bịt kín miệng, ghi nhãn sản phẩm.
37
* Phương pháp ngâm trong dấm ăn
Thảo dược sau khi sơ chế được ngâm với dấm ăn (acid acetic 5%) theo tỷ lệ tỷ lệ 1/1 (g/ml). Dịch ngâm này được bảo quản trong các bình thủy tinh, bịt kín miệng, ghi nhãn sản phẩm.
c. Phương pháp đánh giá khả năng kháng khuẩn của thảo dược
Chúng tôi sử dụng phương pháp khoang giấy trên môi trường thạch đặc để đánh giá khả năng kháng khuẩn của thảo dược
- Chuẩn bị dịch chiết thảo dược:
+ Thảo dược tươi được nghiền nát với cồn 70% theo tỷ lệ 1/1 (g/ml) + Thảo dược bảo quản trong môi trường cồn hoặc acid acetic: dịch ngâm được chắt vào các thời điểm mong muốn sau đó ly tâm lấy dịch nổi để đánh giá khả năng kháng khuẩn.
+ Thảo dược bảo quản ở dạng khô được nghiền nhỏ, ngâm với cồn 70% theo tỷ lệ theo tỷ lệ 1/4 (g/ml). Sau 24h chắt dịch ngâm thảo dược, ly tâm lấy dịch nổi để đánh giá khả năng kháng khuẩn.
- Chuẩn bị khoanh giấy tẩm dịch chiết thảo dược hoặc kháng sinh: Các khoanh giấy lọc có đường kính 6mm được sấy khô và khử trùng ở 1500C trước khi được tẩm dịch chiết thảo dược. Mỗi khoanh giấy được tẩm 0,3 ml dịch chiết thảo dược hoặc dung dịch Gentamicin ở nồng độ 50ppm và làm khô 550C trong bình hút chân không.
- Chuẩn bị môi trường thạch và cấy chan các vi khuẩn thử nghiệm: vi khuẩn thử nghiệm được láng đều trên bề mặt thạch Muller Hilton (MH) với số lượng 0,15 x 106 CFU /đĩa thạch (0,15ml canh khuẩn giống ở nồng độ 106 CFU /ml), sau đó để trong tủ ấm khoảng 10 phút.
- Tiến hành đặt các khoanh giấy tẩm dịch chiết thảo dược lên trên bề mặt đã được láng vi khuẩn thử nghiệm, các khoanh giấy cách nhau 2cm. Mỗi đĩa thạch đặt thêm một khoanh giấy đối chứng âm (không tẩm) và môt khoanh tẩm Gentamycin làm đối chứng dương. Các đĩa thạch được nuôi trong
38
tủ ấm ở 370C trong 18-20 giờ. Khả năng kháng khuẩn được xác định dựa trên đường kính vòng vô khuẩn.
d. Đọc kết quả về khả năng kháng khuẩn
- Khả năng kháng khuẩn được xác định bằng đường kính vòng vô khuẩn và cho điểm -/+ như sau:
(-) là không quan sát được vòng vô khuẩn
(+) là các vòng vô khuẩn có kích thước từ trên 8 đến 12mm (++) là các vòng vô khuẩn có kích thước từ trên 12 đến 18mm (+++) là các vòng vô khuẩn lớn hơn 18mm