* Phương pháp phân tích hàm lượng amylose (Cagampang and Rodriguez, 1980) [64]
Bước 1: Chuẩn bị các dung dịch
Ethanol 95% HCl 30% NaOH 1N
Dung dịch Iod (0,2% I2 và 2% KI)
Bước 2: Chuẩn bị mẫu
Cân 50 mg bột nhũ đã nghiền mịn cho vào ống 50 ml. Thêm 0,5 ml ethanol 95% lắc nhẹ cho tan đều.
Thêm 9,5 ml NaOH 1N. Để qua đêm ở nhiệt độ phòng.
Bước 3: Pha loãng mẫu và đo mẫu
Rút 100 l dung dịch mẫu cho vào bình định mức 25 ml (đối với mẫu thử thay dung dịch mẫu bằng 100 l NaOH 1N).
Thêm nước cất khoảng 1/2 bình, lắc đều. Thêm 250 l HCl 30% lắc đều.
Thêm 250 l dung dịch Iod, lắc đều. Thêm nước cất đến vạch định mức.
Chuyển sang ống 50 ml và lắc đều, để yên 30 phút.
Lắc đều trước khi đưa vào cuvette. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 580 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Đường chuẩn có dạng Y = aX+b Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD
X: lượng amylose có trong 1 ml mẫu, đọc từ máy (mg)
Tính hàm lượng amylose theo công thức: 100
5 , 0 (%) X
Amylose
Đánh giá hàm lượng amylose theo thang đánh giá của IRRI (1988) [115] (Bảng 3.9).
Bảng 3.9 Thang đánh giá hàm lượng amylose (IRRI, 1988) [115]
STT Đánh giá Phân loại gạo Hàm lượng Amylose (%)
1 Nếp Nếp 0 – 2
2 Rất thấp Gạo dẻo 3 – 9
3 Thấp Gạo dẻo 10 – 19
4 Trung bình Mềm cơm 20 – 25
* Phương pháp phân tích hàm lượng protein (Lowry et al., 1951) [156]
Bước 1: Chuẩn bị dung dịch ly trích
Dung dịch NaOH 0,1 N.
Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na-K-tatrate 0,05% + NaOH 0,1N). Dung dịch B (CuSO4 0,1%).
Dung dịch C (A:B = 45 :5). Dung dịch Folin 1 N
Bước 2: Chuẩn bị mẫu
Cân 10 mg bột gạo + 1 ml NaOH 0,1 N. Lắc ít nhất 2 giờ hay để qua đêm.
Bước 3: Pha loãng mẫu và đo
Vortex mẫu sau đó ly tâm mẫu 14.000 vòng/phút trong 3 phút.
Hút 100 μl mẫu cho vào ống 10 ml. Đối với mẫu blank, thay dung dịch ly trích bằng 100 μl NaOH 0,1 N.
Thêm 1 ml nước cất, lắc đều. Thêm 500 μl dung dịch C.
Trộn đều và để yên trong 10 phút.
Thêm 50 μl Folin 1 N, trộn đều và để yên trong 30 phút.
Lắc đều mẫu, sau đó cho vào Cuvette và đo ở bước sóng 580 nm. Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Pha dung dịch gốc Bovine serum albumin (BSA). Đường chuẩn có dạng:
Y = aX + b
Trong đó: Y là Độ hấp thụ OD.
X là Lượng protein có trong mẫu đem đo.
Hàm lượng protein được tính theo công thức: (%) 100
m X P
Với: m: là trọng lượng thực của mẫu:
14 100 %) 100 ( 10 H m H%: là độ ẩm của mẫu.
* Phương pháp phân tích nhiệt trở hồ (Jennings et al., 1979) [125]
Chuẩn bị hai mẫu cho mỗi giống được thử. Mỗi mẫu lấy sáu hạt gạo, cạo sạch lớp cám, chọn hạt không bị nứt, để vào đĩa petri.
Thêm 10 ml KOH 1,7% vào mỗi đĩa.
Sắp xếp các hạt dang đều ra để mỗi hạt có đủ chổ nở lan ra. Đậy đĩa petri, để yên khoảng 23 giờ ở nhiệt độ phòng.
Đánh giá độ trở hồ của hạt gạo theo Jennings et al. (1979) [125], được
trình bày (Bảng 3.10)
Bảng 3.10 Bảng phân cấp độ độ trở hồ (Jennings et al., 1979) [125]
Cấp Độ lan rộng Độ trở hồ
1 Hạt gạo còn nguyên. Cao
2 Hạt gạo phồng lên. Cao
3 Hạt gạo phồng lên; viền còn nguyên hay rõ nét. Cao
4 Hạt gạo phồng lên; viền còn nguyên và nở rộng. Trung bình
5 Hạt rã ra; viền hoàn toàn nở rộng. Trung bình
6 Hạt tan ra hòa chung với viền. Thấp
7 Hạt tan hoàn toàn và quyện vào nhau. Thấp
Cấp trung bình sẽ được tính theo công thức:
N n x Captroho i Trong đó: xi : cấp độ trở hồ; n: số hạt có cấp độ trở hồ xi; N: số hạt thử nghiệm
* Phương pháp phân tích độ bền thể gel (Tang et al., 1991) [244]
Bước 1: Chuẩn bị mẫu
Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo.
Nghiền mịn và cân mẫu (100 mg với ẩm độ 12%).
Bước 2: Hòa tan mẫu
Thêm 0,2 ml ethanol 95% có chứa 0,025% thymol blue. Thêm 2 ml KOH 0,2 N. Sau đó khuấy đều bằng máy Vortex.
Đậy nắp kỹ và đun trong nồi cách thủy (nhiệt độ là 1000C) khoảng 5 phút.
Lấy ra, để yên trong 5 phút và sau đó làm lạnh trong nồi nước đá 10 phút.
Bước 3: Đọc và ghi kết quả
Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt bằng phẳng, để gel chảy từ từ, sau một giờ tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).
Đánh giá độ bền thể gel theo thang điểm của IRRI (1996) [116] (Bảng 3.11)
Bảng 3.11 Phân cấp độ bền thể gel (IRRI, 1996) [116]
Cấp Chiều dài thể gel (mm) Loại độ bền thể gel
1 80 - 100 Rất mềm
3 61 - 80 Mềm
5 41 - 60 Trung bình
7 35 - 40 Cứng
9 < 35 Rất cứng
* Chiều dài và hình dạng hạt gạo
Để đo chiều dài hạt gạo dùng giấy kẻ li đo nhiều lần (ba lần). Mỗi giống lấy 10 hạt gạo (30 hạt cho mỗi giống), cố định các hạt nối đuôi nhau trên đường thẳng để đo chiều dài hoặc khích nhau về chiều ngang để đo chiều rộng hạt rồi lấy giá trị trung bình. Phân loại chiều dài và hình dạng hạt gạo theo tiêu chuẩn đánh giá phẩm chất hạt gạo của IRRI (Juliano et al., 1993) [129] được trình bày (Bảng 3.12)
Bảng 3.12 Tiêu chuẩn đánh giá chiều dài và hình dạng hạt gạo theo IRRI (Juliano et al., 1993) [129]
Cấp Chiều dài hạt gạo (mm) Hình dạng hạt gạo (D/R)
1 Rất dài > 7,5 Thon dài > 3,0
3 Dài 6,61 – 7,5 Trung bình 2,1 – 3,0
5 Trung bình 5,51 – 6,6 Bầu 1,1 – 2,0
7 Ngắn ≤ 5,5 Tròn ≤ 1