phản ứng reverse transcriptase pcr

... tạo dòng sau Nguyên tắc PCR hai giai đoạn hai phản ứng PCR xảy liền nhau, phản ứng thứ PCR phát sinh sợi khuôn mẫu tương ứng với gen tổng hợp sau khuếch đại phản ứng PCR lần thứ hai (Hình 3.10) ... DNA Hình 3.2 Sơ đồ phản ứng chuỗi polymerase Hình 3.3 Các chu kỳ kỹ thuật PCR Có ba kỹ thuật PCR thông dụng: PCR chuẩn, PCR mỏ neo PCR đảo ngược Trong PCR chuẩn (standard PCR) , DNA khuôn mẫu ... real-time PCR cho phép phát định lượng sản phẩm khuếch đại tiến trình phản ứng diễn dựa sở phản ứng huỳnh quang, tăng lên số lượng DNA tương ứng với tăng lên tín hiệu huỳnh quang Trong real-time PCR, ...

Ngày tải lên: 19/08/2013, 08:58

Ngày tải lên: 12/04/2014, 12:00

... dụng cụ cho phản ứng PCR: Thực chất thiết bị dùng để tiến hành phản ứng PCR cần đáp ứng u cầu thay đổi nhiệt độ thật nhanh xác Các thiết bị cải tiến để tránh tối đa bốc nước q trình phản ứng, hay ... Phải có quy trình hướng dẫn cụ thể thực giai đoạn chu kỳ PCR Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với kỹ thuật :PCR chuẩn ,PCR neo ,PCR ảo  PCR chuẩn: DNA mục tiêu mở dây đơi,sau primer tác động hai ... tham gia phản ứng, quan sát trực tiếp tiến trình khuếch đại diễn theo chu kỳ phản ứng Real - time PCR xảy Ngồi ra, Real - time PCR thể số ưu điểm bật: - Khơng cần điện di sau thực phản ứng Real...

Ngày tải lên: 19/05/2014, 15:16

... nước nóng Dung dịch đệm cho phản ứng PCR, thường chứa muối đệm Tris HCL 10 mM, KCL 50Mm MgCl�2 1.5mM Ngoài dung dịch đệm PCR chứa 0.001% BSA hay Gelatine số phản ứng PCR thêm tween hay formamide ... ống nghiệm làm phản ứng PCR men Uracil N Glycosylase (UNG) men có khả phá hủy sản phẩm PCR ngoại nhiễm trước phản ứng PCR xảy ra[4] Chính nhờ việc sử dụng UNG mà thử nghiệm PCR chẩn đoán phát ... đặc hiệu vi khuẩn gây bệnh, gene bệnh lý, dấu ấn di truyền, ) mà phản ứng PCR khuếch đại lên để chúng phát bệnh phẩm Phản ứng PCR không xảy bệnh phẩm nucleic acid đích Một trường hợp khác bệnh...

Ngày tải lên: 05/07/2014, 15:20

... Lê Văn Lãnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Huỳnh Thanh Phương Phản ứng PCR dương tính với mồi VT1 Phản ứng PCR dương tính với mồi VT2 Hình Phản ứng PCR với mồi VT1 VT2 Kết thực cặp mồi VT1 VT2 với kích ... phù hợp cho phân tích PCR 3.3.2 Kết PCR xác định gen mã hóa độc tố Để đảm bảo độ nhạy độ đặc hiệu phản ứng PCR, nồng độ sinh phẩm, hóa chất sử dụng phải phù hợp Sau phản ứng thiết lập (kết không ... bày), nồng độ thành phần PCR xác định sau: Bảng 3b Thành phần phản ứng PCR xác định gen mã hóa yếu tố độc lực E.coli Thành phần Nồng độ Nuclease free water Thể tích (µl) 10 PCR 10X buffer 10mM 2,0...

Ngày tải lên: 28/08/2013, 09:48

... trình phản ứng PCR Thu nhận mẫu Các vi sinh vật, động vật Kỹ thuật PCR lần Mullis cộng mô tả vào năm 1986 phát minh Mullis trao giải nobel vào năm 1993 Giới thiệu môn học Thành phần phản ứng PCR Phản ... học Nguyên tắc phản ứng PCR Biến tính Bắt cặp Kéo dài Giới thiệu môn học Nguyên tắc phản ứng PCR Phản ứng PCR gồm có giai đoạn: • Biến tính DNA mẫu T=940C • Bắt cặp mồi Tm = 550C-650C • Giai ... dụng điều kiện phản ứng PCR  Một đặc điểm phải ý hòa hợp nhiệt độ bắt cặp (Tanneal)  Nhiệt độ thể tương thích mồi xuôi mồi ngược Giới thiệu môn học 20 Các thông số phản ứng PCR qua phần mềm...

Ngày tải lên: 20/10/2013, 03:15

... tự nucleotit Hình 7.3 Hình ảnh điện di sản phẩm PCR (Đinh Duy Kháng, 2002) 1.2 Phản ứng RT -PCR (PCR ngược) 1.2.1 Nguyên lí Thực chất RT -PCR phản ứng nhân trình tự từ khuôn ARN, gồm giai đoạn: ... để xác định có mặt đoạn ADN nhân PCR 97 Hình 7.4 Hình ảnh điện di sản phẩm RT -PCR (Đinh Duy Kháng, 2002) 1.4 Những yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng PCR Kết phản ứng PCR chịu ảnh hưởng yếu tử như: ... liệu dNTP, nước, dung dịch đệm, 1.5 Các lĩnh vực ứng dụng phản ứng PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp PCR, từ Kary Mullis đề xuất hoàn thiện, có ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực khác nhau, khoa học...

Ngày tải lên: 23/10/2013, 16:20

... Lê Văn Lãnh, Huỳnh Thị Mỹ Lệ, Lê Huỳnh Thanh Phương Phản ứng PCR dương tính với mồi VT1 Phản ứng PCR dương tính với mồi VT2 Hình Phản ứng PCR với mồi VT1 VT2 Kết thực cặp mồi VT1 VT2 với kích ... phù hợp cho phân tích PCR 3.3.2 Kết PCR xác định gen mã hóa độc tố Để đảm bảo độ nhạy độ đặc hiệu phản ứng PCR, nồng độ sinh phẩm, hóa chất sử dụng phải phù hợp Sau phản ứng thiết lập (kết không ... bày), nồng độ thành phần PCR xác định sau: Bảng 3b Thành phần phản ứng PCR xác định gen mã hóa yếu tố độc lực E.coli Thành phần Nồng độ Nuclease free water Thể tích (µl) 10 PCR 10X buffer 10mM 2,0...

Ngày tải lên: 11/03/2014, 18:20

... khuếch đại thư viện ADN có sẵn gồm nhiều dòng tế bào khác nhau, kỹ thuật PCR, hóa chất chọn lọc cặp mồi giúp hạn chế phản ứng khuếch đại tập trung vào đoạn ADN quan tâm từ đầu Giải mã trình tự ... chạy hỗn hợp phân tử ADN tận đầu G ta thu thang băng điện di tương ứng với phân đoạn, băng tương ứng với phân đoạn có chiều dài phản ánh vị trí nucleotit G phân tử ADN Giải mã trình tự hệ gen vi ... bao gồm tất phân tử ADN tận đầu 3’ G, nhóm khác tương ứng A, C T Trong nhóm phân tử có kích thước khác phụ thuộc vào vị trí nucleotit tương ứng (ví dụ G) nằm phân tử ADN Các phân đoạn khác biệt...

Ngày tải lên: 12/03/2014, 06:20

... thuyết 896bp (~ 900bp) 2.5 Phản ứng PCR đặc hiệu Các mẫu DN A tách chiết pha loãng nồng độ 20ng/µl để làm khuôn cho phản ứng PCR đặc hiệu xác định tồn gen ver genome Phản ứng PCR tiến hành thể tích ... ng/µl (Hình 4) mẫu ADN tổng số nấm A niger sử dụng làm đối chứng cho phản ứng PCR Các mẫu ADN tổng số sử dụng làm sợi khuôn cho phản ứng PCR đặc hiệu với cặp mồi thiết kế Hình Ảnh điện di AD tổng ... tích phản ứng PCR đặc hiệu Từ 15 mẫu ADN tổng số thu isolate A flavus chọn mẫu ADN tổng số để làm khuôn cho thí nghiệm tối ưu hoá điều kiện phản ứng PCR đặc hiệu với cặp mồi VER Điều kiện cho phản...

Ngày tải lên: 03/04/2014, 13:20

... tục kéo dài chuỗi ADN phía đầu 3’ dựa trình tự mạch ADN làm khuôn Vậy, cách người ta sử dụng phản ứng PCR enzym ADN polymerase để khuếch đại đoạn trình tự ADN đặc hiệu ? Người ta tổng hợp sử dụng ... khuếch đại thư viện ADN có sẵn gồm nhiều dòng tế bào khác nhau, kỹ thuật PCR, hóa chất chọn lọc cặp mồi giúp hạn chế phản ứng khuếch đại tập trung vào đoạn ADN quan tâm từ đầu ... cấp số nhân (số tương ứng qua chu kỳ 2, 4, 8, 16, 32, 64, v.v.) Như vậy, cần từ ADN có mặt lượng mẫu nhỏ, thu lượng lớn xuất phát từ Xét khía cạnh đó, kỹ thuật tách dòng ADN PCR dùng để khuếch đại...

Ngày tải lên: 05/07/2014, 15:20

... PCR locus riêng biệt (bước 3) Một phản ứng PCR để nhân lên locus riêng biệt thiết kế Hỗn hợp phản ứng bao gồm đệm PCR 1x, 0.4µM mồi, 5% DMSO 1U Taq ADN polymerase thể tích phản ứng 25µL Khi phản ... 7-12 đệm PCR 1x 2x) ADN khuôn khác sử dụng quy trình PCR khác nhiệt độ gắn mồi (48 0C, 540C 590C) Băng 1-9 gel phản ứng đệm PCR 1x Băng 10-12 gel phản ứng đệm PCR 2x Băng 7-12 gel (cả đệm PCR 1x ... polymerase (1-2 U/25µL phản ứng) ADN hệ gen (150ng/25µL phản ứng) Các thành phần phản ứng cho vào theo thứ tự khác nên đưa nước vào trước tiên Việc trộn mẫu phải thực đá lạnh, tube phản ứng phải giữ đá...

Ngày tải lên: 11/07/2014, 02:21

... tục kéo dài chuỗi ADN phía đầu 3’ dựa trình tự mạch ADN làm khuôn Vậy, cách người ta sử dụng phản ứng PCR enzym ADN polymerase để khuếch đại đoạn trình tự ADN đặc hiệu ? Người ta tổng hợp sử dụng ... khuếch đại thư viện ADN có sẵn gồm nhiều dòng tế bào khác nhau, kỹ thuật PCR, hóa chất chọn lọc cặp mồi giúp hạn chế phản ứng khuếch đại tập trung vào đoạn ADN quan tâm từ đầu ... cấp số nhân (số tương ứng qua chu kỳ 2, 4, 8, 16, 32, 64, v.v.) Như vậy, cần từ ADN có mặt lượng mẫu nhỏ, thu lượng lớn xuất phát từ Xét khía cạnh đó, kỹ thuật tách dòng ADN PCR dùng để khuếch đại...

Ngày tải lên: 11/07/2014, 20:21

... nghiên cứu V BàN LUN Kt qu thc hin PCR, dũng hoỏ sn phm v tỏch dũng Bng cp mi LMP1F-LMP1R, sn phm PCR thu c cú kớch thc d kin khong 1.300 bp Kt qu in di kim tra sn phm PCR trờn gel agarose 0,8% trỡnh ... Phng phỏp nghiờn cu * Phn ng PCR: 40C 35 Nhit bo qun tm thi sn phm * Dũng húa v gii trỡnh trỡnh t: Sn phm on gen LMP-1 ca EBV, sau tinh sch, dũng hoỏ vo plasmid vector pCR2 .1 (Invitrogen Inc.) Chn ... Kt qu gii trỡnh t gen LMP-1 Hỡnh 1: Kt qu in di kim tra sn phm PCR trờn thch agarose 0,8% M: Thang chun ADN ng chy - 3: sn phm PCR mu ADN ln lt ca BN 1, 2, Kim tra sn phm dũng húa bng in di trờn...

Ngày tải lên: 07/08/2014, 02:24

... Kết phản phản ứng RT -PCR ứng PCR thực với ARN tổng đoạn gen HCV số làm khuôn từ mẫu (thành phần phản M: Chỉ thị ADN (sử dụng hệ gen Lambda (l) cắt enzym giới hạn HindIII); Đường chạy 1- ứng, ... virut phản ứng RT -PCR gây bệnh viêm gan có mẫu huyết BN mẫu huyết lại với đối chứng âm tính (-) (khuôn ARN kháng thể anti-HCV thay nước tinh huyết dương khiết) đối chứng tính Phản ứng RT -PCR dương ... M PCR Như vậy, mẫu huyết có phản ứng anti-HCV âm tính 23.0kb 9.4kb 6.5kb 4.3kb 2.3kb 2.0kb 0.5kb ARN virut HCV, không phát phản ứng RT -PCR (hình 3) Điều cho thấy có tồn lúc ARN-HCV ~ 300bp PCR...

Ngày tải lên: 07/08/2014, 03:20

... trường phản ứng Ion Mg2+ thành phần thiếu phản ứng PCR, nồng độ Mg2+ tối ưu để thực phản ứng PCR từ 150 ÷200µM Nồng độ chuẩn cho khoảng tương ứng, phải thực điều kiện định Nước sử dụng cho phản ứng ... đáp ứng yêu cầu thay đổi nhiệt độ nhanh xác Tránh tối đa bốc nước trình phản ứng Tuy nhiên, ứng với phản ứng cụ thể có thiết bị dụng cu khuyếch đại riêng 26 1.5.6 Phản ứng Multiplex PCR Phản ứng ... nhiều biến dạng PCR đời - RT - PCR (reverse transcriptase PCR) kỹ thuật mà RNA dùng làm khuôn mẫu cho khuếch đại PCR sau chuyển đổi thành c-DNA, gọi RNA - PCR hay RT – PCR RT – PCR nhạy phương...

Ngày tải lên: 14/08/2014, 18:17

Ngày tải lên: 29/08/2014, 13:27

... triển PCR đa mồi đặc hiệu methyl húa giúp ích cho nghiên cứu ngoại di truyền mức độ ADN nhiều gen, đặc biệt gen ức chế ung thư Đề tài nhằm mục đích sau: Tìm điều kiện tối ưu cho phản ứng PCR đa ... kỹ thuật PCR đặc hiệu methyl húa theo nguyên lý xử lý ADN phương pháp bisulfite để xác định mức độ methyl húa promoter Wp, Cp Qp liên quan đến biểu lộ gen EBNA1, đồng thời phát triển PCR đa mồi ... PCR đa mồi đặc hiệu methyl húa cho promoter Wp, Cp Qp EBV, sử dụng nguyên liệu tế bào dòng Ứng dụng PCR đa mồi đặc hiệu xác định mức độ methyl húa promoter điều hũa biểu lộ gen EBNA1 mẫu sinh...

Ngày tải lên: 10/01/2015, 06:08