NGHIÊN CỨUXÁCĐỊNH NẤM AspergillusSINHĐỘCTỐAFLATOXINTRÊNLẠCBẰNGPHẢNỨNGPCRĐẶCHIỆU Trần Tuấn Tú, Đàm Quang Hiếu, Hoàng Thị Ngát, Lê Huy Hàm và Phạm Xuân Hội Summary Identification of Aspergillus flavus induced Aflatoxin in peanut in the orth of Vietnam using PCR method Aflatoxins are carcinogenic metabolites produced by several members of Aspergillus group, such as Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus nomius.Number of methodologies have been developed for detection of aflatoxin in grain and food, including thin-layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC), overpressured chromatography, polymerase chain reaction (PCR), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) At least, more than 20 genes have been determined to be involved in Aflatoxin biosynthesis pathway. In which, genes ver-1, omt-1 and apa-2 play an important role in the pathway. In this study, we use ver as a target gene to detect peanut contaminated aflatoxin in the North of Vietnam by employing PCR approach. Peanut samples on the field, household and market from different area have been collected for isolating Aspergillus flavus induced Aflatoxin strains using from a separate hypha. A primer pair complementing the coding portion of ver gene was generated. DNA extracted from Aspergillus flavus, Aspergillus niger strains from Nghean, Haiduong and Hanoi provinces was used as PCR template. Positive results as designed PCR products were observed only with all DNA templates of Aspergillus flavus from different sources, while no PCR products were observed with DNA templates of Aspergillus niger. The results is suggesting a posibility to use PCR as selective method for early, accurate detection of aflatoxin contaminated in peanut as well as in grains and foods. Keywords: Aflatoxin, Aspergillus flavus, peanut, PCR, identification. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Nấmsinhđộctố là một trong những tác nhân gây bệnh phổ biến làm giảm chất lượng và giá tr sn phNm nông nghip do sinh ra các loi c t gây hi cho sc kho con ngưi và vt nuôi. Ph bin nht trong nhóm nm sinh c t là nm bnh Aspergillus spp. (A. flavus; A. parasiticus; A. fumigatus ) có kh năng sinh c t gây ung thư Aflatoxin. Các chng nm này có ph hot ng rt rng vì vy có kh năng lây nhim trên nhiu loi nông sn như ngô, lc, bông, u tương Các loi ht có du (c bit như lc) rt thích hp cho s phát trin ca nm Aspergillus spp. cũng như s hình thành c t Aflatoxin. Xut phát t thc t trên, ã có nhiu phương pháp ưc nghiên cu và áp dng trên th gii nhm phát hin sm ngun nm bnh, iu này có ý nghĩa quan trng trong vic hn ch tác hi nm bnh trên nông sn. Phương pháp PCR ã ưc s dng phát hin các loi nm và vi khuNn gây bnh và sinh c t trên nông sn, thc phNm và các loi thc ăn gia súc, do tin li, d áp dng, có kh năng phát hin sm mm bnh k c khi chúng chưa sinh c t. Có ít nht 20 gen tham gia vào con ưng tng hp aflatoxin, mt s gen quan trng trong s ó ã xác nh ưc trt t nucleotid và chc năng như apa, omt, ver, nor Trong nghiên cu này chúng tôi s dng gen ver - mã hoá cho enzyme chuyn versicolorin thành sterigmatocystin (tin cht u tiên trong nhánh sinh tng hp Aflatoxin B 1 - cht c nht và ph bin trong nhóm Aflatoxin) làm gen ích bưc u xác nh s có mt ca nm bnh Aspergillussinh c t trên các mu lc thu thp mt s tnh min Bc Vit N am. II. VT LIU VÀ PHƯƠN G PHÁP N GHIÊN CU 1. Vật liệu nghiêncứu Các ging lc thu thp trong nhà dân, trên ng rung và trên th trưng các tnh N gh An, Hi Dương và Hà N i ưc s dng phân lp ngun nm bnh. Cp mi c hiu cho gen ver, các hóa cht s dng trong sinh hc phân t phc v vic tách chit ADN tng s si nm và các nguyên liu cho phn ng PCR ưc mua ca hãng Sigma, Fermentas 2. Phương pháp nghiêncứu 2.1. Thu thp mu lc và thu nhn nm bnh t mu lc. Các mu lc thu v ưc bo qun trong phòng lnh iu kin 4 - 8 0 C ti B môn Bnh hc phân t thc vt. thu ưc nm bnh, chúng tôi tin hành theo 2 cách: (i) t ht lc trc tip trên ĩa petri có lót giy kh trùng sch, gi trong iu kin 28 0 C và Nm khong 80%; (ii) Ct v ht lc t trên môi trưng PDA c, gi nhit 28 0 C. Sau 3 - 5 ngày t mu, tin hành quan sát si nm mc trên lc và v ht lc, xác nh các im mc nm thích hp tin hành cy chuyn và phân lp. 2.2. Phương pháp phân lp nm: S dng phương pháp tách si nm ơn làm thun các isolate. Trên ĩa môi trưng c, tin hành cy chuyn bng cách ly si nm ti các im ngoài rìa ca khuNn lc cy chuyn sang ĩa môi trưng mi. Mi khuNn lc trên ĩa môi trưng chn t 3 n 5 im cy chuyn theo nguyên tc ngu nhiên. Tin hành phân lp nhng mu nm Aspergillus có c im hình thái in hình trên c 2 loi môi trưng PDA c (120 ml dch chit khoai tây, 12 g dextrose, 10 g agar cho 1L môi trưng - là môi trưng giàu dinh dưng) và môi trưng Czapek c (là môi trưng dinh dưng trung bình) cho n khi t ti ng u v màu sc và tc phát trin ca khuNn lc. Da vào các c im nhn dng mu sc khuNn lc, hình dng si nm, vt loang li trên môi trưng quan sát trên ĩa petri và kt hp vi hình dng bào t, cung sinh bào t, th bình quan sát trên kính hin vi chúng tôi tip tc làm thun các isolate bng vic chn lc và cy chuyn các mu nm trên môi trưng c. Trên cơ s các c im nhn dng trong quá trình phân lp, các mu nm ưc phân thành các isolate A. flavus, A. paraciticus hay A. niger. Sau ó, các mu nm này ưc s dng làm nguyên liu phc v cho các thí nghim tip sau. 2.3. Tách chit ADN tng s. Các mu nm thu ưc trên môi trưng c ưc tip tc nuôi cy lc 200v/p trong môi trưng PDA và Czapek lng t 5 - 7 ngày, 28 0 C thu sinh khi. Sau khi ưc ra bng nưc ct t 3 - 4 ln các mu nm ưc gi trong t lnh sâu - 80 0 C làm nguyên liu tách chit ADN tng s. Trong nghiên cu này, chúng tôi ã s dng phương pháp tách chit ADN tng s t nm Aspergillus theo quy trình ca Eric W. Boehm. Cho 200 - 300 mg sinh khi nm ã ưc nghin nh bng nitơ lng vào ng eppendorf 1,5 ml, b sung 500 l dung dch tách chit (100 mM Tris-pH 8.0, 10 mM EDTA, 2% SDS, 1% β-mercaptoethanol), mu 65 0 C trong 1h, o u mu 5 phút mt ln. B sung 300 l dung dch CTAB (5M N aCl, 10% CTAB), mu trong 30 phút. Tip ó, b sung thêm 450 l dung dch chloroform-isoamyl alcohol t l 24:1 (v/v), o u và ly tâm 12000 vòng/phút trong 15 phút. Chuyn pha dch trong phía trên sang ng mi, b sung 600 l dung dch isopropanol lnh và mu - 20 0 C ít nht 3 h. Sau ó, ly tâm mu 12000 vòng/phút trong 10 phút. Loi b dch phía trên và ra kt ta thu ưc bng 300 l EtOH lnh 70%, o nh và ly tâm 12000 vòng/phút trong 5 phút. Thu li và làm khô kt ta; hòa tan kt ta vi 50 l nưc ct kh ion sau ó x lý loi b ARN . Các mu ADN tng s sau ó s ưc kim tra cht lưng bng phương pháp in di trên gel agarose 1% và o quang ph hp th (OD 260/280nm ) kim tra hàm lưng và cht lưng ADN tng s thu ưc. 2.4. Thit k Primer c hiu. Trên cơ s trình t gen ver (Acession number: M91369) ã ưc ăng ký trong ngân hàng gen th gii, chúng tôi s dng chuơng trình CLC Bio 3.1 thit k cp mi VER-496F (5’- ATGTCGGATAAT CACCGTTTAGATGGC-3’) và VER-1391R (5’-ATGTCGGATAAT CACCGTTTAGATGGC-3’) nhân phân on có kích thưc 896 bp ca gen ver-1 (Hình 1). N hng chng nm có băng ADN kích thưc 900bp ưc khuych i bng cp mi trên ưc xem là có kh năng sinh c t Aflatoxin. Hưng nghiên cu trên s là cơ s cho chúng tôi xây dng phương pháp có th chuNn oán s nhim và nh lưng ưc mc nhim nm Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxin t các mu lc hay các cây lương thc khác. Hình 1. Cấu trúc gen ver và vị trí cặp mồi được thiết kế trên gen. Gen ver có kích thước khoảng 1.76 kb, tận cùng đầu 5’ và đầu 3’ là vùng không phiên mã (5’UTS và 3’UTS) dài khoảng 400bp và 372bp; khung đọc mở (ORF) nằm từ vị trí 400 đến vị trí 1393, mã hoá cho 262 a.amin; trong khung đọc mở có tồn tại 3 đoạn exon và 2 đoạn intron. Cặp mồi được thiết kế nằm trọn trong khung đọc mở, có kích thước lý thuyết 896bp (~ 900bp). 2.5. Phn ng PCR c hiu. Các mu DN A ã tách chit ưc pha loãng v nng 20ng/l làm khuôn cho phn ng PCR c hiu xác nh s tn ti ca gen ver trong genome. Phn ng PCR ưc tin hành th tích 20 l cha 0,2 l Taq 5’UTS 5’ 3’ 3’UTS Exon 1 Exon 2 Exon 3 400 - ATG 1393 - GAT Ver –496F Ver –1391R 1765 bp 896 bp Intron polymerase (5 u/l) ca Promega, 2 l buffer 10X, 0,2 mM dNTPs và 20 pmol mỗi mồi. PhảnứngPCR được thực hiện bằng máy nhân gen Genius trong 35 chu kỳ với chương trình nhiệt được thiết lập như sau: Biến tính 94 0 C trong 45 giây, gắn mồi ở 55 0 C trong 45 giây và kéo dài ở 72 0 C trong 1 phút. Các phân đoạn sản phNm ưc in di kim tra trên gel agarose 1% và ghi nhn hình nh bng h thng máy nh N ikon. III. KT QU VÀ THO LUN 1. Phân lp nm bnh Aspergillus spp. t mt s mu lc ca Vit N am. S dng c 2 phương pháp thu thp nm: (i) t ht lc lên ĩa petri có lp giy thm kh trùng ưc làm ưt (5 - 6 ht/ĩa) và (ii) t v la ht lc lên môi trưng PDA c (5 - 6 ming v/ĩa) chúng tôi ã thu ưc các chng nm Aspergillus spp. nh vào các c im hình thái bên ngoài như màu sc và vt loang ca khuNn lc trên môi trưng (Hình 2). Kt qu nhn thy bng phương pháp t v lc trên ĩa môi trưng PDA c, nhim khuNn và ln nhiu loi nm khác (nhim 40%) là thp hơn nhiu so vi phương pháp t c ht lc trên giy thm kh trùng (nhim 70%). Hình 2. Phương pháp thu nhận và phân lập mẫu nấm bệnh từ hạt lạctrên giấy thấm khử trùng được làm ướt (A) và từ vỏ hạt lạctrên môi trường PDA đặc (B). Qua theo dõi và thng kê chúng tôi nhn thy t l các ht lc b nhim nm là rt cao (dao ng t 80 - 100%) và không có s khác bit ln v t l nhim nm ca lc thu thp trong dân (sau khi thu hoch) so vi ngun lc trên th trưng. iu ó cho thy ngun nm bnh ã ưc lây nhim t ng rung n kho bo qun và ngưc li. Hu ht các mu lc b nhim nm A. flavus (có khuNn lc màu xanh vàng, mt sau màu vàng - Hình 3A1) và A. niger (khuNn lc màu en, mt sau màu trng hoc vàng - Hình 3A2) và không thu nhn ưc bt kỳ mu nm nào có c im hình thái ca nm A. paraciticus. iu này cho thy nm bnh Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxin ph bin trên lc Vit N am là chng A. flavus. Trên hai môi trưng PDA và Czapek c ưc s dng, có s khác bit v hình thái khuNn lc và tc phát trin ca nm khi nuôi cy (Hình 3). Tc phát trin ca nm Aspergillus spp. trên môi trưng Czapek chm hơn so vi trên môi trưng PDA. Trên môi trưng PDA, ưng kính khuNn lc nm t trung bình là 6 - 7 cm qua 7 ngày nuôi cy và t mc ti a 9 cm sau khong 20 ngày. Trên môi trưng Czapek, qua 7 ngày nuôi cy, ưng kính trung bình ca khuNn lc ch t ưc là 3,5 - 4 cm, ti a t ưc là 7 cm sau 20 ngày. Xét riêng vi 2 loài nm A. flavus và A. niger, chúng tôi nhn thy mc nhim nm trên lc cũng như tc phát trin ca nm loài A. flavus là cao hơn so vi loài A. niger, t ó có th thy A B nguy cơ ln ca vic nhim nm cũng như nhim c t Aflatoxin cao trên các mu lc ưc kho sát Vit N am (Hình 3). Hình 3. Hình thái nấmAspergillus spp. phân lập được từ mẫu lạc. A. Mẫu nấm A. flavus: trên môi trường PDA (A1) khun lạc phát triển nhanh và vùng nấm mới phát triển có màu vàng nhạt, vùng nấm bên trong có màu xanh. Trên môi trường Czapek (A2) nấmsinh trưởng chậm hơn, màu sắc đậm hơn và có xuất hiện các hạch nấm màu đen. A3: Hình ảnh thể bình và cuống sinh bào tử của nấm A.flavus quan sát dưới kính hiển vi (X 1600). A4: ấm A. flavus trong nuôi cấy lỏng. B. Mẫu nấm A. niger: Trên môi trường Czapek (B1) khun lạc phát triển chậm hơn và màu của khun lạc cũng đậm hơn và có xuất hiện một số “hạch nấm” trên khun lạc - có thể do môi trường Czapek nghèo dinh dưỡng hơn; B2: Hình ảnh sợi nấm A. niger quan sát dưới kính hiển vi (X 1600). Các mu nm Aspergillus thu ưc sau khi làm thun s ưc cy chuyn sang môi trưng PDA và Czapek lng nuôi cy thu sinh khi. Kt qu cho thy, không có s khác bit nào áng k khi nuôi cy nm Aspergillustrên 2 môi trưng lng này, sau khong 5 ngày, s thu ưc lưng sinh khi nấm đủ để tách chiết ADN tổng số. Điều kiện tối ưu của quá trình nuôi cấy này là 200 v/p, ở 28 - 30 0 C (Hình 3A4). Chúng tôi cũng tiến hành làm các tiêu bản nấmAspergillusphân lập được bằng hai cách, làm tiêu bản với mẫu nấm nuôi cấy trên môi trường đặc và làm tiêu bản với mẫu nấm nuôi cấy lỏng để quan sát hình dạng bào tử, cuống sinh bào tử, thể bình , so sánh để khẳng định chính xác hơn các loài nấm đã phân lập (Hình 3). 2. Kết quả tách chiết ADN. Trong thí nghiệm này chúng tôi đã khảo sát một số phương pháp tách chiết ADN tổng số ở nấm men, nấm sợi cũng như nấmAspergillus spp. đã được công bố. Tuy nhiên, sau khi thử nghiệm chúng tôi nhận thấy phương pháp tách chiết dựa trên quy trình của Eric W. A B A1 A2 A3 A4 B1 B2 Boehm vi các mu nm nuôi cy trong môi trưng lng là hiu qu nht. Vì th chúng tôi quyt nh s dng phương pháp này tách chit cho các mu nm ã ưc làm thun mang các c im hình thái c trưng ca nm A. flavus và nm A. niger. Kt qu chúng tôi thu ưc 15 mẫu ADN tổng số nấm A. flavus với hình ảnh điện di trên gel agarose 1% rõ nét với hàm lượng ADN trung bình từ 300 - 500 ng/µl (Hình 4) và 5 mẫu ADN tổng số nấm A. niger sử dụng làm đối chứng cho phảnứng PCR. Các mẫu ADN tổng số được sử dụng làm sợi khuôn cho phảnứngPCRđặchiệu với cặp mồi đã thiết kế. Hình 4. Ảnh điện di AD tổng số các mẫu nấmtrên gel agarose 1%. M: Marker λ HindIII; 1 - 4: ấm A. flavus ghệ An, 5 - 7: ấm A. flavus Hải Dương; 8 - 10 nấm A. flavus Hà ội; 11 - 13: ấm A. niger ghệ An; 14: ấm A. niger Hải Dương và 15: ấm A. niger chun. 3. Kt qu phân tích bng phn ng PCR c hiu. Từ 15 mẫu ADN tổng số thu được của isolate A. flavus chúng tôi chọn ra 7 mẫu ADN tổng số để làm khuôn cho thí nghiệm tối ưu hoá điều kiện phảnứngPCRđặchiệu với cặp mồi VER. Điều kiện cho phảnứngPCR như đã trình bày ở phần vật liệu và phương pháp. Nồng độ khuôn ADN tổng số được thay đổi từ 1 ng, 2 ng, 10 ng, 20 ng, 100 ng và 200 ng cho thể tích phảnứng là 20 µl để tối ưu hoá nồng độ khuôn ADN. Kết quả phân tích cho thấy khoảng nồng độ thích hợp cho mồi VER dao động từ 2 - 20 ng, tuy nhiên ở nồng độ 20 ng các phân đoạn ADN được khuyếch đại tốt nhất và nồng độ 20 ng được chúng tôi duy trì để tối ưu hoá nhiệt độ gắn mồi. Việc tối ưu nhiệt độ gắn mồi là rất quan trọng và trong thí nghiệm này chúng tôi nhận thấy ở nhiệt độ gắn mồi 50 0 C các băng cần khuyếch đại đều xuất hiện tuy nhiên có xuất hiện những băng không đặc hiệu. Ở nhiệt độ gắn mồi 55 0 C, hiệu suất gắn mồi và khuyếch đại gen vẫn được duy trì và các băng không đặchiệu đã biến mất. Sau khi đã thiết lập được điều kiện thích hợp cho phảnứng mồi đặc hiệu, chúng tôi đã tiến hành phảnứngPCR với tất cả các mẫu ADN tổng số của các mẫu nấmphân lập được và đối chứng được sử dụng trong thí nghiệm này là mẫu ADN tổng số của mẫu A. niger. Kết quả thu được các băng ADN khuyếch đại có kích thước xấp xỉ 900bp, tương đồng với kích thước lý thuyết đã tính toán là 896bp ở tất cả các phảnứngPCR sử dụng sợi khuôn là ADN tổng số nấm A. flavus. Các isolate A. flavus phân lập được ở các vùng sinh thái khác nhau đều cho kết quả dương tính với các mồi đặc hiệu, trong khi các chủng A. niger sử dụng làm đối chứng đều cho kết quả âm tính với các mồi đặchiệu (Hình 5). Điều này chứng tỏ cặp mồi đã thiết kế và điều kiện phảnứngPCR chúng tôi thiết lập được là có thể sử dụng phân biệt loài A. flavus và A. niger. Điều đó cũng có nghĩa là phương pháp của chúng tôi hoàn toàn có thể nhận biết được các nấm có khả năng sinhđộctốAflatoxin với các nấm không sinhđộc tố, bởi các nấm A. flavus được coi là loài sinhđộctốAflatoxin rất mạnh trong khi nấm A. niger là loài hoàn toàn không sinhđộc tố. Hình 5. Hình ảnh điện di sản phm khuyếch đại với mồi Ver trên gel agarose 1% M: Marker; 1 - 3: A. flavus ghệ An; 4 - 6: A. flavus Hải Dương; 7: A. flavus Hà ội; C: Đối chứng A. niger chun. Các mẫu có đặc điểm hình thái điển hình của A. flavus đều cho băngđặchiệu ~ 900bp còn mẫu đối chứng là mẫu A. niger chun không có băngđặchiệu (Hình ảnh thu nhận bằng máy chụp ảnh ikon) IV. KẾT LUẬN Con đường sinh tổng hợp Aflatoxin ở nấm bệnh Aspergillus đã được nghiêncứu khá chi tiết ở mức độ phân tử. Ít nhất có 20 gen mã hóa cho các enzyme tham gia vào con đường này và một số gen quan trọng đã được giải trình tự và nghiêncứu chức năng đầy đủ. Trong các gen quan trọng tham gia vào quá trình sinh tổng hợp Aflatoxin, ver, omt và apa đang được quan tâm và sử dụng làm gen đích trong các nghiên cứuxácđịnh nấm Apergillus sinhđộctốAflatoxinbằng kỹ thuật PCR (Hình 6). Trong nghiêncứu có tính chất bước đầu thử nghiệm khả năng sử dụng phương pháp PCR đ chNn oán nm Apergillus sinh c t Aflatoxin. Chúng tôi ã thit lp ưc phương pháp ti ưu phân lp nm A. flavus, phương pháp ti ưu tách chit ADN tng s và c bit là chúng tôi ã ti ưu ưc iu kin cho phn ng PCR có th chNn oán s có mt ca nm A. flavus vi cp mi gen ver. ây là cơ s cho phép chúng tôi tip tc M 1 2 3 4 5 6 7 M C 900bp 1500bp 1000bp 800bp hoàn thin phương pháp có th xác nh các chng nm Apergillus có kh năng sinh c t Aflatoxin nh phn ng PCR c hiu vi các gen khác như ver, omt, apa trc tip trên các mu lc nghiên cu, to mt phương pháp b sung có hiu qu nhm chNn oán nhanh và chính xác nm bnh Aspergillus spp. sinh c t Aflatoxintrên lc cũng như các loi nông sn khác của Việt Nam Hình 6. Sơ đồ minh họa con đường sinh tổng hợp Aflatoxin B 1 ở nấm bệnh Aspergillus. Gen apa là gen điều khiển liên quan đến việc chuyển averufin thành versiconal hemiacetal acetate, dẫn đến sự tập trung acetate cần thiết trước khi bước vào con đường sinh tổng hợp Aflatoxin. Gen ver mã hoá cho enzyme chuyển hoá versicolorin A thành sterigmatocystin và gen omt mã hoá cho enzyme chuyển hoá sterigmatocystin thành O- methylsterigmatocystin là tiền chất của Aflatoxin B 1 . TÀI LIU THAM KHO 1. Kurtzman C.P., et al., 1987. Antonie Leeuwenhoek 53:147-157. 2. Yu J., et al., 2005. Rev. Iberroem.Miccil. 22:194-202. 3. Kolosova A.Y., et al., 2006. Anal. Bioanal.Chem. 384:286-94. 4. Jarvis B., D.A.L.Seiler., A.J.L.Ould and A.P.William, 1983. J.Appl.Bacteriol. 55:325-336. 5. Stroka J., Van O. R. and Anklam E, 2000. J.Chromatoqr.A. 904(2):251-6. 6. Jaimez J., Fente CA., Vazquez BI., Franco CM., Cepeda A., Mahuziez G., and Pronqnon P, 2000. J.Chromatoqr A. 882(1-2):1-10. 7. Bintvihok, A., Y. Adachi, and K. Hirano, 1992. Toxicon 30:492-497. 8. Cheng, R., J. Tsay, Y. Huang, and R. Y. Chiou, 2002. J. Food Prot., 65:840-844. 9. Farber, P., R. Geison, and W. H. Holzapfel, 1997. Int. J. Food Microbiol. 36:215-220. 10. Geisen, R, 1996. Syst. Appl. Microbiol. 19:388-392. 11. http://csm.colostate- pueblo.edu/biology/dcaprio/351L/Proje ct1351L.html 12. http://www.aspergillusflavus.org/pdfs/C TAB%20Method.pdf 13. http://www.protocol- online.org/prot/Protocols/Fungal- Genomic-DNA-Extraction-1200.html 14. http://www.upstate.edu/biochem/amber g/protocols/yeast_genomic_DNA.html 15. www.fgsc.net/fgn37/borges.html gười phản biện: gô Vĩnh Viễn T¹p chÝ khoa häc vµ c«ng nghÖ n«ng nghiÖp ViÖt Nam 10 . NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH NẤM Aspergillus SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN TRÊN LẠC BẰNG PHẢN ỨNG PCR ĐẶC HIỆU Trần Tuấn Tú, Đàm Quang Hiếu, Hoàng Thị Ngát,. nhận biết được các nấm có khả năng sinh độc tố Aflatoxin với các nấm không sinh độc tố, bởi các nấm A. flavus được coi là loài sinh độc tố Aflatoxin rất mạnh trong khi nấm A. niger là loài. định nấm Apergillus sinh độc tố Aflatoxin bằng kỹ thuật PCR (Hình 6). Trong nghiên cứu có tính chất bước đầu thử nghiệm khả năng sử dụng phương pháp PCR đ chNn oán nm Apergillus sinh c