Luận văn nghiên cứu xác định nấm gây bệnh thán thư trên nho, đắc điểm sinh học và tính đa dạng di truyền của nấm

luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP & PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ----------------------***--------------------- HOÀNG THỊ NGÁT NGHIÊN CỨU XÁC ðỊNH NẤM GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN NHO, ðẶC ðIỂM SINH HỌC VÀ TÍNH ðA DẠNG DI TRUYỀN CỦA NẤM LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Hà nội, 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP & PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ----------------------***--------------------- HOÀNG THỊ NGÁT NGHIÊN CỨU XÁC ðỊNH NẤM GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN NHO, ðẶC ðIỂM SINH HỌC VÀ TÍNH ðA DẠNG DI TRUYỀN CỦA NẤM Chuyên ngành : BẢO VỆ THỰC VẬT Mã số : 60.62.10 LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn : TS: Phạm Xuân Hội Hà nội, 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Lời cảm ơn Trước hết, tôi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Phạm Xuân Hội ñã tận tình hướng dẫn và tạo ñiều kiện giúp ñỡ tôi trong quá trình làm việc cũng như thực hiện nghiên cứu khoa học và hoàn thành luận văn này. Trân trọng cảm ơn các thầy cô và lãnh ñạo Viện khoa học Nông nghiệp Việt Nam. Ban ñào tạo sao ñại học ñã tạo ñiều kiện ñể tôi hoàn thành khóa học. Tôi xin chân trọng cảm ơn toàn thể ñồng nghiệp trong Bộ môn Bệnh học phân tử thực vật - Viện Di truyền nông nghiệp giúp ñỡ và khích lệ tôi trong quá trình học tập và làm việc. Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới toàn thể bạn bè và gia ñình tôi ñã giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập. Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… L LL Lời cam i cam i cam i cam ñoan oanoan oan Tôi xin cam đoan mọi kết quả trong báo cáo chưa được sử dụng để báo cáo cho bất kỳ học vị nào, mọi số liệu được sử lý rất đáng tin cậy. Tôi xin cam đoan rằng, kết quả nghiên cứu và xử lý được sự giúp đỡ chỉ dẫn của đồng nghiệp và thầy hướng dẫn. Hà Nội, ngày 7 tháng 12 năm 2011 Tác giả luận văn Hoàng Thị Ngát Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… DANH MỤC KÝ HIỆU NGTK Niên giám thống kê FAO Tổ chức lương thực và nông nghiệp liên hợp quốc ĐTNT Điều tra Ninh thuận Brix độ ngọt, được dùng để đánh giá trái cây C. acutatum Colletotrichum acutatum C. gloeosprioides Colletotrichum gloeosprioides G. ampelophagum Gloeosporium ampelophagum E. ampelina Elsinoe ampelina S. amplinum Sphaceloma amlinum DNA (ADN) Acid Deoxyribo Nucleic CTAB Cetyltrimelthylammonium bromide dNTP Deoxy nucleotide triphosphates TE Tris- EDTA EDTA Ethylenediaminetetra acetic acid KAC Kalipotassium acetate SDS Sodium lauryl sulfate AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism SCAR Sequence Characterized Amplified Region SSR Microsatellite hay Simple Sequence Repeates STS Sequence Tagged Sites ISSR Inter – Simple sequence repeat RAPD Random Amplified Polymorphism DNA RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism NTSYS-pc2.01 Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Diện tích trồng nho của một số nước………………… 5 Bảng 1.2 : Sản lượng nho trên toàn thế giới……………………………… 6 Bảng 1.3. Diện tích gieo trồng và sản lượng nho ở Việt Nam từ năm 2005 đến năm 2010……………………………………………………………… .7 Bảng 2.1 : Trình tự oligo sử dụng trong phản ứng RAPD-PCR .28 Bảng 3.1: Số mẫu thu thập tại Ninh Sơn, Tỉnh Ninh Thuận……………….35 Bảng 3.2: Đặc điểm hình thái khuẩn lạc của các isolate Colletotrichum… .40 Bảng 3.3: Kết quả phân tích Anova hai nhân tố với 3 lần lặp lại mức ý nghĩa α = 0,005 theo chương trình Microsoft Excel 2003………. …………… 42 Bảng 3.4 : Kết quả phân tích Anova hai nhân tố với 3 lần lặp lại mức ý nghĩa α = 0,005 theo chương trình Microsoft Excel 2003 tại các nhiệt độ khác nhau đến sự phát triển đường kính khuẩn lạc…………………… 44 Bảng 3.5 : Kết quả phân tích Anova hai nhân tố với 3 lần lặp lại mức ý nghĩa α = 0,005 theo chương trình Microsoft Excel 2003 tại 4 pH đến sự phát triển của đường kính khuẩn lạc………………………………………………… 46 Bảng 3.6: Kết quả phân tích Anova hai nhân tố với 3 lần lặp lại mức ý nghĩa α= 0,005 theo chương trình Microsoft Excel 2003 .47 Bảng 3.7: Phân tích phương sai 2 nhân tố có sự lặp lại mức ý nghĩa 0.005 ảnh hưởng của môi trường đến đường kính khuẩn lạc…………………… 48 Bảng 3.8: Kết quả phân tích Anova hai nhân tố với 3 lần lặp lại mức ý nghĩa α = 0,005 theo chương trình Microsoft Excel 2003……………………… .50 Bảng 3.9: Kết quả đánh giá tính độc gây bệnh của isolate Elsinoe spp. trên lá và quả nho sau 7 ngày………………………………………………… 50 Bảng 3.10: Kết quả đánh giá độc tính gây bệnh của isolate Colletotrichum spp. trên lá và quả nho sau 7 ngày 52 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bảng 3.11: Kết quả kiểm tra chất lượng ADN tổng số của Colletotrichum spp. sử dụng máy đo quang phổ hấp thu (OD 260/280 ) 55 Bảng 3.12:Hệ số tương đồng di truyền giữa các mẫu C.gloeossprioides… 59 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Triệu chứng trên lá, thân, quả của nấm Elsinoe spp.………………12 Hình 1.2: Triệu chứng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp…………….13 Hình 1.3: Hình thức sinh sản của nấm Elsinoe spp. …………………… .14 Hình 1.4: Chu kỳ sống của một loài nấm Colletotrichum spp. ……………….16 Hình 3.1 : Triệu chứng nhóm I Elsinoe spp. trên lá, quả cây nho…………36 Hình 3.2 : Hình thái khuẩn lạc và bào tử Elsinoe spp. ………………… … .36 Hình 3.3: Triệu chứng nhóm II Colletotrichum spp. trên lá, quả cây nho .37 Hình 3.4: Hình thái khuẩn lạc và bào tử Colletotrichum spp. …………… .38 Hình 3.5: Hình thái bào tử Colletotrichum spp……………………….… 38 Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Elsinoe spp. sau 6 ngày trên môi trường PDA………………… 42 Hình 3.7: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Colletotrichum spp. trên môi trường PDA ………………………….43 Hình 3.8: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Elsinoe spp. tại các pH khác nhau trên môi trường PDA………………… 45 Hình 3.9: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Colletotrichum spp. trên môi trường PDA …………………………46 Hình 3.10: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Elsinoe spp. trên các môi trường khác nhau……………………… .48 Hình 3.11: Đồ thị biểu diễn sự phát triển đường kính khuẩn lạc của các isolate Colletotrichum spp. trên các môi trường khác nhau……………… .49 Hình 3.12: Kết quả lây nhiễm nhân tạo Elsinoe spp. trên quả, lá nho sau 7 ngày trong phòng thí nghiệm …………………………………………… .51 Hình 3.13: Kết quả lây nhiễm nhân tạo Colletotrichum spp. trên quả, lá cây nho sau 7 ngày trong phòng thí nghiệm ………………………………… .53 Hình 3.14: Nấm Colletotrichum spp. nuôi trong môi trường PDA lỏng… 54 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Hình 3.15: Sản phẩm điện di ADN tổng số trên gel agarose 1% 54 Hình 3.16: Kết quả sản phẩm PCR nhận dạng loài C. gloeosporioides .56 Hình 3.17: Sản phẩm điện di của mồi OPA3, OPG17………………… .57 Hình 3.18: Sơ đồ quan hệ di truyền của các C.gloeosporioides………… .60 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Mục lục Lời cảm ơn………………………………………………………………….i Lời cam ñoan………………………………………………………………ii Danh mục ký hiệu…………………………………………………… .….iii Danh nục bảng…………………………………………………………… iv Danh mục hình………………………………………………………… …v Mở ñầu………………………………………………… 1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1. Sơ lược về cây nho và tình hình sản xuất nho .4 1.1.1. Sơ lược về cây nho 4 1.1.1.1. Nguồn gốc, phân loại của cây nho 4 1.1.1.2. Giá trị thực phẩm của cây nho 5 1. 1. 2. Tình hình sản xuất nho…………………………………… 5 1.1.2.1. Tình hình sản xuất nho trên thế giới 5 1.1.2.2. Tình hình sản xuất nho ở Việt Nam .7 1.2. Một số nấm gây bệnh hại trên cây nho .9 1.2.1. Bệnh mốc sương (Downy mildew)………………………………… 9 1.2.2. Bệnh phấn trắng (Powdery mildew)……………………………… .10 1.2.3. Bệnh rỉ sắt………………………………………………………… 10 1.3. Bệnh thán thư gây hại ở nho………………………………… .10 1.3.1. Triệu chứng bệnh thán thư trên cây nho………………………… 11 1.3.1.1. Triệu chứng thứ nhất…………………………………………………….11 1.3.1.2. Triệu chứng thứ hai…………………………………………………… 12 1.3.2. Tác nhân gây bệnh thán thư trên nho…………………………… 13 1.3.2.1. Nấm E. ampelina gây bệnh trên nho………………………………….13 1.3.2.2. Nấm Colletrichum gây bệnh trên nho…………………………………14 . nghiên cứu đề tài Nghiên cứu xác ñịnh nấm gây bệnh thán thư trên nho, ñặc ñiểm sinh học và tính ña dạng di truyền ” Mục ñích nghiên cứu của ñề tài - Xác. định nguyên nhân gây bệnh thán thư trên cây nho ở Ninh Thuận. - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học, độc tính gây bệnh của nấm - Xác định tính đa dạng