cắt dna tái tổ hợp bằng enzyme giới hạn

... vi khuẩn hay nấm men - Dùng enzym hạn chế cắt plasmid nối đoạn gene mã hoá cho insulin để tạo vertor tái tổ hợp (thường dùng pBR322) - Chuyển vertor tái tổ hợp pBR322 vào vi khuẩn E.coli - Nuôi ... vào dược phẩm thành công Bằng kỹ thuật tái tổ hợp AND, người ta chuyển gene mã hoá insulin vào tế bào vi khuẩn, ni cấy mơi trường thích hợp, vi khuẩn E.coli sinh tổng hợp tạo loại peptid Qui trình ... disulfur - Kiểm tra chất lượng sản phẩm Sản xuất insulin tái tổ hợp với chuỗi A chuỗi B riêng biệt Về sau, nhiều phương pháp sản xuất insulin tái tổ hợp phát triển Ví dụ tập đồn Eli Lily phát triển phương...

Ngày tải lên: 05/11/2014, 21:18

... cụng nghờ di truyờn, cõc thuc nghiờm dờu cõn phâi sü dung DNA tâi to hofp (recombinant DNA) Do dụ, cụng nghờ DNA tõi to hỗfp (recombinant DNA technology)(hùnh 1.6) công nghê nên tâng, ca bân nhât ... thu viên gen chüa doan DNA cô gen tPA(ducmg bôi dâm doan DNA chèn vào, ducfng trâng vector, cõc diởm giụi han duỗfc chợ trờn hùnh B:BamHI; Bg: Bgl; E:EcoRI; ) iii) Vùng DNA gen tPA duac mô rông ... pham Alteplase bng cụng nghờ DNA tõi to hỗrp 38 1.3.1 Giôi thiêu khâi quât vê công nghê DNA tâi to hop 38 1.3.2 Quy trinh sân xuat Alteplase bàng công nghê DNA tâi to hop 40 II BÀN L U Â...

Ngày tải lên: 12/10/2015, 10:48

... chiết chúng từ huyết máu nên tốn Bằng phương pháp công nghệ DNA tái tổ hợp tương tự insulin, người ta thu nhận lượng lớn interferon thông qua thể vi sinh vật tái tổ hợp gen để phục vụ cho việc điều ... nghệ DNA tái tổ hợp thông qua E coli với hiệu suất lớn (1 L dịch lên men E coli thu HGH tương đương với lượng chất thu từ 60 tử thi) Đây protein sản xuất công nghệ sinh học đại sớm HGH tái tổ hợp ... thống, chẳng hạn insulin tái tổ hợp sản xuất E coli (Humulin, Eli Lilly, Indianapolis, IN, USA) lẫn nấm men (Novolog, Novo Nordisk, Bagsvaerd, Đan Mạch) Sản xuất protein tái tổ hợp thường đòi...

Ngày tải lên: 07/12/2015, 22:46

... di truyền) mà khởi đầu kỹ thuật AND tái tổ hợp PHƯƠNG PHÁP 1: Sinh tổng hợp Insulin tái tổ hợp theo phương pháp miniproinsulin (MPI) • Tách mARN gen tổng hợp proinsulin từ mẫu nghiền tuỵ người ... xuất Insulin tái tổ hợp chủng VSV biến đổi gen : nhóm phương pháp ch̃i nhóm phương pháp miniproinsulin KHÁI QT VỀ CƠNG NGHỆ AND TÁI TỔ HỢP • Kỹ thuật AND tái tổ hợp tập hợp nhiều kỹ thuật để ... dịch mã; lại loại bỏ ADN ARN khác • Cắt bỏ cầu nối A - T thu mARN Tách mARN gen tổng hợp proinsulin từ mẫu nghiền tuỵ người BƯỚC 3: Biến nạp plasmit tái tổ hợp vào E.coli nhờ phương pháp trộn...

Ngày tải lên: 14/07/2016, 10:47

... 5’-3’ 1.2 Đoạn Klenow DNA polymerase I E coli Lấp đầy đầu 3’ Đánh dấu đầu 3’ Tổng hợp DNA sợi làm đầy đôi Ứng dụng Tổng hợp sợi cDNA Đánh dấu DNA thứ mang đầu lồi 3’ 1.3 DNA polymerase bacteriophage ... SalI cắt trình tự (G TCGAC) + XhoI cắt trình tự (C TCGAG) Methyl hóa + dam (DNA adenine methylase) + dcm (DNA cystosine methylase) Cắt DNA bằng enzyme hạn chế 5.1 Các loại đệm dùng phản ứng cắt ... chloroform kết tủa DNA lại lần thể tích ethanol lần thể tích isopropanol hạn chế hạn chế hạn chế hạn chế II Các enzyme trùng hợp DNA polymerase (DNA- dependent DNA polymerase) 1.1 DNA polymerase...

Ngày tải lên: 07/11/2017, 22:43

... Khi A hay C đƣợc methyl hóa, enzym cắt giới hạn khơng nhận biết đƣợc vị trí cắt DNA vi khuẩn khơng bị enzym cắt giới hạn chúng cắt nhờ chế Các enzym cắt giới hạn hợp thành hệ thống bảo vệ tế bào ... vậy, vị trí cắt giống hai mạch Enzym cắt giới hạn EcoRI DNA khơng đƣợc methyl hố Phân cắt DNA khơng đƣợc methyl hố Enzym cắt giới hạn EcoRI Đầu dính EcoRI khơng cắt DNA đƣợc methyl hố DNA đƣợc methyl ... cho biến nạp DNA Trong thí nghiệm biến nạp gen cần sử dụng enzym cắt giới hạn, enzym sửa chữa DNA, enzym gắn DNA biến nạp vector 2.5.1 Các enzym cắt giới hạn Khái niệm tƣợng giới hạn: Các thực...

Ngày tải lên: 05/11/2012, 09:11

... cân hợp dNTP Công ngh DNA tái t h.p đầu 3’ + Tổng hợp sợi thứ hai cDNA tạo dòng cDNA + Tổng hợp DNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro 1.3 DNA ... (DNA- dependent DNA polymerase) DNA polymerase dùng để tổng hợp DNA thể điều kiện in vitro 1.1 DNA polymerase I E coli Enzyme dịch chuyển điểm đứt (nick) DNA, nick điểm đứt sợi DNA sợi đơi Chức enzyme ... 3’®5’ phân hủy DNA RNA tổ hợp lai Enzyme dùng kỹ thuật di truyền nhờ vào khả tổng hợp cDNA chúng (xem chương 6) Người ta tách chiết mRNA tế bào tổng hợp protein mạnh, sau dùng enzyme reverse...

Ngày tải lên: 31/03/2013, 23:31

... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNA tái tổ hợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNA tái tổ hợp vào hoạt ... Công nghệ DNA tái tổ hợp (DNA recombinant technology) Hệ thống phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ sinh vật để ghép nối vào DNA sinh vật khác tạo phân tử DNA tái tổ hợp Phân ... sự thay đổi của DNA ảnh hưởng đến kiểu cắt hạn chế (restriction patterns) Thể tái tổ hợp (recombinant) Các cá thể tế bào mang tổ hợp gen khác với cha mẹ chúng trình tái tổ hợp di truyền sinh...

Ngày tải lên: 16/08/2013, 21:56

... xuất DNA tái tổ hợp (tạo dòng gen) Plasmid cắt vị trí xác định enzyme hạn chế DNA genome ngoại lai cắt loại enzyme, số đoạn có gen quan tâm Plasmid đoạn genome phối trộn kết hợp nhờ enzyme DNA ... phage Genome tái tổ hợp phage λ sau đóng gói vỏ protein bổ sung vào E coli Các phage λ gây xâm nhiễm DNA tái tổ hợp chúng vào tế bào vật chủ, nơi tái Chỉ đoạn DNA có kích thước thích hợp mang gen ... phát triển công nghệ DNA tái tổ hợp dược phẩm dùng điều trị bệnh rối loạn người Năm 1979, Tổ hợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất thương mại insulin người công nghệ DNA tái tổ hợp Trước thời điểm này,...

Ngày tải lên: 05/10/2013, 19:20

... 10.1) đoạn DNA nối đầu dính đầu dính đầu dính + DNA ligase DNA tái tổ hợp Hình 10.1 Enzyme giới hạn (EcoRI) cắt DNA khác nhau, nhờ kiến tạo phân tử DNA tái tổ hợp in vitro (bắng enzyme DNA ligase) ... truyền 2.1 DNA tái tổ hợp gì? DNA tái tổ hợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợp DNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật tái tổ hợp DNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính Tái tổ hợp DNA + DNA ligase Nối sai DNA tái...

Ngày tải lên: 23/10/2013, 16:20

... dòng mang DNA tái tổ hợp Trong thí nghiệm tạo vector tái tổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid tái tổ hợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật tái tổ hợp DNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNA tái tổ hợp thường ... Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th coli E (đ E coli - Sợi đ bacteriophage (cDNA...

Ngày tải lên: 11/12/2013, 15:15

... dòng mang DNA tái tổ hợp Trong thí nghiệm tạo vector tái tổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid tái tổ hợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật tái tổ hợp DNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNA tái tổ hợp thường ... Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th coli E (đ E coli - Sợi đ bacteriophage (cDNA...

Ngày tải lên: 13/12/2013, 01:16

... tử DNA tái tổ hợp gồm vector plasmid nhỏ pSC101 E coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau Hình Hai phân tử DNA khác cắt enzyme ... enzyme giới hạn EcoRI tạo đầu dính bổ sung nhau, cách khâu nối thành phân tử DNA tái tổ hợp in vitro nhờ xử lý với DNA ligase Phương pháp nối trực tiếp tổng hợp đầu bổ sung Đối với đoạn DNA tạo ... với đoạn DNA tạo cách xử lý enzyme giới hạn cắt thẳng HindII chẳnghạn, việc nối đoạn DNA có đầu tạo thực theo hai cách sau: Nối trực tiếp DNA ligase phage T4 tổng hợp thêm đầu dính vào đầu 3'...

Ngày tải lên: 24/12/2013, 07:17

... 10.1) đoạn DNA nối đầu dính đầu dính đầu dính + DNA ligase DNA tái tổ hợp Hình 10.1 Enzyme giới hạn (EcoRI) cắt DNA khác nhau, nhờ kiến tạo phân tử DNA tái tổ hợp in vitro (bắng enzyme DNA ligase) ... truyền 2.1 DNA tái tổ hợp gì? DNA tái tổ hợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợp DNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật tái tổ hợp DNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNA tái tổ hợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính Tái tổ hợp DNA + DNA ligase Nối sai DNA tái...

Ngày tải lên: 25/01/2014, 19:20

Ngày tải lên: 20/03/2014, 11:20

... DNA tái tổ hợp dùng để thiết lập ngân hàng gen, cDNA tổng hợp protein, enzyme, hormone, Hình 1.1 Cấu tạo phân tử DNA tái tổ hợp 1.3 Quy trình tạo DNA tái tổ hợp Quy trình cơng nghệ tạo DNA tái ... phân tử DNA tái tổ hợp từ lồi khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, cơng nghệ DNA tái tổ hợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNA tái tổ hợp Công nghệ DNA tái tổ hợp thành ... protein chống đông máu v.v… nhờ kỹ thuật ADN tái tổ hợp Công nghệ DNA tái tổ hợp thành tựu đạt 2.1 Khái niệm DNA tái tổ hợp phân tử DNA nhỏ, lắp ráp từ đoạn DNA lấy từ thể truyền gen cần chuyển Năm...

Ngày tải lên: 22/03/2014, 17:40

... dòng mang DNA tái tổ hợp Trong thí nghiệm tạo vector tái tổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid tái tổ hợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật tái tổ hợp DNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNA tái tổ hợp thường ... Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th coli E (đ E coli - Sợi đ bacteriophage (cDNA...

Ngày tải lên: 09/07/2014, 06:20

... nhận đoạn ngắn DNA từ môi trường bên ngoài để đưa vào môi trường bên vi khuẩn, nhờ đó sảy tái tổ hợp Cơ chế: bào nhận - Sự tiếp xúc DNA lạ với tế bào nhận Sự xâm nhập DNA vào tế bào ... diên với số lượng nhỏ Hầu hết các DNA đêu bị thủy phân hoạt động enzyme DNase đường tiêu hóa DNA và RNA thủy phân thành nucleotide và tiếp tục các enzyme phá vơ thành các nhóm phosphate, ... guanine đoạn DNA không bảo vệ bị biến tính Người ta tính toán rằng, một bò ăn 24 kg thức ăn khơ từ thực vật cho tương đương 54µg DNA và DNA dễ dàng bị phân hủy DNase Các enzyme nuclease...

Ngày tải lên: 14/07/2014, 09:50

... này, người ta sử dụng dạng tái tổ hợp protease 3C từ rhinovirus người Protease có kích thước nhỏ (20 kDa) có tính đặc hiệu hạn chế Nó biểu protein tái tổ hợp dung hợp với glutathione-Stransferase ... protein có dung hợp GST mang hoạt tính enzyme tinh điều kiện tự nhiên Ngược lại, protein gắn đuôi His tinh điều kiện tự nhiên biến tính Cơng nghệ DNA tái tổ hợp 173 Protein dung hợp (protein đích ... Một Công nghệ DNA tái tổ hợp 168 kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên protein (kháng thể thứ nhất) Một kháng thể khác, phản ứng với phức hợp kháng thể-kháng nguyên, kết hợp với enzyme (kháng thể...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... phân tử Công nghệ DNA tái tổ hợp 110 SM PC Hình 5.3 Hình ảnh điện di genomic DNA sau phân cắt enzyme hạn chế SM: Chỉ thị kích thước chuẩn DNA PC: đối chứng dương tính (đoạn DNA dùng để đánh dấu ... dùng kỹ DNase I (tụy bò): enzyme xúc tác phản ứng thủy phân liên kết nằm sau pyrimidine chuỗi DNA Trong trưởng hợp DNA sợi đôi, chỗ cắt xảy hay hay sợi (xem chương 1) Công nghệ DNA tái tổ hợp 119 ... đoạn DNA trường hợp muốn tạo số lượng lớn mẫu dò Lúc này, enzyme DNA polymerase I thay DNA Taq polymerase 5’ 3’ 3’ (a) 5’ Vết cắt DNA polymerase I 5’ 3’ 3’ (b) 5’ Điểm cắt Hình 5.10 Đánh dấu DNA...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20