Công nghệ DNA tái tổ hợp

   !"# $%&'()*+$,-./.0123456789:.012/;4 678<==>??+'()@$;5:$;5 $;5#$;5*+$,3!?$;5* +$=AB,-=C==D=E:5<= $?=$$=F=!=D=.@;!G!H=? !:=.@A!G,/I=J:5K!!=L <=M!==;N&="O!P%;, /L==J'()*+$;$+$7!$%&NN$%;$ BA*="O!'(),-!=Q*+$?+5<=?C=R!:"5 S"!P;$F+$'()@=!TR!,I5SU=.@=!T !G!?+;"A;V=.=?C?+?W D!G,/L==J'()*+$0X=;L==J5!:YL==J =.:7!=.Z8J:B=T=;?#7!$%&?+5<= $%IBA**+$ !?[>'(),  /L==J'()*+$BA*%!D$?=O="O!=.,-?# %:L=YK!\*OP=.!?+B]=B!J! [P\=?=Q=7!#E=>[> !;.5.,-?#%:5!:Y$EC+>R!KJBA=^!" VEO=$%IJ!M!EP>5!:Y=:: BA_KNIRR.\=:*![?A , /L==J'()*+$!=K$L=#YK!\O= P=.:*Y!JBEP5!:Y,I5SU=5 !:Y?+R.;K$*BA[B%:=C\=XBA]=L=$*BA H=T='():,-?#%:\==`]=*OP=. .!:.=F=#$:.?=B%:=C\=BA]=Y!=..!:.BN =B_,(=::\=BA :PYM![BE $"5NBA*a()0a()$.=8Y!X=.L=M!J& 5S=7!*+$'(),/7!:H=?+5<==Y!= Y!;`>B=T$  A, /L==J'()*+$H=?+O=5S=Y!E$G?= b=U!F..c:.=F=%:T=d!L,6YL= =J$#L==J$L==J$!=M!J& 5S=7!:E$G#,-=:7!*+$ '()?+5<=5XBEKP!=?GBJ5!:YW <=ER!K!FY!NF;5!:Y,  !"# e7!=.K:;_$?=O A0?# %:L=?+8= ?;",KYBE;=.I?# M!f===._=gAB,-IM!"I K['()R!KJ?;+5%:BhRI!!;.5."=iL= K:L=5K!J!Y?C=h;j_gBD !A\P =., 1KY:\=:R.RhI5SV?=Y5!:Y$% &?!UkEA]=\=!F$%;$=.VBJP=?CV =!GER!K;?+=;#$.=?C?+,KY  !";[?+=.=!F,k..BP=?COE=lV$ B.P'(),kE&=.\=!F$%;$5,mmmB$,(?:=.I P\=nA$ J!P=..o[A[A=.P\= ==..T?A;KY!#J[A%: =F=fL,(?=IA!\=NN=.[\= if=..?ApeL=4.$Pf=D$E'() H=L=hPfDf=..=. "=BJ, (A!\=L==JNN$%;$=.=!F[B?# A$.\= ?=AB!G,/'()b=iBN BAB_!Go[A=.$E?+q=5=*N,( H=$E*NBEL=ViL=?+$%A$AB $%, (A!\=!:=.!GL==5=*N\= ^X$EEBE]==.?+$"5N,3>B!JP=.; M![$O$XfF[>'()]_B"==.,-KE Q=[>:$EJ5J=?#=_NII+$P\=E R!K$., /!F<=$?=$$?+&5S=$%;$!:=.J!M!EL <=K$==J!AB?+?#=#$?=O:nA B;L=B!J=.P=?C,[A\=$E[A Y!AB!G$J?+AB='()*+$, -?#%:KY:5?C=?;L=?+M!?+,(?==:: 7!$%&?+$D$S\==.=?C?+!:5W 5=AB!G_\=i?+B!JF,  ! -=>".c:..5!;..A0..5!;..ar8 =D;.c:.AJ5J= !AAB!G=E'() =;A$M!EB:*=+$$.PAB,'()PI\=i?+BE Jf5S=P.c:.AC>VP.c:.B.:; 0.:;8!;.5.VBJ[A!;.5.:L=?+BA B_.c:.A, J$J.c:.AP!GD'()_Q=[>V BJ=\$J=.5W5=5=EY!5P$% &'()$+$B=T=D,2J: s .c:. t " s ? t $%;% t $? u $:., 6g.c:.AnBAD[>'()VBJ?C=O BFV!V$!;.5.,I5S.c:. avA@  D[> k))--/.c:.$vP$%&'&%(')(D[>-kk//),/mm .c:.A!?+@E=wxmP=,/.c:. AD$%&'()+L.!02[,8U "#$%"&'()*+, !08 !;.0B8 !B]=, d/D"?C=b=FRO=$%& !B]=0 !L8, d/D"Q=NI]FRO=M!?C=b=FRO= Q=$%& !;.0 !5I8, [.c:.AnBA[>5!:K"FNID" $%&'()VBJ?C=;f,/'()?+DB_.c:.A ?+$%.I?#B]=J5=.=.;="O!,'>?=> P*O$%&=KE"'()!G'()>'() =\?=+$!YK!\,[A'()@5=F=: 5W5=?+$#'()P5=F=,3>?=>:H=$< +$F#$;5%F5!:Y=%?+[K:=Y!;!G !,/\=;Q=$%&'()X==+L?+5<=;. ='()=;5<==7!*+$'(), kL s =?av" u !.c:.A y  t  s  t '() s % u !xz;T 0$!5=8,6L t L s .c:.A0I5SU*+v8 y  t  s  t '() s % u !z;T, 6L t L s .c:.A s 0I5! t U$v8 s  { ! t L s R? s =" {  t  s  t '() =% u !B u =0B;!809 { =,8,                ,- .  . " / (' 0 - . '1 2 &34&56 /!=D!U=D !B]==D !5IB]=5! u =.c:. '();=.! { B.$=.-| s " { =D s % u !B]=V !5} s ;#!!: "? u = t $% u !B u =? u =" t !M! { % s $ !5I, I5SU2[,wJ=D !5I?+DB]=.c:.7)vvv, 8+3&% ( s != s ar s !% t B" s  s [> s !09 { =,8!:" ! y = s L t L s ? u = t $% s : s ? y =.c:.? t $%;% t $? u " u !=!L u  s  !?=; t  s =L t [> s .c:. s ? t = t ; u c.,2? y  L t  u .c:.% t B" s  s !Ly.!;.5. u =L t L s ? u = t $ s  .!;.5. u :; t R!% s " t = s !Ly.R!;.5.! {  s .c:. s , } s 5! t U d9'v u :()% t B" s [>U "#$-.(/ 0 1 2  d-= s $2v% t B" s [>U -=L t  u ? u = t $ s  t ? t  t  u .c:.A u := s   s  s  t ? t  t  u .c:.A s  y } u  u  s " { ; u  s  .c:.BL s . t L=% t B" s ? t ,} s 5! t U:v s [>0k↓-/k)/8 u ;vD [>0/↓-/k)k8 s [>? t  u : y = s  s ! t  u " { ; 0:B58 u  s  t } s  s  t " s ! { ! s =L=" { % t B" s B {  s .c:.:v u ;vU 3456 7 /$?=OBEP7!'()*+$;U08kD'() $%&'()0?;.8BE0w8!=K$L?C=$h$ h$$%&'()?+=D, /B.?+5<=$*BA5X='()=; BE0h$8= o;$;5B.$=. λ 5,-KEQ= .:$EFIK A!U d/\=E=>BE=, d6==.nN;5W5=$%BJ.P *+$#5=, d/\=<='()L= A>E=!G[A '()=;?+?=<=:, d/\=BA$ABP5W5=, *+)&% ~;5; u  s L=5!:" u = u %=" u !; u !% {  s !, /! s =; u ? y =$%? { '() t  u = t L} s ? s ? u d≥wmmB s  { = ? t . s $" { L u  t L t ;% t $=" s B u ,/ s $;5 s " { =L t L s =.! {  !% {  u  s =. u : s " { B" { !" t $., '()P$;5?+$%;$@!LK:!GO$;5B]= B*!=KG:0?;5!55.:;!;4.d3'38;:%>0;:.8  ,~O +$WD!G;#$;5Y!i;D=R!F=:P!B.;:% $;5"!RDWDb==Q;=*,~;5"! RD; Q?+$%B]=;:%!R&;j#//;r9, ~;5==..c:.?C=;+!GP, /$;5=![!?U==ER!K= $%P:+$KQ!$O$ER!K.c:.A.c:.BA *054.c:.8, /$;5?+!:=!G!!G?+R&;j ABKM!KCF#$%&'()f,•![:?+ BA?;>BA$048,!G?+BA$L=?+ ;5>"![#\=?+@$;5b=E= ==, 6F$;5J5J=ABFBEK$VBE "AB5'()P$;5nh$V; ?#AB$%, -!:"$;5TFBE;#0m#mmBE"A B85'()BE;V$;A?+FBEI+$,/$;5F BE;#?+=;$;55=RD;f=;€0.;R.5$;58%:;= Q=IKQ!IP.5X=, 2[,[B:=$;5.AJO5=RD;f=;€ $9aww5|,•B$.:O=.==;$;;0)$8 .:;.0-.8,3FO>P!;.5.".?+BD !#NIav U- !"=!gk))--/?+M!:?#;!;.5.OK,/FO> !?+A$SM!$%&..?#=@=.=.:;.#=. =$;;, "1 0 $83,9:;<8-- )$   0:)$  8-.  U=.=$;; .:;.%U[>_ !h$FNIBAar, 2[,|,[B:;$;5.AJOB;$‚/%:;; .5X=V?=(=<=5X=0!;$;.;=.8:X=; <=F0$;:;.8<=_ !h$0%8=.nN0=.= $;;=.<=8,)$;;;;==AAAB!G?= Q=!GO.$‚/i=;;=:,k.<= .c:.ƒd=;5.B[?C=.c:.:D;.ER!K=;!. =;.,rc:.:H=D„d=;K!Ro„d=;?+B* !=L?C=!G;!GO$‚/i!R5W5= BA,<=$;:;.P.$‚/;$+$FNIBAP .c:.A$h$=D'()=;$;5, "#$=3,9: 7>:4?%$6=NIDA =<=5X=<=_ !h$0%8=.nN0=.)$  =. <=8, ~;5?+D_NIRNB]=.c:.A,[A ?+X=B]=A+$ !5IB*!=,2Q ?+B_.c:.VBJ="$%&'()i !?= T=0 !5I8#?+B_<=.c:.="$%& '(),[A@$%&'()!@! A+$B]=;"A:5=.!=N:?+;, (A!>A+$?+=D;!BDV$[?+A+$FNBY Q=>A+$P:?+>JC.c:.'();=.0X=; $;:!;.5.;=.8;"A=N$%&*+$B]=;"A $$5..  =Q    xzd~… |  P  $;:!;.5.  :  #    zd…2  P $;:!;.5., "#$@34565AB' 7:9&C ! 2[,x[B:B$?=OER!K'()*+$05X==.8, ~;5?+D_NIRNB]=.c:.A,'()P=..= ;?+DB_<=;.c:.F==.M!%, ~;5P=..?+$FA+$C.c:.'();=.,/ $;5*+$?+BA$!GB]=T=!LK:$;5!G, $&%& λ &% /B.$=.Y!?!?+&5S=;.5X=,. 5?+&5S==K;B.$=.λ=%:WAB,6= Q=?!IP$=.λ;J!M!E!:'()=AB!G ,†!O;$ BP=..$=.λ;L= A>R% WEP=ABPL=Q==.:!λ^ !:L='()P!GE?+,/=.L= A [...]... di truyền ở người Hàng trăm công ty hiện nay đang đặc biệt phát triển các sản phẩm thông qua biến đổi di truyền các cơ thể sống Dưới đây là các ứng dụng chính của công nghệ DNA tái tổ hợp 1 Ứng dụng trong dược phẩm Sản phẩm thương mại đầu tiên được phát triển bằng công nghệ DNA tái tổ hợp là các dược phẩm dùng trong điều trị các bệnh và các rối loạn ở người Năm 1979, Tổ hợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất... bằng DNA ligase Các cosmid tái tổ hợp được hợp nhất trong vỏ, và các tiểu thể phage được sử dụng để xâm nhiễm vào tế bào vi khuẩn, ở đó cosmid sẽ tái bản như một plasmid Bảng 9.2 so sánh các tính chất của các vector plasmid, phage λ và cosmid Bảng 9.2 So sánh các vector plasmid, phage λ và cosmid 4 Thư viện cDNA Thư viện cDNA (complementary DNA) là tập hợp các đoạn DNA bổ sung (cDNA) được tổng hợp từ... VI Các ứng dụng của công nghệ DNA tái tổ hợp Công nghệ DNA tái tổ hợp hiện nay có rất nhiều ứng dụng trong đời sống Các ứng dụng này bao gồm sản xuất dược phẩm và các loại hóa chất khác, các vi khuẩn đặc biệt, các cây trồng nông nghiệp quan trọng, và các vật nuôi đã được biến đổi di truyền Kỹ thuật này cũng được sử dụng rộng rãi trong các xét nghiệm y khoa và (trong một vài trường hợp) đang được dùng... đổi di truyền bằng công nghệ DNA tái tổ hợp sao cho chúng có thể hoạt động hiệu quả hơn Các chủng vi khuẩn mới hữu ích thu được từ kỹ thuật hiện đại này đang được phát triển để phân hủy các hóa chất độc và các chất gây ô nhiễm, tăng cường thu hồi dầu, tăng nitrogen cho cây trồng, và ức chế sinh trưởng của các vi khuẩn và vi nấm gây bệnh 3 Các sản phẩm nông nghiệp Công nghệ DNA tái tổ hợp cũng đã có một... dựng mô ̣t thư viên cDNA bao gồ m năm bước chính sau: ̣ - Tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một phận cơ thể sinh vật - Tổng hợp sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase) - Gây biế n tính (đun sôi) thể lai mRNA-cDNA để phá hủy sợi mRNA bằ ng RNase H của E coli Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhất nhờ enzyme DNA polymerase với primer... gây ra sự xâm nhiễm DNA tái tổ hợp của chúng vào trong tế bào vật chủ, nơi nó sẽ được tái bản Chỉ các đoạn DNA có kích thước thích hợp và mang các gen cần thiết được đóng gói trong các vỏ của phage, cung cấp một hệ thống chọn lọc tự động cho các vector tái tổ hợp Hình 9.6 Bacteriophage λ là một vector tạo dòng hiệu quả 3 Cosmid vector Các vector phage λ chỉ có thể mang các đoạn DNA có kích thước khoảng... Một ứng dụng công nghệ DNA tái tổ hợp trong thời gian gần đây đó là phát triển các thuốc oligonucleotide có trình tự phân tử DNA hoặc RNA nhân tạo ngắn có thể được dùng để điều trị bệnh Các antisense oligonucleotide bổ sung cho các RNA không mong muốn, như là RNA của virus Khi được bổ sung vào tế bào, thì các antisense DNA này liên kết với mRNA của virus và ức chế sự dịch mã của chúng Các DNA oligonucleotide... đóng góp có ý nghĩa của công nghệ DNA tái tổ hợp đó là cung cấp một lượng lớn các marker (chỉ thị) di truyền được dùng trong lập bản đồ gen Một nhóm trong số các marker được dùng trong lập bản đồ gen đó là restriction fragment length polymorphism (RFLP) RFLP là những biến đổi đa hình trong các kiểu của các đoạn DNA được tạo ra khi phân tử DNA được cắt cùng một enzyme hạn chế Nếu DNA từ hai người được... ̣c cho ̣n dòng tế bào (tái tổ hợp) mang đoa ̣n DNA được tạo dòng Antisense Trình tự không mã hóa của một phân tử DNA sợi đôi Chuỗi cây (chuỗi ngược chiều) bổ sung với mRNA và làm khuôn mẫu cho sự tổng hợp mRNA Antisense molecule Là một phân tử gắ n đă ̣c hiêu lên DNA hoă ̣c mRNA làm dừng ̣ quá trình phiên mã hoặc dịch mã Thường phân tử này có nguồ n gố c từ DNA và RNA Át chế (epistasis)... dung hợp với gen lacZ, điển hình là các vector họ pUR (Hình 9.10) Chọn vector và vị trí cắt hạn chế thích hợp người ta có thể tiến hành dung hợp cho hầu hết gen được tạo dòng 2.3 Phát hiện các protein dung hợp Gắn vector plasmid (ví dụ: pUR) thích hợp với đoạn DNA ngoại lai để tạo ra một sự dung hợp trong khung đọc Biến nạp các vector này vào E coli Kiểm tra các khuẩn lạc riêng biệt mang đoạn DNA ngoại