seminar Các enzyme dùng trong DNA tái tổ hợp: Enzyme cắt hạn chế, Enzyme gắn, Enzyme trùng hợp, Phương pháp cắt DNA bằng enzyme hạn chế A, Thành phần cho tổng thể tích 20
GVHD: NGUYỄN HOÀNG LỘC SVTH: Trịnh Thị Mỹ Uyên Lê Bình Phương Phan Thanh Bảo Phước Các enzyme dùng tạo dòng phân tử I Các enzyme hạn chê Type I + Vị trí cắt cách vị trí nhận biết lớn Type II + Cắt trình tự nhận biết ( khoảng 100 Base) Type III + Vị trí cắt cách vị trí nhận biết lớn ( khoảng 20-30 Base) + Cắt ngồi trình tự nhận biết + Cắt trình tự nhận biết + Cần ATP + Chỉ cần + Cần ATP Không đặc Hiệu Đặc Hiệu Không đặc Hiệu Cách gọi tên Chữ thứ tên chi viết tắt in nghiêng + hai chữ đầu tên loài viết tắt in nghiêng + Viết tắt chủng vi khuẩn + tùy thuộc vào có mặt hay khơng yếu tố ngồi nhiễm sắc thể Gắn các đầu tận cùng cắt bởi enzyme hạn chế Phân tích cấu trúc thể lai Tạo đầu DNA: RNA Ứng dụng Mở vòng cặp tóc Ứng dụng: Tạo cấu trúc sợi đơn số vùng DNA ( làm chất cho đoạn klenow) Tạo đột biến khuyết đoạn ( ở vị trí tận DNA sợi đơi mạch thẳng) Ribonuclease (RNase A) V, Các Protein liên kết với protein sợi đơn Ứng dụng Phát sinh đột biến điểm trược tiếp ( gồm D-loops) Tăng chiều dài khuôn mẫu Kích thích DNA polymerase đặc hiệu phân tích trình tự DNA ... 5’-3’ 1.2 Đoạn Klenow DNA polymerase I E coli Lấp đầy đầu 3’ Đánh dấu đầu 3’ Tổng hợp DNA sợi làm đầy đôi Ứng dụng Tổng hợp sợi cDNA Đánh dấu DNA thứ mang đầu lồi 3’ 1.3 DNA polymerase bacteriophage... chế 5.1 Các loại đệm dùng phản ứng cắt DNA Riêng SmaI sử dụng loại đệm riêng 5.2 Phương pháp cắt DNA enzyme hạn chế A, Thành phần cho tổng thể tích 20 : + DW : 16 + Buffer 10x : + DNA ( 0,2-... DNA polymerase (DNA- dependent DNA polymerase) 1.1 DNA polymerase I E coli 1.2 Đoạn Klenow DNA polymerase I E coli 1.3 DNA polymerase bacteriophage T4 1.4 Taq DNA polymerase 1.1 DNA polymerase