... vector táitổhợp gọi là dòng
tái tổ hợp. Dòng táitổhợp đƣợc phân lập để lƣu trữ DNAtáitổhợp hoặc dùng cho các
thao tác trên gen. Toàn bộ quá trình trên gọi là tạo dòng DNA hay DNA cloning. ... DNA
μg DNA = fmole DNA x x
Từ lượng của vector DNA tính ra lượng của DNA chèn
(ng )DNA chèn =
Căn cứ vào tỉ lệ về số mol giữa vector và DNA chèn rồi dựa vào đó để tính ra lƣợng
DNA ... cắt: Một đơn vị enzym cắt giới hạn là lƣợng enzym xúc
tác phản ứng cắt hết một lƣợng DNAlà 1µg trong buffer thích hợp trong thời gian là 1
giờ ở nhiệt độ thích hợp. Thực hiện phản ứng cắt với...
... sợi đơn của DNA có trình tự đã biết.
Công ngh. DNAtái t. h.p 46
Lời nói đầu
Công nghệ DNAtáitổhợp (còn gọi là kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) là một bộ phận quan trọng và là
công nghệ ... bath).
II. Các enzyme trùng hợp
1. DNA polymerase (DNA- dependent DNA polymerase)
DNA polymerase được dùng để tổng hợpDNA trong cơ thể hoặc trong điều kiện in vitro.
1.1. DNA polymerase I của E. ... của DNA, nick là điểm đứt trên một sợi của DNA sợi đôi.
Chức năng chính của enzyme là sử
a sai dọc theo phân tử DNA. Nếu gặp chỗ sai sót, nó sẽ đi ngược lại để
cắt bỏ sau đó mới tổng hợp DNA. DNA...
... cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau này.
Nối sai
Nối sai
DNA sẽ được
xen vào
DNA được cắt
vớiEcoRI
Các đầu dính
Tái tổhợpDNA
+ DNA ligase
DNA
tái tổ hợp
Hình 10.3 Hai phân tử DNA khác nhau ... dụng trong kỹ thuật di truyền
2.1. DNAtáitổhợplà gì?
DNAtáitổhợp (recombinant DNA) là phân tử DNA được tạo ra trong
ống nghiệm bằng cách kết hợp các DNA từ các nguồn (loài) khác nhau, ... định, gọi là kỹ thuật táitổhợp DNA.
Thông thường một phân tử DNAtáitổhợp bao gồm một phân tử DNA
có bản chất là plasmid hoặc phage nguyên vẹn gọi là vector (thể tải) và
một đoạn DNA từ...
... mapping).
2. Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA
Đoạn DNA được tổng hợp dựa trên khuôn mẫu mRNA được gọi là
cDNA (complementary DNA) . ba
như sau:
- .
- - 2 (Mg
2+
.
- .
mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th E. ... đúng plasmid táitổ hợp.
Vì vậy, việc xác định đúng các dòng vi khuẩn chứa plasmid táitổhợp
phải mất nhiều công sức. Có ba phương thức chính để xác định các dòng
DNA táitổhợplà lai khuẩn ... DNA) dùng trong kỹ thuật táitổhợp DNA.
2. Các vector được dùng để tạo dòng các đoạn DNA
in vitro
5’-PO
4
.
.
Trong thực tế, các đoạn DNA được gắn với nhau để tạo ra phân tử
DNA tái tổ...
... mapping).
2. Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA
Đoạn DNA được tổng hợp dựa trên khuôn mẫu mRNA được gọi là
cDNA (complementary DNA) . ba
như sau:
- .
- - 2 (Mg
2+
.
- .
mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th E. ... đúng plasmid táitổ hợp.
Vì vậy, việc xác định đúng các dòng vi khuẩn chứa plasmid táitổhợp
phải mất nhiều công sức. Có ba phương thức chính để xác định các dòng
DNA táitổhợplà lai khuẩn ... sử dụng là vi khuẩn E. coli để khuếch đại một lượng lớn DNA của
plasmid táitổhợp dùng cho các phân tích về sau.
Hai phương pháp được dùng để biến nạp vector táitổhợp vào E. coli
là điện...
... P.Berg (1972)
S.Cohen đã tạo ra được phân tử DNAtái
tổ hợp gồm vector là plasmid nhỏ
pSC101 của E. coli và DNA ''ngoại lai''
là một plasmid khác. Chính sự kiện này
đã đặt ... phân tử DNA khác nhau
được cắt bởi cùng một enzyme giới hạn
EcoRI tạo ra các đầu dính bổ sung nhau,
bằng cách đó có thể khâu nối thành phân
tử DNAtáitổhợp in vitro nhờ xử lý với
DNA ligase. ... như thế sẽ được
nối với nhau bởi DNA ligase của vi
khuẩn. Cơ sở của phương pháp kết hợp
DNA này được thực hiện lần đầu tiên
giữa DNA của virus SV40 với DNA của
phage l bởi L.Lobban và D.Kaiser...
... cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau này.
Nối sai
Nối sai
DNA sẽ được
xen vào
DNA được cắt
vớiEcoRI
Các đầu dính
Tái tổhợpDNA
+ DNA ligase
DNA
tái tổ hợp
Hình 10.3 Hai phân tử DNA khác nhau ... dụng trong kỹ thuật di truyền
2.1. DNAtáitổhợplà gì?
DNAtáitổhợp (recombinant DNA) là phân tử DNA được tạo ra trong
ống nghiệm bằng cách kết hợp các DNA từ các nguồn (loài) khác nhau, ... định, gọi là kỹ thuật táitổhợp DNA.
Thông thường một phân tử DNAtáitổhợp bao gồm một phân tử DNA
có bản chất là plasmid hoặc phage nguyên vẹn gọi là vector (thể tải) và
một đoạn DNA từ...
... Quy trình tạo DNAtáitổ hợp
1. Mở đầu
1.1. Công nghệ DNAtáitổhợplà gì?
Công nghệ DNAtáitổhợp (còn gọi là kỹ thuật di
truyền hay kỹ thuật gen) là một bộ phận quan trọng và là
công nghệ ... xomatostatin được tổng hợp invitro, sau đó gắn
vào plasmit. Plasmit táitổhợp được biến nạp vào tế bào
E.Coli và xomatostatin được tổng hợp.
- Sản xuất interferon bằng công nghệ plasmit táitổ hợp
Interferon ... phân tử DNAtáitổ hợp
Hình 2.6. Tạo vaccine virus H5N1,
cơ chế loại độc tính ở gen HA của virus H5N1
Có tính an toàn cao, nhất là tránh được độc tính của
virus.
Một số vaccine DNAtáitổhợp đã...
... mapping).
2. Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA
Đoạn DNA được tổng hợp dựa trên khuôn mẫu mRNA được gọi là
cDNA (complementary DNA) . ba
như sau:
- .
- - 2 (Mg
2+
.
- .
mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th E. ... đúng plasmid táitổ hợp.
Vì vậy, việc xác định đúng các dòng vi khuẩn chứa plasmid táitổhợp
phải mất nhiều công sức. Có ba phương thức chính để xác định các dòng
DNA táitổhợplà lai khuẩn ... DNA) dùng trong kỹ thuật táitổhợp DNA.
2. Các vector được dùng để tạo dòng các đoạn DNA
in vitro
5’-PO
4
.
.
Trong thực tế, các đoạn DNA được gắn với nhau để tạo ra phân tử
DNA tái tổ...
... nguyên là protein táitổhợp MBP-
VT2eB.
-VT2eB
Tiến hành định tính kháng huyết thanh bằng phƣơng pháp kết tủa khuyếch tán
trên thạch với kháng nguyên là protein táitổ ... nguyên[4]
a. Định nghĩa
Kháng nguyên là một chất tự nhiên hay tổng hợp có khả năng gây đáp ứng miễn
dịch khi đƣợc đƣa vào cơ thể của một động vật thích hợp hoặc là chất có khả năng
phản ứng với ... MBP-
VT2eB TRÊN HEO”
Giáo viên hƣớng dẫn:
TS. Nguyễn Ngọc Hải
Sử dụng kháng nguyên là protein táitổhợp MBP-VT2eB pha trong keo phèn
với liều 50µg/heo và 75µg/heo có lập lại và không lập...
... trừ 2 tổhợp lai: Dự ĐB2 x DT10 và Dự
ĐB2 x KD, đây là 2 tổhợp lai giữa các dạng bố mẹ có
chiều dài lá công năng xấp xỉ nhau, hiện tượng phân ly tăng
tiến dương thể hiện rõ nhất. ở 3 tổhợp ... đều cho tỷ lệ phân ly
kiểu hình 1 : 2 :1, phù hợp với kết quả ở F1, chứng tỏ 2
dạng bố - mẹ trong mỗi tổhợp lai khác nhau về 1 locus.
Ở hai tổhợp lai (Dự ĐB2 x KD và Dự ĐB2 x Khao 85) có ... F2 (bảng 2b), trừ 2 tổhợp lai Dự ĐB2 x KD, Dự ĐB2 x
Khao 85, 3 tổhợp lai còn lại đều cho tỷ lệ phân ly kiểu
hình 1 : 2 : 1 và đều có hiện tượng phân ly tăng tiến dương
làm tăng chiều rộng...
... cây kháng rầy nâu đồng hợp tử
trội có gía trị ước đoán là 72,27%, cây dị hợp tử là 85,70%,
và cây nhiễm đồng hợp tử lặn là 85,70%, với tổhợp PTB33
/ TN1.
Trong khi đó, quần thể con lai F
2
... chuẩn nhiễm là TN1.
Sử dụng quần thể F
2
của tổhợp lai IR64 / HOALAI. Thu
hoạch hai hạt trên mỗi bông của mỗi cá thể F
2
để theo dõi
sự phân ly ở F
3
. Quần thể F
2
của tổhợp lai
IR54742/IR31917, ... cấp làm
thức ăn cho rầy
Thanh lọc theo phương pháp hộp mạ của IRRI,ba lần nhắc
lại, giống TN 1, IR 64 làm chuẩn nhiễm và PTB 33, Hoa
Lài làm chuẩn kháng. Khi cây mạ ở giai đoạn 2 đến 3 là, ...
... counter (giá trị Y).
Y/X là lượng cDNA được tổng hợp trong số DNA tổng số. Giả định trong
cDNA các loại dNTP được thu nạp một cách đồng đều thì lượng cDNA
được tổng hợplà 5 µl × 10 mM × Y/X × ... phóng xạ. Nếu cDNA đã tổhợp đúng với
vector thì sẽ thấy dưới băng DNA ở trên vị trí của arm -DNA (DNA đã tổ
hợp có khối lượng phân tử bằng tổng khối lượng phân tử của arm -DNA và
cDNA còn sót ... khối lượng phân tử của cDNA. Làm phản ứng tổhợp
vào vector trong 3 ống. Trộn 1 µg DNA λgt 10 hoặc λgt 11 gắn đầu dính
(arm -DNA λgt 10, arm -DNA λgt 11) với một lượng cDNA trong mỗi ống
sao...
... F
1
(L×Y) cho biết: Tổng số con sơ sinh sống/ổ là 10,97 con; số
con sơ sinh sống/ổ là 10,41 con; số con ñẻ nuôi/ổ là 9,88 con; khối lượng sơ
sinh/ổ là 14,60 kg; khối lượng sơ sinh/con là 1,41 kg; số ... Duroc, PiDu lần lượt là 342,70 và 343,45 ngày. Kết quả cho thấy tuổi ñẻ lứa
ñầu ở hai tổhợp lai này là tương ñương. Hệ số biến ñộng của chỉ tiêu này ở cả
hai nhóm lợn là tương ñối thấp 2,29% ... là 1,41 kg; số con 21 ngày/ổ là
9,35 con; thời gian cai sữa là 23,05 ngày; số con cai sữa/ổ là 9,32 con; khối
lượng cai sữa/ổ là 52,28 kg và khối lượng cai sữa/con là 5,67 kg.
Theo Nguyễn Văn...