Nghiên cứu môi trường thích hợp nuôi cấy túi phấn cây ớt capsicum annuum l nghiên cứu khoa học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN NGHIÊN CỨU MƠI TRƯỜNG THÍCH HỢP NI CÂY TÚI PHẤN CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L Sinh viên thực hiện: Lương Thị Mơ Nguyễn Thị Tuyết Nhi Hồ Hoàng Thuận Trần Thị Kim Phượng Phạm Thị Mỹ Hiền Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Trần Đơng Phương TP Hồ Chí Minh, 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em học tập rèn luyện môi trường tốt Em xin gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Trần Đông Phương trực tiếp hướng dẫn truyền đạt cho em kiến thức với kinh nghiệm quý báu suốt trình thực đề tài Chân thành cám ơn bạn thành viên phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài Cuối cùng, xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình Cám ơn tình cảm mà ba mẹ em dành cho ủng hộ lời động viên gia đình giúp có động lực vững bước đường học tập đường đời Bình Dương, ngày 11 tháng năm 2018 Lương Thị Mơ i MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU ĐẶC TÍNH SINH HỌC CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L 1.1 Sơ lược họ Cà Solanaceae 1.2 Sơ lược ớt Capsicum annuum L 1.2.1 Vị trí phân loại 1.2.2 Nguồn gốc, phân bố 1.2.3 Đặc tính sinh học ớt 10 1.2.4 Thành phần công dụng ớt 12 1.2.5 Giá trị kinh tế 12 NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO 13 2.1 Khái niệm ứng dụng 13 2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô 13 2.2.1 Sự lựa chọn mẫu cấy 13 2.2.2 Khử trùng mẫu cấy 13 2.2.3 Môi trường nuôi cấy 14 2.3 Các điều kiện ảnh hưởng đến q trình ni cấy 14 2.3.1 Ánh sáng 14 2.3.2 Nhiệt độ 14 2.3.3 pH 14 2.3.4 Sự thống khí 14 2.3.5 Muối khoáng 14 2.3.6 Nguồn carbon 15 2.3.7 Vitamin 15 2.3.8 Agar 15 2.4 Vai trò chất điều hòa tăng trưởng 15 2.4.1 Auxin 15 2.4.2 Cytokinin 16 2.5 Cây đơn bội đơn bội kép 17 2.5.1 Giới thiệu chung 17 2.5.2 Tạo đơn bội in vitro 18 i 2.5.3 Tạo đơn bội kép 19 2.5.4 Ứng dụng 20 KỸ THUẬT NUÔI CẤY TÚI PHẤN 21 3.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu nuôi túi phấn 21 3.1.1 Ảnh hưởng cho túi phấn 21 3.1.2 Ảnh hưởng giai đoạn phát triển túi phấn 22 3.1.3 Ảnh hưởng việc xử lý vật liệu trước nuôi cấy 22 3.1.4 Ảnh hưởng thành phần nuôi cấy 22 3.2 Những nghiên cứu kĩ thuật nuôi cấy túi phấn in vitro 23 VẬT LIỆU VÀ ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY 25 1.1 Vật liệu 25 1.1.1 Thời gian địa điểm thực 25 1.1.2 Đối tượng nghiên cứu 25 1.1.3 Thiết bị dụng cụ 25 1.1.4 Điều kiện nuôi cấy 25 1.1.5 Môi trường nuôi cấy 25 1.1.6 Hóa chất 25 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Quan sát hình thái hạt phấn trước cấy 26 2.2 Khảo sát nồng độ NAA ảnh hưởng đến cảm ứng túi phấn tạo phôi ớt Capsicum annuum L 27 2.3 Khảo sát nồng độ kinetin ảnh hưởng đến cảm ứng túi phấn tạo phôi ớt Capsicum annuum L 28 2.4 Khảo sát nồng độ BA ảnh hưởng đến cảm ứng tạo chồi từ phôi ớt Capsicum annuum L 29 2.5 Theo dõi ớt tạo từ q trình ni cấy túi phấn ớt 30 QUAN SÁT HÌNH THÁI HẠT PHẤN TRƯỚC KHI CẤY 32 KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ NAA ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ CẢM ỨNG TÚI PHẤN TẠO PHÔI CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L 34 KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ KINETIN ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ CẢM ỨNG TÚI PHẤN TẠO PHÔI CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L 37 ii KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ BA ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ CẢM ỨNG TẠO CHỒI TỪ PHÔI CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L 40 TẠO CÂY HOÀN CHỈNH TỪ CHỒI ĐÃ CẢM ỨNG 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 KẾT LUẬN 45 KIẾN NGHỊ 45 iii DANH MỤC BẢNG Bảng II.2.1 Cách bố trí thí nghiệm khảo sát nồng độ NAA ảnh hưởng đến cảm ứng túi phấn tạo phôi ớt Capsicum annuum L 27 Bảng II.2.2 Cách bố trí thí nghiệm khảo sát nồng độ kinetin ảnh hưởng đến cảm ứng túi phấn tạo phôi ớt Capsicum annuum L 29 Bảng III.1 Số lượng túi phấn cảm ứng trạng thái túi phấn môi trường MS bổ sung NAA với nồng độ khác sau 14 ngày nuôi cấy 35 Bảng III.2 Số lượng túi phấn cảm ứng trạng thái túi phấn môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/L kinetin với nồng độ khác sau 14 ngày nuôi cấy 38 Bảng III Số lượng chồi cảm ứng trạng thái chồi môi trường MS bổ sung BA với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 40 ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT C Dumas de Vaulx et al induction medium 2,4-D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 2-iP 6-y-y-dimethyl-aminopurine BA Benzyladenine BAP 6-benzylaminopurine MS Murashige & Skoog IAA Indole acetic acid IBA Indole butyric acid TDZ Thidiazuron GA3 Gibberillic acid NAA α-Napthalene acetic acid ĐC Đối chứng iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Nghiên cứu mơi trường thích hợp nuôi cấy túi phấn ớt Capsicum annuum L - Sinh viên thực hiện: Lương Thị Mơ - Lớp: DH14NN01 Khoa: Công nghệ Sinh học Năm thứ: Số năm đào tạo: - Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Trần Đơng Phương Mục tiêu đề tài: Tìm mơi trường thích hợp ni cấy túi phấn ớt Tính sáng tạo: Ứng dụng ớt cay, tạo dòng ớt Kết nghiên cứu: Tạo ớt đơn bội Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Tạo nguồn nguyên liệu cho lai tạo giống ớt Công bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): Ngày tháng năm Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi):……………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Ngày tháng năm Người hướng dẫn (ký, họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN: Ảnh 4x6 Họ tên: Lương Thị Mơ Sinh ngày: 07 tháng: 09 năm: 1996 Nơi sinh: Hưng Yên Lớp: DH14NN01 Khóa: 2014 Khoa: Cơng nghệ Sinh học Địa liên hệ: 1011/25 Lê Hồng Phong, Phú Thọ, Thủ Dầu Một, Bình Dương Điện thoại: 0995592215 Email: luongmo3414@gmail.com II Q TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích sinh viên từ năm thứ đến năm học): * Năm thứ 1: Ngành học: Công nghệ Sinh học Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Đạt giải tham gia hoạt động ngoại khóa * Năm thứ 2: Ngành học: Công nghệ Sinh học Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Đạt học bổng khuyến khích học tập * Năm thứ 3: Ngành học: Nông nghiệp – Dược – Môi trường Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Thành viên đề tài nghiên cứu khoa học giải Nhì Đạt học bổng khuyến khích học tập * Năm thứ 4: Ngành học: Nơng nghiệp – Dược – Môi trường Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Khá Sơ lược thành tích: Đạt học bổng khuyến khích học tập Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Ngày tháng năm Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) A1 A2 A3 A4 A5 A6 Hình III.3 Túi phấn ớt sau 14 ngày ni cấy mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L NAA kinetin với nồng độ khác Trong đó: A1: Túi phấn khơng thay đổi hình dạng, khơng xuất bơng trắng A2: Túi phấn biến dạng, túi phấn xuất bơng trắng A3: Túi phấn biến dạng, nhiều túi phấn xuất trắng A4: Túi phấn biến dạng nhiều, hầu hết túi phấn xuất trắng A5: Túi phấn biến dạng, nhiều túi phấn xuất trắng A6: Túi phấn biến dạng, túi phấn xuất bơng trắng Kinetin cytokinin có hoạt động mạnh, có khả phân chia tế bào mạnh mẽ có tác dụng kích thích hình thành phơi (Bùi Trang Việt, 2000) Sau 14 ngày nuôi cấy, nghiệm thức MS bổ sung NAA 0,5 mg/L kinetin 2,0 mg/L cho kết tốt (8,67 túi phấn), túi phấn phát triển tốt, màu vàng nâu, cảm ứng tốt hơn so với nghiệm thức lại Kết không phù hợp với báo cáo công bố trước Ni cấy túi phấn mơi trường chứa NAA 0,5 mg/L kinetin 1,0 mg/L, thu tỉ lệ nỗn cảm ứng phơi cao giống PH 57 PH 43 (Arjunappa HM et al., 2016) có khác biệt kiểu gen nên kết có khác biệt nồng độ kinetin Nồng độ kinetin tăng dần số lượng túi phấn cảm ứng tăng tăng đến nghiệm thức bổ sung 2,0 mg/L, sau giảm dần hai nghiệm thức MS bổ sung 2,5 mg/L 3,0 mg/L Đến nồng độ 3,0 mg/L túi phấn bị đen chết Do 39 thân túi phấn có lượng chất điều hòa sinh trưởng, việc bổ sung thêm làm cho túi phấn có thay đổi hướng phát triển, sử dụng nồng độ cao, túi phấn bị ức chế ngược (Hoàng Minh Tấn cs., 2006) KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ BA ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ CẢM ỨNG TẠO CHỒI TỪ PHÔI CÂY ỚT CAPSICUM ANNUUM L Túi phấn cảm ứng cấy chuyền sang môi trường MS bổ sung BA với nồng độ thay đổi vòng tuần Kết thu từ bảng III.3 cho thấy nghiệm thức thấp nghiệm thức Đối chứng khơng có chồi cảm ứng Cao nghiệm thức MS bổ sung BA 1,0 mg/L (3,33 chồi/bình) Các nghiệm thức cịn lại cho kết thấp khơng có khác biệt có ý nghĩa qua thống kê (bảng III.3) Bảng III Số lượng chồi cảm ứng trạng thái chồi môi trường MS bổ sung BA với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy Nghiệm thức Số lượng chồi (MS bổ sung BA (mg/L)) cảm ứng Đối chứng 0,0c 0,0 0,5 Trạng thái chồi Không xuất chồi, phôi không phát triển 1,0b Xuất chồi ít, phôi phát triển, chồi bị khuyết mầm 1,0 3,33a Xuất chồi nhiều, phôi phát triển mạnh, chồi có đầy đủ hai mầm 1,5 0,33bc Xuất chồi ít, túi phấn phát triển thành sẹo Cv % 34,99 Trong cột số liệu có mẫu tự khơng có khác biệt mức ý nghĩa 0,05 qua phép thử Duncan 40 A1 A2 A3 A4 Hình III.4 Túi phấn ớt cảm ứng sau tuần nuôi cấy môi trường MS có bổ sung BA với nồng độ khác Trong đó: A1: Khơng xuất chồi, phơi khơng phát triển A2: Xuất chồi ít, phơi phát triển, chồi bị khuyết mầm A3: Xuất chồi nhiều, phơi phát triển mạnh, chồi có đầy đủ hai mầm A4: Xuất chồi ít, túi phấn phát triển thành mô sẹo BA cytokinin có hoạt động mạnh, có khả tạo chồi (Bùi Trang Việt, 2000) Sau 14 ngày nuôi cấy, nghiệm thức MS bổ sung BA 1,0 mg/L cho kết tốt (3,33 chồi), chồi phát triển tốt, màu xanh, có hai mầm hồn chỉnh so với nghiệm thức lại Kết phù hợp với báo cáo cơng bố trước Ni cấy túi phấn môi trường bổ sung BA 1,0 mg/L, thu tỉ lệ phôi cảm ứng cao giống PH 57 PH (92,8 %) (Arjunappa et al., 2016) Nồng độ BA tăng dần số lượng chồi cảm ứng tăng tăng đến nghiệm thức bổ sung 1,0 mg/L, sau giảm nghiệm thức MS bổ sung 1,5 mg/L Đến nồng độ 1,5 mg/L túi phấn bắt đầu hình thành mơ sẹo Do thân túi phấn có lượng chất điều hòa, việc bổ sung thêm làm cho túi phấn có thay đổi hướng phát triển, sử dụng nồng độ auxin cytokinin có tỉ lệ gần tạo mơ sẹo (Hồng Minh Tấn cs., 2006) 41 TẠO CÂY HOÀN CHỈNH TỪ CHỒI ĐÃ CẢM ỨNG Sau chồi xuất hiện, tất chồi nghiệm thức chuyển sang mơi trường MS ½ bổ sung than hoạt tính 0,5 g/L để kéo dài chồi rễ (Arjunappa et al., 2016) Chồi thu nghiệm thức MS bổ sung BA 0,5 mg/L bị khuyết mầm, phát triển thành hoàn chỉnh, sau thời gian nuôi cấy mầm bị úa vàng Chồi thu nghiệm thức MS bổ sung BA 1,0 mg/L có đủ hai mầm phát triển tốt thành hoàn chỉnh Sau tuần nuôi cấy môi trường MS ½ ta thu hoàn chỉnh nghiệm thức BA 1,0 mg/L (hình III.5.1) Hình III.5 Chồi ớt sau tuần ni cấy mơi trường MS ½ thu nhận từ nghiệm thức tạo chồi Sau tuần ni cấy hồn chỉnh phát triển cao khoảng cm có - thật (hình III.5.2), tiến hành nhuộm rễ thuốc nhuộm acetocarmine đưa ngồi trồng 42 Hình III.5 Cây ớt hồn chỉnh có nguồn gốc từ ni cấy túi phấn sau tuần ni cấy đủ điều kiện đưa ngồi trồng Rễ nhuộm với thuốc nhuộm acetocarmine quan sát giai đoạn kính hiển vi để xác định số lượng nhiễm sắc thể Ở giai đoạn metaphase trình nguyên phân, nhiễm sắc thể xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo Khi đếm số lượng nhiễm sắc thể, ta thấy có 12 nhiễm sắc thể đơn xếp thành hàng nhiễm sắc thể ớt 2n = 24 (III.5.3) Có thể xác định ban đầu đơn bội Hình III.5 Giai đoạn metaphase trình nguyên phân từ rễ ớt có nguồn gốc từ ni cấy túi phấn nhuộm quan sát kính hiển vi 43 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 KẾT LUẬN Túi phấn có màu xanh chuyển sang tím kích thước khoảng 2,5 mm chọn làm vật liệu để nuôi cấy Môi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/L cho kết cảm ứng tốt số lượng túi phấn cảm ứng khoảng túi phấn/bình Mơi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/L kinetin 2,0 mg/L cho kết cảm ứng tốt số lượng túi phấn cảm ứng khoảng túi phấn/bình Là mơi trường thích hợp cho việc cảm ứng tạo phôi từ túi phấn ớt Môi trường MS bổ sung BA 1,0 mg/L cho kết tạo chồi tốt số lượng chồi cảm ứng khoảng chồi/bình Là mơi trường thích hợp cho việc cảm ứng tạo chồi từ phôi ớt Sau nhuộm rễ đếm số lượng nhiễm sắc thể, đơn bội KIẾN NGHỊ Nếu có điều kiện tiếp tục nghiên cứu Đưa thụ phấn xác định số lượng nhiễm sắc thể Lưỡng bội hóa đơn bội thu 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Huy Hàm, Nguyễn Thị Khánh Vân, Lưu Mỹ Dung, Lê Thu Vê, Đỗ Năng Vịnh (2005), Phát triển ứng dụng kỹ thuật đơn bội chọn tạo giống ngô ưu lai , Hội nghị khoa học công nghệ trồng tháng 3, 2005, Hà Nội Lê Thị Khánh (2009), Giáo trình rau, NXB Đại học Nơng Lâm Huế, Huế Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật I, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh Dương Cơng Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật II, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh Trần Văn Lài, Trần Khắc Thi (2005), “Kết nghiên cứu chọn tạo số giống rau chủ yếu”, Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thơn, số 5, tr 22 - 28 Nguyễn Hồng Lộc (2011), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - Các khái niệm ứng dụng, NXB Đại học Huế Võ Thị Thanh Lộc, Nguyễn Thị Thu An, Nguyễn Phú Son, Huỳnh Hữu Thọ, Trương Hồng Võ Tuấn Kiệt, Lâm Hn, Lê Trường Giang (2015), “Phân tích chuỗi giá trị ớt tỉnh Đồng Tháp”, Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Cần Thơ Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Đức Lượng (2011), Công nghệ tế bào, NXB Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh 10 Hồ Kì Quang Minh (2009), “Tạo callus từ hạt phấn nhờ kĩ thuật nuôi cấy túi phấn thuốc Nicotiana tabacum L.”, Trường Đại học Khoa học tự nhiên ĐHQG TP Hồ Chí Minh 11 Trần Duy Qúy (1999), Các phương pháp chọn giống trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 12 Hoàng Minh Tấn, Vũ Quang Sáng, Nguyễn Kim Thanh (2006), Giáo trình sinh lý thực vật, NXB Đại học Sư phạm 13 Phan Hữu Tôn (2004), Công nghệ sinh học chọn tạo giống trồng, NXB Nông Nghiệp - Hà Nội 14 Bùi Trang Việt (2000), Sinh thực vật đại cương, NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, TP Hồ Chí Minh 46 15 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Tiếng Anh 16 Arjunappa HM., Kumar S., Latha P., (2016), “Effect of genotype and media on direct embryogenesis of chillipepper (Capsicum annuum L.)”, International Journal of Recent Scientific Research, pp 8592 - 8595 17 Basay S., Ellialtioglu S., (2013), “Effect of genotypical factors on the effectiveness of anther culture in eggplant (Solanum melongena L.)”, Turkish Journal of Biology, 37, pp 499 - 505 18 Bhat JG., Murthy HN., (2007), “Factors affecting in vitro gynogenic haploid production in Niger (Guizotia abyssinica (L f.) Cass.)”, Plant Growth Regul, 52, pp 241 - 248 19 Blakelsee AF., Belling J., Farhnam ME., Bergner AD., (1922), “A haploid mutant in the Jimson weed”, Datura stramonium, Science, 55, pp 646 - 647 20 Bohanec B., Jakse M., (1999), “Variation of gynogenic response among long-day onion (Allium cepa L.) accessions”, Plant Cell Rep, 18, pp 737 - 742 21 Burk LG., Gerstel DU., Wernsman EA., (1979), “Maternal haploids of Nicotiana tabacum L from seed”, Science (206), pp 585 22 Çaglar G., Abak K., (1996), The effects of season and irradiation doses on haploid embryo production in cucumber (C sativus L.), Proc of the VIth Eucarpia meeting on Cucurbit genetics and breeding, Malaga, Spain, 21, pp 25 - 30 23 Comlekcioglu N., Buyukalaka S and Abak K., (2001), “Effect of silver nitrate on haploid embryo induction by anther culture in pepper (Capsicum annuumL.)”, In: Xith EUCARPIA meeting on genetics and breeding of capsicum and eggplant, Antalya, Turkey, pp 133 - 136 24 Faris NM., Rakoczy-Trojanowska M., Malepszy S., Niemirowicz-Szczytt K., (2000), “Diploidization of cucumber (Cucumis sativus L.) haploids by in vitro culture of leaf explant”, S Bielecki, J Tramper, J Polak (eds), Progr, Biotechnol., Food Biotechnology,17, pp 49 - 54 25 Gémes-Juhász A., Balogh P., Ferenczy A., Kristóf Z., (2002), “Effect of optimal stage of female gametophyte and heat treatment on in vitro gynogenesis induction in cucumber (Cucumis sativus L.)”, Plant Cell Reports, 21, pp 105 - 111 47 26 Irikova T., Grozeva S., (2011), “Anther culture in pepper (Capsicum annuum L.) in vitro, Acta Physiol Plant 27 Jain S., Mohan SK., Sopory, Veilleux RE., (1996), “In vitro haploid production in higher plants”, Kluwer Academic, Dordrecht, pp 31 28 Kasha KJ., Kao KN., (1970), “High frequency haploid production in barley (Hordeum vulgare L.)”, Nature, 225, pp 874 - 876 29 KuZuyA M., HosoyA K., Yashiro K., Tomita K., Ezura H., (2003), Powdery mildew (Sphaerotheca fuliginea) resistance in melon is selectable at the haploid level, J Exp Bot 54(384), pp 1069 - 1074 30 Lantos C., Juhasz AG., Vagi, P., Mihaly R., Kristof Z and Pauk J., ( 2012), “Androgenesis induction in microspore culture of sweet pepper (Capsicum annuum L.)” Plant Biotechnology Reports, 6, pp.123-132 31 Niemirowicz-szczytt K., Faris N.M., Nikolova V., Rakoczy-Trojanowska M., Malepszy S., (1995), “Optimization of cucumber (Cucumis sativus L.) haploid production and doubling”, In: Cucurbitaceae ’94, G Lester (ed.) pp 169 - 171 32 Niizeki H., Oono K., (1962), “ Introduction of haploid rice plant from anther culture”, Proc, Jap, Acad, 44, pp 554 - 557 33 Nikolova V., Niemirowicz-szczytt K., (1996), “Diploidization of cucumber (Cucumis sativus L.) haploids by colchicine treatment”, Acta Soc Bot Pol, (65), pp 311 - 317 34 Nowaczyk P and Kisiala A., (2006), “Effect of selected factors on the effectiveness of Capsicum annuum L anther culture”, Journal of Applied Genetics, 47(2), pp 113 - 117 35 Olszewska D., Kisiala A., Niklas-nơak A., Nowaczyk P., (2014), “ study of in vitro anther culture in selected genotypes of genus Capsicum”, turkish journak of biology, 38, pp 118 - 124 36 Roshany G., Kalantarai S., Naderi R., Hassani ME., (2013), “Callus Formation via Anther Culture in Capsicum annum L with Differences in Genotypes, Media and Incubation Temperature”, Technical Journal of Engineering and Applied Sciences, pp 3847 - 3853 48 37 Sari N., Abak K., (1996), “Effect of different colchicines doses and application period in dihaploidization of haploid watermelon plants”, Turk J Agric For, 20, pp 555559 38 Thomas WTB., Newton AC., Wilson A., Booth A., Macaulay M., Keith R., (2000), “Development of recombinant chromosome substitution lines: a barley resource”, SCRI annual report 1999/2000, pp 99 -10 39 Tsay HS., Lai PC and Chi NC., (1980),“Studies on anther culture and haploid regenerationof asparagus”, Journal of Agricultural Research of China, 29(4), pp 309-319 40 Yang BZ., Zhou SD., Zhang ZQ., Dai XZ., Li LH and Xie DP., (2009) “Effects of different medium and hormone on cultured anther of hot pepper” Journal of Hunan Agricultural University, 35, pp 61-64 41 Yetisir H., Sari N., (2003), “A new method for haploid muskmelon (Cucumis melo L.) dihaploidization”, Science Hort, 98, pp 277-283 49 PHỤ LỤC  Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog) BẢNG 1: THÀNH PHẦN MUỐI KHOÁNG CƠ BẢN (mg/l) Skoog I Skoog II Skoog III NH4NO3 1650,00 KNO3 1900,00 KH2PO4 170,00 MgSO4.7H2O 370,00 CaCl2.2H2O 440,00 Na2EDTA 37,30 FeSO4.7H2O 27,80 Mn2SO4.4H2O 22,30 H3BO3 6,20 ZnSO4.7H2O 8,60 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 BẢNG 2: THÀNH PHẦN VITAMIN CỦA MOREL (mg/l) Pirydoxine (B6) 1,00 Biotin (II) 0,01 Morel’s Meso-inositol 100,00 Vitamin Nicotinic Acid (P.P) 1,00 Thiamin-HCl (B1) 1,00 Pantotheate-Ca 1,00 50 Phân tích thống kê ANOVA Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát nồng độ NAA ảnh hưởng đến cảm ứng tạo phôi ớt Capsicum annuum L Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát nồng độ kinetin ảnh hưởng đến cảm ứng tạo phôi ớt Capsicum annuum L 51 Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát nồng độ BA ảnh hưởng đến cảm ứng phôi tạo chồi ớt Capsicum annuum L 52 53 ... khác như: nuôi cấy túi phấn cà tím Solanum melongena L (Basay et al., 2013), tạo callus nuôi cấy túi phấn ớt Capsicum annuum L với kiểu gen khác nhau, môi trường nhiệt độ ủ (Roshany et al., 2013)... 2013) Đối với ớt, nhiều nghiên cứu tiến hành phương pháp nuôi cấy túi phấn như: nghiên cứu ảnh hưởng kiểu gen môi trường đến việc nuôi cấy túi phấn ớt Capsicum annuum L (Arjunappa et al., 2016; Irikova... mg /L kinetin 1,0 mg /L cho tỉ l? ?? tạo callus 84,98 % Môi trường tái sinh hiệu callus dưa leo MS bổ sung tổ hợp TDZ 0,03 mg /L BAP 1,0 mg /L Bao phấn ớt cấy môi trường MS bổ sung tổ hợp BAP mg /L NAA