nghiên cứu xác định môi trường tối ưu nuôi cấy nấm đông trùng hạ thảo

2.3 Xỏc nh giỏ tr dc liu v thnh phn hoỏ hc ca nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris Nghiờn cu nh hng ca nhit v m n s phỏt trin ca nm ụng trựng h tho Cordyceps militarisNh trờn ó trỡnh by, nhit v m cú nh hng ln n s phỏt trin ca ng kớnh khun lc nm Cordycpes a Phng phỏp tin hnh: militaris Vỡ th qua cỏc thớ nghim trờn, chỳng tụi tng hp kt qu ghi c bng 7Bng 7: nh hng ca nhit v m n s phỏt trinca nm Cordyceps militaris nuụi cy trờn mụi trng MYPSt TN ng kớnh KL - Ngun nm Cordyceps militaris lm khụ khụng khớ 400C v dựng mỏy nghin thnh bt nm (mm) cỏctrờn ngy nuụi3 cy Nhit trung % khụ )5 10 1520 - Ly 0,1sau g bt chit ln vi nc sụi (3 bỡnh(0C) x 10 ml) m Lc quatrung phubỡnh( v lm lnh thu25 cht10,8 chit18,2 sut29,0 33,0 36,0 23,1 85,02 11,0 20,0 29,0 38,0 43,0 24,1 84,53 12,5 24,7 34,3 43,3 45,0 26,2 83,0 Kt qu bng 7, chỳng tụi-rỳt c nhnphn xột sau:Nm ụng h tho militaris trinmng tt trờn nhit trung bỡnh 26,2 v 10 ml mcỏc trung bỡnh 83 thớch %, kt qu t c sau 25 ngy nuụi cy Saurakhi lmmt khụslnh, cũn li c hontrựng nguyờn trongCordyceps 10 ml methanol v phỏt lc qua 0,22mụi àm.trng TrcMYPS, phõn tớchiu tip kin HPLC, cỏcmu c ho tan0C dung dch hp ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 45 mm Nm phỏt trin iu kin nhit trung bỡnh phỏt 24,1 hin 0C v m trung bỡnhnm 84,5 % nhanh th 2, kt qu sau 25 ngy nuụi cy ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm - HPLC: Th tớch mu àl; dung dch gii methanol: 20 mM phosphoric acid = t l 15 : 85 20 phỳt, ti bc súng 260 tb.c m - Nm phỏt trin chm nht thỏng iu kin thi tit mỏt m hn, nhit trung bỡnh 23,1 0C v m trung bỡnh 85 % thỡ sau 25 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm ch t c 36 nh43lng chun: mm.Kt quCordycepin trờn ó khng nh nhit thớch nm c Cordyceps trinhydroxyethyl) tt l iu kin nhit Xỏc nh hoc Cordycepic Acidhp hoccho ng th bng militaris hp chtphỏt N6 -(2 Adenosine, õy26,20C l chtv chm th 83% phỏt hin cỏc mu Cordyceps v khụng c tỡm thy cỏc sinh vt Hp cht ny v cht Adenosine v deoxyadenosine ( Cordycepin ) c s dng lm cht ch th cht lng so sỏnh cỏc chng khỏc ca nm Cordyceps c Xỏc nh mt s vitamin v nguyờn t vi lng theo phng phỏp chung ca phõn tớch húa hc Phn xỏc nh giỏ tr dc liu Cụng ty c phn dc liu Trung ng II thc hin PHN I M U Nm ông trùng h tho (ĐTHT) mt loi nm ký sinh trờn cụn trựng, không ch c nhà khoa hc nghiên cu, mà c c xó hi quan tõm n, vỡ nm l loi dc liu quý, rt tt cho sc kho ngi, phự hp vi mi la tui, t tr con, ph n mang thai, thiu niờn, cho n ngi gi Theo cỏc ti liu ghi chộp v ụng dc c, ụng trựng h tho l mt v thuc bi b ht sc quý giỏ, cú tỏc dng tớch cc vi cỏc bnh nh ri lon tỡnh dc, thn h, lit dng, di tinh, au lng, mi gi, ho hen, v cú tỏc dng tt i vi tr em cũi xng chm ln Mt s nghiờn cu hin i gn õy ó ch rng nm ụng trựng h tho cú tỏc dng lm tng cng cụng nng ca tuyn thng thn, ci thin c chc nng thn, nõng cao nng lc dch, khỏng khun, khỏng virus, chng ung th v cht phúng x [10,11] Trờn th gii, nm ụng trựng h tho ó c cỏc nh khoa hc nghiờn cu v thu c rt nhiu thnh tu cú giỏ tr Vi cụng ngh sinh hc tiờn tin, nhiu nc ó thnh cụng vic nuụi cy cht nn Cordyceps v phỏt trin nn cụng nghip sn xut Cordyceps Cụng ty Biofact life (Malaysia) ó kt hp cụng ngh tiờn tin ca Nht v cỏc nc khỏc nuụi cy thnh cụng nm Cordyceps trờn mụi trng nhõn to to hai hot cht chớnh l Cordycepin v Adenosine c to t h si nm Các nước nh Trung Quốc, Hàn Quốc, Mỹ, Nhật Bản, Malaysia sản xuất nm Đông trùng hạ thảo quy mô công nghiệp t nhng nm 1995, th k XX Vit Nam vic nghiờn cu v nm ụng trựng h tho mi ch bt u, cho nờn cũn gp nhiu khú khn, c v c s vt cht v kin thc Cho n cha cú mt t chc, c quan no ỏp dng c thnh cụng cụng ngh sinh hc tiờn tin nuụi cy v sn xut nm ụng trựng h tho Cordyceps lm nguyờn liu sn xut thc phm chc nng cho ngi Nghiờn cu nh hng ca nhit v m n s phỏt trin ca nm ụng trựng h tho Cordyceps militarisNh trờn ó trỡnh by, nhit v m cú nh hng ln n s phỏt trin ca ng kớnh khun lc nm Cordycpes militaris Vỡ th qua cỏc thớ nghim trờn, chỳng tụi tng hp kt qu ghi c bng 7Bng 7: nh hng ca nhit v m n s phỏt trinca nm Cordyceps militaris nuụi cy trờn mụi trng MYPSt TN ng kớnh KL nm (mm) sau cỏc ngy nuụi cy Nhit trung bỡnh(0C) m trung bỡnh( % )5 10 15 20 25 10,8 18,2 29,0 33,0 36,0 23,1 85,02 11,0 20,0 29,0 38,0 43,0 24,1 84,53 12,5 24,7 34,3 43,3 45,0 26,2 83,0 Kt qu bng 7, chỳng gúp phn vo nghiờn cu mụi trng nuụi cy thớch hp nm ụng trựng h tho Vit Nam, chỳng tụi c giao thc hin ti: NGHIấN CU XC NH MễI TRNG TI U NUễI CY NM ễNG TRNG H THO CORDYCEPS MILITARIS Mc ớch v yờu cu đặt a Mc ớch Nghiờn cu mụi trng nuụi nm Cordyceps militaris để xỏc nh mụi trng ti u cho nm Cordyceps militaris sinh trng v phỏt trin tt Xỏc nh c mt s c im hỡnh thỏi v s sinh trng phỏt trin ca nm Cordyceps militaris trờn mụi trng thớch hp Bc u xỏc nh giỏ tr dc liu ca nm Cordyceps militaris b Yờu cu Xỏc nh c thnh phn mụi trng nuụi cy cho nm Cordyceps militaris phát triển tốt Xỏc nh c ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ v ẩm độ đến s sinh trng v phỏt trin ca nấm Cordyceps militaris Xỏc nh c giỏ tr dc liu ca nm Cordyceps militaris PHN II TNG QUAN NGHIấN CU I Tỡnh hỡnh nghiờn cu v nm ụng trựng h tho giới 1.1 S lc lch s nghiờn cu v nm ụng trựng h tho Nm ụng trựng h tho c cỏc nh khoa hc Trung Quc xỏc inh mi u xut hin t vựng nỳi cao nguyờn Tõy Tng, loi dc liu ny thc cht l hin tng u trựng cỏc loi bm thuc chi Thitarodes b nm Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc ký sinh Nm 1878 cỏc nh khoa hc ó phỏt hin nm ny ký sinh trờn sõu non (u trựng) ca mt loi cụn trựng thuc chi Thitarodes Thng d gp nht sõu non loi Thitarodes baimaensis hoc Thitarodes armoricanus, ngoi cũn 46 loi khỏc thuc chi Thitarodes cng cú th b Cordyceps sinensis ký sinh Vo cui thu cỏc cht trờn da ca sõu non h ngi ờm (Noctuidae) tng tỏc vi cỏc bo t nm v to cỏc si nm, cỏc si nm ó õm sõu vo u trựng, coi chỳng l cht dinh dng phỏt trin n u hố nm sau, nm phỏt sinh mnh v gõy cht sõu, sau ú chỳng hỡnh thnh chi, phỏt trin chui mt t, nhng gc dớnh vo u sõu Do ú nhiu ngi gi l nm ụng trựng h tho bi vỡ ụng nm sng c th cụn trựng, hố thỡ nm phỏt trin ngoi c th ging nh cõy c (hỡnh 1) [8, 9] u th k XVIII, nhng ngi truyn giỏo Chõu u ó a ụng trựng h tho n vi nc Phỏp nghiờn cu, v h coi nc Phỏp l nc cú nn y hc hin i n rt nhiu nc ó nghiờn cu, iu tra v thu thp nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris ngoi t nhiờn lm nguyờn liu sn xut thc phm chc nng phc v cho ngi [10] Hỡnh 1: Nhng ụng trựng h tho Cordyceps militaris ( ngun http://thucphamchucnang.files.won ) 1.2 Sự phân b ca nm ụng trựng h tho Theo ti liu ca bỏo in t [8, 9] nm ụng trựng h tho ch yu tỡm thy c vo hố, vựng nỳi cao trờn 4.000 m nh cao nguyờn Tõy Tng, T Xuyờn, Thanh Hi, Cam Tỳc v Võn Nam, Theo cỏc nh khoa hc thỡ chi nm Cordyceps cú ti 400 loi khỏc nhau, tớnh riờng Trung Quc ó tỡm thy khong 60 loi ụng trựng h tho Tuy nhiờn cho n ngi ta mi ch nghiờn cu c loi nm Cordyceps sinensis v Cordyceps militaris cú giỏ tr dc liu tt vi ngi V thuc ny thc cht l hin tng ký sinh trờn c th u trựng ca loi bm cú tờn khoa hc l Thitarodes thuc chi Cordyceps, chủ yếu Thitarodes baimaensis hoc Thitarodes armoricanus Loi nm ny phõn b rng chõu vi trung tõm a dng l vựng ụng v Chõu c 1.3 C ch lõy nhim ca nm ụng trựng h tho Cordyceps vo c th cụn trựng Theo Bỏch khoa ton th [8] thỡ loi nm Cordyceps lõy nhim vo c th sâu hi n cha rừ nguyờn nhõn Nhng sõu ny cú th ó n phi bo t nm hoc chỳng mc bnh nm ký sinh t cỏc l th n si nm phỏt trin mnh, chỳng xõm nhim vo cỏc mụ ca vt ch, s dng hon ton cỏc cht dinh dng c th sõu n mt giai an nht nh, nm phỏt trin thnh dng cõy (hỡnh dng ging thc vt) v phỏt tỏn bo t Nm ụng trựng h tho cũn sng, ngi ta cú th trụng rừ hỡnh sõu, vi uụi l mt cnh nh, mc lỏ Khi sy khụ, nú cú mựi nh cỏ, t lờn cú mựi thm Phn "lỏ" hỡnh dng ging ngún tay, di khong - 11cm si nm mc dớnh lin vo u sõu non m thnh u sõu non ging nh tm, di chng 3-5 cm, ng kớnh khong 0,3 - 0,8 cm Bờn ngoi cú mu vng xm hoc nõu vng vi khong 20-30 khớa, khớa gn u nh hn Phn u cú mu nõu , uụi ging nh uụi tm, cú tt c cp chõn, nhng ụi gia l rừ nht Cht m nm hỡnh que cong mc t mỡnh sõu non, di hn sõu non mt chỳt Sõu non d b góy, rut bờn cng y, mu trng hi vng; cht m nm khỏ dai v bờn rut hi rng, cú mu trng ng [11, 12] II Giỏ tr dc liu ca nm ụng trựng h tho Cordyceps: Nm 1993, ụng trựng h tho ó lm c th gii kinh ngc qua s kin th thao quc t Mt n ng viờn ngi Trung Quc ó liờn tc phỏ k lc th gii ni dung chy c ly 1000 m, 3000 m v 10000 m Thnh cụng ca ngi n ng viờn ny mt phn nh vo dựng ụng trựng h tho ba n hng ngy Tp on Dc phm Tasly ó nhõn ging ụng trựng h tho u tiờn vựng m ly cao nguyờn cú cao trờn 4000 m Nh ú, Tasly ó phõn lp v chit xut c ht hot ng sinh hc cú giỏ tr dc liu ca ụng trựng h tho, to nờn viờn nang Tasly Hong trựng tho vi hm lng Polissaccharid cao Hng i ny ó cho Trung Quc cú thng hiu ụng trựng h tho ó xut khu vi ton cu Nm ĐTHT cú cỏc cht dc liu quý ch yếu l Cordycepin Adenosine, nhiều chất khác có tác dụng tốt cho người như: Protein, Acid amin, Vitamin, Lipit, Polysaccharide,v cỏc khoỏng cht, Phõn tớch hoỏ hc cho thy sinh (biomass) ca THT cú 17 acid amin khỏc nhau, cú D-mannitol, cú lipid, cú nhiu nguyờn t vi lng (Al, Si, K, Na ) Quan trng hn l sinh THT cú nhiu cht hot ng sinh hc m cỏc nh khoa hc ang phỏt hin dn dn nh cỏc tin b ca ngnh hoỏ hc cỏc hp cht t nhiờn Trong ú phi k n cht Cordiceptic acid, Cordycepin, Adenosine, Hydroxyethyl-adenosine ỏng chỳ ý hn c l nhúm hot cht HEAA ( Hydroxy-Ethyl-Adenosine- Analogs) Ngoài cũn cú cha nhiu loi Vitamin (trong 100g THT cú 0,12 g, vitamin B12; 29,19 mg vitamin A; 116,03 mg, vitamin C, ngoi cũn cú vitamin B2 (riboflavin), vitamin E, vitamin K ) [11] Sau õy l giỏ tr dc liu quan trng ca mt s cht: 2.1 Cht Cordycepin ( 3- deoxyadenosine ) cú nm THT vi hm lng l 0.006 mg/g, õy mt dng analoge ca Adenosine, cht ny cú tỏc dng ngn chn vi khun, chng virus, ngn chn ung th, ung th vũm hng, bnh lao (tuberculosis bird-type) ngi 2.2 Cht acid Cordycepic ( mt dng D-mannitol ) ĐTHT thiờn nhiờn cú hm lng l 30.05 mg/g Cht Acid Cordycepic cú tỏc dng gim ho v hen suyn, gim ng huyt v khỏng vi khun 2.3 Cht SOD, mt cht chng oxi húa ( Superoxide Dismutase ) nm THT cú hm lng l 149.4 U/ml, có tác dụng chng li thp khp, phỏt ban lupus, viờm ty da hay c, ung th v phúng x, nú cng cú kh nng chng li lóo húa v lm p ln da [10, 11] 2.4 Cht Polysaccharide cú hm lng l 94,6 mg/g, cú tỏc dng gia tng h dch, chng ung th, iu tr cỏc bnh v tim phi, viờm ph qun tớnh tui gi cng nh ci thin kh nng gii c ca gan Hm lng Polysaccharide thiờn nhiờn l 94,6 mg/g, cú tỏc dng gia tng h dch, chng ung th, iu tr cỏc bnh v tim phi, viờm ph qun tớnh tui gi cng nh ci thin kh nng gii c ca gan [9, 10] 2.5 Cht Manitol cú th tỡm thy nhiu thc vt, nhng nm ụng trựng h tho cú hm lng diosmol l cao nht, ngoi cụng dng lm gim m mỏu, ng mỏu v cholesterol Cht Manitol cũn giỳp cho mch mỏu gión m, phũng chng bnh tim mch rt hu hiu 2.6 Cht Adenosin cú vai trũ quan trng quỏ trỡnh chuyn húa nng lng ca c th Cht ny giỳp ci thin tun hon ngoi biờn v tim mch, ci thin nng lc cho c bp, gim sinh trng ca cỏc t bo thoỏi húa, tng lng oxy mỏuVỡ vy vic b sung hm lng Adenosin cao cho c th l vụ cỳng cn thit, giỳp cho ngi luụn di nng lng lao ng hiu qu III Cụng dng ca nm ụng trựng h tho Cordyceps Cỏc nghiờn cu y hc v dc hc ó chng minh c nm ụng trựng h tho Cordyceps cú nhng tỏc dng sau: 1- Chng li tỏc dng xu ca cỏc tõn dc i vi thn, thớ d i vi c tớnh ca Cephalosporin A - Bo v thn trng hp gp tn thng thiu mỏu - Chng li s suy thoỏi ca thn, xỳc tin vic tỏi sinh v phc hi cỏc t bo tiu qun thn - Lm h huyt ỏp ngi cao huyt ỏp - Chng li hin tng thiu mỏu c tim - Gi n nh nhp p ca tim - Tng cng tớnh dch khụng c hiu - iu tit tớnh dch c hiu - Tng cng nng lc thc bo ca cỏc t bo dch 10 - Tng cng tỏc dng ca ni tit t tuyn thng thn v lm trng n cỏc nhỏnh khớ qun 12 - Lm chm quỏ trỡnh lóo hoỏ ca c th 13 - Hn ch bnh tt ca tui gi 14 - Nõng cao nng lc chng ung th ca c th 15 - Chng li tỡnh trng thiu oxygen ca c th 16 - Tng cng tỏc dng lu thụng mỏu c th 17 - Hn ch tỏc hi ca tia gamma i vi c th 18 - Tng cng tỏc dng an thn, trn tnh thn kinh 19 - Tng cng vic iu tit nng ng mỏu 20 - Lm gim cholesterol mỏu v chng x va ng mch 21- Xỳc tin tỏc dng ca cỏc ni tit t (hoocmon) 22 - Tng cng chc nng tiờu hoỏ v hp thu cỏc cht dinh dng 23 - c ch vi sinh vt cú hi, k c vi khun lao 24 - Khỏng viờm v tiờu viờm 25 - Cú tỏc dng cng dng v chng lit dng Vi nhng tỏc dng trờn thỡ nm ụng trựng h tho cũn trc tip nh hng n mt s h thng quan trng c th 3.1 i vi h thng dch: Nhng nghiờn cu thc nghim Trung Quc ó chng minh THT cú kh nng lm tng cng hot ng dch t bo cng nh dch dch th C th l nm cú tỏc dng nõng cao hot tớnh ca i thc bo v cỏc t bo nhim khun Chỳng iu tit cỏc phn ng ỏp ca t bo lympho B, tng cng mt cỏch cú chn lc hot tớnh ca cỏc t bo c ch, lm tng nng cỏc khỏng th IgG, IgM huyt Mt khỏc, nm THT cũn l mt v thuc c ch dch cú tỏc dng chng li s lóo húa ca cỏc t bo 3.2 i vi h thng tun hon tim, nóo: Nm THT cú tỏc dng lm gión mch mỏu, lm tng lu lng tun hon nóo v tim, thụng qua c ch hng phn thc th M c trn thnh mch Mt khỏc, nm THT cũn cú kh nng iu chnh lipit mỏu, lm gim lng cholesterol v lipoprotein, hn ch quỏ trỡnh tin trin ca tỡnh trng x va ng mch 3.3 i vi h hụ hp: Nm THT cú tỏc dng bỡnh xuyn, tr m v phũng chng khớ ph thng iu ny lm sỏng t quan im ca c nhõn xa xa cho rng nm ụng trựng h tho cú kh nng bo ph, ớch thn v d lao khỏi [11] 3.4 i vi h thng ni tit: Cỏc tỏc gi Chen L.T, Cao H.F & Huang W.F nm 2009 cho bit nm ụng trựng h tho cú tỏc dng lm tng trng lng tuyn v thng thn v tng tng hp cỏc hoocmon tuyn ny, ng thi nm cú tỏc dng tng t nh hormon nam tớnh v lm tng trng lng tinh hon cng nh cỏc c quan sinh dc ph trờn ng vt thc nghim Ngoi ra, THT cũn cú tỏc dng chng ung th, chụng viờm nhim, chng quỏ trỡnh lóo hoỏ v trn tnh chng co git [12] IV Nghiờn cu lõm sng ca nm ụng trựng h tho Cordyceps sp Cỏc nh y hc c truyn v ngoi nc ó nghiờn cu s dng nm THT iu tr thnh cụng khỏ chng bnh nh ri lon mỏu, viờm ph qun v hen ph qun, viờm thn tớnh v suy thn, ri lon nhp tim, cao huyt ỏp, viờm mi d ng, viờm gan B mn tớnh, ung th phi (cú tỏc dng h tr) v thiu nng sinh dc Vin nghiờn cu ni tit Thng Hi (Trung Quc) cng ó dựng nm THT iu tr cho cỏc bnh nhõn b lit dng, kt qu t c khỏ tt Nh vy, cú th thy rng nm THT l mt nhng v thuc ụng y cú kh nng ci thin i sng tỡnh dc trc tip hoc giỏn tip thụng qua tỏc dng nõng bi b c th iu ny ó c cỏc nh y hc c truyn bit n t rt sm Theo cỏc cun sỏch c xa, nm THT cú v ngt, tớnh m vo hai kinh thn v ph, cú cụng nng dng ph, b thn, ớch tinh c dựng tr ph h khỏi xuyn, thn suy dng nuy (lit dng), di tinh, lng au gi mi Khú cú th k ht cỏc phng thuc ụng y cú s dng THT, nhng ci thin v phũng chng cỏc bnh ri lon tỡnh dc Cỏc nh y hc c truyn Trung Quc, ó nghiờn cu dựng nm THT iu tr thnh cụng khỏ nhiu bnh nh: Ri lon lipid mỏu (hiu qu t 76,2%), viờm ph qun mn tớnh v hen ph qun, viờm thn mn tớnh v suy thn (t hiu qu t 44,7-70%), ri lon nhp tim (t hiu qu 74,5%), tng huyt ỏp, viờm mi d ng, viờm gan B mn tớnh (t hiu qu 70%), ung th phi (cú tỏc dng h tr) v thiu nng sinh dc (t hiu qu t 31,57-64,15%) [11,12,13] 4.1 Ci thin chc nng gan: Cỏc nh khoa hc Trung Quc ó nghiờn cu thc hin trờn 70 bnh nhõn viờm gan B tớnh v x gan, s dng nm THT hoc l hn hp tho dc vi thnh phn chớnh l nm linh chi, kt qu cho thy cú 68 % ngi bnh cú phn ng lõm sng tt (vi nhúm s dng THT) v ch cú 57 % phn ng tt (vi nhúm hn hp tho dc cha nm Linh chi) iu ny cho thy nm ụng trựng h tho tt hn nm linh chi vic iu tr bnh gan hay x gan cho ngi [14] Thớ nghim khỏc cng c thc hin trờn 22 bnh nhõn x gan liu lng g/ngy cng cho kt qu rt kh quan th nghim cỏc chc nng gan sau thi gian iu tr bng ụng trựng h tho [10] 4.2 Gii c cho thn: Bỏc s y hc c truyn cho rng nm THT cú tỏc dng lm tng chc nng thn Rt nhiu cụng trỡnh y hc hin i xỏc nhõn l nh nm cú kh nng lm tng nhng loi hoocmon tuyn thng thn v tuyn sinh dc tit Thc hin trờn 51 bnh nhõn b hng thn tớnh, theo liu trỡnh iu tr t 3-5 g THT/ ngy, kt qu cho thy chc nng thn c ci thin ỏng k Mt khỏc chc nng ca h dch cng c nõng cao hn so vi nhúm i chng Mt nghiờn cu khỏc trờn 57 bnh nhõn b hng thn s dng gentamixin , ngi ta quan sỏt thy bnh nhõn cú s dng nm THT vi lng 4.5 g/ ngy thỡ thn c bo v tt hn, 89 % chc nng thn c hi phc, gim tỏc dng gõy c ca khỏng sinh so vi nhúm i chng dựng gi dc hay s dng liu phỏp khỏc ch cho kt qu 45 % Nghiờn cu 51 bnh nhõn b suy thn cú dựng nm 10 IV Nghiờn cu s phỏt trin ca khun lc nm Cordycpes militaris trờn mụi trng MYPS theo thi gian Qua hai thớ nghim trờn ó xỏc nh c mụi trng MYPS l ti u nht cho nm Cordycep militaris phỏt trin Chỳng tụi tin hnh i sõu vo nghiờn cu nuụi cy nm trờn mụi trng ny Kt qu thớ nghim v s phỏt trin ca nm thỏng c trỡnh by bng Bng 4: S phỏt trin ca khun lc nm Cordyceps militaris trờn mụi trng MYPS ( Thớ nghim thỏng 2) Nhit S phỏt trin ca KL nm (mm) sau thi gian nuụi cy trung Ln nhc li bỡnh 10 15 20 25 11,0 20,0 29,0 33,5 37,0 10,5 19,5 27,5 31,0 33,5 11,0 15,0 30,5 34,5 37,5 TB 10,8 18,2 29,0 33,0 36,0 (0C) 23,1 m trung bỡnh (%) 85 Kt qu bng cho thy iu kin nhit trung bỡnh 23,10C v m trung bỡnh 85% trờn mụi trng MYPS nm Cordyceps militaris phỏt trin cho kt qu c th nh sau: - Sau ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 10,8 mm - Sau 10 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 18,2 mm - Sau 15 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 29 mm 29 - Sau 20 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 33 mm - Sau 25 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 36 mm - T ngy th 26 khun lc nm phỏt trin chm v gn nh khụng phỏt trin Dui õy l hỡnh nh nm Cordyceps militaris ang phỏt trin trờn mụi trng MYPS thỏng (hỡnh 6) Hỡnh6: S phỏt trin ca khun lc nm Cordycpes militaris trờn mụi trng MYPS sau ngy nuụi cy iu kin T0= 23,10C, H%=85% Thớ nghim nuụi cy nm Cordyceps militaris iu kin thỏng 3, kt qu thu c bng 30 Bng 5: S phỏt trin ca khun lc nm Cordyceps militaris trờn mụi trng MYPS ( Thớ nghim thỏng 3) Nhit S phỏt trin ca KL nm (mm) sau thi gian nuụi cy trung Ln nhc li bỡnh 10 15 20 25 12,0 21,0 30,5 35,5 40,0 11,5 20,0 27,0 39,0 43,0 9,0 20,0 26,0 40,0 45,0 TB 11,0 20,3 29,0 38,0 43,0 (0C) 24,1 m trung bỡnh (%) 84,5 Thớ nghiờm nuụi cy nm tin hnh thỏng vi iu kin nhit trung bỡnh 24,10C v m trung bỡnh 84,5 %cho thy nm Cordyceps militaris phỏt trin trờn mụi trng MYPS mnh hn C th : - Sau ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 11 mm - Sau 10 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 20,3 mm - Sau 15 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 29 mm - Sau 20 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 38 mm - Sau 25 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 43 mm 31 Di õy l hỡnh nh chỳng tụi chp c nm phỏt trin trờn mụi trng MYPS iu kin thỏng (hỡnh 7) Hỡnh b: S phỏt trin ca khun lc nm Cordyceps militaris trờn mụi trng MYPS sau 10 ngy nuụi cy Qua hỡnh nh chỳng tụi thy nm Cordyceps militaris ó phỏt trin tt iu kiờn nhit 24,10C , m 84,5% Thớ nghim nuụi cy nm Cordyceps militaris iu kin thỏng 4, kt qu trỡnh bi bng 32 Bng 6: S phỏt trin ca khun lc nm Cordyceps militaris trờn mụi trng MYPS ( Thớ nghim thỏng 4) Nhit S phỏt trin ca KL nm (mm) sau thi gian nuụi cy trung Ln nhc li bỡnh 10 15 20 25 15,0 26,0 36,0 46,0 46,0 12,0 23,0 33,0 41,0 42,0 10,5 25,0 34,0 43,0 45,0 TB 12,5 24,7 34,3 43,3 45,0 (0C) 26,2 m trung bỡnh (%) 83 Bng s liu trờn cho thy iu kin nhit trung bỡnh 26,20C v m trung bỡnh l 83% thỡ nm Cordyceps militaris phỏt trin tt nht Kt qu c th t cao nht: - Sau ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 12,5 mm - Sau 10 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 24,7 mm - Sau 15 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 34,3 mm - Sau 20 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 43,3 mm - Sau 25 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 45 mm Kt qu dng li sau 25 ngy nuụi cy nm, vỡ ngy th 26 khúm nm phỏt trin rt chm quan sỏt khun lc phỏt trin, chỳng tụi ó chp li hỡnh nh ( hỡnh 8a, 8b) 33 Hỡnh 8a: S phỏt trin ca khun lc nm Cordycpes militaris trờn mụi trng MYPS sau 10 ngy thỏng 34 Hỡnh 8b: S phỏt trin ca khun lc nm Cordycpes militaris trờn mụi trng MYPS sau 10 ngy thỏng Rừ rng l yu t nhit v m cú nh hng rừ rt n s phỏt trin ca nm Cordyceps militaris 35 V Nghiờn cu nh hng ca nhit v m n s phỏt trin ca nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris Nh trờn ó trỡnh by, nhit v m cú nh hng ln n s phỏt trin ca ng kớnh khun lc nm Cordycpes militaris Vỡ th qua cỏc thớ nghim trờn, chỳng tụi tng hp kt qu ghi c bng Bng 7: nh hng ca nhit v m n s phỏt trin ca nm Cordyceps militaris nuụi cy trờn mụi trng MYPS ng kớnh KL nm (mm) sau cỏc ngy nuụi Nhit cy t TN trung 10 15 20 25 bỡnh (0C) m trung bỡnh (%) 10,8 18,2 29,0 33,0 36,0 23,1 85,0 11,0 20,0 29,0 38,0 43,0 24,1 84,5 12,5 24,7 34,3 43,3 45,0 26,2 83,0 Kt qu bng 7, chỳng tụi rỳt c mt s nhn xột sau: - Nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris phỏt trin tt trờn mụi trng MYPS, iu kin nhit trung bỡnh 26,2 0C v m trung bỡnh 83 %, kt qu t c sau 25 ngy nuụi cy ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c l 45 mm - Nm phỏt trin iu kin nhit trung bỡnh 24,1 0C v m trung bỡnh 84,5 % nhanh th 2, kt qu sau 25 ngy nuụi cy ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t c 43 mm - Nm phỏt trin chm nht thỏng iu kin thi tit mỏt m hn, nhit trung bỡnh 23,1 0C v m trung bỡnh 85 % thỡ sau 25 ngy nuụi cy, ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm ch t c 36 mm Kt qu trờn ó khng nh nhit thớch hp cho nm Cordyceps militaris phỏt trin tt l iu kin nhit 26,20C v m 83% 36 minh ho kt qu thu c bng chỳng tụi trỡnh by lờn hỡnh v hỡnh nh ng ging hỡnh 10 ng kớnh trung bỡnh ca khun lc (mm) 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 10 15 20 25 Thi gian nuụi cy (ngy) ?t ?t ?t Hỡnh 9: Thi gian nuụi cy nh hng n s phỏt trin ca nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris Ghi chỳ: - t 1: T0 = 23,10C; H% = 85% - t 2: T0 = 24,10C; H% = 84,5% - t 3: T0C = 26,20C; H% = 83% 37 Hỡnh 10: Nm Cordyceps militaris phỏt trin sau 10 ngy nuụi cy trờn mụi trng MYPS VI Xỏc nh giỏ tr dc liu v thnh phn hoỏ hc ca nm Cordyceps militaris Trờn c s nuụi cy nm Cordyceps militaris trờn mụi trng MYPS iu kin nhit 26,20C v m , vic 83% xỏc nh giỏ tr dc liu v thnh phn húa hc cú nm Cordyceps militaris Cụng ty c phn dc liu Trung ng II thc hin Qua phõn tớch v thnh phn hoỏ hc ca nm Cordyceps militaris c trỡnh by bng 38 Bng 8: Xỏc nh thnh phn hoỏ hc ca nm Cordyceps militaris STT Gớa tr dc liu Thnh phn hoỏ hc Cordycepin 3- deoxyadenosine HEAA Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs VTM VTMA, VTMB12, VTMC, VTMB2, VTME, Nguyờn t vi lng Na, K, Al, Si Qua phõn tớch hoỏ hc v cỏc hp cht t nhiờn, Cụng ty dc liu Trung ng II cho bit sinh nm Cordyceps militaris cú cha nhiu cht sinh hoc, s ú phi k n cht Cordycepin, ú l 3- deoxyadenosine, tha l nhúm hot cht HEAA ( Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs) Ngoi nm Cordyceps militaris cũn cha nhiu loi vitamin nh vitamin A, vitamin B12, vitamin C, vitamin B2-riboflavin, vitamin E, vitamin Kv cỏc nguyờn t vi lng nh Na, K, Al, Si Nh vy nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris cú nhiu giỏ tr Kt qu trờn cho thy vic nghiờn cu nm ụng trựng h tho Vit Nam l ht sc cn thit, mang tớnh thc tin 39 PHN V KT LUN V NGH A KT LUN Qua bn thỏng thc ti Vin BVTV, chỳng tụi rỳt mt s kt lun sau: Nghiờn cu nh hng ca cỏc mụi trng nuụi cy n s phỏt trin ca nm Cordyceps militaris Trong ba mụi trng Czapek-Dox, PDA v MYPS thỡ mụi trng MYPS gm cú cỏc thnh phnõgar, sacharoza, maltoza, pepton v cao nm men l ti u nht cho nm ụng trựng h tho Cordyceps militaris phỏt trin mc +++ Th l mụi trng PDA gm cỏc thnh phn khoai tõy, sacharoza v agar thỡ nm Cordyceps militaris phỏt trin mc ++ Cũn trờn mụi trng Czapek-Dox gm cú agar, sacharoza, NaNO3, K2HPO4, MgSO4.7H2O, KCl, thỡ nm gn nh khụng phỏt trin So sỏnh kh nng phỏt trin ca nm Cordyceps militaris trờn hai mụi trng PDA v MYPS nhit trung bỡnh 24,70C v m trung bỡnh 84,% 2.1 Nm Cordyceps militaris phỏt trin trờn mụi trng MYPS sau 25 ngy nuụi cy ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 42 mm 2.2 Nm Cordyceps militaris phỏt trin trờn mụi trng PDA sau 25 ngy nuụi cy ng kớnh trung bỡnh ca khun lc nm t 33,5 mm nh hng ca thi gian nuụi cy trờn mụi trng MYPS n s phỏt trin ca nm Cordyceps militaris 3.1 nhit trung bỡnh 23,10C v m trung bỡnh 85% thỡ ng kớnh ca khun lc nm sau 25 ngy nuụi cy t trung bỡnh l 36 mm 3.2 nhit trung bỡnh 24,10C v m trung bỡnh 84,5% thỡ ng kớnh ca khun lc nm sau 25 ngy nuụi cy t trung bỡnh l 43 mm 3.3 nhit trung bỡnh 26,20C v m trung bỡnh 83% thỡ ng kớnh ca khun lc nm sau 25 ngy nuụi cy t trung bỡnh l 45 mm Gớa tr dc liu ca nm Cordyceps militaris bao gm : 40 4.1 Cordycepin vi thnh phn hoỏ hc l 3- deoxyadenosine 4.2 HEAA vi thnh phn hoỏ hc l Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs 4.3 Mt s loi vitamin nh vitamin A, vitamin B12, vitamin C, vitamin B2, vitamin E, vitamin K, 4.4 Mt s nguyờn t vi lng nh Na, K, Al, Si B NGH Nm Cordyceps militaris l mt loi nm mi cú rt nhiu cụng dng, õy l loi thc phm chc nng rt tt vi ngi, vỡ vy chỳng tụi nghi: cn tip tc nghiờn cu mụi trng nuụi cy nm Cordyceps militaris nhõn nhanh ngun nm ny lm nguyờn liu thc phm chc nng phc v cho ngi 41 PHN V TI LIU THAM KH O A Ti liu nc Phm Quang Thu (2009) iu tra phỏt hin nm Nhng trựng h tho Cordyceps nutans pat phõn b khu bo tn thiờn nhiờn Tõy Yờn T - Sn ng - Bc Giang Tp trớ nụng nghip v phỏt trin nụng thụn s - thỏng 4/2009 Phm Quang Thu (2009) Phỏt hin nm Nhng trựng h tho Cordyceps gunni (Berk.)Berk ti quc gia Tam o tnh Vnh Phỳc Tp nụng nghip v phỏt trin nụng thụn s - thỏng 6/2009 Phm Quang Thu, Nguyn Mnh H Phỏt hin nm Nhng trựng h tho Cordyceps militaris (L.:FR.)LINK ti quc gia Hong Liờn tnh Lo Cai Tp nụng nghip v phỏt trin nụng thụn s - thỏng 9/2009 Phm Th Thu (2004) Cụng ngh sinh hc bo v thc vt NXB H Quc Gia H Ni Phm Th Thu (2010) Nghiờn cu phỏt trin cỏc ngun nm Beauveria v Metarhizium ng dng phũng tr sõu hi cõy trng, cõy rng v phỏt hin ngun nm Cordyceps sp lm thc phm chc nng cho ngi Báo cáo ti Hi tho Quc gia bnh hi thc vt Vit Nam 24/4 25/4/2010 Nh xut bn Nụng nghip Trang 224 231 Bỏo in t Hi tiờu chun v bo v ngi tiờu dựng Vit Nam-Timo Cordyceps king ụng trựng h tho cho mi ngi (th 3, ngy 1, thỏng 4, nm 2008 ) Bỏo in t Bỏch Khoa Ton Th m wikipedia ụng trựng h tho Ngy 12, thỏng 1, nm 2010 42 Bỏo in t Thy thuc Ca Bn V thuc ụng y ụng trựng h tho, ngy 25, thỏng 1, nm 2010 Báo điện tử Greenbiotech Thc phm dinh dng Gii phỏp sc khe cho mi ngi Ngày 25/07/2009 10 Bỏo in t Thn dc ụng trựng h tho Cõu lc b nm trng Vit Nam Mush clubVN com Ngày 3/5/2009 B Tài liu nc ngoi Chen L.T.,Cao H.F & Huang W.F, 2005 Components, pharmacological activities and application of Cordyceps militaris, Modern Food Science 21(3), 192-195 Feng-Lin Hu, Zeng-Zhi Li, Ya-Qiong He, Chu-Ru Li, Bo Huang, MeiZhen Fan, 2009 Secondary metabolistes in a soybean fermentation both of Paecilomyces militaris Journal of Food Chemistry 116, pp.198-201 Ohta Y Lee, J B Hayashi, K F ujita A., Park D K, 2007 Invivo antiinfluenza virus activity of animmun omodulatory acidicpolysaccharide isolated from Cordyceps militaris grow on germinated soybeans Journal of Agricutural and Food Chemistry, 55 (25), 10194-10199 43 [...]... u Bc 1: Cõn s lng tng thnh phn ca 3 mụi trng Bước 2: Nu tng loi môi trường cho tan cỏc thnh phn nguyờn liu, o pH = 6 Bước 3: Đổ 1/2 phn môi trường vào ống nghiệm( 1/4 đến 1/3 ống ) v ngui, ri gúi li Phn mụi trng cũn li vo bỡnh tam giỏc, mang tt c i kh trựng trong thi gian 60 phỳt, 1210C (vi ỏp sut 1at) Bc 4: - Cho ra v nghiêng môi trường ng nghiệm trong bung cy - Rút mụi trũng trong bỡnh tam giỏc... v ghi nhn cú phõn b ti Vit Nam [1] Ti vn Quc gia Tam o, Vnh Phỳc Phm Quang Thu ó phỏt hin nm THT Cordyceps Gunnii [2] Ti vn Quc gia Hong Liờn, tnh Lo Cai ó phỏt hin nm THT Cordyceps militari (Nấm nhộng trùng thảo) [3] Nm 2009, Phm Th Thựy ó thu thp vn Quc gia Cỳc Phng, tnh Ninh Bỡnh ngun nm Cordyceps [6] V nm Nhng trựng tho Cordyceps militaris ln u tiờn c phỏt hin v mụ t Vit Nam [1,2] Loi nm ny phõn... phm s dng: Hiện nay nm ĐTHT ó được rất nhiều nước trên thế giới sản xuất thnh viờn dc liu thc phm chc nng cho ngi trên quy mô công nghiệp như Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bn, Mỹ và Malaysia Nấm ĐTHT c sản xut trên môi trường nhân tạo tốt hơn nhiều so với ĐTHT thu được ở ngoài tự nhiên Có rất nhiều sản phẩm được sản xuất từ nm ĐTHT và được bán khắp mọi nơi trên thế giới 5.1 Sn phm CORDY-CGB: Dng úng gúi:... - Rút mụi trũng trong bỡnh tam giỏc ra a petri trong bung cy, ngui - Sau ú ngui v kh trựng bung cy bng tia UV ( 30 phỳt n 60 phỳt ) Bước 5: Tiến hành cấy chấm điểm trờn a petri v cy rích rắc trờn tng ng nghim Bước 6: Gúi ng nghim v a petri cy nm, nuôi trong tủ nh ụn, theo dõi hàng ngày s phỏt trin ca nm Thớ nghim 2: Tin hnh nuụi cy nm Cordyceps militaris trờn 2 mụi trng PDA v MYPS trong thỏng 3 Phng... cm rt lng lo hoc cm sõu mt phn vo mụ ca nm phn sinh sn Tỳi bo t cú kớch thc 300 510 à x 3,5 5à, phn m gn trờn tỳi th qu cú kớch thc 3,5 5 à [3] Mt s khu vc khỏc cng ang c trin khai tỡm kim v nghiờn cứu nm Cordyceps, thng thỡ Cordyceps Vit Nam phõn b nhng khu rng nhit i thng xanh, cú cao t 800 m n 2000 m Trong chng trỡnh nghiờn cu ngh nh th gia Vit Nam v Trung Quc cp nh nc v nghiờn cu nm ụng trựng... phng phỏp nghiờn cu 1 Ni dung: 1.1 Nghiờn cu mt s mụi trng nuụi cy nm Cordyceps militaris xỏc nh mụi trng ti u cho nm Cordyceps militaris phỏt trin 1.2 Nghiờn cu ảnh hưởng ca thi gian n s phỏt trin ca nấm Cordyceps militaris 1.3 Xỏc nh giỏ tr dc liu, thành phần hoỏ hc ca nm Cordyceps militaris 2 Phng phỏp nghiờn cu 2.1 Nghiờn cu mụi trng nuụi cy nm Cordyceps militaris xỏc inh mụi trng ti u a Mt s mụi ... Bc 1: Cõn s lng tng thnh phn ca mụi trng Bước 2: Nu tng loi môi trường cho tan cỏc thnh phn nguyờn liu, o pH = Bước 3: Đổ 1/2 phn môi trường vào ống nghiệm( 1/4 đến 1/3 ống ) v ngui, ri gúi li... - Cho v nghiêng môi trường ng nghiệm bung cy - Rút mụi trũng bỡnh tam giỏc a petri bung cy, ngui - Sau ú ngui v kh trựng bung cy bng tia UV ( 30 phỳt n 60 phỳt ) Bước 5: Tiến hành cấy chấm... thc phm chc nng cho ngi quy mô công nghiệp Trung Quốc, Hàn Quốc, Nhật Bn, Mỹ Malaysia Nấm ĐTHT c sản xut môi trường nhân tạo tốt nhiều so với ĐTHT thu tự nhiên Có nhiều sản phẩm sản xuất từ nm