NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS

Nấm là loại dược liệu quý rất tốt cho sức khoẻ

Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp PHẦN I M U Nm ông trùng h tho (ĐTHT) mt loại nấm ký sinh trùng, kh«ng nhà khoa hc nghiên cu, mà c c xã hội quan tâm đến, nấm loại dược liệu quý, tốt cho sức khoẻ người, phù hợp với lứa tuổi, từ trẻ con, phụ nữ mang thai, thiếu niên, người già Theo tài liệu ghi chép đông dược cổ, Đông trùng hạ thảo vị thuốc bồi bổ q giá, có tác dụng tích cực với bệnh rối loạn tình dục, thận hư, liệt dương, di tinh, đau lưng, mỏi gối, ho hen, có tác dụng tốt trẻ em còi xương chậm lớn Một số nghiên cứu đại gần nấm Đơng trùng hạ thảo có tác dụng làm tăng cường công tuyến thượng thận, cải thiện chức thận, nâng cao lực miễn dịch, kháng khuẩn, kháng virus, chống ung thư chất phóng xạ [10,11] Trên giới, nấm Đơng trùng hạ thảo nhà khoa học nghiên cứu thu nhiều thành tựu có giá trị Với công nghệ sinh học tiên tiến, nhiều nước thành công việc nuôi cấy chất Cordyceps phát triển công nghiệp sản xuất Cordyceps Công ty Biofact life (Malaysia) kết hợp công nghệ tiên tiến Nhật nước khác nuôi cấy thành công nấm Cordyceps môi trường nhân tạo để tạo hai hoạt chất Cordycepin Adenosine tạo từ hệ sơi nấm C¸c níc Trung Qc, Hàn Quốc, Mỹ, Nhật Bản, Malaysia đà sản xuất đợc nm Đông trùng hạ thảo quy mô công nghiệp từ năm 1995, kỷ XX Ở Việt Nam việc nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo bắt đầu, cịn gặp nhiều khó khăn, sớ vật chất kiến thức Cho đến chưa có tổ chức, quan áp dụng thành công công nghệ sinh học tiên tiến để nuôi cấy sản xuất nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps để làm nguyên liệu sản xuất thực phm chc nng cho ngi Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Để góp phần vào nghiên cứu mơi trường ni cấy thích hợp nấm Đông trùng hạ thảo Việt Nam, giao thực đề tài: “NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS ” Mc ớch v yờu cu đặt a Mc ớch Nghiên cứu mơi trường ni nấm Cordyceps militaris ®Ĩ xác định môi trường tối ưu cho nấm Cordyceps militaris sinh trưởng phát triển tốt Xác định số đặc điểm hình thái sinh trưởng phát triển nấm Cordyceps militaris mơi trường thích hơp Bước đầu xác định giá trị dược liệu nấm Cordyceps militaris b Yêu cầu Xác định thành phần môi trường nuôi cấy cho nấm Cordyceps militaris phát triển tốt Xỏc nh c ảnh hởng cđa u tè nhiƯt ®é Èm ®é ®Õn sinh trưởng phát triển nÊm Cordyceps militaris Xác định giá trị dược liệu nấm Cordyceps militaris Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp PHẦN II TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU I Tình hình nghiên cứu nấm Đơng trùng hạ thảo trªn thÕ giíi 1.1 Sơ lược lịch sử nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo Nấm Đông trùng hạ thảo nhà khoa học Trung Quốc xác đinh đầu xuất từ vùng núi cao nguyên Tây Tạng, loại dược liệu thực chất tượng ấu trùng loài bướm thuộc chi Thitarodes bị nấm Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc ký sinh Năm 1878 nhà khoa học phát nấm ký sinh sâu non (ấu trùng) lồi trùng thuộc chi Thitarodes Thường dễ gặp sâu non lồi Thitarodes baimaensis Thitarodes armoricanus, ngồi cịn 46 lồi khác thuộc chi Thitarodes bị Cordyceps sinensis ký sinh Vào cuối mùa thu chất da sâu non họ ngài đêm (Noctuidae) tương tác với bào tử nấm tạo sợi nấm, sợi nấm đâm sâu vào ấu trùng, coi chúng chất dinh dưỡng để phát triển Đến đầu mùa hè năm sau, nấm phát sinh mạnh gây chết sâu, sau chúng hình thành chồi, phát triển chui khỏi mặt đất, gốc dính vào đầu sâu Do nhiều người gọi nấm Đơng trùng hạ thảo mùa đơng nấm sống thể trùng, mùa hè nấm phát triển thể giống cỏ (hình 1) [8, 9] Đầu kỷ XVIII, người truyền giáo Châu Âu đưa Đông trùng hạ thảo đến với nước Pháp để nghiên cứu, họ coi nước Pháp nước có y học đại Đến nhiều nước nghiên cứu, điều tra thu thập nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris tự nhiên để làm nguyên liệu sản xuất thực phẩm chức phục vụ cho người [10] TrÇn thuú h¬ng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiƯp Hình 1: Nhộng Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris ( nguồn http://thucphamchucnang.files.won ) 1.2 Sù ph©n bố nấm Đông trùng hạ thảo Theo tài liệu báo điện tử [8, 9] nấm Đông trùng hạ thảo chủ yếu tìm thấy vào mùa hè, vùng núi cao 4.000 m cao nguyên Tây Tạng, Tứ Xuyên, Thanh Hải, Cam Túc Vân Nam, Theo nhà khoa học chi nấm Cordyceps có tới 400 lồi khác nhau, tính riêng Trung Quốc tìm thấy khoảng 60 lồi Đơng trùng hạ thảo Tuy nhiên người ta nghiên cứu lồi nấm Cordyceps sinensis Cordyceps militaris có giá trị dược liệu tốt với người Vị thuốc thực chất tượng ký sinh thể ấu trùng lồi bướm có tên khoa học Thitarodes thuộc chi Cordyceps, chđ u lµ Thitarodes baimaensis Thitarodes armoricanus Loài nấm phân bố rộng châu Á với trung tâm đa dạng vùng Đông Á Châu Úc 1.3 Cơ chế lây nhiễm nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps vào thể côn trùng Theo Bách khoa tồn thư [8] lồi nấm Cordyceps lây nhiễm vào thể s©u hại đến chưa rõ nguyên nhân Những sâu ăn phải bào tử nấm chúng mặc bệnh nấm ký sinh từ lỗ thở Đến si nm phỏt Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp triển mạnh, chúng xâm nhiễm vào mơ vật chủ, sử dụng hồn toàn chất dinh dưỡng thể sâu Đến giai đọan định, nấm phát triển thành dạng (hình dạng giống thực vật) phát tán bào tử Nấm Đơng trùng hạ thảo cịn sống, người ta trơng rõ hình sâu, với cành nhỏ, mọc Khi sấy khơ, có mùi cá, đốt lên có mùi thơm Phần "lá" hình dạng giống ngón tay, dài khoảng - 11cm sợi nấm mọc dính liền vào đầu sâu non mà thành Đầu sâu non giống tằm, dài chừng 3-5 cm, đường kính khoảng 0,3 - 0,8 cm Bên ngồi có màu vàng xẫm nâu vàng với khoảng 20-30 vằn khía, vằn khía gần đầu nhỏ Phần đầu có màu nâu đỏ, giống tằm, có tất cặp chân, đôi rõ Chất đệm nấm hình que cong mọc từ sâu non, dài sâu non chút Sâu non dễ bẻ gãy, ruột bên căng đầy, màu trắng vàng; chất đệm nấm dai bên ruột rỗng, có màu trắng ngà [11, 12] II Giá trị dược liệu nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps: Năm 1993, Đông trùng hạ thảo làm giới kinh ngạc qua kiện thể thao quốc tế Một nữ vận động viên người Trung Quốc liên tục phá kỷ lục giới nội dung chạy cự ly 1000 m, 3000 m 10000 m Thành công người nữ vận động viên phần nhờ vào dùng Đông trùng hạ thảo bữa ăn hàng ngày Tập đồn Dược phẩm Tasly nhân giống Đơng trùng hạ thảo vùng đầm lầy cao nguyên có độ cao 4000 m Nhờ đó, Tasly phân lập chiết xuất hết hoạt động sinh học có giá trị dược liệu Đơng trùng hạ thảo, tạo nên viên nang Tasly Hoàng trùng thảo với hàm lượng Polissaccharid cao Hướng cho Trung Quốc có thương hiệu Đơng trùng hạ thảo xuất vi tồn cầu Nấm §THT có chất dược liệu quý chủ yÕu Cordycepin vµ Adenosine, ngoµi nhiều chất khác có tác dụng tốt cho ngêi nh: Protein, Acid amin, Vitamin, Lipit, Polysaccharide,và cỏc khoỏng cht, Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Phân tích hố học cho thấy sinh khối (biomass) ĐTHT có 17 acid amin khác nhau, có D-mannitol, có lipid, có nhiều nguyên tố vi lượng (Al, Si, K, Na ) Quan trọng sinh khối ĐTHT có nhiều chất hoạt động sinh học mà nhà khoa học phát nhờ tiến ngành hoá học hợp chất tự nhiên Trong phải kể đến chất Cordiceptic acid, Cordycepin, Adenosine, Hydroxyethyl-adenosine Đáng ý nhóm hoạt chất HEAA ( Hydroxy-Ethyl-Adenosine- Analogs) Ngoµi cịn có chứa nhiều loại Vitamin (trong 100g ĐTHT có 0,12 g, vitamin B12; 29,19 mg vitamin A; 116,03 mg, vitamin C, ngồi cịn có vitamin B2 (riboflavin), vitamin E, vitamin K ) [11] Sau giá trị dược liệu quan trọng số chất: 2.1 Chất Cordycepin ( 3- deoxyadenosine ) có nấm ĐTHT với hàm lượng 0.006 mg/g, lµ dạng analoge Adenosine, chất có tác dụng ngăn chặn vi khuẩn, chống virus, ngăn chặn ung thư, ung thư vòm họng, bệnh lao (tuberculosis bird-type) người … 2.2 Chất acid Cordycepic ( dạng D-mannitol ) cđa §THT thiên nhiên có hàm lượng 30.05 mg/g Chất Acid Cordycepic có tác dụng giảm ho hen suyễn, giảm đường huyết kháng vi khuẩn 2.3 Chất SOD, chất chống oxi hóa ( Superoxide Dismutase ) nấm ĐTHT có hàm lượng 149.4 U/ml, cã t¸c dơng chống lại thấp khớp, phát ban đỏ lupus, viêm tấy da hay cơ, ung thư phóng xạ, có khả chống lại lão hóa làm đẹp da [10, 11] 2.4 Chất Polysaccharide có hàm lượng 94,6 mg/g, có tác dụng gia tăng hệ miễn dịch, chống ung thư, điều trị bệnh tim phổi, viêm phế quản mãn tính tuổi già cải thiện khả giải độc gan Hàm lượng Polysaccharide thiên nhiên 94,6 mg/g, có tác dụng gia tăng hệ miễn dịch, chống ung thư, điều trị bệnh tim phổi, viêm phế quản mãn tính tuổi già cải thiện khả giải độc gan [9, 10] Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp 2.5 Chất Manitol tìm thấy nhiều thực vật, nấm Đông trùng hạ thảo có hàm lượng diosmol cao nhất, ngồi công dụng làm giảm mỡ máu, đường máu cholesterol Chất Manitol giúp cho mạch máu giãn mỡ, phòng chống bệnh tim mạch hữu hiệu 2.6 Chất Adenosin có vai trị quan trọng q trình chuyển hóa lượng thể Chất giúp cải thiện tuần hoàn ngoại biên tim mạch, cải thiện lực cho bắp, giảm sinh trưởng tế bào thối hóa, tăng lượng oxy máu…Vì việc bổ sung hàm lượng Adenosin cao cho thể vô cúng cần thiết, giúp cho người dồi lượng để lao động hiệu III Công dụng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps Các nghiên cứu y học dược học chứng minh nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps có tác dụng sau: 1- Chống lại tác dụng xấu tân dược thận, thí dụ độc tính Cephalosporin A - Bảo vệ thận trường hợp gặp tổn thưng thiếu máu - Chống lại suy thoái thận, xúc tiến việc tái sinh phục hồi tế bào tiểu quản thận - Làm hạ huyết áp người cao huyết áp - Chống lại tượng thiếu máu tim - Giữ ổn định nhịp đập tim - Tăng cường tính miễn dịch khơng đặc hiệu - Điều tiết tính miễn dịch đặc hiệu - Tăng cường lực thực bào tế bào miễn dịch 10 - Tăng cường tác dụng nội tiết tố tuyến thượng thận làm trương nở nhánh khí quản 12 - Làm chậm q trình lão hố thể 13 - Hạn chế bệnh tật tuổi già 14 - Nâng cao lực chống ung thư thể TrÇn thuú h¬ng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiƯp 15 - Chống lại tình trạng thiếu oxygen thể 16 - Tăng cường tác dụng lưu thông máu thể 17 - Hạn chế tác hại tia gamma thể 18 - Tăng cường tác dụng an thần, trấn tĩnh thần kinh 19 - Tăng cường việc điều tiết nồng độ đường máu 20 - Làm giảm cholesterol máu chống xơ vữa động mạch 21- Xúc tiến tác dụng nội tiết tố (hoocmon) 22 - Tăng cường chức tiêu hoá hấp thu chất dinh dưỡng 23 - Ức chế vi sinh vật có hại, kể vi khuẩn lao 24 - Kháng viêm tiêu viêm 25 - Có tác dụng cường dương chống liệt dương Với tác dụng nấm Đơng trùng hạ thảo trực tiếp ảnh hưởng đến số hệ thống quan trọng thể 3.1 Đối với hệ thống miễn dịch: Những nghiên cứu thực nghiệm Trung Quốc chứng minh ĐTHT có khả làm tăng cường hoạt động miễn dịch tế bào miễn dịch dịch thể Cụ thể nấm có tác dụng nâng cao hoạt tính đại thực bào tế bào nhiễm khuẩn Chúng điều tiết phản ứng đáp tế bào lympho B, tăng cường cách có chọn lọc hoạt tính tế bào ức chế, làm tăng nồng độ kháng thể IgG, IgM huyết Mặt khác, nấm ĐTHT cịn vị thuốc ức chế miễn dịch có tác dụng chống lại lão hóa tế bào 3.2 Đối với hệ thống tuần hoàn tim, não: Nấm ĐTHT có tác dụng làm giãn mạch máu, làm tăng lưu lượng tuần hồn não tim, thơng qua chế hưng phấn thực thể M trơn thành mạch Mặt khác, nấm ĐTHT cịn có khả điều chỉnh lipit máu, làm giảm lượng cholesterol lipoprotein, hạn chế trình tiến triển tình trạng xơ va ng mch Trần thuỳ hơng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp 3.3 Đối với hệ hơ hấp: Nấm ĐTHT có tác dụng bình xuyễn, trừ đờm phịng chống khí phế thũng Điều làm sáng tỏ quan điểm cổ nhân xa xưa cho nấm Đơng trùng hạ thảo có khả “bảo phế, ích thận” “dĩ lao khái” [11] 3.4 Đối với hệ thống nội tiết: Các tác giả Chen L.T, Cao H.F & Huang W.F năm 2009 cho biết nấm Đơng trùng hạ thảo có tác dụng làm tăng trọng lượng tuyến vỏ thượng thận tăng tổng hợp hoocmon tuyến này, đồng thời nấm có tác dụng tương tự hormon nam tính làm tăng trọng lượng tinh hoàn quan sinh dục phụ động vật thực nghiệm Ngồi ra, ĐTHT cịn có tác dụng chống ung thư, chông viêm nhiễm, chống trình lão hố trấn tĩnh chống co giật [12] IV Nghiên cứu lâm sàng nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps sp Các nhà y học cổ truyền nước nghiên cứu sử dụng nấm ĐTHT để điều trị thành công chứng bệnh rối loạn máu, viêm phế quản mãn hen phế quản, viêm thận mãn tính suy thận, rối loạn nhịp tim, cao huyết áp, viêm mũi dị ứng, viêm gan B mạn tính, ung thư phổi (có tác dụng hỗ trợ) thiểu sinh dục Viện nghiên cứu nội tiết Thượng Hải (Trung Quốc) dùng nấm ĐTHT để điều trị cho bệnh nhân bị liệt dương, kết đạt tốt Như vậy, thấy nấm ĐTHT vị thuốc đơng y có khả cải thiện đời sống tình dục trực tiếp gián tiếp thông qua tác dụng nâng đỡ bồi bổ thể Điều nhà y học cổ truyền biết đến từ sớm Theo sách cổ xưa, nấm ĐTHT có vị ngọt, tính ấm vào hai kinh thận phế, có cơng dưỡng phế, bổ thận, ích tinh dùng để trị phế hư khái xuyễn, thận suy dương nuy (liệt dương), di tinh, lưng đau gối mỏi Khó kể hết phương thuốc đơng TrÇn th h¬ng 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiƯp y có sử dụng ĐTHT, để cải thiện phịng chống bệnh rối loạn tình dục Các nhà y học cổ truyền Trung Quốc, nghiên cứu dùng nấm ĐTHT điều trị thành công nhiều bệnh như: Rối loạn lipid máu (hiệu đạt 76,2%), viêm phế quản mạn tính hen phế quản, viêm thận mạn tính suy thận (đạt hiệu từ 44,7-70%), rối loạn nhịp tim (đạt hiệu 74,5%), tăng huyết áp, viêm mũi dị ứng, viêm gan B mạn tính (đạt hiệu 70%), ung thư phổi (có tác dụng hỗ trợ) thiểu sinh dục (đạt hiệu từ 31,57-64,15%) [11,12,13] 4.1 Cải thiện chức gan: Các nhà khoa học Trung Quốc nghiên cứu thực 70 bệnh nhân viêm gan B mãn tính xơ gan, sử dụng nấm ĐTHT hỗn hợp thảo dược với thành phần nấm linh chi, kết cho thấy có 68 % người bệnh có phản ứng lâm sàng tốt (với nhóm sử dụng ĐTHT) có 57 % phản ứng tốt (với nhóm hổn hợp thảo dược chứa nấm Linh chi) Điều cho thấy nấm Đông trùng hạ thảo tốt nấm linh chi việc điều trị bệnh gan hay xơ gan cho người [14] Thí nghiệm khác thực 22 bệnh nhân xơ gan liều lượng g/ngày cho kết khả quan thử nghiệm chức gan sau thời gian điều trị Đông trùng hạ thảo [10] 4.2 Giải độc cho thận: Bác sĩ y học cổ truyền cho nấm ĐTHT có tác dụng làm tăng chức thận Rất nhiều cơng trình y học đại xác nhân nhờ nấm có khả làm tăng loại hoocmon tuyến thượng thận tuyến sinh dục tiết Thực 51 bệnh nhân bị hỏng thận mãn tính, theo liệu trình điều trị từ 3-5 g ĐTHT/ ngày, kết cho thấy chức thận cải thiện đáng kể Mặt khác chức hệ miễn dịch nâng cao so với nhóm đối chứng Một nghiên cứu khác 57 bệnh nhân bị hỏng thận sử dụng gentamixin , người ta quan sát thấy bệnh nhân có sử dụng nấm ĐTHT với lượng 4.5 g/ ngày thận bảo vệ tốt hơn, 89 % chức thận hồi phc, gim tỏc dng gõy c Trần thuỳ hơng 10 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp mơi trường MYPS (mặt trước) Hình 5b: Sắc tố khuẩn lạc nấm Cordyceps militaris IV Nghiên cứu phát triển khuẩn lạc nấm Cordycpes militaris môi trường MYPS theo thời gian Qua hai thí nghiệm xác định môi trường MYPS tối ưu cho nấm Cordycep militaris phát triển Chúng tiến hành sâu vào nghiên cứu nuôi cấy nấm môi trường Kết thí nghiệm phát triển nấm tháng trình bày bảng Bảng 4: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordyceps militaris mơi trường MYPS ( Thí nghiệm tháng 2) Nhiệt Sự phát triển KL nấm (mm) sau thời gian độ ni cấy trung Lần nhắc lại bình 10 15 20 25 (0C) 11,0 10,5 11,0 20,0 19,5 15,0 29,0 27,5 30,5 33,5 31,0 34,5 37,0 33,5 37,5 23,1 Trần thuỳ hơng 29 m độ trung bình (%) 85 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp TB 10,8 18,2 29,0 33,0 36,0 Kết bảng cho thấy điều kiện nhiệt độ trung bình 23,1 0C độ ẩm trung bình 85% mơi trường MYPS nấm Cordyceps militaris phát triển cho kết cụ thể sau: - Sau ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 10,8 mm - Sau 10 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 18,2 mm - Sau 15 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 29 mm - Sau 20 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 33 mm - Sau 25 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 36 mm - Từ ngày thứ 26 khuẩn lạc nấm phát triển chậm gần không phát triển Duới hình ảnh nấm Cordyceps militaris phát triển mơi trường MYPS tháng (hình 6) Trần thuỳ hơng 30 506301024 Khoa CNSH & MT Khóa Ln Tèt NghiƯp Hình6: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordycpes militaris môi trường MYPS sau ngày ni cấy điều kiện T0= 23,10C, H%=85% Thí nghiệm nuôi cấy nấm Cordyceps militaris điều kiện tháng 3, kết thu bảng Bảng 5: Sự phát triển khuản lạc nấm Cordyceps militaris môi trường MYPS ( Thí nghiệm tháng 3) Sự phát triển KL nấm (mm) sau thời gian nuôi cấy Lần nhắc lại TB Nhiệt độ trung bình 10 15 20 25 12,0 11,5 9,0 11,0 21,0 20,0 20,0 20,3 30,5 27,0 26,0 29,0 35,5 39,0 40,0 38,0 40,0 43,0 45,0 43,0 (0C) 24,1 Ẩm độ trung bình (%) 84,5 Thí nghiêm ni cấy nấm tiến hành tháng với điều kiện nhiệt độ trung bình 24,10C độ ẩm trung bình 84,5 %cho thấy nấm Cordyceps militaris phát triển môi trường MYPS mạnh Cụ th ể: - Sau ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 11 mm Trần thuỳ hơng 31 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp - Sau 10 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 20,3 mm - Sau 15 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 29 mm - Sau 20 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 38 mm - Sau 25 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 43 mm Dưới hình ảnh chúng tơi chụp nấm phát triển môi trường MYPS điều kin thỏng (hỡnh 7) Trần thuỳ hơng 32 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Hình b: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordyceps militaris môi trường MYPS sau 10 ngày nuôi cấy Qua hình ảnh chúng tơi thấy nấm Cordyceps militaris phát triển tốt điều kiên nhiệt độ 24,10C , ảm độ 84,5% Thí nghiệm ni cấy nấm Cordyceps militaris điều kiện tháng 4, kết trình bảng Trần thuỳ hơng 33 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp Bảng 6: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordyceps militaris môi trường MYPS ( Thí nghiệm tháng 4) Nhiệt Sự phát triển KL nấm (mm) sau thời gian độ nuôi cấy trung Lần nhắc lại bình TB 10 15 20 25 15,0 12,0 10,5 12,5 26,0 23,0 25,0 24,7 36,0 33,0 34,0 34,3 46,0 41,0 43,0 43,3 46,0 42,0 45,0 45,0 (0C) 26,2 Âm độ trung bình (%) 83 Bảng số liệu cho thấy điều kiện nhiệt độ trung bình 26,2 0C độ ẩm trung bình 83% nấm Cordyceps militaris phát triển tốt Kết cụ thể đạt cao nhất: - Sau ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 12,5 mm - Sau 10 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 24,7 mm - Sau 15 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 34,3 mm - Sau 20 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 43,3 mm - Sau 25 ngày nuôi cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 45 mm Kết dừng lại sau 25 ngày nuôi cấy nấm, ngày thứ 26 khóm nấm phát triển chậm Để quan sát khuẩn lạc phát triển, chúng tơi chụp lại hình ảnh ( hình 8a, 8b) Trần thuỳ hơng 34 506301024 Khoa CNSH & MT Khóa Ln Tèt NghiƯp Hình 8a: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordycpes militaris môi trường MYPS sau 10 ngy thỏng Trần thuỳ hơng 35 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Hình 8b: Sự phát triển khuẩn lạc nấm Cordycpes militaris môi trường MYPS sau 10 ngày tháng Rõ ràng yếu tố nhiệt độ ẩm độ có ảnh hưởng rõ rệt đến phát triển nấm Cordyceps militaris V Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ẩm độ đến phát triển nấm Đông trùng h tho Cordyceps militaris Trần thuỳ hơng 36 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp Như trình bày, nhiệt độ ẩm độ có ảnh hưởng lớn đến phát triển đường kính khuẩn lạc nấm Cordycpes militaris Vì qua thí nghiệm trên, tổng hợp kết ghi bảng Bảng 7: Ảnh hưởng nhiệt độ độ ẩm đến phát triển nấm Cordyceps militaris nuôi cấy môi trường MYPS Đợt TN Đường kính KL nấm (mm) sau ngày ni Nhiệt Ẩm độ cấy 15 29,0 29,0 34,3 độ trung trung 23,1 24,1 26,2 bình 85,0 84,5 83,0 10,8 11,0 12,5 10 18,2 20,0 24,7 20 33,0 38,0 43,3 25 36,0 43,0 45,0 Kết bảng 7, rút số nhận xét sau: - Nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phát triển tốt mơi trường MYPS, điều kiện nhiệt độ trung bình 26,2 0C độ ẩm trung bình 83 %, kết đạt sau 25 ngày ni cấy đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 45 mm - Nấm phát triển điều kiện nhiệt độ trung bình 24,1 0C độ ẩm trung bình 84,5 % nhanh thứ 2, kết sau 25 ngày nuôi cấy đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 43 mm - Nấm phát triển chậm tháng điều kiện thời tiết mát mẻ hơn, nhiệt độ trung bình 23,1 0C độ ẩm trung bình 85 % sau 25 ngày ni cấy, đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 36 mm Kết khẳng định nhiệt độ thích hợp cho nấm Cordyceps militaris phát triển tốt điều kiện nhiệt độ 26,20C ẩm độ 83% Để minh hoạ kết thu bảng chúng tơi trình bày lên hình hình ảnh ng ging hỡnh 10 Trần thuỳ hơng 37 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Đường kính trung bình khuẩn lạc (mm) 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 10 15 Đ?t Đ?t 20 25 Thời gian nuôi cấy (ngày) Đ?t Hình 9: Thời gian ni cấy ảnh hưởng đến phát triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Ghi chú: - Đợt 1: T0 = 23,10C; H% = 85% - Đợt 2: T0 = 24,10C; H% = 84,5% - Đợt 3: T0C = 26,20C; H% = 83% Trần thuỳ hơng 38 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Hình 10: Nấm Cordyceps militaris phát triển sau 10 ngày nuôi cấy môi trường MYPS VI Xác định giá trị dược liệu thành phần hoá học nấm Cordyceps militaris Trên sỏ nuôi cấy nấm Cordyceps militaris môi trường MYPS điều kiện nhiệt độ 26,2 0C ẩm độ, việc 83% xác định giá trị dược liệu thành phần hóa học có nấm Cordyceps militaris Cơng ty cổ phần dược liệu Trung ương II thực Qua phân tích thành phần hố học nấm Cordyceps militaris trình bày bảng Bảng 8: Xác định thành phần hoá học nấm Cordyceps militaris STT Gía trị dược liệu Cordycepin HEAA VTM Nguyờn t vi lng Trần thuỳ hơng Thnh phn hoá học 3’- deoxyadenosine Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs VTMA, VTMB12, VTMC, VTMB2, VTME,… Na, K, Al, Si 39 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Qua phân tích hố học hợp chất tự nhiên, Công ty dược liệu Trung ương II cho biết sinh khối nấm Cordyceps militaris có chứa nhiều chất sinh hoc, số phải kể đến chất Cordycepin, 3’- deoxyadenosine, thưa nhóm hoạt chất HEAA ( Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs) Ngồi nấm Cordyceps militaris chứa nhiều loại vitamin vitamin A, vitamin B 12, vitamin C, vitamin B2-riboflavin, vitamin E, vitamin K…và nguyên tố vi lượng Na, K, Al, Si Như nấm Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris có nhiều giá trị Kết cho thấy việc nghiên cứu nấm Đông trùng hạ thảo Việt Nam cần thiết, mang tính thực tiễn PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ A KẾT LUẬN Qua bốn tháng thực tập Viện BVTV, rút số kết luận sau: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển ca nm Cordyceps militaris Trần thuỳ hơng 40 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa Ln Tèt NghiƯp Trong ba mơi trường Czapek-Dox, PDA MYPS mơi trường MYPS gồm có thành phầnâgar, sacharoza, maltoza, pepton cao nấm men tối ưu cho nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris phát triển mức +++ Thứ môi trường PDA gồm thành phần khoai tây, sacharoza agar nấm Cordyceps militaris phát triển mức ++ Cịn mơi trường Czapek-Dox gồm có agar, sacharoza, NaNO3, K2HPO4, MgSO4.7H2O, KCl, nấm gần không phát triển So sánh khả phát triển nấm Cordyceps militaris hai môi trường PDA MYPS nhiệt độ trung bình 24,70C độ ẩm trung bình 84,% 2.1 Nấm Cordyceps militaris phát triển mơi trường MYPS sau 25 ngày ni cấy đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 42 mm 2.2 Nấm Cordyceps militaris phát triển môi trường PDA sau 25 ngày ni cấy đường kính trung bình khuẩn lạc nấm đạt 33,5 mm Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy môi trường MYPS đến phát triển nấm Cordyceps militaris 3.1 Ở nhiệt độ trung bình 23,1 0C ẩm độ trung bình 85% đường kính khuẩn lạc nấm sau 25 ngày ni cấy đạt trung bình 36 mm 3.2 Ở nhiệt độ trung bình 24,1 0C ẩm độ trung bình 84,5% đường kính khuẩn lạc nấm sau 25 ngày ni cấy đạt trung bình 43 mm 3.3 Ở nhiệt độ trung bình 26,2 0C ẩm độ trung bình 83% đường kính khuẩn lạc nấm sau 25 ngày ni cấy đạt trung bình 45 mm Gía trị dược liệu nấm Cordyceps militaris bao gồm : 4.1 Cordycepin với thành phần hoá học 3’- deoxyadenosine 4.2 HEAA với thành phần hoá học Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs 4.3 Một số loại vitamin vitamin A, vitamin B 12, vitamin C, vitamin B2, vitamin E, vitamin K, … 4.4 Một số nguyên tố vi lượng Na, K, Al, Si Trần thuỳ hơng 41 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp B ĐỀ NGHỊ Nấm Cordyceps militaris lồi nấm có nhiều công dụng, loại thực phẩm chức tốt với người, chúng tơi đề nghi: cần tiếp tục nghiên cứu môi trường nuôi cấy nấm Cordyceps militaris để nhân nhanh nguồn nấm làm nguyên liệu thực phẩm chức phục vụ cho người PHẦN V TÀI LIỆU THAM KH ẢO A Tài liu nc Trần thuỳ hơng 42 506301024 Khoa CNSH & MT Khãa LuËn Tèt NghiÖp Phạm Quang Thu (2009) Điều tra phát nấm Nhộng trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn Động - Bắc Giang Tạp trí nơng nghiệp phát triển nơng thơn số - tháng 4/2009 Phạm Quang Thu (2009) Phát nấm Nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni (Berk.)Berk vườn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn số - tháng 6/2009 Phạm Quang Thu, Nguyễn Mạnh Hà Phát nấm Nhộng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L.:FR.)LINK vườn quốc gia Hồng Liên tỉnh Lào Cai Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn số - tháng 9/2009 Phạm Thị Thuỳ (2004) Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật NXB ĐH Quốc Gia Hà Nội Phạm Thị Thuỳ (2010) Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người B¸o c¸o Hội thảo Quốc gia bệnh hại thực vật Việt Nam 24/4 – 25/4/2010 Nhà xuất Nông nghiệp Trang 224 – 231 Báo điện tử Hội tiêu chuẩn bảo vệ người tiêu dùng Việt Nam-Timo Cordyceps king Đông trùng hạ thảo cho người (thứ 3, ngày 1, tháng 4, năm 2008 ) Báo điện tử Bách Khoa Toàn Thư mở wikipedia Đông trùng hạ thảo Ngày 12, tháng 1, năm 2010 Báo điện tử Thầy thuốc Của Bạn Vị thuốc đông y Đông trùng hạ thảo, ngày 25, tháng 1, nm 2010 Trần thuỳ hơng 43 506301024 ... NghiƯp Để góp phần vào nghiên cứu mơi trường ni cấy thích hợp nấm Đông trùng hạ thảo Việt Nam, giao thực đề tài: “NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS ” Mc ớch... triển nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris ba mơi trường Czapek-Dox, PDA, MYPS Từ xác định môi trường tối ưu cho nấm Cordyceps militaris phát triển I Nghiên cứu môi trường nuôi cấy nấm Cordyceps. .. phần hoá học nấm Cordyceps militaris Phương pháp nghiên cứu 2.1 Nghiên cứu môi trường nuôi cấy nấm Cordyceps militaris để xác đinh môi trường tối ưu a Một số môi trường sử dụng: + Môi trường Czapek