DOÃN THỊ HỒNG NHUNG TIẾP tục NGHIÊN cứu bào CHẾ VIÊN nén CHỨA TIỂU PHÂN NANO FENOFIBRAT KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược sĩ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DOÃN THỊ HỒNG NHUNG Mã sinh viên: 1601585 TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA TIỂU PHÂN NANO FENOFIBRAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến NCS Đào Anh Hoàng Nơi thực Viện Công nghệ dược phẩm Quốc gia Bộ môn Bào chế Viện dược liệu HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng lòng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến, người thầy tận tình dạy, truyền đạt kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Đào Anh Hoàng trực tiếp hướng dẫn, động viên giúp đỡ em suốt trình làm thực nghiệm Em xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô giáo, anh chị kĩ thuật viên, học viên cao học bạn sinh viên Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia, Viện dược liệu, Bộ môn Bào chế, Bộ môn Công nghiệp dược, người giúp đỡ tạo điều kiện thiết bị, máy móc, hóa chất cho em q trình nghiên cứu để hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám Hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo phòng ban khác, thầy cô cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn tới gia đình, người thân, bạn bè ln động viên, khuyến khích giúp đỡ em suốt thời gian qua Hà Nội, ngày 07 tháng 06 năm 2021 Sinh viên Doãn Thị Hồng Nhung MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét fenofibrat 1.1.1 Cơng thức hóa học 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Độ ổn định 1.1.4 Đặc điểm dược động học 1.1.5 Dược lý chế tác dụng 1.1.6 Chỉ định, chống định, liều dùng 1.1.7 Một số chế phẩm thị trường 1.1.8 Các phương pháp định lượng fenofibrat 1.2 Tổng quan nano tinh thể phương pháp bào chế 1.2.1 Nano tinh thể 1.2.2 Phương pháp bào chế 1.2.3 Kĩ thuật phân chia 1.2.3 Một số thiết bị 1.2.4 Thiết bị nghiền bi kiểu đứng 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến đặc tính tiểu phân nano trình nghiền ướt 1.3 Vài nét trình rắn hóa hỗn dịch nano 1.3.1 Nguyên tắc 1.3.2 Một số q trình rắn hố hỗn dịch nano 10 1.3.3 Rắn hóa hỗn dịch nano q trình tạo hạt tầng sơi 10 1.4 Vài nét đánh giá sinh khả dụng thuốc dùng theo đường uống 13 1.4.1 Khái niệm sinh khả dụng động vật sử dụng 13 1.4.2 Phương pháp định lượng thuốc huyết tương 14 1.4.3 Các nghiên cứu định lượng acid fenofibric huyết tương 15 1.5 Một số nghiên cứu liên quan 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu thiết bị 17 2.1.1 Nguyên vật liệu 17 2.1.2 Thiết bị 17 2.1.3 Viên đối chiếu 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.2.1 Xây dựng công thức bào chế viên nén chứa nano fenofibrat 145 mg quy mô 1000 viên/lô: Đánh giá ảnh hưởng yếu tố cơng thức q trình 18 2.2.2 Đề xuất tiêu chuẩn viên nén fenofibrat 145mg cốm fenofibrat thu 18 2.2.3 Đánh giá sinh khả dụng viên nén fenofibrat 145mg thu so sánh với viên đối chiếu in vivo 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp bào chế viên nén fenofibrat 145mg 19 2.3.2 Phương pháp đánh giá số tiêu chất lượng tiểu phân nano fenofibrat 22 2.3.3 Phương pháp đánh giá chất lượng cốm fenofibrat 23 2.3.4 Phương pháp đánh giá chất lượng viên nén 27 2.3.5 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng viên nén 29 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 30 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1 Kết xây dựng phương pháp định lượng fenofibrat 31 3.1.1 Phương pháp quang phổ UV- VIS 31 3.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao (HPLC) 31 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng yếu tố công thức quy trình nghiền bi 32 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố công thức dịch nghiền 33 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố quy trình 35 3.3 Kết khảo sát ảnh hưởng yếu tố công thức tạo hạt 37 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng loại đường dịch phun 37 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Manitol dịch phun 38 3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ DOSS dịch phun 38 3.3.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ HPMC E6 dịch phun 38 3.4 Kết bào chế viên nén fenofibrat 145 mg quy mô 1000 viên/lô 40 3.4.1 Kết bào chế hỗn dịch tiểu phân nano fenofibrat 40 3.4.2 Kết bào chế cốm chứa tiểu phân nano fenofibrat 40 3.4.3 Kết bào chế viên nén fenofibrat 145 mg 42 3.6 Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nén thu 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ CÁI VIẾT TẮT CT Công thức CDH Chất diện hoạt dd Dung dịch DC Dược chất DOSS Natri Docusat (Diotyl sulforsuccinate) FB fenofibrat FDA Food and Drug Administration (Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm) HDBC Hỗn dịch bào chế HLDC Hàm lượng dược chất HPC Hydroxypropylcellulose HPMC E6 Hydroxypropyl methylcellulose KT Kích thước KTTP Kích thước tiểu phân trung bình NaLS Natri lauryl sulfat PDI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) RPM Vòng/phút (revolutions per minute) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) SD Độ lệch chuẩn (Standard deviation) SKD Sinh khả dụng TB Trung bình TD Tá dược USP Dược điển Mỹ (United States Pharmacopeia) w/v Khối lượng thể tích VKNTTW Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Mức độ ứng dụng loại thiết bị tầng sôi [39] 11 Bảng 1.2 Động vật sử dụng đánh giá sinh khả dụng đường uống 13 Bảng 1.3 Phương pháp xử lý mẫu huyết tương 14 Bảng 1.4 Một số nghiên cứu định lượng acid fibric huyết tương 15 Bảng 2.1 Các nguyên liệu dùng thực nghiệm 17 Bảng 2.2 Công thức cho mẻ nghiền 300 ml/ cối hỗn dịch Fenofibrat 19 Bảng 2.3 Công thức dịch phun cho trình tạo hạt 20 Bảng 3.1 Tóm tắt kết thẩm định phương pháp HPLC 31 Bảng 3.2 Cơng thức khảo sát sơ q trình nghiền 32 Bảng 3.3 Ảnh hưởng CDH anion đến HLDC HDBC sau li tâm 33 Bảng 3.4 Ảnh hưởng nồng độ dd HPMC E6 đến HLDC HDBC sau li tâm 34 Bảng 3.5 Ảnh hưởng thể tích dịch nghiền đến HLDC HDBC sau li tâm 35 Bảng 3.6 Ảnh hưởng thời gian nghiền đến HLDC HDBC sau li tâm 36 Bảng 3.7 Công thức thông số lựa chọn nghiền bi lựa chọn 36 Bảng 3.8 Ảnh hưởng loại đường đến đặc tính cốm fenofibrat 37 Bảng 3.9 Ảnh hưởng nồng độ Manitol đến đặc tính cốm fenofibrat 38 Bảng 3.10 Ảnh hưởng nồng độ DOSS đến đặc tính cốm fenofibrat 38 Bảng 3.11 Ảnh hưởng nồng độ HPMC E6 39 Bảng 3.12 Công thức dịch phun fenofibrat P12 39 Bảng 3.13 Kết kích thước PDI cối mẻ khác 40 Bảng 3.14 Công thức dịch phun tương ứng quy mô 1000 viên/ lô 40 Bảng 3.15 Kết đánh giá tiêu cốm nano fenofibrat lô 41 Bảng 3.16 Tiêu chuẩn chất lượng cốm fenofibrat 42 Bảng 3.17 Công thức viên bao 42 Bảng 3.18 Thông số trình bào chế viên nén bao phim fenofibrat 145mg 43 Bảng 3.19 Đặc tính viên nén fenofibrat 145 mg 43 Bảng 3.20 Đề xuất TCCL viên nén fenofibrat 145 mg 44 Bảng 3.21 Tóm tắt thông số dược động học 45 Bảng 3.22 Tóm tắt số liệu so sánh số thông số dược động học 45 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Công thức fenofibrat Hình 1.2 Cấu tạo thiết bị nghiền bi hành tinh lượng cao Hình 1.3 Sơ đồ tóm tắt giai đoạn bào chế viên nén fenofibrat 145mg quy mô 1.000 viên/ lô 19 Hình 3.1 Ảnh hưởng CDH anion đến KTTP hệ nano 33 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ dd HPMC E6 đến KTTP hệ nano 34 Hình 3.3 Nồng độ thuốc máu theo thời gian 45 ĐẶT VẤN ĐỀ Fenofibrat (FB) dẫn chất thuộc nhóm acid fibric FDA Hoa Kỳ chấp thuận dùng điều trị tăng lipid máu năm 1998 có nhiều ưu điểm so với dẫn chất nhóm, đặc biệt có khả kết hợp với thuốc hạ lipid khác [1], [51], [52] Tuy nhiên FB thuộc phân nhóm II bảng phân loại BCS nên sinh khả dụng (SKD) thuốc thấp ổn định [40] Do để cải thiện SKD cho dạng bào chế FB dùng theo đường uống cải thiện khả hoà tan lựa chọn ưu tiên Những năm gần đây, công nghệ nano phổ biến nhờ hiệu vượt trội tính ứng dụng cao So với dạng thuốc chứa dược chất (DC) kích thước micron, dạng thuốc chứa tiểu phân nano dùng theo đường uống có SKD tăng, ổn định không phụ thuộc vào bữa ăn Để cải thiện khả hồ tan, qua làm tăng SKD FB, số dạng thuốc bào chế sở tiểu phân nano FB xuất thị trường TriCor hãng Abbott với dạng viên nén hàm lượng 48mg 145mg Để tiếp tục hướng nghiên cứu trước tác giả Nguyễn Thị Ánh (2020) tăng khả ứng dụng thực tế phương pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat, thực đề tài: “Tiếp tục nghiên cứu bào chế viên nén chứa tiểu phân nano fenofibrat” với mục tiêu: Xây dựng công thức bào chế viên nén chứa tiểu phân nano fenofibrat 145 mg quy mô 1.000 viên/lô Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên nén chứa tiểu phân nano fenofibrat bào chế Bước đầu đánh giá sinh khả dụng thuốc viên nén fenofibrat 145mg nghiên cứu PHỤ LỤC 4: Dự thảo tiêu chuẩn sở viên nén fenofibrat 145mg I YÊU CẦU KỸ THUẬT 1.1 Công thức cho viên 650mg: TT Tên nguyên liệu Khối lượng (mg) Fenofibrat 145,00 Hydroxy propyl cellulose 4,8 Hydroxypropyl methyl cellulose E6 14,5 Manitol 145,0 Natri docusat 2,90 Lactose monohydrat 196,50 Natri croscarmellose 32,00 Magnesi stearat 3,2 Microcrystalline cellulose PH102 94,8 10 Opadry amb II white 10,00 11 Nước tinh khiết* 0,35 ml * Bay trình SX 1.2 Yêu cầu nguyên liệu STT Tên nguyên liệu Xuất xứ Tiêu chuẩn Fenofibrat Trung Quốc BP 2020 Hydroxy propyl cellulose Hà Lan EP 10.0 Hydroxypropyl methyl cellulose E6 Trung Quốc USP 43 Manitol Pháp EP 10.0 Natri docusat Trung Quốc USP 43 Lactose monohydrat Đức BP 2020 Natri croscarmellose Ireland USP 43 Magnesi stearat Ấn Độ BP 2020 Microcrystalline cellulose PH102 Ấn Độ BP 2020 10 Opadry amb II white Trung Quốc TC NSX 11 Nước tinh khiết Việt Nam DĐVN 1.3 Yêu cầu chất lượng 1.3.1 Hình thức: Viên nén bao phim màu trắng, thành cạnh viên lành lặn 1.3.2 Độ đồng khối lượng: ± 5% so với khối lượng trung bình viên 1.3.3 Định tính: Chế phẩm phải cho phép thử định tính fenofibrat 1.3.4 Độ hịa tan: Khơng 80 % (Q) fenofibrat, C20H21ClO4, hòa tan 30 phút 1.3.5 Tạp chất liên quan: - Tạp chất liên quan A fenofibrat: Không 0,2% - Tạp chất liên quan B fenofibrat: Không 0,50% - Tạp không định danh bất kỳ: Không 0,2% - Tổng tạp (bao gồm tạp A, tạp B tạp không định danh): Không 1,0% 1.3.6 Định lượng: Hàm lượng fenofibrat phải đạt từ 90,0-110,0%, C20H21ClO4, so với hàm lượng ghi nhãn, tính theo khối lượng trung bình viên - II PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 Hình thức: Bằng cảm quan chế phẩm phải đạt yêu cầu nêu 2.2 Độ đồng khối lượng: - Tiến hành theo DĐVN 5, phụ lục 11.3 2.3 Định tính: - Trong mục định lượng: - A Dung dịch thử cho pic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic thu sắc ký đồ dung dịch chuẩn fenofibrat - B Phổ UV pic thu từ dung dịch thử tương ứng với phổ UV pic fenofibrat chuẩn 2.4 Độ hòa tan: * Điều kiện hòa tan: + Thiết bị: Kiểu cánh khuấy + Môi trường: 1000 ml dung dịch natri lauryl sulfat 0,05 M + Tốc độ cánh khuấy: 50 rpm + Thời gian: 30 phút * Tiến hành: Xác định hàm lượng hoạt chất hòa tan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - Dung dịch đệm pH 2,9: Điều chỉnh pH dung dịch kali dihydrophosphat 136 mg/l đến pH 2,9 ± 0,05 với dung dịch acid phosphoric 10% - Pha động: Methanol – dung dịch đệm pH 2,9 (80 : 20) - Dung dịch chuẩn: Pha dung dịch fenofibrat pha động có nồng độ xác khoảng 0,145 mg/ml - Dung dịch thử: Sau thời gian thử, hút dung dịch thử, lọc qua màng lọc 0,45 µm, bỏ dịch lọc đầu * Điều kiện sắc ký: - Cột sắc ký: Cột RP18, 150 x 4,6 mm, 5µm - Detector UV bước sóng 286 nm - Tốc độ dịng: 1,0 ml/min - Thể tích tiêm: 10 µl * Thử độ thích hợp hệ thống sắc ký: Tiêm lặp lại 06 lần dung dịch chuẩn, RSD% diện tích pic fenofibrat không 2,0%, hệ số đối xứng pic (T) không 2,0 * Tiêm dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng fenofibrat viên hịa tan dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch chuẩn, dung dịch thử hàm lượng C20H21ClO4 fenofibrat chuẩn Cơng thức tính tốn % Hịa tan = St × Mc × HLc × Dt Sc ×Dc × 0,145 Trong đó: - St: Diện tích pic dung dịch thử; - Sc: Diện tích pic fenofibrat chuẩn - Mc: Lượng cân fenofibrat chuẩn (g); - HLc: Hàm lượng chuẩn (%); - Dt: Độ pha loãng thử; - Dc: Độ pha loãng chuẩn; - 0,145: lượng lý thuyết fenofibrat có viên (g) 2.5 Tạp chất liên quan: Tiến hành phương pháp sắc ký với điều kiện sắc ký, pha động, nước acid hóa, dung dịch thử độ thích hợp hệ thống, dung dịch thử gốc, dung dịch chuẩn: giống phần định lượng - Dung dịch thử tạp: Cách chuẩn bị giống dung dịch thử gốc mục Định lượng để thu dung dịch có nồng độ fenofibrat xác khoảng 0,5 mg/ml - Dung dịch đối chiếu: Pha loãng dung dịch fenofibrat chuẩn (chuẩn bị giống mục Định lượng) pha động để thu dung dịch có nồng độ xác khoảng 0,5 µg/ml - Dung dịch thử độ nhạy: Pha loãng dung dịch đối chiếu pha động để thu dung dịch có nồng độ xác khoảng 0,25 µg/ml * Tiến hành: - Tiêm dung dịch thử độ thích hợp hệ thống: độ phân giải pic tạp chất A B fenofibrat khơng 2,0 - Tiêm dung dịch đối chiếu: RSD% diện tích pic fenofibrat từ 06 lần tiêm lặp lại không 5,0% - Tiêm dung dịch thử độ nhạy: Tỉ số tín hiệu nhiễu (Signal to Noise, S/N) khơng 10 - Tiêm dung dịch thử với thời gian phân tích gấp lần thời gian lưu pic fenofibrat *Yêu cầu: Tên tạp chất Thời gian lưu tương đối 0,34 0,36 0,50 Hệ số đáp ứng pic (F) 1,3 1,0 - Giới hạn chấp nhận Fenofibrat tạp A 0,2 Fenofibrat tạp B 0,50 3RS)-3-[4-(4Chlorobenzoyl)phenoxy]butan-2-on (1) Methyl 2-[4-(40,65 chlorobenzoyl)phenoxy]-2-methylpropanoat (2) Ethyl 2-[4-(4-chlorobenzoyl)phenoxy]- 0,80 2-methyl-propanoat (3) (4-Chlorophenyl)[4-(10,85 methylethoxy)phenyl]methanon (4) Fenofibrat 1,00 Fenofibrat tạp C 1,35 Tạp khác 1,0 0,2 Tổng tạp 1,0% * Ghi chú: - Các tạp (1), (2), (3), (4) tạp sinh trình sản xuất nguyên liệu kiểm soát kiểm tra nguyên liệu đầu vào - Fenofibrat tạp C (USP 43) tạp G (theo BP 2020 DĐVN 5) * Cơng thức tính tốn: St × Mc × HLc × Dt × % tạp = KLTBV Sc ×Dc × Mt ×F ×0,145 Trong đó: - St: Diện tích pic tạp SKĐ dung dịch thử; - Sc: Diện tích pic dung dịch đối chiếu; - Mc: Lượng cân fenofibrat chuẩn (g); - HLc: Hàm lượng chuẩn (%); - Dt: Độ pha loãng dung dịch thử; - Dc: Độ pha loãng dung dịch đối chiếu; - KLTBV: Khối lượng trung bình viên (g) -Mt: Lượng cân mẫu thử (g); - F: Hệ số đáp ứng tạp; - 0,145: lượng lý thuyết fenofibrat có viên (g) * Yêu cầu: Trên sắc ký đồ thu dung dịch thử tạp: - Tạp chất liên quan A fenofibrat: Không 0,2% - Tạp chất liên quan B fenofibrat: Không 0,50% - Tạp không định danh bất kỳ: Không 0,2% - Tổng tạp (bao gồm tạp A, tạp B tạp không định danh): Không 1,0% 2.6 Định lượng: - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, DĐVN 5, phụ lục 5.3 - Nước acid hóa: Điều chỉnh nước cất đến pH 2,5 ± 0,1 acid phosphoric đặc - Pha động: Acetonitril – nước acid hóa (70 : 30) - Dung dịch chuẩn: Pha dung dịch fenofibrat chuẩn pha động có nồng độ xác khoảng 0,05 mg/ml - Dung dịch thử gốc: Cân 20 viên, loại bỏ lớp bao phim, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với 50 mg fenofibrat vào bình định mức 100 ml, thêm 30 ml nước acid hóa, lắc để phân tán Thêm khoảng 50 ml acetonitril, lắc siêu âm 10 phút để hòa tan Thêm acetonitril vừa đủ đến vạch Lắc đều, lọc - Dung dịch thử: Pha loãng 5,0 ml dung dịch thử gốc thành 50,0 ml pha động - Dung dịch thử độ thích hợp hệ thống sắc ký: Cân khoảng 5,0 mg chuẩn fenofibrat tạp A fenofibrat tạp B vào bình định mức 50,0 ml, hịa tan pha lỗng vừa đủ thể tích acetonitril Hút 1,0 ml dung dịch thu vào bình định mức 200 ml, pha loãng vừa đủ pha động để dung dịch chứa 0,5 µg/ml chuẩn tạp A tạp B * Điều kiện sắc ký: - Cột sắc ký: Cột RP18, 250 x 4,6 mm, 5µm, trì 35°C - Detector UV bước sóng 286 nm - Tốc độ dịng: 1,2 ml/min - Thể tích tiêm: 10 µl * Tiến hành: - Tiêm dung dịch thử độ thích hợp hệ thống: độ phân giải pic tạp chất A B fenofibrat khơng 2,0 - Tiêm dung dịch chuẩn: RSD% diện tích pic fenofibrat từ 06 lần tiêm lặp lại không 2,0% - Tiêm dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng fenofibrat viên dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch chuẩn, dung dịch thử hàm lượng C20H21ClO4 fenofibrat chuẩn * Cơng thức tính tốn: % Hàm lượng = St × Mc × HLc × Dt × KLTBV Sc ×Dc × Mt × 0,145 - St: Diện tích pic fenofibrat dung dịch thử; - Sc: Diện tích pic dung dịch chuẩn; - Mc: Lượng cân fenofibrat chuẩn (g); - Mt: Lượng cân mẫu thử (g); - HLc: Hàm lượng chuẩn (%); - Dt: Độ pha loãng thử; - Dc: Độ pha loãng dung dịch chuẩn; - KLTBV: Khối lượng trung bình viên (g); - 0,145: Lượng lý thuyết fenofibrat có viên (g) III ĐĨNG GĨI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN, HẠN DÙNG - Đóng gói: Lọ thủy tinh nút kín, 100 viên - Nhãn rõ ràng, quy chế - Bảo quản: Nơi khô, tránh ánh sáng, nhiệt độ 30OC - Hạn dùng: 36 tháng PHỤ LỤC 5: Kết đánh giá sinh khả dụng 5.1 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 5.1.1 Chuẩn bị mẫu Cách chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc dung dịch chuẩn làm việc dung môi - Dung dịch chuẩn gốc để pha đường chuẩn (CCA): Hòa tan chất chuẩn Fenofibric acid MeOH để thu dung dịch chuẩn gốc có nồng độ AFENO xác khoảng 250 µg/mL - Dung dịch chuẩn gốc để pha mẫu kiểm tra (QCA): Hòa tan chất chuẩn Fenofibric acid MeOH để thu dung dịch chuẩn gốc có nồng độ AFENO xác khoảng 250 µg/mL - Dung dịch chuẩn nội (IS): Hòa tan chất chuẩn Atovastatin Ca MeOH để thu dung dịch chuẩn nội gốc có nồng độ xác khoảng 250 µg/mL Cách chuẩn bị mẫu đường chuẩn (CC) huyết tương - Từ dung dịch CCA chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc huyết tương WSSCC1, WSS-CC2 có nồng độ AFENO tương ứng khoảng 50 µg/mL, µg/mL - Mỗi đường chuẩn bao gồm: 01 mẫu huyết tương trắng (blank), 01 mẫu huyết tương trắng thêm chuẩn nội (Zero) 08 mẫu chuẩn huyết tương có chứa AFENO IS Tóm tắt nồng độ cách chuẩn bị mẫu chuẩn trình bày bảng Bảng - Cách chuẩn bị mẫu CC huyết tương Mẫu Nồng độ (µg/mL) VHT trắng (mL) VWSS-CC1 (mL) VWSS-CC2 (mL) Tổng số mẫu Blank Zero S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 0 0,25 0,5 1,5 10 20 30 50 10 10 9,5 8 0 0 0 10 0 0,5 0 0 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Cách chuẩn bị mẫu kiểm tra (QC) huyết tương - Từ dung dịch QCA, chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc huyết tương WSSQC1, WSS-QC2 có nồng độ AFENO tương ứng khoảng 50 µg/mL, 10 µg/mL - Tóm tắt nồng độ cách chuẩn bị mẫu kiểm tra trình bày bảng Bảng - Cách chuẩn bị mẫu QC huyết tương Mẫu LQC MQC HQC 0,75 25 40 9,25 VWSS-QC1 (mL) VWSS-QC2 (mL) 0,75 0 Tỏng số mẫu 40 40 40 độ Nồng (µg/mL) VHT trắng (mL) Cách chuẩn bị mẫu SST - Chuẩn bị phân tích mẫu huyết tương có nồng độ AFENO khoảng µg/mL theo quy trình để kiểm tra độ thích hợp hệ thống - Nồng độ cách chuẩn bị mẫu SST trình bày bảng Bảng - Cách chuẩn bị mẫu SST huyết tương Mẫu SST Nồng (µg/mL) độ VHT (mL) 4,5 trắng VWSS-QC1 (mL) 0,5 Tổng số mẫu20 5.1.2 Tiêu chuẩn chấp nhận lơ phân tích - Một lơ phân tích (analytical run) bao gồm mẫu Blank (mẫu huyết tương trắng chất phân tích chuẩn nội); mẫu Zero (mẫu huyết tương trắng khơng có chất phân tích có chuẩn nội); mẫu đường chuẩn (CC): 06 mẫu chuẩn; mẫu QC 03 mức nồng độ (nồng độ thấp, trung bình cao), nồng độ mẫu 5% tổng số lượng mẫu nghiên cứu tùy theo số lượng lớn mẫu nghiên cứu - Một lơ phân tích chứa batch nhiều batch - Một batch bao gồm mẫu nghiên cứu mẫu QC 03 mức nồng độ (nồng độ thấp, trung bình cao), nồng độ mẫu 5% tổng số lượng mẫu nghiên cứu tùy theo số lượng lớn xử lý lúc tức không gián đoạn thời gian nhóm phân tích điều kiện xử lý mẫu - Tất mẫu cá thể nên phân tích lơ phân tích *Lơ phân tích chấp nhận tất điều kiện thỏa mãn: - Kết đường chuẩn: + Độ mẫu chuẩn phải nằm khoảng 85% - 115%, riêng điểm LLOQ phải đạt từ 80% - 120% so với nồng độ lý thuyết + Có 75% số điểm đường chuẩn tối thiểu điểm phải đạt yêu cầu - Kết mẫu QC: + Độ mẫu QC phải đạt từ 85% - 115% so với nồng độ lý thuyết + Có 67% tổng số mẫu QC phải đạt yêu cầu mức nồng độ phải có 50% số mẫu QC đạt yêu cầu - Tại thời điểm trùng với thời gian lưu chất phân tích, đáp ứng mẫu LLOQ lớn lần đáp ứng mẫu zero - Tại thời điểm trùng với thời gian lưu chất phân tích, đáp ứng mẫu blank không lớn 20% đáp ứng mẫu LLOQ - Tại thời điểm trùng với thời gian lưu chuẩn nội, đáp ứng mẫu blank không lớn 5% đáp ứng trung bình mẫu CC QC 5.1.3 Phương pháp tính kết Xác định nồng độ AFENO có mẫu thử chưa biết nồng độ dựa vào tỷ lệ diện tích pic AFENO/IS thu từ sắc đồ mẫu thử đường chuẩn phân tích điều kiện (sử dụng hệ số weight 1/x2) Các mẫu khơng có pic có nồng độ LLOQ báo cáo kết 5.1.4 Phân tích lại * Các mẫu phải phân tích lại - Sự cố từ thiết bị phân tích - Sai sót q trình xử lý tiêm mẫu - Sắc ký đồ xấu bị trôi thời gian lưu - Nồng độ vượt ULOQ - Nồng độ mẫu sau pha loãng nhỏ LLOQ 5.1.5 Phân tích kiểm tra phương pháp - Mục đích: đánh giá độ lặp lại phương pháp mẫu nghiên cứu - Tiến hành theo hướng dẫn FDA: sau hồn thành q trình phân tích (bao gồm phân tích lại có), lựa chọn 10% 1000 mẫu 5% tổng số lượng mẫu lại nghiên cứu dựa nguyên tắc: chọn mẫu phân tích ngày khác nhau, mẫu nhiều NTN, mẫu xung quanh Cmax pha thải trừ Phân tích theo qui trình ban hành Tính độ lệch kết phân tích kiểm tra phương pháp với kết phân tích cuối chấp nhận - Phương pháp có độ lặp lại tốt có 67% tổng số lượng mẫu chọn có độ lệch 20% Trường hợp kết khơng đạt u cầu trên, cần phân tích nguyên nhân, khắc phục điều chỉnh thẩm định lại phương pháp cần - Q trình phân tích kiểm tra phương pháp tiến hành độc lập với q trình phân tích, khơng tác động làm thay đổi kết phân tích 6.1.6 Cách ký hiệu tên mẫu sắc ký đồ - Mẫu kiểm tra độ thích hợp hệ thống: SSTi, i số thứ tự mẫu SST (1, 2…) - Mẫu huyết tương trắng: BL - Mẫu huyết tương trắng thêm IS: ZE - Các mẫu CC: S1→S8 - Các mẫu QC: LQCi, MQCi, HQCi - Các mẫu nghiên cứu: x-y-Ti; đó: x: mã số cá thể ; y: giai đoạn (giai đoạn 1, 2); Ti: thứ tự thời điểm lấy mẫu Ví dụ: D03-1-Ti: mẫu lấy thời điểm Ti, giai đoạn cá thể D03 5.2 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 5.2.1 Chất chuẩn Bảng - Các chất chuẩn dùng nghiên cứu Nội dung Chuẩn Chuẩn nội Tên chất chuẩn Acid Fenofibric Atorvastatin Ca Hàm lượng (%) 99,7 (nguyên trạng) 94,4 (nguyên trạng) Số kiểm soát F076G0 C0320225.02 Nơi sản xuất USP VKNTTW 5.2.2 Thuốc thử Bảng - Các thuốc thử dùng nghiên cứu Tên thuốc thử Độ tinh khiết Nơi sản xuất Methanol HPLC Merck, Đức Acetonitril HPLC Merck, Đức Scharlau, Tây Ban Nha Acid Phosphoric 85% p.a Nước RO 5.2.3 Mẫu huyết tương trắng Bảng - Mẫu huyết tương trắng dùng nghiên cứu Nơi cung Mẫu Chất chống cấp Học viện đơngNa2EDTA 5.2.4 Mẫu huyết tương chó Qn Y 108 01 Bảo -35oC ± quản 5oC Bảng - Số lượng mẫu huyết tương chó nghiên cứu Nội dung Số lượng mẫu Mẫu phân tích 350 Mẫu phân tích kiểm tra phương pháp 34 * Điều kiện bảo quản mẫu sau nhận: - Nhiệt độ bảo quản: -35ºC ± 5oC 5.3 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH 5.3.1 Kết chuẩn bị mẫu 5.3.1.1 Các dung dịch chuẩn gốc Bảng 10 - Các dung dịch chuẩn gốc Nội dung Dung dịch CCA Dung dịch QCA Dung dịch IS gốc Pha dung dịch Mục đích sử dụng Chuẩn bị CC Ngày cân 12/03/2021 12/03/2021 Chất chuẩn Acid Fenofibric Atorvastatin Ca Lượng cân (mg) 25,70 25,73 100 100 Dung môi pha mẫu MeOH MeOH MeOH Nồng độ (µg/mL) 256,2 256,5 489,3 Bình định mức (mL) Chuẩn bị QC IS làm việc 26,80 50 Dung dịch CCA, QCA IS gốc bảo quản tủ lạnh (ở nhiệt độ 2ºC - 8ºC) 5.3.1.2 Đường chuẩn Ngày 12/03/2021, từ dung dịch CCA chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc huyết tương WSS-CC1, WSS-CC2 có nồng độ AFENO tương ứng khoảng 51,246 µg/mL; 5,125 µg/mL Bảng 11 - Kết chuẩn bị mẫu CC huyết tương Mẫu Blank Zero S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 0 0,25 0,51 1,53 4,10 10,2 20,4 30,7 51,2 49 98 47 46 10 10 9,5 8 0 0 0 10 0 0,5 0 0 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Nồng độ (µg/mL) VHT trắng (mL) VWSS-CC1 (mL) VWSS-CC2 (mL) Tổng số mẫu 5.1.3 Mẫu kiểm tra Ngày 12/03/2021, từ dung dịch QCA chuẩn bị dung dịch chuẩn làm việc huyết tương WSS-QC1, WSS-QC2 có nồng độ AFENO tương ứng khoảng 51,306 µg/mL; 10,261 µg/mL Bảng 12 - Kết chuẩn bị mẫu QC huyết tương Mẫu LQC MQC HQC 0,770 25,653 41,044 9,25 VWSS-QC1 (mL) VWSS-QC2 (mL) 0,75 0 Tỏng số mẫu 40 40 40 độ Nồng (µg/mL) VHT trắng (mL) 5.1.4 Mẫu SST Ngày 12/03/2021, từ dung dịch WSS-QC chuẩn bị mẫu SST sau: Bảng 13 - Cách chuẩn bị mẫu SST huyết tương Mẫu Nồng SST (µg/mL) 5,131 độ VHT (mL) 4,5 trắng VWSS0,5 QC1 (mL) Tổng số mẫu20 Mẫu CC, QC, SST lưu giữ tủ lạnh âm sâu (ở nhiệt độ -35ºC ± 5ºC) phân tích 5.4 KẾT QUẢ THỐNG KÊ Phương pháp phân tích thống kê - Phân tích dược động học phân tích thống kê: Các thông số dược động học AFENO xác định phần mềm Phoenix WinNonlin 8.2 theo mơ hình dược động học không ngăn (Non compartmental analysis) từ liệu nồng độ thuốc theo thời gian cá thể chó AUClast tính theo phương pháp hình thang tuyến tính (linear trapezoidal summation) Phần mềm Phoenix tự động xác định điểm đưa vào tính Lambda Z, số tốc độ liên quan đến đoạn cuối pha thải trừ dựa liệu nồng độ BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DOÃN THỊ HỒNG NHUNG TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA TIỂU PHÂN NANO FENOFIBRAT KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 ... pháp bào chế tiểu phân nano fenofibrat, thực đề tài: ? ?Tiếp tục nghiên cứu bào chế viên nén chứa tiểu phân nano fenofibrat? ?? với mục tiêu: Xây dựng công thức bào chế viên nén chứa tiểu phân nano fenofibrat. .. Kết bào chế viên nén fenofibrat 145 mg quy mô 1000 viên/ lô 40 3.4.1 Kết bào chế hỗn dịch tiểu phân nano fenofibrat 40 3.4.2 Kết bào chế cốm chứa tiểu phân nano fenofibrat 40 3.4.3 Kết bào. .. Kết bào chế viên nén fenofibrat 145 mg quy mô 1000 viên/ lô 3.4.1 Kết bào chế hỗn dịch tiểu phân nano fenofibrat  Để bào chế dịch nghiền cho mô quy mô tương ứng 1000 viên/ lô, tiến hành bào chế