Xác định hàm lượng đường saccarose và fructse trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === đồ án tốt nghiệp Đề tài: xác định hàm l-ợng đ-ờng saccarose fructose thực phẩm ph-ơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao GV h-ớng dẫn: ThS Lê tâm SV thực hiện: Nguyễn Thị Tuyên Lớp: 48K - C«ng nghƯ thùc phÈm M· sè SV: 0752040565 VINH - 12/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Tuyên Số hiệu sinh viên: 0752040565 Khóa: 48 Ngành: Cơng nghệ Thực phẩm Tên đề tài: Xác định hàm lượng đường số thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: Họ tên cán hướng dẫn: Th.s Lê Thế Tâm Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm Ngày hoàn thành đồ án : Ngày tháng năm Ngày Chủ nhiệm môn (Ký, ghi rõ họ, tên) tháng năm 2011 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án tốt nghiệp ngày tháng năm Người duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP SVTH: Nguyễn Thị Tuyên TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH GVHD: ThS Lê Thế Tâm BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Tuyên Khóa: 2007 - 2011 Cán hướng dẫn: Th.s Lê Thế Tâm Cán duyệt: Số hiệu sinh viên: 0752040565 Ngành: Công nghệ Thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………… Nhận xét cán hướng dẫn: ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… …………………………………… Ngày tháng năm 2011 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Tuyên Khóa: 48 Cán hướng dẫn: Th.s Lê Thế Tâm Cán duyệt: Số hiệu sinh viên: 0752040565 Ngành: Công nghệ Thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………… Nhận xét cán duyệt: ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… …………………………………… Ngày tháng năm 2011 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường, Trường Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn đến ThS Lê Thế Tâm - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa - Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình làm thí nghiệm Nhân dịp này, tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán khoa Hố Và lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Vinh, tháng 12 năm 2011 Sinh viên Nguyễn Thị Tuyên MỤC LỤC Trang LỜI NÓI ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Chương TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu đường 1.1.1 Khái niệm chung đường 1.1.2 Phân loại tính chất 1.1.3 Tác dụng đường 15 1.1.4 Một số tác hại đường 16 1.2 Các phương pháp xác định đường 17 1.2.1 Phương pháp Bertrand 17 1.2.2 Phương pháp Rozevich 20 1.2.3 Định lượng đường khử phương pháp Axit Dinitro -Salicylic (DNS) 22 1.2.4 Định lượng saccarose theo phương pháp thủy phân axit 25 1.2.5 Xác định hàm lượng sacaroza phương pháp phân cực 26 1.2.6 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 28 1.3 Giới thiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 29 1.3.1 Cơ sở lý thuyết 29 1.3.2 Nguyên tắc trình sắc ký cột 30 1.3.3 Phân loại sắc ký ứng dụng 30 1.3.4 Các đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 31 1.3.5 Hệ thống HPLC 34 1.3.6 Chọn điều kiện sắc ký 38 1.3.7 Tiến hành sắc ký 40 Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 Phương pháp lấy mẫu 43 2.2 Nguyên tắc 43 Chương THỰC NGHIỆM 44 3.1 Thiết bị, dụng cụ 44 3.2 Hóa chất 44 3.3 Thực nghiệm 45 3.3.1 Sơ đồ xử lý mẫu 45 3.3.2 Các bước tiến hành 45 3.3.3 Chuẩn bị mẫu 47 3.4 Tính tốn kết 47 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 48 4.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn Saccarose 48 4.2 Đường chuẩn Fructose 50 4.3 Đánh giá phương pháp 52 4.3.1 Xác định độ lặp lại phương pháp 52 4.3.2 Ảnh hưởng yếu tố đến phương pháp 54 4.3.3 Sắc đồ 55 Chương KẾT LUẬN 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Một số D-monosaccharide thường gặp Hình 1.2 Cấu tạo số disaccharide 10 Hình 1.3 Hệ thống máy HPLC 38 Hình 4.1 Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pick thu nồng độ chuẩn saccarose 49 Hình 4.2 Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pick thu nồng độ chuẩn fructose 51 Hình 4.3 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 6,25 mg/ml 55 Hình 4.4 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 12,5 mg/ml 55 Hình 4.5 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 25 mg/ml 56 Hình 4.6 Sắc đồ đường saccarose sữa tươi Vinamilk 56 Hình 4.7 Sắc đồ đường saccarose sữa đặc Vinamilk 57 Hình 4.8 Sắc đồ đường saccarose nước cam ép Twisster 57 Hình 4.9 Sắc đồ đường saccarose nước tăng lực Sting 58 Hình 4.10 Sắc đồ chuẩn đường fructose 12,5 mg/ml 59 Hình 4.11 Sắc đồ chuẩn đường fructose 25 mg/ml 59 Hình 4.12 Sắc đồ chuẩn đường fructose 40 mg/ml 60 Hình 4.13 Sắc đồ chuẩn đường fructose 55 mg/ml 60 Hình 4.14 Sắc đồ đường fructose nước cam ép Twister 61 Hình 4.15 Sắc đồ đường fructose nước tăng lực Sting 61 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Độ tương đối số đường so với Saccarose Bảng 4.1 Diện tích peak saccarose tương ứng với nồng độ chuẩn 48 Bảng 4.2 Kết phân tích hàm lượng saccarose 50 Bảng 4.3 Diện tích peak fructose tương ứng với nồng độ chuẩn 50 Bảng 4.4 Kết phân tích hàm lượng fructose 52 Bảng 4.5 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu 53 Bảng 4.6 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu 53 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH y=122677,54857x- 30227 R = 0,99966 3500000 3000000 2500000 2000000 y 1500000 Linear (y) 1000000 500000 0 10 15 20 25 30 Hình 4.1 Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pick thu nồng độ chuẩn saccarose Từ giá trị diện tích peak đo ta tính hàm lượng C (mg/100ml) - Sau ta tính hàm lượng saccarose (mg/100ml) có mẫu tính theo cơng thức: C = (C0 x V0 x K x 100) / V Trong đó: C : nồng độ sacrose có mẫu (mg/100ml) Co: nồng độ saccarose dịch chiết tính từ đường chuẩn (mg/ml) V0: thể tích dịch chiết cuối chạy máy (ml) K: hệ số pha loãng V: thể tích mẫu (ml) SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 49 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Bảng 4.2 Kết phân tích hàm lượng saccarose Mẫu Sữa đặc Vinamilk Sữa tươi có đường Vinamilk Nước tăng lực Sting Nước cam ép Twister C0 (mg/ml) Thể tích mẫu (ml) Diện tích pick 21,95662 2,66336.106 7,63265 9,06128.105 3,816325 2,70838 3,0203.105 1,083352 28,37012 3,45015.106 11,348048 C (g/100ml) 43,91324 4.2 Đường chuẩn Fructose Dãy chuẩn Fructose khảo sát có nồng độ sau: 12,5mg/ml; 25 mg/ml; 40 mg/ml; 55 mg/ml Phân tích chuẩn nói xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích pick Bảng 4.3 Diện tích peak fructose tương ứng với nồng độ chuẩn Diện tích pick Nồng độ a b R2 chuẩn (mg/ml) Lần Lần Lần 12,5 1,70567.106 1,7205.106 1,7123.106 25 3,42179.106 3,4189.106 3,4205.106 40 5,40320.106 5,4124.106 5,4029.106 55 7,27065.106 7,2699.106 7,2713.106 SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 50 132530,17098 48212,76913 0,9998 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng fructose sau: Phương trình hồi qui đường chuẩn theo diện tích peak có dạng: y = ax + b x nồng độ, y diện tích pick a = 132530,17098 b = 48212,76913 y = 132530,17098x + 48212,76913 R2= 0,9998 8000000 7000000 6000000 5000000 y Linear (y) 4000000 3000000 2000000 1000000 0 10 20 30 40 50 60 Hình 4.2 Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pick thu nồng độ chuẩn fructose Từ giá trị diện tích peak đo ta tính hàm lượng C (mg/100ml) Sau ta tính hàm lượng Fructose (mg/100ml) có mẫu tính theo cơng thức: C = (C0 x V0 x K x 100) / V Trong đó: C : nồng độ Fructose có mẫu (mg/100ml) Co: nồng độ Fructose dịch chiết tính từ đường chuẩn (mg/ml) V0: thể tích dịch chiết cuối chạy máy (ml) K: hệ số pha loãng V: thể tích mẫu (ml) SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 51 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Bảng 4.4 Kết phân tích hàm lượng fructose Mẫu C0 (mg/ml) Thể tích mẫu (ml) Diện tích pick C (g/100ml) Nước tăng lực Sting 20,71094 2,79304.106 8,284376 Nước cam ép Twister 3,13706 4,63968.105 1,254824 4.3 Đánh giá phương pháp 4.3.1 Xác định độ lặp lại phương pháp Theo lý thuyết thống kê, đại lượng đặc trưng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn S hệ số biến thiên CV% Thực phân tích ml mẫu với sữa tươi Vinamilk, 2ml với sữa đặc Vinamilk, 5ml mẫu nước cam ép Twister 5ml nước tăng lực Sting, tiến hành phân tích lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phương pháp nêu bảng 4.5 bảng 4.6 Độ lặp lại phương pháp đánh giá qua độ lệch chuẩn tương đối (CV%) Dựa vào nồng độ tương ứng tính kết trung bình tính độ lệch chuẩn hệ số biến thiên theo công thức đây: Độ lệch chuẩn S: Σ( Xi – Xtb )2 ΣXi S = Xtb = n-1 Độ lệch chuẩn tương đối CV(%) = n S  100 xtb Trong đó: Xi nồng độ đường lần chạy thứ i Xtb nồng độ trung bình n lần chạy n số lần chạy lặp lại SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 52 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Bảng 4.5 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu (nồng độ saccarose) Sữa đặc Sữa tươi Nước tăng lực Vinamilk Vinamilk Sting Thể TT tích (ml) Nồng độ (mg/ml) Thể tích (ml) Nồng độ (mg/ml) Thể Nồng độ tích (mg/ml) (ml) Nước cam ép Twister Thể Nồng độ tích (mg/ml) (ml) 2,0 21,95662 4,0 7,63265 5,0 2,70838 5,0 28,37012 2,0 21,96552 4,0 7,64852 5,0 2,71536 5,0 28,39853 2,0 21,94305 4,0 7,62534 5,0 2,70525 5,0 28,36895 Xtb 21,95506 7,63550 2,7097 28,3792 S 0,01132 0,01185 0,00518 0,01675 CV(%) 0,0512 0,155 0,191 0,059 Bảng 4.6 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu (nồng độ fructose) Nước tăng lực Sting Nước cam ép Twister Thể tích Nồng độ Thể tích Nồng độ (ml) (mg/ml) (ml) (mg/ml) 5,0 20,71094 5,0 3,13706 5,0 20,72568 5,0 3,12857 5,0 20,71895 5,0 3,13529 TT Xtb 20,71852 3,13364 S 0,00738 0,00448 CV(%) 0,0356 0,143 SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 53 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Nhận xét: Kết tính tốn cho thấy, phương pháp có lặp lại cao, cho độ tốt, đáp ứng yêu cầu định lượng 4.3.2 Ảnh hưởng yếu tố đến phương pháp 4.3.2.1 Ảnh hưởng tốc độ dòng Tốc độ dòng ảnh hưởng lớn đến thời gian lưu mẫu ảnh hưởng đến chiều cao peak tương ứng Tốc độ dịng lớn thời gian lưu nhỏ Trong thí nghiệm luận văn hệ thống HPLC chúng tơi đặt tốc độ dịng 1,35 ml/phút 4.3.2.2 Ảnh hưởng thành phần dung môi pha động Thành phần dung môi pha động ảnh hưởng lớn đến kết phân tích Trong thí nghiệm xác định hàm lượng đường phương pháp HPLC luận văn dùng pha động ACN/H2O 50/50 Nếu tỷ lệ pha động khơng tn thủ nghiêm ngặt có tác dụng không tốt tới đối xứng peak ảnh hưởng lớn đến thời gian lưu 4.3.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ cột tách Nhiệt độ cột cách có ảnh hưởng đến q trình phân tích ảnh hưởng đến chuyển động nhiệt phần tử mẫu co giãn cột khí hậu khắc nghiệt Nghệ An, nhiệt độ ban ngày ban đêm có chênh lệch lớn Hiện máy sắc ký đại có trang bị thí bị điều nhiệt, ta cài đặt nhiệt độ cho máy suốt thời gian phân tích Vì thiết bị HPLC đại kết phân tích bị ảnh hưởng nhiệt độ Trong thí nghiệm luận văn hệ thống HPLC đặt nhiệt độ 300C 4.3.2.4 Ảnh hưởng phương pháp xử lý mẫu Mỗi giai đoạn xử lý mẫu ảnh hưởng đến kết phân tích Nhất quy trình xử lí mẫu phức tạp phương pháp HPLC Trong quy trình xử lí mẫu khơng tn thủ bước quy trình chuẩn gây sai số lớn cho kết phân tích SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 54 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH 4.3.3 Sắc đồ Hình 4.3 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 6,25 mg/ml Hình 4.4 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 12,5 mg/ml SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 55 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.5 Sắc đồ chuẩn đường saccarose 25 mg/ml Hình 4.6 Sắc đồ đường saccarose sữa tươi Vinamilk SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 56 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.7 Sắc đồ đường saccarose sữa đặc Vinamilk Hình 4.8 Sắc đồ đường saccarose nước cam ép Twisster SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 57 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.9 Sắc đồ đường saccarose nước tăng lực Sting SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 58 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.10 Sắc đồ chuẩn đường fructose 12,5 mg/ml Hình 4.11 Sắc đồ chuẩn đường fructose 25 mg/ml SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 59 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.12 Sắc đồ chuẩn đường fructose 40 mg/ml Hình 4.13 Sắc đồ chuẩn đường fructose 55 mg/ml SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 60 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Hình 4.14 Sắc đồ đường fructose nước cam ép Twister Hình 4.15 Sắc đồ đường fructose nước tăng lực Sting SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 61 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH Chương KẾT LUẬN Từ kết phân tích cho thấy hàm lượng saccarose mẫu thực phẩm là: + Mẫu sữa đặc Vinamilk: 43,91324 g/100ml + Mẫu sữa tươi Vinamilk: 3,816325 g/100ml + Mẫu nước cam Twister: 11,348048 g/100ml + Mẫu nước tăng lực Sting: 1,083352 g/100ml Độ lặp lại saccarose mẫu sữa đặc Vinamilk với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,514% Độ lặp lại saccarose mẫu sữa tươi Vinamilk với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,155% Độ lặp lại saccarose mẫu nước cam Twister với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,059% Độ lặp lại saccarose mẫu nước tăng lực Sting với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,203% Hàm lượng fructose mẫu thực phẩm là: + Mẫu nước cam Twister: 1,254824 g/100ml + Mẫu nước tăng lực Sting: 8,284376 g/100ml Độ lặp lại fructose mẫu nước cam Twister với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,143% Độ lặp lại fructose mẫu nước tăng lực Sting với độ lệch chuẩn tương đối: CV(%) = 0,0356% SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 62 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH TÀI LIỆU THAM KHẢO Hồng Kim Anh Hóa học thực phẩm Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Phạm Luận (1999) Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao Đại học quốc gia Hà Nội Hoàng Văn Lựu Các phương pháp sắc ký Đại học Vinh Nguyễn Văn Mùi Thực hành hóa sinh học Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985) Các phương pháp sắc ký Nhà xuất khoa học kỹ thuật Trần Thị Xô Hóa sinh I Trường ĐH Bách khoa Khoa hóa Đại học Đà Nẵng Trang Web http://www.scribd.com http://baigiang.violet.vn/ http://www.hoahoc.org http://www.hoahocvietnam.com SVTH: Nguyễn Thị Tuyên 63 GVHD: ThS Lê Thế Tâm ... lượng saccarose theo phương pháp thủy phân axit 25 1.2.5 Xác định hàm lượng sacaroza phương pháp phân cực 26 1.2.6 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 28 1.3 Giới thiệu phương pháp sắc. .. phẩm chiếm hàm lượng đáng kể Ở khóa luận chúng tơi nghiên cứu đường việc xác định hàm lượng đường số sản phẩm thực phẩm sữa, nước giải khát Có thể xác định đường nhiều phương pháp phương pháp Bertrand,... 1.2 Các phương pháp xác định đường [3] 1.2.1 Phương pháp Bertrand Là phương pháp hóa học dùng để định lượng đường khử dựa khả khử hợp chất khác chúng Một phương pháp định lượng đường khử xác phổ