Khóa luận nghiên cứu tách dòng, giải trình tự và thiết kế vecto biểu hiện gene novw tham gia sinh tổng hợp kháng sinh novobiocin

56 474 0
Khóa luận nghiên cứu tách dòng, giải trình tự và thiết kế vecto biểu hiện gene novw tham gia sinh tổng hợp kháng sinh novobiocin

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Số trang Mục lục 1.3 Đường khử 16 1.3.4 Con đường sinh tổng hợp đường Novioce .18 2.4.6 Chạy điện di ADN plasmid Agarose 36 Bé gi¸o dục đào tạo Viện đại học mở hà nội Khoa c«ng nghƯ sinh häc -&&& - Khóa luận tốt nghiệp đề tài: Khúa Lun Tt Nghip K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội NGHI£N CøU T¸CH DòNG, GIảI TRìNH Tự Và THIếT Kế VECTOR BIểU HIệN GEN NOVW THAM GIA SINH TổNG HợP KHáNG SINH NOVOBIOCIN Giáo viên hớng dẫn: TS Tạ Thị Thu Thủy Sinh viên thực hiện: Vũ Văn Hùng Lớp KS.CNSH 06 - 04 Hà Nội, tháng năm 2010 LờI CảM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc em xin bầy tỏ lòng biết ơn chân thành đến cô giáo TS Tạ Thị Thu Thủy, Ngời đà trực tiếp hớng dẫn ân cần bảo giúp đỡ em hoàn thành khóa luận Em xin gủi lời cảm ơn thầy cô giáo, cán khoa Công nghệ sinh học Viện Đại Học Mở Hà Nội đà tạo điều kiện giúp đỡ em trình em thực nghiệm Phòng sinh học phân tử Viện Đại Học Mở Hà Nội Em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đà quan tâm động viên em suốt thời gian qua Qua em xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình tập thể nhóm G6 nhóm thực tập em phòng sinh học phân tử Do thời gian khả thân có hạn, nên khóa luận không tránh khỏi thiếu sót Nên em mong nhận đợc thêm bảo thầy cô góp ý bạn để khóa luận đợc đầy đủ hoàn thiện V Vn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Ni Em xin chân thành cảm Hà nội, ngày 19 tháng năm ơn! 2010 Sinh viên Vũ Văn Hùng NHỮNG TỪ NGỮ KÝ HIỆU VIẾT TẮT ADN ARN mRNA Amp EDTA EtBr PCR SDS TAE Taq Polymerase TBE OD TE dNTP RE Bio RAPD Nu Tm Bp Kb Axit deoxyribonucleic Axit ribonucleic Messenger RNA( RNA thông tin) Ampicillin Ethylen diamin tetra-acetic acid Ethidium bromide Polymerase Chain Reaction Sodium dodecyl sulphate Tris – Acetate –EDTA Polymerase Thermus aquaticus Tris – Base –EDTA Optical Density Trophectoderm Deoxiribonucleotide 5’ - triphosphates Restriction enzyme Biotechnology Random Amplified Polymorphic DNA Nucleotid Melting temperature Bazơ pairs Kilo Bazơ Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Open ORF reading frame( khung đọc mở) Escherichia coli National Center for Biotechnology E.coli NCBI Information MỞ ĐẦU Ngày nay, công nghệ sinh học coi năm ngành công nghệ mũi nhọn nhân loại gồm: công nghệ sinh học, công nghệ thông tin, công nghệ điện - điện tử, công nghệ vật liệu công nghệ lượng Công nghệ sinh học môn tập hợp ngành khoa học công nghệ gồm: sinh học phân tử, di truyền học, vi sinh vật học, sinh hóa học cơng nghệ học, nhằm tạo quy trình cơng nghệ khai thác quy mơ cơng nghiệp hoạt động sống vi sinh vật, tế bào động, thực vật để sản xuất sản phẩm có giá trị phục vụ đời sống, phát triển kinh tế - xã hội bảo vệ môi trường Công nghệ sinh học ứng dụng vào nhiều lĩnh vực công nghiệp, nông nghiệp, y học, dịch vụ, du lịch… nhằm phục vụ cho cầu sống dinh dưỡng, giải trí, chăm sóc sức khỏe Bằng kiến thức sinh học thực vật, động vật, nấm, vi khuẩn, sử dụng “công nghệ ADN tái tổ hợp” nhà khoa học cố gắng tạo trồng, vật ni có suất chất lượng cao, loại thực phẩm, dược phẩm phục vụ cho việc chữa bệnh cho người Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Xu hướng nghiên cứu hoá dược giới nghiên cứu tạo hệ kháng sinh cách thay gốc đường vào gốc đường cũ số nhóm kháng sinh (7) Vì kháng sinh hệ có hoạt tính kháng khuẩn cao hơn, tránh đựơc tượng kháng thuốc vi khuẩn đồng thời khả thải trừ thuốc nhanh Mục tiêu đề tài tách dịng giải trình tự gen novW tham gia sinh tổng hợp kháng sinh Novobiocin Từ việc giải trình tự gen novW ta dự đốn chức gen nghiên cứu novW, từ thiết kế vector biểu Đề tài thực theo bước sau: Thực phản ứng PCR gen novW Chuyển gen novW vào vector pGEM 7+ Giải trình tự gen novW Thiết kế vector biểu ta sử dụng vector pET-32a(+), vector biểu để chuyển gen novW vào vector pET-32a(+) Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan kháng sinh 1.1.1 Lịch sử phát triển kháng sinh - Lịch sử Giữa kỷ 17, thầy thuốc hoàng gia Anh chữa bệnh cách dùng rêu áp lên vết thương Cuối kỷ 19 Anh, mẫu bánh mì mốc dùng để chữa vết thương Năm 1928, Alexander Fleming (Bệnh viện Saint Mary, London) phát nấm tiết chất có tác dụng diệt khuẩn -Nấm Penicillium notatum -Chất có tác dụng diệt khuẩn : penicillin Ông coi người mở kỉ nguyên sử dụng kháng sinh y học Ông trao Giải thưởng Nobel y học năm 1945 với Ernst Boris Chain Howard Walter Florey việc tìm phân tách penicilin – coi loại kháng sinh việc điều trị bệnh nhiễm trùng Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Năm 1938, Ernst Boris Chain Howard Walter Florey (Đại Học Oxford) bắt đầu nghiên cứu tác dụng điều trị penicillin(1) Ngày 25/5/1940 thử nghiệm tác dụng kháng sinh thành công chuột Edward Abraham nghiên cứu điều chế penicillin tinh chất Năm 1943 dự án sản xuất penicillin phủ Mỹ đặc biệt ý nghiên cứu thử nghiệm bước đầu sản xuất Năm 1945, Chain Florey nhận giải Nobel y học Năm 1939, Chain theo Howard Florey nghiên cứu tác nhân tự nhiên chống vi khuẩn, vi sinh vật sản xuất Việc dẫn ông Florey xem xét lại cơng trình Alexander Fleming, người mơ tả penicillin năm trước Chain Florey tới việc khám phá tác dụng chữa bệnh penecillin thành phần hóa học Ơng tạo lý thuyết cấu trúc penicillin, lý thuyết xác nhận việc xác định cấu trúc tinh thể phương pháp chiếu tia X chiều (X-ray crystallography) Dorothy Hodgkin làm Vì Chain, Florey Fleming đoạt giải Nobel năm 1945 Sulfonamid Gerhard Domard (Đức) tìm vào năm 1932 Streptomycin Selman Waksman Albert Schatz tìm vào năm 1934 Đến nay, có 1600 chất kháng sinh tìm có khoảng 150 loại sử dụng rộng rãi ( phần lớn: độc, có tác dụng phụ, phổ kháng khuẩn hẹp, giá thành sản xuất cao…) - Lịch sử phát triển kháng sinh Việt Nam Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Ở nước ta loại thần dược đánh dấu bước ngoặt lớn công tác cấp cứu điều trị chiến thương bảo vệ sức khỏe cộng đồng Năm 1950 kháng chiến chống Pháp, GS Đặng Văn Ngữ nuôi cấy Penicillium Chryroylum dùng chiết môi trường nuôi cấy để điều trị vết thương cho thương binh Năm 1968 Bộ môn công nghệ dược, đại học dược hà nội thành lập đào tạo cán chuyên khoa kháng sinh chuẩn bị cho phát triển ngành công nghiệp kháng sinh, năm 1970 đơn vị nghiên cứu chuyên đề kháng sinh giáo sư Trương Công Quyền làm chủ nhiệm đời, hoạt động thời gian khơng thành cơng giải thể Sau Việt Nam nhiều đối tác nươc ngồi Liên Xơ (cũ), Trung Quốc, Tây Ban Nha, Triều Tiên hợp tác giúp đỡ sản xuất, điều chế kháng sinh, sau không thành công nhiều nguyên nhân(2) Năm 1985 – 1990 chương trình nghiên cứu nhà nước 64C y tế nghiên cứu sản xuất thử kháng sinh Oxytetracyclin Tetracyclin kết đạt không cao công nghệ lẫn hiệu suất Như thời gian nghiên cứu cộng tác điều chế sản xuất kháng sinh gặp nhiều khó khăn chưa thành cơng Hiện giới có khoảng 8000 kháng sinh tìm thấy có nguồn gốc từ vi sinh vật việc sử dụng kháng sinh không giới hạn lĩnh vực y học mà có áp dụng rộng rãi chăn nuôi trồng trọt công nghiệp thực phẩm 1.1.2 Khái niệm kháng sinh Chất kháng sinh hiểu chất hoá học xác định, khơng có chất enzym, có nguồn gốc sinh học (trong phổ biến từ vi Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội sinh vật), với đặc tính nồng độ thấp (hoặc thấp) có khả ức chế mạnh mẽ tiêu diệt vi sinh vật gây bệnh mà đảm bảo an toàn cho người hay động vật điều trị(3) 1.1.3 Cơ chế tác dụng kháng sinh Cơ chế tác dụng lên vi sinh vật gây bệnh ( hay đối tượng gây bệnh khác - gọi tắt mầm bệnh) chất kháng sinh thường mang đặc điểm riêng, tùy thuộc vào chất kháng sinh đó, đó, kiểu tác động thường gặp làm rối loạn cấu trúc thành tế bào, rối loạn chức điều tiết trình vận chuyển vật chất màng tế bào chất, làm rối loạn hay kiềm toả trình sinh tổng hợp protein, rối loạn trình tái ADN, tương tác đặc hiệu với giai đoạn định chuyển hóa trao đổi chất(4) - Ức chế trình tổng hợp vách vi khuẩn (vỏ) vi khuẩn Các nhóm kháng sinh gồm có penicillin, bacitracin, vancomycin Do tác động lên q trình tổng hợp vách nên làm cho vi khuẩn dễ bị đại thực bào phá vỡ thay đổi áp suất thẩm thấu - Ức chế chức màng tế bào Các nhóm kháng sinh gồm có : colistin, polymyxin, gentamicin, amphoterricin Cơ chế làm chức màng làm cho phân tử có khối lượng lớn ion bị ngồi - Ức chế q trình sinh tổng hợp protein Nhóm aminoglycosid gắn với receptor tiểu phân 30S ribosome làm cho trình dịch mã khơng xác Nhóm chloramphenicol gắn với tiểu phân 50S ribosome ức chế enzyme peptidyltransferase ngăn cản việc gắn acid amin vào chuỗi polypeptide Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Nhóm macrolides lincoxinamid gắn với tiểu phân 50S ribosome làm ngăn cản trình dịch mã acid amin chuỗi polypeptide - Ức chế q trình tổng hợp acid nucleic Nhóm refampin gắn với enzyme RNA polymerase ngăn cản trình mã tạo thành mRNA (RNA thơng tin) Nhóm quinolone ức chế tác dụng enzyme ADN gyrase làm cho hai mạch đơn ADN duỗi xoắn làm ngăn cản q trình nhân đơi ADN Nhóm sulfamide có cấu trúc giống PABA (p aminobenzonic acid) có tác dụng cạnh tranh PABA ngăn cản trình tổng hợp acid nucleotid Nhóm trimethoprim tác động vào enzyme xúc tác cho trình tạo nhân purin làm ức chế q trình tạo acid nucleic Mỗi ngày lại có rât nhiều loại kháng sinh dược sĩ bào chế trình kháng kháng sinh vi khuẩn 1.1.4 Phân loại kháng sinh Phân loại kháng sinh nhằm khái quát cách có hệ thống danh mục kháng sinh ngày nhiều thêm, có nhiều sở để phân loại kháng sinh, dựa vào phổ tác dụng, chế tác dụng, dựa vào nguồn gốc, đường sinh tổng hợp hay theo cấu trúc hóa học Dưới cách phân loại dựa theo cấu trúc hóa học Theo cách kháng sinh có nhóm chính(3): Các kháng sinh cacbonhydrat Các saccacrid nojirimycin Các aminoglycosid streptomycin 10 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội 98% với chủng strepomyces rishiriensis DSM 40489 coumermycin A1 99%.(hình 13) Và để đánh giá trình tự axit amin, ta so sánh kết nhận từ việc giả trình tự gen với ngân hàng gen giới thông qua trang NCBI Ta thấy gen novW có trình tự axit amin hồn tồn tương đồng với trình tự axit amin nhóm gen có chức isomerase, cơng bố ngân hàng gen giới, với độ tương đồng 100%.(hình 14) novO novP novQ novR novS novT novU novV nov W PCR PGEM EcoRI EcoRI + Hind III Hind III NovW W E.coli Bl 21 42 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Hình 10: Sơ đồ chuyển gen NovW vào vector pGEM 7+ Trong pNovW viết tắt pGEM 7+-NovW 3kb M 67 M Hình 11: Hình ảnh chạy điện di agarose sản phẩm cắt pGEM7+-novW (pNovW) Trong M: Marker 43 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, mẫu sản phẩm cắt pNovW tương ứng Từ kết so sánh trình tự axit amin trình tự nucleotide novW với trình tự gen đăng ký ngân hàng gen giới NCBI Ta kết luận sơ gen novW gen co chức mã hóa cho tổng hợp enzyme xúc tác cho phản ứng đồng phân hóa nhóm (– CH3) q trình sinh tổng hợp đường L-novioce vị trí bon số phân tử đường 44 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội GTGAGACTTCGCCCGCTCGGTATCGAGGGTGTCTGGGAGATCACCCCCGAGCAGCGCG CCGATCCGCGGGGGGTCTTCCTGGACTGGTATCACGTCGACCGGTTCGCCGAGGCGATC GGCCGCCCCCTGCGGCTGGCCCAGGCCAATCTGTCGGTGTCCGTCCGCGGGGTGGTGCG CGGCATCCACTTCGTCGATGTGCCGCCGGGGCAGGCCAAGTACGTGACGTGTGTGCGC GGCGCGGTGTTCGACGTGGTGGTGGACCTGCGCGTCGGCTCGCCGACGTACGGGTGCT GGGAAGGCACCCGGCTCGACGATGTCAGCCGTCGTGCCGTCTACCTCTCGGAGGGCAT CGGGCACGGCTTCTGCGCGATCTCGGACGAGGCCACGCTGTGCTATCTGTCTTCGGGGA CCTACGACCCGGCGACCGAGCACGGTGTGCACCCGCTCGATCCCGAACTGGCCATCGA CTGGCCCACCGGGACGCCGCTGCTGTCCCCCCGCGACCAGGACGCGCTCCTGCTCGCCG AAGCCCGGGACGCCGGCCTGTTGCCGACCTACGCGACCTGTCAGGCCGTCACGGTGCC TTCACCGGCGCCGGGTTCGGTCGGAGACCCGGGCCCGTGA Hình 12: Chuỗi trình tự gen novW 45 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội 46 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Hình 13: Kết so sánh nucleotid 47 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Hình 14: Kết so sánh axit amin 3.1.4 Chuyển gen novW vào vector pET-32a(+) Để thiết kế vector biểu ta dùng vector pET-32a(+) vector biểu Quá trình chuyển gen novW vào vector pET -32a thực theo sơ đồ hình 15 Để tách gen novW, Ta cắt vector pnovW( vector pGEM7 + có chứa đoạn gen novW) hai enzyme giới hạn EcoRI HindIII (Theo mục 2.4.2) Đồng thời ta dùng hai enzyme cắt vector pET- 32a(+) Sau phản ứng, ta thu đoạn gen vector pET 32a+ dạng thẳng Đoạn vector pET 32a + đoạn gen novW nối với enzyme nối T4 ADN ligase theo kỹ thuật nối gen trình bày mục 2.4.3 (hình 18) Sau nối gen, ta biến nạp sản phẩm nối gen vào tế bào khả biến E.coli XL1 Blue nuôi cấy tăng sinh môi trường thạch đĩa LB có bổ sung thêm kháng sinh Ampicilin (1mg amp/1ml LB) với nhiệt độ 37 oC, khoảng thời gian từ 14 đến 16 Sau khoảng thời gian trên, đĩa thạch xuất khuẩn lạc Ta chọn từ 6- khuẩn lạc nhỏ, trắng riêng rẽ, đem nuôi riêng rẽ ống môi trường LB lỏng có bổ sung kháng sinh( 1µl /1ml), với nhiệt độ 37độ C, khoảng thời gian từ 14 đến 16 OD dịch nuôi cấy khoảng 0,6 thực tách plasmid theo kỹ thuật tách 48 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội plasmid mục 2.4.1 Khi thu Plasmid, ta tinh plasmid cắt hai enzyme giới hạn EcoRI/Hind III Kết cắt gen phân tích phương pháp điện di agarose Thông qua kết điện di (hình 16), ta thấy có vạch tương ứng với hai đoạn ADN, đoạn có độ dài tương đương với 5,9 kb hay ứng với độ dài vector pET32-a(+) đoạn có độ dài tương đương với 0,624 kb tương ứng với độ dài gen novW Điều thể gen novW chuyển thành công vào vector pET -32a(+) , tạo vector tái tổ hợp vector pET -32a(+) vector pET -32a(+)-novW Vector dùng vector biểu hiện, để thu enzyme cho phản ứng 49 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Hind III EcoRI NovW pET32a+ _NovW E.coli BL21 DE3 50 Vũ Văn Hùng Lớp: pET32a 04 06 + NovW Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội Hình 15: Sơ đồ Chuyển gen novW vào vector pET 32a+ M M Hình 16: Hình ảnh chạy điện di agarose ADN sản phẩm chuyển gen novW vào vector pET -32a(+) Trong M marker 1, 2, 3, 4, mẫu ADN tương ứng 51 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội 3.2 Thảo luận, đề xuất Như vậy, nghiên cứu thực thành cơng tách dịng gen novW từ hệ gen chủng Streptomyces spheroides novobiocin biosymthetic Thực thành công việc chuyển gen novW vào vector pGEM7 + đồng thời giải trình tự gen novW so sánh với gen công bố ngân hàng gen giới Kết gen novW nhận có độ dài 0,624 kb hay 624 nucleotide Nghiên cứu thiết kế thành công vector biểu sử dụng vector pET -32a(+) tạo vector tái tổ hợp vector pET -32a(+)-novW novW gen đóng vai trị quan trọng q trình sinh tổng hợp đường khử L-noviose Novobiocin kháng sinh nghiên cứu ứng dụng nhiều y học Qua nghiên cứu tách dịng giải trình tự gen novW, ta tìm vai trị gen novW, novW tham gia vào trình đồng phân hóa nhóm metyl(-CH3) đường sinh tổng hợp đường L-Noviose kháng sinh Novobiocin Việc nghiên cứu chuyển gen tạo vector tái tổ hợp cho phép tạo dịng có khả sản xuất tối ưu lượng kháng sinh, giảm giá thành sản xuất Vì 52 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội tương lai lĩnh vực chuyển gen tạo vector tái tổ hợp cần tiếp tục nghiên cứu nhiều Đồng thời tiếp tục nghiên cứu sâu thêm gen novW, để biểu protein thực phản ứng thử enzyme Tài liệu tham khảo Trích dẫn: http://d.violet.vn/uploads/resources/562/426665/KH ANGSINH.ppt Nguyễn Duy Lương, Đồn Hồng Đào, GS Vũ Khánh Sản xuất nguyên liệu kháng sinh nước Hội dược học PGS.TS Cao Văn Thu (2000) Bài Giảng kháng sinh vitamin http://vi.wikipedia.org/wiki/Kh %C3%A1ng_sinh#C.C6.A1_ch.E1.BA.BF_t.C3.A1c_.C4 91.E1.BB.99ng_c.E1.BB.A7a_kh.C3.A1ng_sinh Kampranis, S.C., Gormley, N.A., Tranter, R., Orphanides, G and Maxwell, A (1999) Probing the 53 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội binding of coumarins and cyclothialidines to ADN gyrase Biochemistry 38, 1967- 1976 Hooper, D.C., Wolfson, J.S., McHugh, G.L., Winters, M.B and Swartz, M.N (1982) The effects of novobiocin, coumemycin A1, clorobiocin, and their analogs on Escherichia coli ADN gyrase and bacterial growth Antimicrob Agents Chemother 22, 662-671 Steffensky, M., Muhlenweg, A., Wang, Z.X , Li, S.M and Heide, L (2000) Identification of the novobiocin biosynthetic gene cluster of S spheroides NCIB 11891 Antimicrob Agents Chemother 44, 1214–1222 Luận văn Tiến sỹ TS Tạ Thị Thu Thủy Một số kỹ thuật sinh học phân tử ta sử dụng số trang website sau để thiết kế mồi, tìm enzyme giới hạn, đánh giá trình tự Nucleotid, đánh giá trình tự, độ tương đồng độ sai khác trình tự ADN • NCBI địa chỉ: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ • Just BIO địa chỉ: http://www.justbio.com/index.php?page=hostedtools Tại hai trang có nhiều cơng cụ ứng dụng sử dụng phổ biến rộng rãi sinh học phân tử 54 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Cơng Nghệ Sinh Học Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Nội 55 Vũ Văn Hùng Lớp: 06 - 04 Khoa Công Nghệ Sinh Học ... Mục tiêu đề tài tách dòng giải trình tự gen novW tham gia sinh tổng hợp kháng sinh Novobiocin Từ việc giải trình tự gen novW ta dự đoán chức gen nghiên cứu novW, từ thiết kế vector biểu Đề tài thực.. .Khóa Luận Tốt Nghiệp K13 Viện Đại Học Mở Hà Ni NGHIÊN CứU TáCH DòNG, GIảI TRìNH Tự Và THIếT KÕ VECTOR BIĨU HIƯN GEN NOVW THAM GIA SINH TỉNG HợP KHáNG SINH NOVOBIOCIN Giáo viên... nghiên cứu tìm chế tổng hợp kháng sinh từ tác động đến đuờng sinh tổng hợp kháng sinh mức độ phân tử theo ý muốn Từ ý nghĩa nhóm nghiên cứu thực nghiên cứu với tên “ Nghiên cứu tách dòng, giải trình

Ngày đăng: 23/12/2013, 15:31

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan