- Thiết kế tế bào khả biến từ Ecoli XL1 Blue
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 Kết Quả
3.1.2 Chuyển gen novW vào vector pGEM7+
Sản phẩm PCR chớnh xỏc nhất, sau khi đó được tinh sạch và chuyển vào vector pGEM7+ theo phương phỏp chuyển gen ở mục 2.4.3 (như sơ đồ hỡnh 10)
Để kiểm chứng kết quả chuyển gen novW vào vector pGEM7+, ta biến nạp vector pGEM7+ cú chứa gen novW (tức vector PGEM7+-
novW) vào tế bào khả biến E.coli XL1 Blue theo phương phỏp biến nạp ở mục 2.4.4. Sau đú, sản phẩm biến nạp thành cụng được nuụi tăng sinh trong mụi trường thạch đĩa LB cú bổ sung thờm khỏng sinh Ampicilin( 1mg/1ml), với nhiệt độ là 37 oC, trong khoảng thời gian từ 14 đến 16 giờ. Sau khoảng thời gian trờn, đĩa thạch sẽ xuất hiện cỏc khuẩn lạc. Ta chọn từ 6- 7 khuẩn lạc nhỏ, trắng và riờng rẽ, đem nuụi riờng rẽ trong cỏc ống mụi trường LB lỏng cú bổ sung khỏng sinh( 1mg amp/1ml LB), với nhiệt độ là 37 oC, trong khoảng thời gian từ 14 đến 16 giờ cho tới khi OD của dịch nuụi cấy khoảng 0,6 thỡ thực hiện tỏch plasmid, theo kỹ thuật tỏch plasmid ở mục 2.4.1. Mục đớch của việc
tỏch plasmid là để kiểm tra xem novW đó được chuyển vào vector pGEM7+ chưa.
Sau khi thu được plasmid, ta tinh sạch plasmid rồi dựng hai enzyme giới hạn là EcoRI/Hind III cắt gen theo mục 3.4.2. Sau đú, ta đem sản phẩm cắt đi chạy điện di bằng agarose.
Thụng qua kết quả điện di ( hỡnh 11), ta thấy cú 2 vạch tương ứng với hai đoạn ADN, một đoạn cú độ dài tương đương với 3,6 kb tương đương với độ dài của vector PGEM7+ và một đoạn ngắn tương đương với 0,624 kb tương ứng với độ dài của gen novW. Điều này thể hiện rằng gen novW đó chuyển thành cụng vào vector pGEM7+. Và để chắc chắn chỳng ta cần khẳng định lại kết quả bằng giải trỡnh tự gen.