Nghiên cứu qui trình phân lập genistein từ hạt đậu nành

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ********** NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH PHÂN LẬP GENISTEIN TỪ HẠT ĐẬU NÀNH Giáo viên hướng dẫn: ThS Phùng Văn Trung Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12 năm 2009 i TĨM TẮT Đề tài thực phòng Các Hợp Chất Thiên Nhiên-Viện Cơng Nghệ Hóa Học-Viện Khoa Học Và Cơng Nghệ Việt Nam Thành Phố Hồ Chí Minh Đề tài có tên: “ Nghiên Cứu Qui Trình Phân Lập Genistein từ Hạt Đậu Nành” Đề tài tiến hành từ tháng đến tháng 12 năm 2009 Để phân lập hợp chất genistein từ hạt đậu nành, trước tiên cần chọn dung mơi thích hợp sau đậu nành tiến hành ngâm dung môi Sau 24 thu dịch chiết đem cô quay để dạng Cao Cao chiết đem chạy sắc ký cột đồng thời kiểm tra song song với sắc ký lớp mỏng nhằm thu hợp chất cần phân tách Sau phân tách hợp chất tiếp tục tinh chế lại nhiều lần để hợp chất tinh khiết Chất gửi đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân nhằm xác định cấu trúc chất Sau tháng làm đề tài kết đạt được: phân lập 172mg GDN-3 từ hạt đậu nành, xác định cấu trúc GDN-3 genistein, định tính nhóm hợp chất có đậu nành (alkaloid, flavonoid, steroid, saponin, đường khử…), thử hoạt tính kháng oxy hóa genistein iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT v DANH SÁCH CÁC BẢNG vii DANH SÁCH CÁC HÌNH viii DANH SÁCH CÁC SƠ ĐỒ ix Chương 1:MỞ ĐẦU Chương 2: TỔNG QUAN 2.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT HỌC 2.1.1 Tên 2.1.2 Mô tả thực vật đậu nành 2.1.3 Phân bố-sinh thái-cách trồng trọt 2.2 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 2.2.1 Y học dân gian Việt Nam 2.2.2 Y học hóa sinh đại 2.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 11 2.3.1 Protein 11 2.3.2 Lipid 11 2.3.3 Glucid 11 2.3.4 Chất khoáng 12 2.3.5 Vitamin 12 2.3.6 Isoflavone glycoside 12 2.3.7 Saponine 14 2.3.8 Phytosterol 15 iv 2.3.9 Chất ức chế protease 16 2.3.10 Phytate 16 2.4 GENISTEIN 17 Chương 3: NGUYÊN VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 NGUYÊN LIỆU 20 20 3.1.1 Hạt đậu nành: 20 3.1.2 Dụng cụ - hóa chất: 20 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.2.1 Khảo sát sơ thành phần hóa học hạt đậu nành 21 3.2.2 Các phương pháp chiết xuất 29 3.2.3 Phương pháp phân lập tinh chế hợp chất 30 3.2.4 Xác định cấu trúc hóa học 32 3.2.5 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa 32 Chương 4: THỰC NGHIỆM – KẾT QUẢ 36 4.1 KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HẠT ĐẬU NÀNH 36 4.1.1 Phương pháp tiến hành 36 4.1.2 Kết 37 4.1.3 Nhận xét 39 4.2 PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ CÁC HỢP CHẤT 40 4.2.1 Chiết xuất 40 4.2.2 Phân lập tinh chế chất từ cao EtOAc 40 4.3 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HĨA HỌC CỦA GDN-3 44 4.4 QUY TRÌNH PHÂN LẬP GENISTEIN TỪ HẠT ĐẬU NÀNH 49 4.5 THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA 50 Chương 5: KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 53 5.1 KẾT LUẬN 53 5.2 KIẾN NGHỊ 53 Tài liệu tham khảo 54 v DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CHCl3: Chloroform 13 Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance d: Doublet (NMR) dd: Doublet of doublet (NMR) DEPT: Detortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO: Dimethyl sulfoxide DPPH: 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EC50: 50% Efficient Concentration Value IC50: 50% Inhibitory Capacity Value EtOAc: Ethyl acetate EtOH: Ethanol C-NMR: H-NMR: Proton Nuclear Magnetic Resonance HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Coherence HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation IR: Infrared J: Coupling constant m: Multiplet (NMR) MeOH: Methanol MS: Mass Spectrometry NMR: Nuclear Magnetic Resonance EP: Ether petrole vi ppm: Parts per million Rf: Retention factor s: Singlet (NMR) TLC: Thin Layer Chromatography (Sắc ký lớp mỏng) UV: Ultraviolet (Tia tử ngoại, tia cực tím) δ: Chemical shift HDL: Hight Density Lipid LDL: Low Density Lipid ATP: Adenosine Triphosphate vii DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG Trang Bảng 4.1: Kết khảo sát sơ thành phần hóa học chất có hạt đậu nành 37 Bảng 4.2: Kết sắc ký đồ phân đoạn thu sau khai triển sắc ký cột cao EtOAc 42 Bảng 4.3: Dữ liệu phổ 13C-NMR DEPT CỦA GDN-3 45 Bảng 4.4: Dữ liệu phổ 13C-NMR, 1H-NMR HMBC GDN-3 46 Bảng 4.5: Bảng so sánh liệu phổ GDN-3 genistein công bố 47 Bảng 4.6: Cách pha mẫu 51 Bảng 4.7: Độ hấp thu mẫu thử mẫu chuẩn 517nm 52 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH Trang Hình 2.1: Cây đậu nành rễ Hình 2.2: Hoa đậu nành Hình 2.3: Lá đậu nành Hình 2.4: Quả đậu nành tươi Hình 2.5: Quả hạt đậu nành khơ Hình 2.6: Cấu trúc isoflavone có đậu nành 12 Hình 2.7: Cấu trúc glycoside isoflavone 13 Hình 2.8: Cấu trúc hóa học soyasaponin 14 Hình 2.9: Cấu trúc hóa học cholesterol phytosterol 15 Hình 2.10: Cấu trúc acid phytic 16 Hình 2.11: Genistein 17 Hình 2.12: Sản phẩm Genistein số hợp chất Isoflavones 19 Hình 3.1: Hạt đậu nành 20 Hình 4.1: Kết định tính hợp chất có hạt đậu nành 39 Hình 4.2: Sắc ký cột thường cao EtOAc 41 Hình 4.3: Sắc ký lớp mỏng cao EtOAc, hệ dung mơi CHCl3-MeOH (9:1) 41 Hình 4.4: Dạng tinh thể GDN-3 43 Hình 4.5: TLC GDN-3 hệ CHCl3-MeOH (9:1) 43 Hình 4.6: Dạng bột GDN-3 43 ix DANH MỤC SƠ ĐỒ SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 4.1: Chuẩn bị dịch chiết định tính 36 Sơ đồ 4.2: Qui trình phân lập cao EtOAc 40 Sơ đồ 4.3: Phân lập chất từ cao EtOAc 43 Sơ đồ 4.4: Qui trình phân lập Genistein từ hạt đậu nành x Chương 1: MỞ ĐẦU Ngày phụ nữ khơng đóng vai trị quan trọng gia đình mà cịn đảm nhiệm cơng việc ngồi xã hội Vì tốc độ lão hóa thể trở nên nhanh Một nguyên nhân quan trọng ảnh hưởng đến trình lão hóa phụ nữ thiếu hụt hormon estrogen (nội tiết tố nữ) Như biết, hormon nữ giới gồm hai nhóm chính: - Các estrogen mà chủ yếu estradiol có tác dụng tạo nên vẻ đẹp quyến rũ nữ giới, tạo vóc dáng, da mịn màng tác nhân định cho chu kỳ kinh nguyệt, tạo trứng chín rụng để chuẩn bị cho thụ thai trứng gặp tinh trùng - Các progestrogen mà đại diện progesteron có chức phận bảo vệ thai nhi phát triển đảm bảo tiết sữa cho bú bà mẹ ni Các hormon hình thành thể tuổi dậy đạt hàm lượng cao tuổi 25 Sau hàm lượng chúng giảm dần, thời kỳ mãn kinh sau sinh Điều gây nhiều triệu chứng bất lợi cho nữ giới như: chứng đỏ mặc, huyết áp lên xuống thất thường gây khó chịu, tính khí thất thường, bị nhiều stress, da khơ, có nhiều vết nhăn, lỗng xương, dịn dễ gãy, vỡ…, thể nhanh lão hóa Để khắc phục tình trạng trên, y học đại sử dụng “ liệu pháp thay hormon” (Hormone replacement Therapy; HRT) tức sử dụng hormon có nguồn gốc tổng hợp Tuy nhiên lại gây số nguy lớn ung thư vú, ung thư màng tử cung, buồng trứng, huyết khối tĩnh mạch đột qụy thiếu máu cục bộ, tăng nguy tim mạch Protein đậu nành có giá trị cao khơng sản lượng thu hoạch mà cịn chứa đầy đủ tám loại acid amin thiết yếu cho thể người: isoleucin, leucin, lysin, methionin, phenylalanin, tryptophan, valin threonin Hàm lượng lysin đậu nành cao hẳn so với loại rau củ khác Các acid amin có hàm lượng thấp đậu nành methionin cystein Trong phân đoạn protein đậu nành, người ta tìm thấy lượng đáng kể β-amylase, cytochrome C, lectine, lipoxygenase, urease, lunasin proteaseinhibitor Tuy nhiên, hạt đậu nành cịn có chứa khoảng 1% lipoxygenase Chất oxy hóa chất béo khơng bão hịa thành aldehyd mạch ngắn, gây vị đắng khó chịu cho sản phẩm từ đậu nành 2.3.2 Lipid Đậu nành chứa lipid hạt đậu nành chứa 18-20% lipid toàn phần, đến 85% hợp chất acid béo khơng bão hịa (acid linoleic, acid linolenic) Trong đậu nành chứa lượng đáng kể lecithin, sử dụng công nghiệp sản xuất nhũ tương 2.3.3 Glucid Đậu nành nói chung có chứa α-galactooligosacharid khó tiêu hóa rafinose, stachyose hay verbascose Các hợp chất bị chuyển hóa hệ vi khuẩn ruột tạo khí, gây triệu chứng đầy 2.3.4 Chất khống Các chất khống có đậu nành kali, phosphor, magne, kẽm, canxi 11 2.3.5 Vitamin Trong hạt đậu nành có chứa nhiều vitamin, không vitamin tan dầu vitamin A, D, E, K mà cịn có vitamin tan nước vitamin nhóm B: Thiamin (B1), Riboflavine (B2), Niacine (B3), Acid pantotheic (B5), Pyroxidin (B6), Acid folic (B9) Trong hạt đậu nành chứa lượng đáng kể vitamin nhóm E (tocopherol tocotrienol), vốn nhóm vitamin có hoạt tính chống oxy hóa cao 2.3.6 Isoflavone glycoside nó: Người ta tìm thấy đậu nành có chứa 12 chất thuộc nhóm isoflavone, dạng aglycol dạng glycosid Ba aglycol tìm thấy đậu nành daidzein, genistein, glycitein (Hình 2.6) HO HO O O MeO OH O O OH OH Genistein Glycitein HO O O OH Daidzein Hinh 2.6: Cấu trúc isoflavone có đậu nành Các dẫn chất glycosid genistein, daidzein glycitein tạo thành chất như: genistin, daidzin, glycitin (Hình 2.7) 12 HO HO OH O O OH O O HO HO OH OH OH MeO O OH O OH Genistin Glycitin HO OH O O HO OH O OH Daidzin Hình 2.7: Cấu trúc glycoside isoflavone Hàm lượng isoflavone đậu nành phụ thuộc nhiều vào giống đậu nành, điều kiện khí hậu, sinh thái Trong hạt đậu nành hàm lượng isoflavone thay đổi từ 1-3% 13 2.3.7 Saponin Soyasaponin nhóm A Soyasaponin nhóm B OH O COOH OH O O CH2OH OH COOH O O O R3 OH OH OAc OH OH R1 R1 O OH O CH2OH OH O OAc O OH O OAc OH OH OR2 OR2 R' R'' HO CH2OH Sapogenol A (R’=R’’=OH), B (R’=H, R’’=OH) Soyasaponin nhóm B Soyasaponin nhóm A R1 R2 R3 R1 R2 A1 CH2OH β-D-glucose CH2OAc CH2OH α-L-rhamnose A2 CH2OH H CH2OAc H α-L-rhamnose A3 H H CH2OAc CH2OH H A4 CH2OH β-D-glucose H H H A5 CH2OH H H CH2OH β-D-glucose A6 H H Hình 2.8 : Cấu trúc hóa học soyasaponin 14 Saponin đậu nành nhóm hợp chất có cấu trúc triterpen phức tạp gồm khung aglycol kỵ nước nối với hay nhiều nhóm đường thân nước Các soyasaponin nhóm A có hai chuỗi đường nhóm B có chuỗi đường mang thêm nhóm 2,3-dihydro-2,5-dihydroxy-6-methyl-4H-pyran-4-one (DDMP) 2.3.8 Phytosterol Các phytosterol có cấu trúc tương tự cholesterol Các phytosterol β-sitosterol (24-α-ethylcholesterol), campesterol (24-α-methylcholesterol) stigmasterol (Δ22,24-α-ethylcholesterol) HO HO Cholesterol Campesterol HO HO Stigmasterol β-sitosterol Hình 2.9: Cấu trúc hóa học cholesterol phytosterol Các phytosterol có hoạt tính dược học quan trọng làm giảm cholesterol máu, kháng khối u, kháng tiểu đường, kháng viêm,… Các phytosterol tham gia thành phần cấu tạo màng tế bào Nhờ cấu trúc tương tự cholesterol nên phytosterol có đậu nành ức chế hấp thu sinh tổng hợp cholesterol 15 2.3.9 Chất ức chế protease Hai chất ức chế protease nghiên cứu nhiều Bowman-Birk (BBI) Kunitz (KI) BBI peptid ngắn 7900Da có khả ức chế trypsine chymotrypsine KI ức chế trypsine Hoạt tính bảo vệ chống lại tổn thương gây tia xạ hay gốc tự BBI chứng minh tế bào quan hay mô khác chuột, cho thấy khả phòng nhiều loại bệnh ung thư khác ruột, phổi, da hay khoang miệng 2.3.10 Phytate R R R R R R R=OPO3H2 Hình 2.10 : Cấu trúc acid phytic Acid phytic: inositol-1,2,3,4,5,6-hexaphosphate hay myo-insitol hexakisphosphate (Hình 2.13) Acid phytic vừa có tác động khơng có lợi cho thể pH sinh lý Ban đầu, người ta cho acid phytic tạo phức với ion Fe2+ , Ca2+, Mg2+ Zn2+ ; ức chế hấp thu ion Hơn nữa, acid phytic tương tác với protein, làm ức chế vài enzyme α-amylase làm chậm tiêu hóa amidon làm giảm glucose máu 2.4 Genistein [7, 13, 14, 17, 18, 21, 24] 16 HO O OH O OH Hình 2.11: Genistein Tên IUPAC : 5,7-Dihydroxy-3-(4-hydroxyphenyl) chromen-4-one Tên khác : 4´,5,7,-Trihydroxyisoflavone Công thức nguyên : C15H10O5 Trọng lượng phân tử : 270,24g/mol Trạng thái : tinh thể màu vàng, hình kim Độ tan : dễ tan methanol, DMSO Điểm nóng chảy : 297-298oC Genistein thuộc nhóm isoflavone, có hàm lượng cao đậu nành sản phẩm từ đậu nành Ngồi genistein có mặt nhiều loại rau ngũ cốc (cỏ ba đỏ, củ sắn dây…) với hàm lượng khác Genistein chứng minh phytoestrogen có khả phát huy nhiều tác dụng ảnh hưởng khác có mặt thể Cơ chế tác động genistein: • Hoạt tính anti-estrogen: Do cấu trúc tương tự hormon estrogen người nên genistein có khả gắn với receptor estrogen, làm giảm nồng độ estrogen máu • Ức chế hoạt tính enzyme đặc hiệu tyrosine kinase (enzyme có khả xúc tác cho q trình chuyển nhóm phốt phát từ ATP đến tyrosin), ANDtopoisomerase I II (enzyme tháo xoắn AND) có tế bào tăng sinh • Ức chế enzyme caspase, enzyme tác động q trình thối biến neuron nên genistein có tác động tốt việc phịng bệnh Alzheimer 17 • Nhờ hoạt tính chống oxy hóa nên genistein có khả ức chế sản phẩm peroxyd, gốc tự do, chất oxy hóa có khả gây đột biến DNA Các nhà khoa học sâu nghiên cứu hoạt tính genistein đạt kết sau: Singh cộng (2006): Khảo sát tác dụng genistein in vitro in vivo tế bào ung thư bàng quang chuột Trên in vitro in vivo nhận thấy ức chế tăng sinh tế bào ung thư phụ thuộc vào liều, làm giảm khoảng 50% kích thước khối u chuột Li cộng (2005): Điều trị in vitro tế bào ung thư (tuyến tiền liệt, vú, tụy phổi) genistein 24 Kết genistein ức chế đáng kể tăng sinh khối u Lin cộng (2005): Tác động daidzein genistein tế bào ung thư vú Cả hai chất có tác động ức chế phosphodiesterase mơ tăng sinh Cao cộng (2006): Điều trị tế bào ung thư tuyến tụy daidzein hay genistein Cả hai chất làm giảm khả sống tế bào ung thư Hedlund cộng (2006): Điều trị tế bào ung thư tuyến tiền liệt isoflavone khác genistein, daidzein, glycitein Genistein daidzein làm giảm hẳn tăng sinh tế bào biểu mô lành tính Glycitein làm giảm đáng kể tăng sinh tế bào ung thư tuyến tiền liệt Tuy nhiên, nhà khoa học thuộc trường King’s College Lodon (2006) phát genistein tiêu diệt tinh trùng trước chúng kịp kết hợp với trứng Vì phụ nữ chuẩn bị có thai khuyến cáo nên tránh ăn thức ăn có chứa đậu nành vài ngày • Một số sản phẩm Genistein thị trường giới: 18 Hình 2.12: Sản phẩm Genistein số hợp chất Isoflavone 19 Chương 3: NGUYÊN VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 NGUYÊN LIỆU: 3.1.1 Hạt đậu nành Hạt đậu nành mua siêu thị sản phẩm công ty trách nhiệm hữu hạn thương mại dịch vụ Xuân Hồng Địa chỉ: 44/12 Phan Xích Long – phường 16 Quận 11 - Thành phố Hồ Chí Minh Hình 3.1: Hạt đậu nành 3.1.2 Dụng cụ - hóa chất 3.1.2.1 Dụng cụ • Máy cô quay • Máy đo UV DR2000 • Máy đo điểm chảy Electrothermal 9100; mao quản dùng để đo điểm chảy 20 • Cột sắc ký • Đèn UV 254 UV 365 • Cân phân tích PRECISA XB 220A • Bản sắc ký Silicagel F254 MERCK (Silicagel 60 F254, 20ì20cm) ã Dng c thc hnh cỏc loi 3.1.2.2 Hóa chất • Etyl acetat • Dimethylsulfoxid • Acidchlohydric • Ethanol • Acid sulfuric 10% cồn • Ether petrole • Chloroforme • Methanol • Diethylether • Nước cất • Iod 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 3.2.1 Khảo sát sơ thành phần hóa học hạt đậu nành [2, 3, 5] Nguyên tắc: chiết tách hỗn hợp chất có hạt đậu nành thành ba phân đoạn theo độ phân cực tăng dần cách chiết hạt đậu nành với dung môi: ether ethylic, ethanol nước Sau xác định nhóm hợp chất phản ứng đặc trưng 3.2.1.1 Khảo sát diện hợp chất alkaloid • Thuốc thử alkaloid: Có nhiều thuốc thử cho phản ứng màu kết tủa với alkaloid -Thuốc thử Mayer Công thức: 1,35 g HgCl2 hòa tan 100 ml dung dịch KI 5% 21 Dấu hiệu nhận biết: tạo kết tủa màu trắng vàng -Thuốc thử Dragendoff Công thức: +Dung dịch A: 850 mg Bi(NO3)3.5H2O 40 ml H2O 10 ml acetic +Dung dịch B: Hòa tan g KI 20 ml H2O Trộn hai thể tích hai dung dịch A B để làm thuốc thử Dấu hiệu nhận biết: tạo kết tủa có màu từ vàng cam đến đỏ -Thuốc thử Wagner Công thức: Hòa tan g Iod 100 ml dung dịch KI 10% Dấu hiệu nhận biết: cho kết tủa màu nâu sáng đến nâu đen -Thuốc thử Bouchardat Công thức: I2 2,5 g 5,0 g KI hòa tan 10 ml nước cất Dấu hiệu nhận biết: cho kết tủa màu nâu màu vàng đậm -Thuốc thử Hager Acid picric bão hòa H2O Dấu hiệu nhận biết: cho kết tủa màu từ vàng cam đến đỏ 3.2.1.2 Khảo sát diện hợp chất coumarine • Thuốc thử coumarine - Dung dịch NaOH 10% - Dung địch HCl đđ - Nước cất - Dung dịch Na2CO3 10% 22 - p-Nitroaniline - giọt • Định tính coumarine Lấy dịch trích ethanol 98% làm mẫu thử - Phản ứng mở vòng lactone: Cho vào ống nghiệm, ống ml dịch thử, thêm vào ống 0,5 ml NaOH 10% Đun hai ống bếp cách thủy đến sôi, lấy để nguội, thêm vào ống ml nước cất Nếu chất lỏng ống có kiềm ống khơng kiềm xem dương tính Tiếp tục đem acid hóa ống có kiềm với vài giọt HCl đđ, dung dịch suốt lại xuất vẩn đục kết tủa dấu hiệu dương tính - Phản ứng diazo hóa: Lấy ml mẫu vào ống nghiệm, thêm vào ml dung dịch Na2CO3 10% ml nước cất Nếu dung dịch ống chuyển sang màu đỏ thẫm dấu hiệu dương tính 3.2.1.3 Khảo sát diện hợp chất flavonoid •Thuốc thử flavonoid Tải FULL (77 trang): https://bit.ly/3i7eRIB Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net Trong dung dịch, flavonoid tạo kết tủa màu vàng cam màu đỏ với acetate chì, tạo kết tủa màu xanh lục, đơi màu nâu đỏ với sắt (III) clorur, FeCl3 Flavonoid xác định phản ứng Shibata, gọi phản ứng Shinoda hay Cyanidin Willstater Thuốc thử tập hợp hóa chất gồm: dung dịch HCl đậm đặc, bột Mg kim loại, rượu isoamylic [CH3(CH3)CHCH2CH2CH2OH] Kết phản ứng cho màu tím 3.2.1.4 Khảo sát diện hợp chất glycosid • Thuốc thử glycosid -Thuốc thử Tollen 23 Công thức: pha 0,5 ml dung dịch AgNO3 10% với 0,5 ml dung dịch NaOH 10% Sau nhỏ từ từ dung dịch NH4OH đến tan kết tủa Dấu hiệu nhận biết: có Ag kết tủa -Thuốc thử Molish Công thức: nhỏ - giọt dung dịch thymol 2% vào ml H2SO4 đậm đặc Dấu hiệu nhận biết: xuất màu đỏ thẫm -Thuốc thử Baljet Công thức: pha dung dịch acid picric 1% cồn với dung dịch NaOH 10% nước theo tỷ lệ thể tích 1:1 Dấu hiệu nhận biết: Nhỏ - giọt thuốc thử vào ml chất thử, có màu vàng cam hồng xỉn phản ứng dương tính -Thuốc thử Legal Tải FULL (77 trang): https://bit.ly/3i7eRIB Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net Lấy ml mẫu thử cho vào - giọt pyridin, thêm giọt dung dịch Natri nitroprussiat 0,5% pha, sau cho từ từ giọt dung dịch KOH N Dấu hiệu nhận biết: xuất màu đỏ tím 3.2.1.5 Khảo sát diện hợp chất steroid • Thuốc thử steroid - Thuốc thử Liebermann-Burchard Anhydrid acetic: 20 ml H2SO4 đậm đặc: ml 24 Dấu hiệu nhận biết: xuất vòng ngăn cách hai lớp chất lỏng có màu từ hồng đến xanh - Thuốc thử Rosenheim Cl3COOH 90% Dấu hiệu nhận biết: xuất kết tủa kết tủa tan có dư thuốc thử - Thuốc thử Salkowski H2SO4 đặc: ml Dung dịch tách làm lớp: lớp H2SO4 có màu xanh, lớp CHCl3 có màu nâu đỏ 3.2.1.6 Khảo sát diện hợp chất saponin • Dựa vào số tạo bọt để xác định diện saponin a Cơ sở phương pháp Dược điển Pháp định nghĩa số tạo bọt sau: Chỉ số tạo bọt saponin độ lỗng ngun liệu nước để có chiều cao bọt cm sau lắc ống nghiệm có kích thước xác định, tiến hành điều kiện quy định b Cách tiến hành thử nghiệm dấu hiệu nhận biết Cân g bột dược liệu cho vào erlen 500 ml chứa sẵn 100 ml nước sôi Tiếp tục cho nước erlen sôi nhẹ 30 phút Lọc, để nguội, thêm nước cất 100 ml Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16 cm, đường kính 16 mm Cho vào ống nghiệm 1, 2, 3, 4, 5… 10 ml dịch lọc Thêm nước cất vào ống cho đủ 10 ml Bịt miệng ống nghiệm lắc theo chiều dọc ống 15 giây, giây lắc lần Để yên 15 phút, sau đo chiều cao cột bọt 3484735 25 ... Nhằm phân lập hợp chất quan trọng có giá trị này, đề tài luận văn với tên ? ?Nghiên cứu qui trình phân lập Genistein từ hạt đậu nành? ?? Mục tiêu đề tài gồm: Phân lập Genistein từ hạt đậu nành Phân. .. Minh Đề tài có tên: “ Nghiên Cứu Qui Trình Phân Lập Genistein từ Hạt Đậu Nành? ?? Đề tài tiến hành từ tháng đến tháng 12 năm 2009 Để phân lập hợp chất genistein từ hạt đậu nành, trước tiên cần chọn... dịch chiết định tính 36 Sơ đồ 4.2: Qui trình phân lập cao EtOAc 40 Sơ đồ 4.3: Phân lập chất từ cao EtOAc 43 Sơ đồ 4.4: Qui trình phân lập Genistein từ hạt đậu nành x Chương 1: MỞ ĐẦU Ngày phụ nữ