Xác định Aflatoxin bằng phương pháp HPLC đầu dò huỳnh quang

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TPHCMKHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨMMÔN: PHÂN TÍCH HÓA LÝ THỰC PHẨM 2XÁC ĐỊNH AFLATOXIN BẰNGPHƯƠNG PHÁP HPLC ĐẦU DÒHUỲNH QUANGNỘI DUNGTỔNG QUAN ĐỘC TỐ AFLATOXINTỔNG QUAN SẮC KÝ HPLCHÀM LƯỢNG AFLATOXIN TRONG ĐẬU PHỘNG.PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BẰNG SẮC KÝLỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

Nhóm: PHÂN TÍCH HĨA LÝ THỰC PHẨM XÁC ĐỊNH AFLATOXIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC ĐẦU DÒ HUỲNH QUANG STT TÊN THÀNH VIÊN MSSV NỘI DUNG ĐÁNH GIÁ NGUYỄN THỊ HUYỀN Độc tố nấm mốc 2022180119 Nguồn gốc Aflatoxin Cấu tạo Aflatoxin ĐOÀN HƯƠNG LAN 2022180027 Các dạng Aflatoxin Chuyển hóa Aflatoxin NGUYỄN THỊ NGỌC THẢO 2022180114 Nguyên tắc hoạt động HPLC Khái niệm Cấu tạo HPLC Phạm vi áp dụng NGUYỄN PHÚC NHẬT 2022181026 Nguyên tắc, nguyên liệu HUY Thiết bị, hóa chất Cách tiến hành 2022181038 Kết TRẦN THỊ HÀ MY NGUYỄN ĐẮC NHÂN 2022181043 Tác hại Aflatoxin Tổng bài, làm powerpoint 8 8 NỘI DUNG 01 02 03 TỔNG QUAN ĐỘC TỐ AFLATOXIN TỔNG QUAN SẮC KÝ HPLC HÀM LƯỢNG AFLATOXIN TRONG ĐẬU PHỘNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) TỔNG QUAN ĐỘC TỐ ĐỘC TỐ NẤM MỐC  Aflatoxin nhóm chất độc mạnh hình thành tự nhiên  Aflatoxin thường có loại hạt có dầu lạc, đậu nành, hạt điều, hạt hướng dương,…hay hạt ngũ cốc, bột sinh dưỡng, thức ăn gia súc có nguồn gốc từ hạt ngũ cốc  Aflatoxin gây ung thư, tổn thương gan, gây giảm sức đề kháng thể  Aflatoxin B1 coi chất độc nguy hiểm NGUỒN GỐC AFLATOXIN  Aflatoxin độc tố vi nấm sản sinh tự nhiên số loại Aspergillus, loại nấm mốc  Aspergillus flavus aspergillus parasiticus thuộc họ nấm cúc, loại nấm sản sinh aflatoxin tự nhiên môi trường nuôi cấy nhân tạo  Loại nấm mốc phát tiển nhiều loại chất, loại hạt có dầu chí có bột cá thịt giàu protein CẤU TẠO CỦA AFLATOXIN  Aflatoxn B1 có cơng thức C17H22O6 Trong cấu trúc phân tử có nhóm lacton metoxyl, khơng có nhóm hydroxyl tự  Aflatoxin B1 có màu huỳnh quang xanh da trời  Aflatoxin B1 có chứa vịng lacton  Aflatoxn G1 có cơng thức C17H22O7 Trong cấu trúc phân tử có nhóm lacton metoxyl, khơng có nhóm hydroxyl tự  Aflatoxin G1 có màu huỳnh quang xanh  Aflatoxin G1 có chứa vịng lacton CẤU TRÚC PHÂN TỬ AFLATOXIN Có 16 dạng aflatoxin khác có tự nhiên Aflatoxin B1 dạng độc Sự có mặt Aspergillus sản phẩm thực phẩm lúc thị mức aflatoxin có hại mà biểu thị cho rủi ro đáng kể sử dụng thực phẩm • Aflatoxin B1 & B2: sinh CÁC DẠNG AFLATOXIN Aspergillus flavus A parasiticus • Aflatoxin G1 & G2: sinh VÀ CHUYỂN HOÁ Aspergillus parasiticus CỦA CHÚNG Aflatoxin M1, M2 thường phát sữa bò cho ăn loại hạt bị nhiễm nấm mốc Các độc tố sản phẩm trình chuyển hóa gan động vật CÁC DẠNG AFLATOXIN VÀ CHUYỂN HỐ CỦA CHÚNG Tuy nhiên Aflatoxin M1 có mặt sản men Aspergillus parasiticus • Aflatoxin M1: chất chuyển hóa B1 người động vật • Aflatoxin M2: chất chuyển aflatoxin B2 sữa bò ăn thức ăn nhiễm aflatoxin • Aflatoxicol phẩm lên aflatoxin hóa cho Thiết bị Ngâm dụng cụ thủy tinh phòng thử nghiệm tiếp xúc với dung dịch aflatoxin axit sulfuric vài giờ, sau tráng kỹ nước để loại bỏ hết vết axit Kiểm tra axit hết hay chưa hết đo pH Cột lực miễn nhiễm (IA) Máy trộn Giấy lọc gấp nếp Giấy lọc sợi thủy tinh Bình định mức: loại A, dung tích ml Cột lực Máy đo quang phổ, đo bước sóng khoảng từ 200 nm đến 400 nm Cuvet thạch anh, có chiều dài đường quang cm không hấp thụ đáng kể bước sóng từ 300 nm đến 370 nm Màng lọc dung dịch pha lỏng, polytetrafluoroethylen (PTFE), có đường kính mm cỡ lỗ 0,45 Thiết bị HPLC, bao gồm: 9.1 Máy HPLC, tạo tốc độ dịng ml/phút 9.2 Bộ bơm mẫu, có vịng bơm nạp 50 tương đương Máy đo quang phổ Cuvet thạch anh Máy HPLC 9.3 Cột tách phân tích pha đảo 9.4 Hệ thống dẫn xuất sau cột 10 Detector huỳnh quang, có bước sóng kích thích 365 nm bước sóng phát xạ 435 nm, có khả phát 0,05 ng aflatoxin B1 thể tích bơm (trong trường hợp 50 Cột tách phân tích pha đảo Hệ thống dẫn xuất sau cột Đầu dò huỳnh quang Hóa chất Nước Natri clorua Iơt Aflatoxin, dạng tinh thể viên nang Axetonitril, loại dùng cho HPLC Metanol, loại dùng cho phân tích Metanol, loại dùng cho HPLC Toluen, loại phân tích (cần thực tủ hút) Hỗn hợp toluen/axetonitril Trộn 98 phần thể tích toluen với phần thể tích axetonitril 10 Dung mơi chiết: Trộn phần thể tích metanol với phần thể tích nước Hóa chất 11 Pha động: Trộn phần thể tích nước với phần thể tích axetonitril phần thể tích metanol Khử khí dung dịch trước sử dụng 12 Thuốc thử dẫn xuất sau cột Hịa tan 100 mg iơt ml metanol Thêm 200 ml nước, khuấy giờ, sau lọc qua màng lọc 0,45µm 13 Dung dịch gốc Aflatoxin B1, B2, G1 G2 14 Dung dịch gốc hỗn hợp aflatoxin Chuẩn bị dung dịch gốc có chứa 500 ng/ml aflatoxin B1, 125 ng/ml aflatoxin B2, 250 ng/ml aflatoxin G1 125 ng/ml aflatoxin G2 toluen/axetonitril 15 Dung dịch chuẩn hỗn hợp aflatoxin 16 Axit sulfuric, c(H2SO4) = mol/l Nước Aflatoxin Natri Clorua Acetonitrile Metanol Toluene Acid Sufuric Các dung dịch mẫu dung dịch chuẩn dùng cho phép xác định HPLC phải chứa loại dung dịch hỗn hợp dung mơi Chiết Cân 25 g mẫu đồng hóa máy trộn 2phút/tốc độ cao Thêm g natri clorua (4.2) 125 ml dung môi chiết (4.10) Kiểm tra để đảm bảo thời gian trộn tốc độ trộn Lọc hỗn hợp Dùng pipet 15 ml (V2) dịch lọc cho vào bình nón có nắp đậy thủy tinh lọc dịch chiết pha loãng qua giấy lọc vi sợi thủy tinh Dịch lọc V1 Dùng pipet lấy 15 ml (V4) dịch lọc thứ hai (V3) V6 thể tích dịch chiết mẫu (6.7) làm bơm Vào bình chứa dung mơi cột IA qua cột tách chiết mẫu hỗn hợp metanol nước, lọc ly tâm, pha loãng mẫu nạp lên cột IA, rửa rửa giải Thu lấy chất rửa giải metanol axetonitril cho vào bình định mức ml (5.5) Pha loãng nước đến vạch (V5) KHỐI LƯỢNG CỦA AFLATOXIN TỔNG SỐ LÀ TỔNG CỘNG KHỐI LƯỢNG CỦA BỐN LOẠI AFLATOXIN TRÊN ➢ mi khối lượng aflatoxin i có mặt thể tích bơm, tương ứng với diện tích pic đo chiều cao pic đọc đường chuẩn, tính nanogam ➢ m1 khối lượng mẫu thử, tính gam, có mặt phần dịch lọc thứ hai lấy dùng cho cột IA (V4) độ chụm phương pháp đưa phụ lục A giá trị lấy từ thử liên phịng thử nghiệm không áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Các kết thử liên phòng thử nghiệm: Các liệu sau thu phép thử liên phòng thử nghiệm tiến hành năm 1999 AOAC IUPAC tổ chức phù hợp với ISO 5725:1986 Các mẫu ngô, lạc bơ lạc bị nhiễm bẩn tự nhiên bị làm biến tính với 10 μg/kg, 20 μg/kg 30 μg/kg aflatoxin tổng số, theo tỷ lệ 7:1:3:1 B1, B2, G1 G2 tương ứng điều tra đánh giá ... dụng máy UV-VIS, huỳnh quang, khối phổ, tán xạ bay hơi…  Đầu dò huỳnh quang: là detector nhạy (cao 10-1000 lần so với detector UV-VIS detector đạu có HPLC  Detector huỳnh quang xác có tính chọn... hệ thống HPLC bao gồm độ phân giải, định lượng hợp chất HPLC hỗ trợ việc tách hóa chất tinh chế HÀM LƯỢNG AFLATOXIN TRONG NGŨ CỐC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) TIÊU... 2022181043 Tác hại Aflatoxin Tổng bài, làm powerpoint 8 8 NỘI DUNG 01 02 03 TỔNG QUAN ĐỘC TỐ AFLATOXIN TỔNG QUAN SẮC KÝ HPLC HÀM LƯỢNG AFLATOXIN TRONG ĐẬU PHỘNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG