Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan của cao chiết từ rễ cây nhó đông morinda longissima y z ruan trên chuột nhắt trắng mus musculus var swiss

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG ======== LÊ NGUYỄN BẢO NGỌC NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ RỄ CÂY NHĨ ĐƠNG (Morinda longissima Y.Z.Ruan) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Swiss) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đà Nẵng - Năm 2016 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH - MÔI TRƯỜNG ======== NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ RỄ CÂY NHĨ ĐƠNG (Morinda longissima Y.Z.Ruan) TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG (Mus musculus Var Swiss) Ngành: Công nghệ sinh học Người hướng dẫn: ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm Niên khóa: 2012 – 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm Các kết trình bày khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày 27 tháng 04 năm 2016 Sinh viên LÊ NGUYỄN BẢO NGỌC LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, em xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến ThS NCS Nguyễn Công Thùy Trâm – người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình cho em suốt trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô giáo khoa Sinh - Mơi trường tận tình giảng dạy tạo nhiều điều kiện để em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè, người bên cạnh quan tâm giúp đỡ em suốt thời gian vừa qua Đà Nẵng, ngày 27 tháng 04 năm 2015 Sinh viên LÊ NGUYỄN BẢO NGỌC MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Gan bệnh lý gan 1.1.1 Cấu tạo chức gan 1.1.2 Các bệnh lý gan 1.2.Các hoạt chất sinh học có tác dụng bảo vệ gan 1.3.Các phép thử hoạt tính sinh học nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan hợp chất 1.4.Cây nhó đơng (Morinda longissima Y.Z.Ruan) 11 1.4.1 Đặc điểm thực vật học 11 1.4.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học 11 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu 14 2.1.1 Nguyên liệu thực vật 14 2.1.2 Nguyên liệu động vật 14 2.1.3 Hóa chất 14 2.1.4 Phạm vi nghiên cứu 14 2.2 Nội dung nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Phương pháp xác định mẫu 15 2.3.2 Phương pháp chiết dịch nghiên cứu 15 2.3.3 Phương pháp thử độc tính cấp 15 2.3.4 Phương pháp gây độc gan chuột 16 2.3.5 Phương pháp xác định hoạt tính bảo vệ gan 16 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 17 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Kết khảo sát nồng độ CCl4 thích hợp để gây độc gan chuột 19 3.2 Kết khảo sát độc tính cấp cao chiết ML chuột thử nghiệm 20 3.3 Ảnh hưởng cao chiết từ rễ Nhó đơng đến thông số enzyme AST, ALT huyết chuột gây nhiễm độc CCl4 22 3.4 Kết quan sát trực quan gan chuột nhóm thực nghiệm 25 3.5 Kết xác định hàm lượng MDA đồng thể gan chuột gây độc CCl4 28 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 Kết luận 31 Kiến nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ALT Alanin aminotransferase AST Aspartate aminotransferase CCl3 Trichloromethyl CCl4 Carbon tetrachloride cs cộng CYP450 Cytochrome P450 EtOH Ethanol GOT Glutamat oxaloacetat transaminase GPT Glutamat pyruvat transaminase HBV Hepatitis B virus HSC Hepatic Stellate Cell LD50 Lethal dose 50% MDA Malonyl dialdehyde ML Morinda longissima NAPQI N- acetyl parabenzoquinoneimin OD Optical Density PAR Paracetamol TBA Acid thiobarbituric TCA Acid tricloacetic DANH MỤC BẢNG BIỂU Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Đặc tính loại virus A, B, C, D, E 1.2 Những thuốc gây ngộ độc gan 3.1 3.2 Kết gây độc CCl4 nhóm chuột thử nghiệm sau 48 Kết khảo sát độc tính cấp cao chiết ML chuột thử nghiệm 19 20 Ảnh hưởng cao chiết từ rễ Nhó đơng đến 3.3 thông số enzyme AST, ALT huyết 22 chuột gây nhiễm độc CCl4 3.4 3.5 Kết quan sát trực quan gan chuột nhóm thực nghiệm Kết xác định hàm lượng MDA đồng thể gan chuột gây độc CCl4 25 28 DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ Số hiệu hình Biểu đồ 3.1 Tên hình Nồng độ enzyme AST, ALT huyết chuột Trang 23 Biểu đồ 3.2 Hàm lượng MDA gan chuột 29 Hình 3.1 Các hình ảnh gan 26 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Gan quan tham gia vào q trình chuyển hóa chất thể người động vật Gan đảm nhận nhiều chức khác chức giải độc chất nội sinh ngoại sinh tạo Trong trường hợp bệnh lý hay tải chất độc gan, tế bào gan bị hủy hoại làm suy giảm chức gan gây nên tổn thương không hồi phục viêm gan, xơ gan, ung thư gan [44] Bệnh gan bệnh thường gặp cộng đồng Ở Việt Nam số người bị bệnh gan chiếm tỉ lệ cao Theo số liệu thống kê Tổ chức Y tế giới - WHO, tỉ lệ người nhiễm virus viêm gan B (HBV) chiếm từ 10 - 20% dân số, tức 10 – 16 triệu người, điều đáng lo ngại tổng số trường hợp bị xơ gan Việt Nam có tới 80% ca có nguyên nhân từ viêm gan B [37], [44] Mỗi năm có 10.000 người chết biến chứng xơ gan ung thư gan [14], [37] Hiện nay, nước giới đẩy mạnh việc nghiên cứu, bào chế sản xuất loại thuốc bảo vệ gan có nguồn gốc thảo dược thay cho thuốc tổng hợp nhằm giảm tác dụng phụ không mong muốn thuốc gây giảm giá thành trình điều trị bệnh[3], [35] Nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, nước ta có điều kiện thuận lợi cho phát triển nguồn tài nguyên thực vật, đặc biệt loại thảo dược quý hiếm, có Nhó đơng Cây Nhó đơng (Morinda longissima Y.Z.Ruan) thuốc người dân Sơn La sử dụng điều trị rối loạn tiêu hóa, giải độc, kháng viêm bệnh gan cho hiệu tốt [36] Kết cơng trình nghiên cứu công bố gần xác định số thành phần hóa học Nhó đơng, nhiên chưa có nghiên cứu tác dụng dược lý loài 28 3.5 Kết xác định hàm lượng MDA đồng thể gan chuột gây độc CCl4 Kết xác định hàm lượng MDA gan trình bày qua bảng 3.5 Bảng 3.5 Hàm lượng MDA dịch đồng thể gan chuột % Nhóm Giá trị OD MDA (nM/ml) giảm so với nhóm HTC O% p bệnh lí Chứng sinh lí 0.472 ± 0.069 7.460 ± 1.088 Chứng bệnh lí 1.173 ± 0.098 18.455 ± 1.522 p