Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và thử phân lập các phân đoạn cao chiết từ cao tổng ethanol của rễ đại tướng quân hoa trắng (crinum asiaticum l ) thu hái trên địa bàn đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC - - BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học thử phân lập phân đoạn cao chiết từ cao tổng Ethanol rễ Đại Tướng Quân hoa trắng (Crinum asiaticum L.) thu hái địa bàn Đà Nẵng Giáo viên hướng dẫn: Ts Trần Mạnh Lục Sinh viên: Huỳnh Thị Thanh Nguyệt Lớp: 16CHDE Chuyên ngành: Hóa Dược MSSV: 314054161136 Đà Nẵng, tháng năm 2020 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 16990083424611000000 ĐẠ HỌC ĐÀ NẴNG C NG H TRƯỜNG ĐẠ HỌC SƯ PHẠ H H CH NGH Đ c ập – T ỆT N o – Hạnh ph c H NH Ệ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP SINH VIÊN H ỳnh hị hanh Ng Họ tên inh iên: ệt Tên đ tài Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học phân lập phân đoạn cao chiết từ cao tổng Ethanol rễ Đại ướng Quân hoa trắng (Crinum asiaticum L.) th hái địa bàn Đà Nẵng N u ên i u, n c thiết bị - Ng ên iệ rễ Đại ướng Quân hoa trắng th hái Đà Nẵng - Dụng cụ thiết bị bếp cách thủ , cân phân t ch, phễ chn r, c c thủ tinh, phễ chiết, b chưng ninh, N i un n hiên cứu: - Điều chế mẫu cao chiết Rắn - Lỏng chiết Lỏng - Lỏng - Định tính thành phần nhóm chức cao chiết phản ứng hóa học đặc trưng - Định danh thành phần hóa học cao chiết phương pháp sắc ký GC – MS - Sắc ký lớp mỏng phân lập thành phần nhóm chức có cao chiết - Phân lập thành phần nhóm chức từ phân đoạn cao chiết n - Hexane từ cao tổng Ethanol phương pháp sắc ký CC, GC - MS Giáo iên hướn N n TS rần ạnh ục iao đ tài 01/ 2020 N hoàn thành 05/ 2020 Chủ nhi hoa TS Trần Đức Mạnh Giáo iên hướn rần n ạnh ục inh viên đ hoàn thành n p báo cáo cho hoa ngà tháng 06 năm 2020 LỜI CẢ ƠN Khoảng thời gian thực đề tài khóa luận t t nghiệp nà đ mang đến cho nhiều kỉ niệm đồng thời đ giúp đúc ết rèn luyện nhiề ĩ Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâ sắc tới Ts Trần Mạnh Lục, người thầ đầy nhiệt huyết tận tụ đ giúp đỡ, hướng dẫn từ su t q trình xác định vấn đề nghiên cứu, xây dựng đề cương toàn b q trình nghiên cứu, hồn thành luận văn Thầ đ tin tưởng giao đề tài tạo điều kiện t t nhất, ln tận tình hướng dẫn, bảo truyền đạt tri thức su t q trình hồn thành đề tài khóa luận t t nghiệp Tơi xin cảm ơn thầy, cô giảng viên khoa Hóa học trường Đại học phạm Đà Nẵng đ q an tâm giúp đỡ, nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh, chị hóa đ ôn tận tình dạy quan tâm su t thời gian thực đề tài Cảm ơn anh chị đ đ ng viên hỗ trợ, tận tình hướng dẫn dành nhiều thời gian để giúp tơi giải vấn đề hó hăn hi thực đề tài khóa luận t t nghiệp ước đầu làm quen với việc nghiên cứu nên báo cáo khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung thầy để tơi hồn thiện iến thức thân inh nghiệm sau Cu i xin chúc quý thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công cu c s ng nghiệp giảng dạy Tơi xin chân thành cảm ơn tất thầy cô khoa Hóa anh chị khóa trên! M CL C MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đ i tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đ i tượng nghiên cứu 3.2 Phạm vi nghiên cứu N i dung nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm Ý nghĩa hoa học thực tiễn đề tài B cục đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TÊN GỌI 1.2 TỔNG QUAN VỀ HỌ VÀ CHI 1.3 MÔ TẢ THỰC VẬT 1.4 PHÂN BỐ VÀ CÁCH TRỒNG 1.4.1 Phân b 1.4.2 Cách trồng chăm sóc 10 1.5 THUỘC ÍNH DƯỢC LÝ 10 1.5.1 Y học dân gian 11 1.5.2 Xác nhận khoa học m t s sử dụng Ethnomedicinal 13 1.5.3 Tác dụng ch ng nhiễm trùng, ch ng viêm bảo vệ gan, giảm đa 14 1.5.4 Đặc tính ch ng s t rét 15 1.5.5 Tác dụng ức chế đa Axit Axetic Formalin gây 15 1.5.6 Điều trị tiêu chảy 16 1.5.7 Chế phẩm Anti - U500 hạn chế u xơ tử cung - u tuyến tiền liệt từ Đại ướng Quân hoa trắng 16 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ DỤNG CỤ 19 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 19 2.2 NGÂM DẦM TỔNG HỢP CAO ETHANOL TỪ MẪU RỄ ĐẠI ƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG 20 2.2.1 Xử lý nguyên liệu 20 2.2.2 Mục đ ch 20 2.2.3 Cách tiến hành 20 2.2.4 Tính tốn kết 21 2.3 PHƯƠNG PHÁP CHIẾT PHÂN BỐ LỎNG - LỎNG TỪ TỔNG CAO ETHANOL 21 2.3.1 Mục đ ch 22 2.3.2 Nguyên tắc kỹ thuật chiết 22 2.3.3 Cách tiến hành 22 2.3.4 Tính tốn kết 24 2.4 XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN NHÓM CHỨC CÁC PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT 24 2.4.1 Định tính Alkaloid 24 2.4.2 Định tính Flavonoid 24 2.4.3 Định tính Steroid 25 2.4.4 Định tính Glycosid 25 2.4.5 Định tính Phenol 25 2.4.6 Định tính Tanin 25 2.4.7 Định tính Sesquiterpen - Lacton 26 2.5 ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÁC PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT 26 2.5.1 Nguyên tắc 26 2.5.2 Cấu tạo thiết bị 26 2.5.3 Ư , nhược điểm 27 2.6 PHÂN TÍCH SẮC KÝ LỚP MỎNG CÁC PHÂN ĐOẠN CAO TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL 28 2.6.1 Mục đ ch 28 2.6.2 Cách tiến hành 28 2.7 PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO HEXAN TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL 31 2.7.1 2.8 Tiến hành sắc ký c t cao n - Hexan 31 NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 KẾT QUẢ CHIẾT TÁCH CÁC HỢP CHẤT TRONG NGUYÊN LIỆU BẰNG PHƯƠNG PHÁP NGÂM CHIẾT VÀ CHIẾT LỎNG - LỎNG 35 3.1.1 Kết điều chế cao tổng Ethanol phương pháp ngâm chiết 35 3.1.2 Kết chiết phân b Lỏng - Lỏng 36 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM CHỨC TRONG CÁC PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT TỪ CAO TỔNG ETHANOL BẰNG THUỐC THỬ ĐẶC RƯNG 40 3.3 KẾT QUẢ ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CÁC PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT 42 3.3.1 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn cao chiết n Hexane 42 3.3.2 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn cao chiết Dicholoromethane 44 3.3.3 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn cao chiết Ethyl Acetate 45 3.3.4 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn cao chiết Nước 46 3.4 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH SẮC KÝ LỚP MỎNG CÁC PHÂN ĐOẠN CAO TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL 50 3.4.1 Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao n - Hexane 51 3.4.2 Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao Dichloromethane 52 3.4.3 Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao cao Ethyl Acetate 53 3.4.4 Kết sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao Nước 54 3.5 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO HEXAN TÁCH TỪ TỔNG CAO ETHANOL 55 3.5.1 Kết định danh thành phần hóa học phân đoạn tinh thể PĐI 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 4.1 Kết luận 60 4.2 Kiến nghị 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH M C HÌNH Hình 1.1 Tiêu câ Đại ướng Quân hoa trắng (Nguồn: Internet) Hình 1.2 Họ Amaryllidaceae A - Crinum, B - Narcissus, C - Sprekelia, D Agapanthus, E - Allium, F - Tristagma (Nguồn: Internet) Hình 1.3 Hoa (a), (b), thân (c) rễ (d) câ Đại ướng Quân hoa trắng (Nguồn: Internet) Hình Đại ướng Quân trồng àm đường viền đường ph ((Nguồn: Internet) Hình 1.5 Náng hoa trắng y học dân gian (Nguồn: Internet) 13 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học Lycorine 15 Hình 1.7 Cấu trúc hóa học Crinamine 15 Hình 1.8 Cấu trúc hóa học Stigmasterol 16 Hình 1.9 Cấu trúc hóa học Cycloartenol 16 Hình 1.10 Chế phẩm Anti - 500 18 Hình 2.1 Ngun liệ phơi hơ nghiền mịn 20 Hình 2.2 Ngâm nguyên liệu hệ th ng cô cao, thu hồi dung môi 21 Hình 2.3 Nguyên lý chiết phân b Lỏng - Lỏng 22 Hình 2.4 Phân tán cao Ethanol với nước cất a) Cao Ethanol, b) Phân tán với nước cất 23 Hình đồ thiết bị sắc ký khí ghép kh i phổ (GC - MS) 27 Hình 2.6 Bản mỏng slicagel Kieselgel 60F254 28 Hình 2.7 Các bình dung mơi triển khai sắc ký lớp mỏng 29 Hình Đèn tử ngoại dùng phát vết chất SKLM 30 Hình 2.9 Chuẩn bị chất hấp thu a) Cân Silicagel; b) Sấ i icag ; c) Ngâm trương Silicagel Hexane 32 Hình 2.10 Sắc ký c t (CC) a) C t sắc ký (d=5 cm, h=50cm), b) Nhồi c t (140 g Silicagel), c) Nạp mẫu (3,5 g cao n – Hexane), d) Giải ly c t sắc ký cao n - Hexane 33 Hình 11 đồ nghiên cứu thực nghiệm 34 Hình 3.1 Ngâm chiết mẫu thử dịch chiết (6 lần) rễ 35 Hình 3.2 Kết chiết phân b Lỏng - Lỏng với dung môi n - Hexane a) Chiết Lỏng - Lỏng n - Hexane, b) Dịch chiết Lỏng - Lỏng n - Hexane qua lần chiết, c) Dịch nước sau lần chiết, d) Cao chiết Lỏng - Lỏng với n - Hexane 36 Hình 3.3 Kết chiết Lỏng - Lỏng với dung môi Dichlorometane a) Chiết Lỏng Lỏng Dichloromethane, b) Dịch chiết Lỏng - Lỏng Dichloromethane qua lần chiết, c) Dịch nước sau lần chiết, d) Cao chiết Dichloromethane 37 Hình 3.4 Kết chiết phân b Lỏng - Lỏng với dung môi Ethyl Acetate 38 a) Chiết Lỏng - Lỏng Ethyl Acetate, b) Dịch chiết Lỏng - Lỏng Ethyl Acetate qua lần chiết, c) Dịch nước sau lần chiết, d) Cao chiết Ethyl Acetate 38 Hình 3.5 Biể đồ % kh i ượng cao chiết từ cao tổng Ethanol 39 Hình đồ kết chiết Rắn - Lỏng chiết Lỏng - Lỏng 39 Hình 3.7 Kết chạy sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao n - Hexane giải ly d ng môi đơn n - Hexane (a), Dichloromethane (b), Ethyl Acetate (c),và hệ dung môi Hexane : Ethyl Acetate tỷ lệ 2:8 (d), 4:6 (e), 6:4 (f), 8:2 (g) 51 Hình 3.8 Kết chạy sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao Dichloromethane giải ly d ng môi đơn n - Hexane (a), Dichloromethane (b), Ethyl Acetate (c),và hệ dung môi n – Hexane : Ethyl Acetate tỷ lệ 2:8 (d), 4:6 (e), 6:4 (f), 8:2 (g) 52 Hình 3.9 Kết chạy sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao Ethyl Acetate giải ly d ng môi đơn n - Hexane (a), Dichloromethane (b), Ethyl Acetate (c),và hệ dung môi n - Hexane: Ethyl Acetate tỷ lệ 2:8 (d), 4:6 (e), 6:4 (f), 8:2 (g) 53 Hình 3.10 Kết chạy sắc ký lớp mỏng phân đoạn cao nước giải ly dung môi đơn H xan (a), Dich orom than (b), Eth Ac tat (c),và hệ dung môi Hexane - Ethyl Acetate tỷ lệ 2:8 (d), 4:6 (e), 6:4 (f), 8:2 (g) 54 Hình 11 ăc ý c t: a) C t sắc ký giải ly thứ bình hứng, b) C t sắc ký giải ly thứ hai bình hứng 55 Hình 12 Các phân đoạn th sau sắc kí c t cao chiết Hexane 55 Hinh 3.13 a) Sắc kí lớp mỏng bình hứng giải phân đoạn PĐI; b) ắc kí lớp mỏng phân đoạn PĐI với dung môi giải ly: A Hexane, B Dichloromethane, C Chloroform, D Ethyl Acetate 56 Hình 3.14 Các tinh thể hình kim (TT.1) sau tinh chế 56 Hinh 15 a) Phân đoạn PĐI mỏng giải mỏng giải , c) Phân đoạn PĐI mỏng giải ; b) Phân đoạn PĐI , d) Phân đoạn PĐI mỏng giải ly 57 Hình 16 đồ phân lập cao chiết n - Hexane 57 DANH M C BẢNG Bảng 1.1 Danh Sách Các Loại Alkaloids Lycorine Crinum asiaticum L 11 Bảng 2.1 Các hóa chất sử dụng 19 Bảng 3.1 Kết ngâm chiết nguyên liệu Ethanol 960 35 Bảng 3.2 Thể tích dịch chiết kh i ượng cao n - H xan th 36 Bảng 3.3 Thể tích chiết kh i ượng cao Dichloromethane tách từ tổng cao Ethanol 37 Bảng 3.4 Thể tích dịch chiết kh i ượng cao Eth Ac tat th từ cao Ethanol 38 Bảng 3.5 Kh i ượng cao chiết th phương pháp chiết Lỏng - Lỏng 38 Bảng 3.6 Thành phần nhóm chất có phân đoạn cao tách từ tổng cao Ethanol phần rễ Đại ướng Quân hoa trắng 40 Bảng 3.7 Kết định danh chất phân đoạn cao chiết Hexane tách từ tổng cao Ethanol phần rễ câ Đại ướng Quân hoa trắng 42 Bảng 3.8 Kết định danh chất phân đoạn cao chiết Dichloromethane tách từ tổng cao Ethanol phần rễ câ Đại ướng Quân hoa trắng 44 Bảng 3.9 Kết định danh chất phân đoạn cao chiết Ethyl Acetate tách từ tổng cao Ethanol phần rễ câ Đại ướng Quân hoa trắng 46 Bảng 3.10 Kết định danh chất phân đoạn cao chiết Nước tách từ tổng cao Ethanol phần rễ câ Đại ướng Quân hoa trắng 46 Bảng 3.11 Tổng hợp kết định danh chất phân đoạn cao chiết tách từ tổng cao Ethanol phần rễ câ Đại ướng Quân hoa trắng 47 Bảng 3.12 Kết giá trị Rf chất xuất mỏng phân đoạn cao Hexane giải ly hệ dung môi Hexane - Ethyl Acetate tỷ lệ 2:8 (d) 51 Bảng 3.13 Kết xác đinh giá trị Rf chất xuất mỏng phân đoạn cao Dichloromethane giải ly Hexane : Ethyl Acetate tỷ lệ 4:6(e) 52 Bảng 3.14 Kết xác đinh giá trị Rf chất xuất mỏng phân đoạn cao Ethyl Acetate, giải ly Ethyl Acetate (c) 53 Bảng 3.15 Kết xác đinh giá trị Rf chất xuất mỏng phân đoạn cao Nước, giải ly hệ dung môi Hexane: Ethyl Acetate tỷ lệ 4:6(e) 54 Bảng 3.16 Thành phần hóa học định danh phân đoạn tinh thể PĐI 58 DANH M C CHỮ VIẾT TẮT WHO World Health Organization – Tổ chức y tế giới YHCT Y học Cổ Truyền TLC - SKLM Thin Layer Chromatography – Sắc ký lớp mỏng CC Column Chromatography – Sắc ký c t GC Gas Chromatography – Sắc ký khí MS Mass Spectrometry – Phổ kh i ượng STT S thứ tự Ts Tiến sĩ TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn, T.V., Thực trạng đa dạng sinh học giải pháp bảo tồn dựa tiếp cận sử dụng khôn khéo tài nguy n đất ngập nước vườn Quốc gia Xuân Thủy: Luận văn Thạc sĩ hoa học ôi trường ch ên ngành ôi trường phát triển bền vững 2014, Đại học Qu c gia Hà N i Văn âm, N N , t a , Đ nh gi đa dạng di truyền ằng thị hình th i tương uan kiểu hình c c d ng N ng hoa trắng rinum a iaticum ) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, 2019(12B): p 36 Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kĩ th ật Hà N i, 1995 Đỗ Tất Lợi, Đ V , Dược liệu học vị thuốc Việt Nam Tập 1, 2000 Nhà XB Y học Thể thao Hà N i Chi, V V and D Đ iến, Phân loại thực vật NX Đại học Trung học Chuyên nghiệp, 1978 ViệnDượcLiệu, Phương ph p chiết xuất dược liệu Nhà xuất Khoa học Kĩ th ật Hà N i, 2008 Nguyễn hượng, D., Kỹ thuật chiết xuất dược liệu 2008, Khoa học Kỹ thuật TÀI LIỆU TIẾNG ANH Patel, D., Crinum asiaticum Linn: A Medicinal Herb as Well as Ornamental Plant in Central India International Journal of Environmental Science & Natural Resources, 2017 6(1): p 1-7 Vaughan, J and C Geissler, The new Oxford book of food plants 2009: OUP Oxford 10 Fennell, C and J Van Staden, Crinum species in traditional and modern medicine Journal of Ethnopharmacology, 2001 78(1): p 15-26 11 Refaat, J., et al., Crinum; an endless source of bioactive principles: a review part v biological profile International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2013 4(4): p 1239 12 Haque, M., S Jahan, and M Rahmatullah, Ethnomedicinal uses of crinum asiaticum: A review World J Pharm Pharm Sci, 2014 3: p 119-28 Koshimizu, T., On the “ rinum ine” in the flora of Japan Shokubutsugaku 13 Zasshi, 1938 52(615): p 135-139 14 Hayasaka, D and K Fujiwara, Species composition and environmental factors, including human impacts, on coastal sand-dunes and maritime strandforests in Southern Thailand Tropics, 2005 14(3): p 245-254 15 Khisha, T., et al., Ethnomedical studies of chakma communities of Chittagong hill tracts, Bangladesh Bangladesh Pharmaceutical Journal, 2012 15(1): p 59-67 16 Rahman, M.A., et al., Analgesic and anti-inflammatory effects of Crinum asiaticum leaf alcoholic extract in animal models African Journal of Biotechnology, 2013 12(2) 17 Rahman, M., et al., Antinociceptive and anti-inflammatory effect of Crinum asiaticum bulb extract Asian J Pharm Clin Res, 2011 4(3): p 34-37 18 Asmawi, M., et al., In vivo antinociceptive activity of leaf extract of Crinum asiaticum and phytochemical analysis of the bioactive fractions Int J Pharmacol, 2011 7: p 125-129 Çitoğ , G 19 , t a , Evaluation of analgesic, anti-inflammatory and hepatoprotective effects of lycorine from Sternbergia fisheriana (Herbert) Rupr Fitoterapia, 2012 83(1): p 81-87 20 Likhitwitayawuid, K., et al., Cytotoxic and antimalarial alkaloids from the bulbs of Crinum amabile Journal of Natural Products, 1993 56(8): p 1331-1338 21 Santos, A.R., et al., Antinociceptive properties of steroids isolated from Phyllanthus corcovadensis in mice Planta medica, 1995 61(04): p 329-332 22 Gomes, A.Y.S., et al., Mechanism involved in the spasmolytic effect of a mixture of two triterpenes, cycloartenol and cycloeucalenol, isolated from Herissanthia tiubae in the guinea-pig ileum Planta medica, 2005 71(11): p 10251029 WEBSIDE 23 http://ecolandscape.vn/tag/crinum-asiaticum-l/ PH L C PH L C KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH THÀNH PHẦN NHÓM CHỨC TRONG CÁC CAO PHÂN ĐOẠN TÁCH TỪ TỔNG CAO ETANHOL CỦA RỄ ĐẠI ƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG PHỤ LỤC 1.1 Kết định tính nhóm chất cao Hexane tách từ tổng cao Ethanol rễ Đại Tướng Quân hoa trắng NHÓM CHỨC RỄ CÂY ĐẠ TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO HEXANE THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayer Wagner Dragendoiff Alkaloid Mẫu thử không tượng (-) H2SO4 đậ đặc Mẫu thử xuất kết Mẫu thử xuất kết tủa đỏ nâu.(++) tủa cam (++) 1% AlCl3/C2H5OH 1% NaOH/ C2H5OH Mẫu thử không phản ứng (-) Mẫu thử không phản ứng (-) Flavonoid Mẫu thử chuyển sang mà vàng đậm.(++) Salkowski Rosenthaler Mẫu thử khơng có tượng (-) Mẫu thử chuyển sang màu vàng.(+) Steroid Keller- Killiani Tollens Phenol- H2SO4 Mẫu thử bị đục màu.(+) Mẫu thử chia hai lớp.(++) Bortrager 5% FeCl3/ H2O Mẫu thử chia hai lớp.(+) 1% Vanilin+ HCl đặc Mẫu thử chuyển sang mà vàng đục (+) Mẫu thử chuyển sang màu cam.(++) Mẫu thử bị đục màu.(+) Gelatin mặn Stiasny 5% FeCl3/ H2O Mẫu thử bị đục màu.(+) Mẫu thử bị đục màu.(+) Mẫu thử chuyển sang màu cam (++) Glycosid Phenol Tannin Tollen H2SO4 đậ đặc, to Sesquitepen - Lacton Mẫu thử xuất lớp tráng bạc mỏng bám thành ng (+) Mẫu thử có màu vàng trong.(+) PHỤ LỤC 1.2 Kết định tính nhóm chất cao Dichlorometanetách từ tổng cao Ethanol rễ Đại Tướng Quân hoa trắng RỄ CÂY ĐẠ TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO NHÓM CHỨC DICHLOROMETANE THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayer Wagner Dragendoiff Mẫu thử xuất Mẫu thử xuất Mẫu thử xuất kết màu xanh (+) kết tủa đỏ.(+++) tủa cam (++) Alkaloid H2SO4 đậ đặc 1% AlCl3/ C2H5OH 1% NaOH/ C2H5OH Flavonoid Mẫu thử không phản Mẫu thử không phản ứng thu c thử (-) ứng thu c thử (-) Salkowski Mẫu thử đậm màu (+) Rosenthaler Steroid Mẫu thử tượng (-) Mẫu thử chuyển sang màu vàng đục (+) Keller- Killiani Tollens Phenol- H2SO4 Mẫu thử đục màu (+) Mẫu thử chia hai lớp (++) Bortrager 5% FeCl3/ H2O Mẫu thử chia hai lớp (+) 1% Vanilin+ HCl đặc Mẫu thử xuất trầm cam (+) Gelatin mặn Mẫu thử đậm màu.(++) Stiasny Glycosid Phenol Mẫu thử nhạt màu.(+) 5% FeCl3/ H2O Tannin Mẫu thử nhạt màu.(+) Tollen Mẫu thử nhạt màu.(+) Mẫu thử chuyển màu vàng nâu (++) H2SO4 đậ đặc, to Sesquitepen - Lacton Mẫu thử xuất lớp tráng bạc mỏng bám thành ng (+) Mẫu thử đục mà (+) PHỤ LỤC 1.3 Kết định tính nhóm chất cao Ethyl Acetate tách từ tổng cao Ethanol rễ Đại Tướng Quân hoa trắng RỄ CÂY ĐẠ TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO NHÓM ETHYL ACETATE CHỨC THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayer Wagner Dragendoiff Mẫu thử Mẫu thử xuất Mẫu thử xuất kết tượng (-) kết tủa đỏ (++) tủa cam (++) Alkaloid H2SO4 đậ đặc 1% AlCl3/ C2H5OH 1% NaOH/ C2H5OH Flavonoid Mẫu thử khơng có Mẫu thử khơng có Mẫu thử đậm màu tượng (-) tượng (-) (+) Salkowski Rosenthaler Steroid Mẫu thử khơng có tượng (-) Mẫu thử chuyển sang màu vàng đục (+) Keller- Killiani Tollens Phenol- H2SO4 Không tượng.(-) Mẫu thử chia hai lớp (+) Mẫu thử chia hai lớp.(+) Bortrager 5% FeCl3/ H2O 1% Vanilin+ HCl đặc Mẫu thử xuất trầm cam (+) Mẫu thử chuyển màu vàng lục.(++) Mẫu thử nhạt màu.(+) Gelatin mặn Stiasny 5% FeCl3/H2O Mẫu thử nhạt màu.(+) Mẫu thử nhạt màu.(+) Mẫu thử xuất trầm vàng (++) Glycosid Phenol Tannin Tollen H2SO4 đậ đặc, to Sesquitepen Lacton Mẫu thử xuất lớp tráng bạc mỏng bám thành ng (+) Mẫu thử khơng có tượng.(-) PHỤ LỤC 1.4 Kết định tính nhóm chất cao Nước tách từ tổng cao Ethanol rễ Đại Tướng Quân hoa trắng NHÓM CHỨC RỄ CÂY ĐẠ TƯỚNG QUÂN HOA TRẮNG/CAO NƯỚC THUỐC THỬ THUỐC THỬ THUỐC THỬ Mayer Wagner Dragendoiff Mẫu thử xuất kết Mẫu thử xuất Mẫu thử xuất tủa đỏ (++) kết tủa đỏ.(+++) kết tủa cam.(+++) 1% AlCl3/ 1% NaOH/ C2H5OH C2H5OH Mẫu thử xuất Mẫu thử xuất trầm đỏ (++) Alkaloid H2SO4 đậ đặc Flavonoid Mẫu thử đục màu (+) trầm đỏ (+) Salkowski Rosenthaler Mẫu thử khơng có tượng.(-) Mẫu thử chuyển sang màu vàng đục (+) Steroid Keller- Killiani Tollens Phenol- H2SO4 Mẫu thử đục màu (+) Mẫu thử chia hai lớp (++) Mẫu thử đục màu (+) Bortrager 5% FeCl3/ H2O 1% Vanilin+ HCl đặc Mẫu thử chuyển mà vàng đục.(++) Mẫu thử chuyển màu cam đục.(+++) Mẫu thử đục màu (+) Gelatin mặn Stiasny 5% FeCl3/ H2O Mẫu thử đục màu.(+) Mẫu thử nhạt màu.(+) Mẫu thử chuyển màu cam đục (++) Glycosid Phenol Tannin Tollen H2SO4 đậ đặc, to Sesquitepen Lacton Mẫu thử xuất lớp tráng bạc mỏng bám thành ng (+) Mẫu thử khơng có tượng.(-) PH L C KẾT QUẢ SẮC KÝ GC-MS CỦA CÁC MẪU NGHIÊN CỨU PHỤ LỤC 2.1 Kết sắc ký GC-MS cao Hexane rễ Đại Tướng Quân hoa trắng PHỤ LỤC 2.2 Kết sắc ký GC - MS cao Dichloromethane rễ Đại Tướng Quân hoa trắng PHỤ LỤC 2.3 Kết sắc ký GC - MS cao Ethyl Acetate rễ Đại Tướng Quân hoa trắng PHỤ LỤC 2.4 Kết sắc ký GC - MS cao Nước rễ Đại Tướng Quân hoa trắng PHỤ LỤC 2.5 Kết sắc ký GC - MS phân đoạn PĐI.2 rễ Đại Tướng Quân hoa trắng