Nghiên cứu sự ô nhiễm của một số chỉ tiêu vi khuẩn ở nước uống đóng chai trên địa bàn thành phố thái nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TẠ PHƢƠNG THUỲ NGHIÊN CỨU SỰ Ô NHIỄM CỦA MỘT SỐ CHỈ TIÊU VI KHUẨN Ở NƢỚC UỐNG ĐÓNG CHAI TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ THÁI NGUYÊN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên, năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TẠ PHƢƠNG THUỲ NGHIÊN CỨU SỰ Ô NHIỄM CỦA MỘT SỐ CHỈ TIÊU VI KHUẨN Ở NƢỚC UỐNG ĐÓNG CHAI TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ THÁI NGUYÊN CHUYÊN NGÀNH: SINH HỌC THỰC NGHIỆM MÃ SỐ: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Đặng Xuân Bình Thái Nguyên, năm 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn thực Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực Một số kết công bố TS Đặng Xn Bình, phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Các tài liệu tham khảo, trích dẫn ghi tên tác giả tên tài liệu trích dẫn phần tài liệu tham khảo Tác giả luận văn Tạ Phƣơng Thùy Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Đặng Xuân Bình tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Bộ môn Công nghệ vi sinh, Viện Khoa học Sự sống - Đại học Thái Nguyên cho phép tạo điều kiện cho tơi q trình hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Khoa Sau đại học, Trường Đại học Sư Phạm Thái Nguyên, thầy cán Khoa Sinh-KTNN, tồn thể bạn bè đồng nghiệp tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quan, trường học gia đình địa bàn thành phố Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tác giả luận văn Tạ Phƣơng Thùy Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nước đóng chai 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Một số yêu cầu kỹ thuật nước khoáng thiên nhiên đóng chai theo TCVN 6213: 2004 1.2 Thực trạng ô nhiễm số tiêu vi khuẩn nước uống đóng chai (NUĐC) 1.2.1 Thực trạng ô nhiễm giới 1.2.2 Thực trạng ô nhiễm nước 1.3 Tình hình nghiên cứu ô nhiễm số tiêu vi khuẩn nước đóng chai 12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 12 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 14 1.4 Ô nhiễm nước vi khuẩn 16 1.4.1 Ô nhiễm vi khuẩn từ động vật 16 1.4.2 Ô nhiễm vi khuẩn từ nguồn nước (nước ngầm, nước bề mặt) 16 1.4.3 Ơ nhiễm vi khuẩn từ khơng khí 17 1.4.4 Ơ nhiễm vi khuẩn q trình xử lý, sản xuất lưu thông bảo quản 17 1.5 Ý nghĩa ô nhiễm nước tiêu Coliform 18 1.6 Vai trò vi khuẩn E.coli gây nhiễm nước 19 1.6.1 Hình thái tính chất bắt màu 19 1.6.2 Tính chất ni cấy 19 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.6.3 Sức đề kháng 21 1.6.4 Tính gây bệnh 21 1.7 Một số hiểu biết ngộ độc thực phẩm E coli gây 1.8 Vai trị vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa gây nhiễm nước 22 1.8.1 Hình thái tính chất bắt màu 24 1.8.2 Tính chất ni cấy 24 1.8.3 Sức đề kháng 24 1.8.4 Khả gây bệnh 25 23 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 26 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 26 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 26 2.2 Vật liệu nghiên cứu 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Phương pháp điều tra tình hình sản xuất phân phối sản phẩm nước uống đóng chai địa bàn TP Thái Nguyên 27 2.3.2 Phương pháp thu mẫu nước để phân tích vi khuẩn 27 2.3.3 Phương pháp xác định tiêu Coliform 27 2.3.4 Phương pháp xác định tiêu E Coli (fecal Coliform) 29 2.3.5 Phương pháp xác định tiêu P Aeruginosa 29 2.3.6 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hố học chủng E coli phân lập 29 2.3.7 Phương pháp xác định đặc tính sinh vật, hố học chủng P aeruginosa phân lập 32 2.3.8 Phương pháp xác định độc lực chủng vi khuẩn phân lập Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên 32 http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.9 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn phân lập 33 2.3.10 Phương pháp xử lý số liệu 34 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Tình hình sử dụng sản phẩm nước uống đóng chai địa bàn TP Thái Nguyên 37 3.2 Xác định tiêu Coliform 40 3.3 Xác định tiêu E coli 41 3.4 Xác định tiêu P aeruginosa 43 3.5 Xác định tỷ lệ nhiễm loại vi khuẩn mẫu nước 44 3.6 So sánh tỷ lệ nhiễm loại vi khuẩn mẫu nước uống đóng chai 45 3.7 Xác định thành phần loại vi khuẩn thuộc nhóm Coliform nhiễm nước uống đóng chai 48 3.8 So sánh đặc tính sinh vật học chủng vi khuẩn thuộc nhóm Coliform 50 3.9 Giám định đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn E coli 52 3.10 Giám định đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn P aeruginosa 53 3.11 Kết quả thử khả sản sinh độc tố đường ruột củ a vi khuẩn E coli phân lập được 54 3.12 Giám định yếu tố bám dính chủng E coli phân lập được 55 3.13 Xác định độc lực vi khuẩn E coli phân lập 56 3.14 Xác định độc lực vi khuẩn P aeruginosa phân lập 58 3.15 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn E.coli phân lập 59 3.16 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn chủng vi khuẩn P aeruginosa phân lập 60 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 Kết luận 62 Đề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Tài liệu tiếng việt 64 Tài liệu tiếng nước 66 PHỤ LỤC ẢNH 69 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết điều tra tình hình sử dụng sản phẩm NUĐC địa bàn TP Thái Nguyên Bảng 3.2 37 Kết điều tra tình hình sản xuất phân phối sản phẩm nước uống đóng chai địa bàn TP Thái Nguyên Bảng 3.3 Kết xác định tiêu Coliform mẫu nước uống đóng chai Bảng 3.4 41 Kết xác định tiêu E coli mẫu nước uống đóng chai Bảng 3.5 42 Kết xác định tiêu P aeruginosa mẫu nước uống đóng chai Bảng 3.6 43 Kết xác định tần xuất nhiễm loại vi khuẩn Coliform, E coli P aeruginosa Bảng 3.7 45 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Coliform, E coli, P aeruginosa mẫu nước uống đóng chai Bảng 3.8 46 Kết xác định thành phần loại vi khuẩn thuộc nhóm Coliform Bảng 3.9 39 49 Kết so sánh đặc tính sinh vật hóa học chủng vi khuẩn thuộc nhóm Coliform 51 Bảng 3.10 Kết giám định đặc tính sinh học vi khuẩn E coli 52 Bảng 3.11 Kết giám định đặc tính sinh học vi khuẩn P aeruginosa Bảng 3.12 53 Kết quả thử khả sản sinh độc tố đường ruột của vi khuẩn E coli phân lập được Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên 54 http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 3.13 Kết quả giám định yếu tố bám dính chủng E.coli phân lập được 56 Bảng 3.14 Kết thử độc lực vi khuẩn E coli phân lập 57 Bảng 3.15 Kết thử độc lực vi khuẩn P aeruginosa phân lập Bảng 3.16 58 Kết quả thử tí nh mẫn cảm với kháng sinh và hóa dược của vi khuẩn E coli phân lập được Bảng 3.17 60 Kết quả thử tí nh mẫn cảm với kháng sinh và hóa dược của vi khuẩn Pseudomonas phân lập được Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên 61 http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 Bảng 3.14 Kết thử độc lực vi khuẩn E coli phân lập đƣợc Ký Số Liều tiêm Số hiệu lượng xoang chuột sản chủng bụng thử phẩm (n) (ml/con) (con) SP 0,2 BT NS STT Theo dõi cḥt thí nghiệm chết sau công cường độc (con) lệ chết 24 32 48 giờ giờ ngày 1 0 50,0 0,2 0 0 25,0 0,2 0 75,0 VT 0,2 0 25,0 NK 0,2 1 0 50,0 OP 0,2 1 50,0 VC 0,2 0 75,0 BN 0,2 0 75,0 32 53,1 Tổng Tỷ (%) Theo kết bảng 3.14, cho thấy sau ngày tỷ lệ chuột chết chiếm 53,1%, điều chứng tỏ chủng vi khuẩn E coli lựa chọn thử độc lực gây chết chuột chủng có độc lực có khả gây bệnh Vì vậy, người sử dụng nước uống nhiễm E coli gây đau bụng, phân lỏng, nhiều lần ngày, thân nhiệt tăng (có trường hợp sốt cao), người mệt mỏi, chân tay co quắp, đổ mồ hôi, bệnh kéo dài vài ngày khỏi.[9], [15], [17] Những chuột chết mổ khám quan sát bệnh tích thấy: Viêm ruột, ruột đầy xuất huyết, gan, lách đen, sưng, nhão Phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm (tim, gan, lách…) chuột chết tìm thấy E coli Hai chuột đối chứng âm tính (2 chuột tiêm dung dịch BHI) nuôi riêng Theo dõi ngày chuột sống bình thường Chúng tơi tiến hành mổ khám kiểm tra Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 khơng thấy bệnh tích, lấy bệnh phẩm ni cấy phân lập vi khuẩn khơng tìm thấy vi khuẩn E coli Kết nghiên cứu phù hợp với [22] Như vậy, chủng vi khuẩn E coli phân lập có khả gây bệnh 3.14 Xác định độc lực vi khuẩn P aeruginosa phân lập đƣợc Tiến hành thử độc lực hai chủng vi khuẩn P aeruginosa phân lập chuột bạch giống thử độc lực E coli Kết trình bày bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết thử độc lực vi khuẩn P aeruginosa phân lập đƣợc Liều Ký Số hiệu lượng sản chủng phẩm (n) SP 0,2 BT NS STT tiêm xoang bụng Số chuột thử Theo dõi cḥt thí nghiệm chết sau cơng cường độc Tỷ lệ (con) chết 24 32 giờ giờ ngày 75,0 0,2 1 0 50,0 0,2 0 75,0 VT 0,2 0 50,0 NK 0,2 1 0 75,0 OP 0,2 1 50,0 VC 0,2 0 75,0 BN 0,2 0 75,0 32 6 65,6 (ml/con) Tổng 48 (%) (con) Số liệu bảng 3.15 cho thấy: Sau ngày, tỷ lệ chuột thí nghiệm chết tới 65,6% Tỷ lệ chuột thí nghiệm chết thấp (50%) BT, VT, OP; cao (75%) NS, NK, VC, BN Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 So sánh với kết M E Z D Silva [33] nghiên cứu nước đóng chai loại 21 lít cho thấy tỷ lệ chuột thí nghiệm chết 76,6%, mẫu nước máy tỷ lệ cịn cao nhiều (95%) Như vậy, chủng vi khuẩn P aeruginosa lựa chọn thử độc lực gây chết chuột chủng có độc lực gây nguy hiểm cho người sử dụng 3.15 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dƣợc chủng vi khuẩn E coli phân lập đƣợc Trong năm gần đây, nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh tượng kháng kháng sinh chủng vi khuẩn đường ruột ngày tăng, dẫn đến tượng nhờn thuốc Xác định tính mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập nhằm chọn loại kháng sinh có tác dụng điều trị bệnh đạt hiệu cao Chúng chọn chủng vi khuẩn E coli phân lập để thử kháng sinh đồ Kết xác định khả mẫn cảm với kháng sinh trình bày bảng 3.16 Qua bảng 3.16 cho thấy: Các chủng vi khuẩn E coli phân lập mẫn cảm với kháng sinh: Ceftazidime (Ce) (66,6%), Norfloxacin (No) (50,0%), Enrofloxacin (En) (66,6%) Kháng mạnh với loại kháng sinh: Kanamycin (Kn) (66,6%), Neomycin (N50) (50,0%) Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu Naijmul Hasan (2010), Sussman M (1985), S C Edberg (1996) Như vậy, điều trị bệnh tiêu chảy vi khuẩn E coli gây sử dụng loại kháng sinh: Ceftazidime, Norfloxacin, Enrofloxacin Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 Bảng 3.16 Kết quả thƣ̉ tí nh mẫn cảm với kháng sinh và hóa dƣợc của vi khuẩn E coli phân lập đƣợc Stt Tên kháng sinh & hóa dược Số chủng thử 10 Ceftazidime Colistin Gentamycin Kanamycin Neomycin Norfloxacin Spectinomycin Sulfamethoxazole Tetracyclin Enrofloxacin 6 6 6 6 6 Đánh giá mức độ mẫn cảm Rất mẫn Mẫn cảm Kháng cảm trung bì nh thuốc + % + % + % 66,6 33,3 0 33,3 50,0 16,6 33,3 66,6 0 0 33,3 66,6 16,6 33,3 50,0 50,0 33,3 16,6 16,6 66,6 16,6 0 66,6 33,3 0 83,3 16,6 66,6 33,3 0 3.16 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dƣợc chủng vi khuẩn Pseudomonas phân lập đƣợc Pseudomonas vi khuẩn gây bệnh người động vật Khi xâm nhập vào thể làm suy giảm hệ miễn dịch người, gây nhiễm trùng đường hô hấp, viêm phổi, nhiễm trùng đường tiết niệu, nhiễm trùng máu Nhiều nghiên cứu gần cho thấy chúng nguy hiểm có khả kháng thuốc cao [34], [39] Chúng chọn chủng vi khuẩn Pseudomonas phân lập để thử kháng sinh đồ nhằm xác định số loại kháng sinh đặc hiệu để trị bệnh Pseudomonas gây nên Kết trình bày bảng 3.17 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 Bảng 3.17 Kết quả thƣ̉ tí nh mẫn cảm với kháng sinh và hóa dƣợc vi khuẩn Pseudomonas phân lập đƣợc Stt Tên kháng sinh & hóa dược Sớ chủng thử 10 Ceftazidime Colistin Gentamycin Kanamycin Neomycin Norfloxacin Spectinomycin Sulfamethoxazole Tetracyclin Enrofloxacin 3 3 3 3 3 Đánh giá mức độ mẫn cảm Rất mẫn Mẫn cảm Kháng cảm trung bì nh thuốc + % + % + % 100 0 0 66,6 0 33,3 33,3 66,6 0 0 33,3 66,6 33,3 0 66,6 33,3 66,6 0 0 66,6 33,3 0 33,3 66,6 0 33,3 66,6 66,6 33,3 0 Theo bảng 3.17 cho thấy: Các chủng vi khuẩn Pseudomonas phân lập mẫn cảm với kháng sinh: Ceftazidime (100%), Colistin (66,6%), Enrofloxacin (66,6%) Kháng mạnh với loại kháng sinh như: Kanamycin (66,6%), Neomycin (66,6%), Sulfamethoxazole (66,6%), Tetracyclin (66,6%) Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Naijmul Hasan et al (2010) [36], Nelson Fok et al (2005) [38], Papapetropoulou M (1994) [39], S C Edberg (1996) [42] Qua kết trên, chúng tơi kết luận sử dụng loại kháng sinh: Ceftazidime, Colistin, Enrofloxacin; đặc biệt Ceftazidime điều trị bệnh Pseudomonas gây Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN Khảo sát 226 địa điểm, tỷ lệ đơn vị sử dụng NUĐC: - Trường học quan, doanh nghiệp : 90%-100% - Gia đình: 28,67% Lượng tiêu thụ trung bình: - Trường học: 526 ± 36,25 bình/ngày - Cơ quan, doanh nghiệp: 2753±69,46 bình/ngày - Gia đình: 19±1,93 bình/ngày Tỷ lệ đơn vị sử dụng NUĐC khơng có đăng kí chất lượng ATVSTP ( 62,28%) Có 75,0% - 89,3% mẫu NUĐC không đạt quy định kỹ thuật tiêu Coliform 69,2% - 78,6% mẫu nước không đạt tiêu chuẩn kỹ thuật tiêu E coli 3,7% - 13,0% mẫu NUĐC không đạt tiêu chuẩn kỹ thuật tiêu P aeruginosa 68,9% - 85,7% mẫu nước nhiễm hai loại vi khuẩn Coliform E coli; 3,7% - 8,3% mẫu nước nhiễm hai loại vi khuẩn Coliform P aeruginosa; 3,1% - 8,3% mẫu nước nhiễm đồng thời loại vi khuẩn Coliform, E coli P aeruginosa Tỷ lệ mẫu nước uống nhiễm Coliform E coli thường tập trung từ tháng đến tháng 10; có chiều hướng giảm từ tháng 11 đến tháng năm sau (p < 0,05); tháng tỷ lệ nhiễm Coliform lại có xu hướng tăng Kết không rõ rệt mẫu nước nhiễm P aeruginosa Tỷ lệ nhiễm loại vi khuẩn thuộc nhóm Coliform: 75,0 % 89,3% Trong đó: Citrobacter: 9,0% - 36,8%; E coli: 85,7% - 100%; Enterobacter 8,0% - 22,2%; Klebsiella: 4,7% - 22,2% loại vi khuẩn Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 khác: 4,0% - 26,3% Các chủng vi khuẩn phân lập có đặc tính sinh vật hóa học đặc trưng, điển hình giống, lồi; có độc lực với chuột thí nghiệm: E coli gây chết chuột tới 53,1%, P aeruginosa gây chết 65,6% chuột thí nghiệm Các chủng vi khuẩn E coli phân lập mẫn cảm với kháng sinh: Ceftazidime (Ce) (66,6%), Norfloxacin (No) (50,0%), Enrofloxacin (En) (66,6%) Kháng mạnh với loại kháng sinh: Kanamycin (Kn) (66,6%), Neomycin (N50) (50,0%) Các chủng vi khuẩn Pseudomonas phân lập mẫn cảm với kháng sinh: Ceftazidime (Ce) (100%), Colistin (Co) (66,6%), Enrofloxacin (En) (66,6%) Kháng mạnh với kháng sinh: Kanamycin (Kn) (66,6%), Neomycin (N50) (66,6%), Sulfamethoxazole (S3) (66,6%) ĐỀ NGHỊ - Cần có đề tài tiếp tục nghiên cứu sâu tình hình nhiễm vi sinh NUĐC về: số tiêu vi sinh khác; loại nước đóng chai, đóng bình khác bày bán thị trường - Mở rộng quy mơ khảo sát để có kết khái qt Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ Y tế (2009), Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia chất lượng nước ăn uống QCVN 01: 2009/BYT Bộ Y tế (2009), Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia chất lượng nước sinh hoạt QCVN 02: 2009/BYT Bộ Khoa học Công nghệ (2004), Tiêu chuẩn Việt Nam – Nước khoáng thiên nhiên đóng chai TCVN 6213: 2004 Bộ Khoa học Công nghệ (1996), TCVN 6187 - 1996 (ISO 9308/1 : 1990) Chất lượng nước - Phát đếm vi khuẩn Coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt Escherichia coli giải định Phần 1: Phương pháp màng lọc Bộ Khoa học Công nghệ (2000), TCVN 5652-78, Nước uống Phương pháp lấy mẫu, bảo quản vận chuyển mẫu Bộ Khoa học Công nghệ (1988), Xác định Pseudomonas aeruginosa ISO 8360/2: 1988 NF T90-421 Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượn, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty (1995), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật, tập I, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ (1999), Bệnh đường tiêu hố lợn Nxb Nơng nghiệp - Hà Nội Nguyễn Thị Hiền, Phan Thị Kim, Trương Thi Hoà, Lê Thị Lan Chi (2003), Vi sinh vật nhiễm tạp lương thực thực phẩm, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 10 Nguyễn Thị Kim Lan, Nguyễn Văn Quang (2000), Giáo trình kiểm tra vệ sinh thú y, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 66 11 Chu văn Mẫn, Đào Hữu Hồ (2002), Giáo trình Thống kê Sinh học, NXB ĐHQG Hà Nội 12 Lương Đức Phẩm (2000), Vi sinh vật học an toàn vệ sinh thực phẩm, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 13 Nguyễn Vĩnh Phước (1977), Kiểm nghiệm vi khuẩn đường ruột Vi sinh vật học thú y, tập I Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 14 Nguyễn Vĩnh Phước (1970), Vi sinh vật thú y tập 2, Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 15 Nguyễn Vĩnh Phước (1976), Vi sinh vật thú y tập 3, Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 16 Lê Văn Tạo cs (1993), “Nghiên cứu chế tạo vaccine E.coli uống phòng cho bệnh phân trắng lợn con”, Tạp chí khoa học Nơng nghiệp Công nghệ thực phẩm, số trang 13 - 15 17 Nguyễn Như Thanh (1997), Vi sinh vật thú y, Nxb Nơng nghiệp 18 Trịnh Văn Thịnh (1964), Giáo trình bệnh nội khoa bệnh ký sinh trùng thú y, Nxb Nơng thơn, Hà Nội 19 Hồng Thu Thuỷ (1991), E.coli, Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh vật học, Nhà xuất Văn hóa, trang 88 - 90 Tài liệu tiếng nƣớc 20 Acres (1985), "Enterotoxingenic Escherichia coli infections in newborn calves", A review, Journal of dairy science 68 (1), pp 229256 21 Bergeys (1957), Manual of Determinative bacteriology-9, London, Bailiere, Tindll and cox, Itd, pp 179-180 22 Chan, Zalifah, Norrakiah (2007), “Microbiological and Physicochemical quality of Drinking water”, The Malaysian Journal of Analytical Sciences, Vol 11 No 2, p 414-420 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 67 23 De Victorica J, Galván M (2001), Pseudomonas aeruginosa as an indicator of health risk in water for human consumption, Water Science and Technology, 43:49-52 24 Gamal F Gad, Ramadan A El-Domany, Sahar Zaki (2007), “Characterization of Pseudomonas aeruginosa isolated from clinical and environmental samples in Minia, Egypt: prevalence, antibiogram and resistance mechanisms”, Journal of Antimicrobial Chemotherapy, Vol 60, pp 1010-1017 25 Gholam Resa (2010), “Bacteriological Evaluation of Bottled Water from Domestic Brands in Tehran Markets, Iran”, World Applied Sciences journal 8(3): 274-278 26 Hardalo, Edberg (1997), Pseudomonas aeruginosa: Assessment of risk from drinking – water, Critical Reviews in Microbiology, 23:47 – 75 27 Health protection agency (2004), Direct enumeration of Escherichia coli by the Most Probable Number (MPN) technique, National Standard Method F 20 Issue 28 Health Protection Agency (2004), Enumeration of coliforms and presumptive Escherichia Coli by the Most Probale Number (MPN) technique, National Standard Method D issue 29 Hernandez Duquino H, Rosenberg FA (1987), Antibiotic – resistant Pseudomonas in bottled drinking water, U.S National Library of Medicine 30 H Nsanze, Z Babarinde, H Al Kohaly (1999), “Microbiological quality of bottled drinking water in the UAE and the effect of storage at different temperatures”, Environment international, Volume 25, Issue 1, p 53-57 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 68 31 Kristen Catlin (2002), Biochemical test media for lab unknown identification, American Society for Microbiology, Washington, D.C.20036 32 Marie Eliza Zamberlan da Silva (2007), Comparision of the bacteriological quality of tap water and bottled mineral water, Int J Hyg Environ Health 33 Marie Eliza Zamberlan da Silva, Filho (2008), Characterisation of potential virulence markers in Pseudomonas aeruginosa isolated from drinking water, Antonic van Leeuwenhoek, Brazil 34 Mohammad Hasanuzzaman, Kathryn M Umadhay-briones Szilvia M Zsiros (2004), “Isolation, identification, and characterization of a novel, oil-degrading bacterium, Pseudomonas aeruginosa T1”, Current microbiology, Vol 49, pp 108-114 35 M.R Khan (1998), M.L Saha and A.H.M.G Kibria, “A bacteriological profile of bottled water sold in Bangladesh”, World journal of Microbiology and Biotechnology, Vol 8, pp 544 – 545 36 Naijmul Hasan et al (2010), Bacterial indicators of rick of disease from drinking water,Int J Food Microbiol, 92(3), pp.41-47 37 Nazih Daood (2009), “Risk Assessment of Heterotrophic Bacteria from Bottled Mineral Water Consumed in Syria”, Damascus University Journal for basic sciences, Vol 25, No 38 Nelson Fok, M.Sc., CIPHI (C) (2005), Pseudomonas aeruginosa as a water borne gastroenteritis pathogen, Enviromental Public Health 39 Papapetropoulou M (1994), “Occurrence and antibiotic-resistance of Pseudomonas species isolated from drinking water in southern Greece”, J Chemother, 6(2): 111-6, Greece Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 69 40 Quinn, Carter, Markey, Carter (1994) Clinical Veterinary Microbiology Wolfe publishing Mosby-Year Book Europe Limited 41 Sussman M (1985), The Virulence of Escherichia coli, Academic press, London 42 S C Edberg, P Gallo, C Kontnick (1996), “Analysis of the virulence characteristics of bacteria Isolated from Bottled, Water Cooler, and Tap water”, Microbial Ecology in Health and Disease, Vol.9, No 2, p 67-77 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 70 PHỤ LỤC ẢNH Hình 1: Xác định Coliform Hình 2: Hình thái tính chất bắt màu Gram âm E coli Hình 3: E coli mơi trường Macconkey agar Hình 4: E coli Triple Sugar Iron agar Hình 5: E coli dung huyết thạch máu Hình 6: Chuột thí nghiệm Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn 71 Hình 7: Chuột thí nghiệm mổ khám bệnh tích Hình 9: Hình thái tính chất bắt màu Gram âm P aeruginosa Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên Hình 8: Kết thử độc tố đường ruột vi khuẩn E coli da thỏ Hình 10: Indole dương tính http://www.lrc-tnu.edu.vn 72 Hình 11: Pseudomonas mơi trường thạch máu Hình 12: Thử kháng sinh đồ Hình 13: Phản ứng Catalase dương tính (sủi bọt mạnh) Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn