Xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu luận văn thạc sĩ nông nghiệp

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HẰNG XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM THỊT ĐÔNG LẠNH NHẬP KHẨU Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN ĐẠO HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Hồng Ngân tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y Cộng đồng, Khoa Thú y- Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể ban lãnh đạo, cán viên chức quan Thú y vùng giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Xác định giá trị sử dụng phương pháp 2.1.1 Một số khái niệm 2.1.2 Các thông số kỹ thuật thẩm định, xác nhận giá trị sử dụng phương pháp 2.2 Một số cách tiếp cận để xác định giá trị sử dụng phương pháp từ tổ chức có uy tín 2.3 Luật an toàn thực phẩm quy phạm pháp luật qui định giới hạn mức độ ô nhiễm vi sinh vật thịt, sản phẩm thịt 2.3.1 Trên giới 2.3.2 Tại Việt Nam 11 2.4 Hệ vi sinh vật gây vệ sinh, an toàn thịt sản phẩm thịt 12 2.4.1 Tổng số Vi sinh vật hiếu khí 12 2.4.2 E.coli 13 2.4.3 Salmonella 14 2.5 Ngộ độc thức ăn thịt nhiễm khuẩn 15 2.5.1 Ngộ độc nhiễm bệnh vi khuẩn 15 iii 2.5.2 Ngộ độc độc tính vi khuẩn 17 2.6 Các phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật thịt sản phẩm thịt 18 2.6.1 Một số phương pháp định lượng tổng số VSVHK 18 2.6.2 Một số phương pháp định lượng E.coli 19 2.6.3 Phương pháp phát Salmonella 20 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 21 3.1 Đối tượng, địa điểm nghiên cứu 21 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 21 3.2 Nội dung nghiên cứu 21 3.2.1 Xác định giá trị sử dụng phương pháp 21 3.2.2 Ứng dụng Kiểm nghiệm số mẫu thịt đông lạnh nhập 21 3.3 Nguyên liệu 21 3.3.1 Chủng chuẩn vi sinh vật 21 3.3.2 Các mâũ thịt đông lạnh: 22 3.3.3 Các thiết bị phịng thí nghiệm 23 3.3.4 Môi trường ni cấy vi sinh vật 22 3.4 Phương pháp nghiên cứu 23 3.4.1 Phương pháp thẩm định tiêu chuẩn 23 3.4.2 Phương pháp kiểm nghiệm số tiêu vi sinh vật thịt 27 3.4.3 Phương pháp phân tích số liệu 27 Phần Kết thảo luận 30 4.1 Kết thẩm định phương pháp 30 4.1.1 Kết đánh giá hiệu suất môi trường sử dụng thẩm định phương pháp 30 4.1.2 Kết kiểm tra mẫu đánh giá 30 4.1.3 Kết kiểm tra đặc tính sinh hóa, đặc tính ni cấy chủng chuẩn 31 4.1.4 Kết xác định nồng độ vi khuẩn gây nhiễm 34 4.1.5 Kết thẩm định TCVN 9977:2013 35 4.1.6 Kết thẩm định TCVN 9975: 2013 38 4.1.7 Kết xác nhận giá trị sử dụng TCCS 03: 2016/TYV2-CĐ 39 4.2 Kết kiểm nghiệm số mẫu thịt đông lạnh nhập 44 4.2.1 Kết kiểm nghiệm mẫu thịt bị đơng lạnh 46 iv 4.2.2 Kết kiểm nghiệm mẫu đùi gà 47 4.2.3 Kết kiểm nghiệm mẫu thịt gà nguyên 47 Phần Kết luận kiến nghị 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Kiến nghị 51 Tài liệu tham khảo 52 Phụ lục 57 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AOAC (Association of Official Analytical Chemists) : Hiệp hội phân tích hố phân tích thức ATCC (American Type Culture Collection) : Hệ thống chủng chuẩn Hoa Kỳ ATTP : An toàn thực phẩm BYT : Bộ Y Tế CFU (Colony Forming Unit) : Đơn vị hình thành khuẩn lạc E coli : Escherichia coli FAO (Food and Agriculture Organization of the : Tổ chức nông lương quốc tế United Nations) FDA (The United States Food and Drug Administration) : Cục Thực phẩm Dược Hoa Kỳ HACCP(Hazard Analysis and Critical Control Point) : Phân tích mối nguy điểm kiểm sốt tới hạn ICH (International Conference for Harmonization) : Hội thảo quốc tế đồng hoá ISO (International Organization for Standarlization) :Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế KĐBĐ : Không đảm bảo đo LOD ( Limit of Detection) : Giới hạn phát NMKL (Nordisk metodikkomite for levnedsmidler) : Ủy ban phân tích thực phẩm Bắc Âu OIE (World Organisation for Animal Health) : Tổ chức Thú y giới QCVN : Quy chuẩn Việt Nam TCCS : Tiêu chuẩn sở TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TPP (Trans-Pacific Partnership Agreement) : Hiệp định đối tác xuyên Thái Bình Dương TSVSVHK : Tổng số vi sinh vật hiếu khí WHO (World Health Organization) : Tổ chức Y tế giới VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm WTO (World Trade Organization) : Tổ chức thương mại giới vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Qui định chung Châu âu (EC) số 2073/2005 tiêu chuẩn vi sinh đối thịt sản phẩm thịt 10 Bảng 2.2 Giới hạn vi sinh vật thịt sản phẩm thịt theo QCVN 8-3/BYT 11 Bảng 3.1 Môi trường dùng để thẩm định phương pháp phân tích tiêu VSV 22 Bảng 4.1 Kết đánh giá hiệu suất môi trường 30 Bảng 4.2 Kết xét nghiệm mẫu đánh giá 31 Bảng 4.3 Kết kiểm tra, so sánh đặc tính sinh hóa vi khuẩn 32 Bảng 4.4 Kết dò nồng độ vi khuẩn E.coli, Salmonella .34 Bảng 4.5 Kết độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9977:2013, TCVN 4884-2:2015 35 Bảng 4.6 Kết tính độ khơng đảm bảo đo TCVN 9977:2013 .37 Bảng 4.7 Kết độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9975:2013, TCVN 7429-2:2008 38 Bảng 4.8 Kết xác định độ không đảm bảo đo TCVN 9975:2013 39 Bảng 4.9 Kết xác định nồng độ gây nhiễm 40 Bảng 4.10 Kết Tỉ lệ Salmonella dương tính 41 Bảng 4.11 Kết xác định giới hạn phát phương pháp 41 Bảng 4.12 Kết phát Salmonella 42 Bảng 4.13 Kết so sánh tương đồng TCCS03:2016; TCVN 4884:2005 43 Bảng 4.14 Kết thực thử nghiệm thành thạo 44 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Khuẩn lạc vi khuẩn mơi trường chọn lọc đặc trưng 34 Hình 4.2 Tỉ lệ % lô mẫu kiểm nghiệm, 45 Hình 4.3 Kết định lượng tổng số VSVHK mẫu thịt bị 46 Hình 4.4 Kết định lượng tổng số VSVHK lô mẫu đùi gà 47 Hình 4.5 Kết định lượng tổng số VSVHK lô gà nguyên .48 Hình 4.6 Tỉ lệ nhiễm tổng số VSVHK mẫu kiểm nghiệm 49 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Hằng Tên luận văn: “ Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu” Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Đảm bảo kết thử nghiệm - Cung cấp số liệu cho hoạt động đánh giá công nhận phép thử - Ứng dụng kiểm nghiệm, xét nghiệm mẫu thịt đông lạnh Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thẩm định Thẩm định phương pháp theo Trần Cao Sơn 2010, Tiêu chuẩn Việt nam 9332:2012 Phương pháp kiểm nghiệm mẫu thịt + Định lượng tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013 + Định lượng E.coli theo TCVN 9975:2013 + Định tính Salmonella theo TCCS 03-2016/TYV2-CĐ Kết kết luận Kết thẩm định phương pháp định lượng Tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013: Các thông số: Độ lặp lại Sr: có giá trị 0,045-0,047 , Độ tái lặp S R có giá trị 0,033-0,038, giá trị độ khơng đảm bảo đo phương pháp Ue : 0,126 Kết thẩm định phương pháp định lượng E.coli theo TCVN 9975: 2013 Các thông số đạt độ lặp lại Sr nằm khoảng 0,029-0,033, Độ tái lặp S R có giá trị 0,032- 0,039, giá trị độ khơng đảm bảo đo phương pháp Ue: 0,098 Kết xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phát hiên Salmonella :các thông số giới hạn phát LOD: 2CFU/25g, độ nhạy Se: 95,56%, độ đặc hiệu Sp: 100%, độ xác Ac: 97,33%) Kết kiểm nghiệm mẫu thịt 94 lơ (470) mẫu thịt bị, 64 lơ (320 mẫu) thịt đùi gà, 15 lô (75 mẫu) thịt gà nguyên đông lạnh nhập xét nghiệm tiêu Tổng số vi sinh vật hiếu ix PHỤ LỤC 3:SỐ LIỆU THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.1 Kết đếm tổng số VSVHK Kết đếm tổng số VSVHK (CFU/g) Nền mẫu thịt bò PP thay Lần lặp Nền mẫu thịt gà PP Tham chiếu PP thay PP Tham chiếu Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày L1 670 610 590 570 590 510 570 450 L2 600 550 520 540 620 560 620 470 L3 640 540 550 720 650 650 650 540 L4 530 650 580 500 480 480 480 480 L5 660 650 450 460 520 480 520 460 L6 670 550 620 490 590 540 670 540 L7 640 670 550 450 550 510 580 580 L8 490 470 510 520 630 630 630 540 L9 610 590 550 530 630 610 680 560 L10 680 580 420 440 520 550 520 430 Ghi chú: PP thay thế: TCVN 9977:2013 PP tham chiếu: TCVN 4884-1:2015 63 Nền mẫu thịt gà TCVN 9977:2013 TCVN 4884-1:2015 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR 590 2.770852 510 2.7076 0.0109 0.0001193 -0.032 0.001027 0.0633 0.004 570 2.7559 450 2.6532 -0.014 0.00019 -0.047945 0.0023 0.1026623 0.01054 620 2.792392 560 2.7482 0.0325 0.0010538 0.0086 7.35E-05 0.0442 0.00195 620 2.7924 470 2.6721 0.0228 0.00052 -0.02906 0.0008 0.1202938 0.01447 650 2.812913 650 2.8129 0.053 0.0028072 0.0733 0.005373 0 650 2.8129 540 2.7324 0.0433 0.00188 0.031236 480 2.681241 480 2.6812 -0.079 0.0061919 -0.058 0.003408 0 480 2.6812 480 2.6812 -0.088 520 2.716003 480 2.6812 -0.044 0.0019296 -0.058 0.003408 0.0348 0.00121 520 2.716 460 2.6628 -0.054 0.00287 -0.0384 590 2.770852 540 2.7324 0.0109 0.0001193 -0.007 5.21E-05 0.0385 0.00148 670 2.8261 540 2.7324 0.0565 0.00319 0.031236 0.001 550 2.740363 510 2.7076 580 2.7634 580 2.7634 -0.006 3.8E-05 0.06227 0.0039 630 2.799341 630 2.7993 0.0394 0.0015532 0.0597 0.003567 630 2.799341 610 2.7853 0.0394 0.0015532 0.0457 520 2.716003 550 2.7404 -0.044 0.0019296 0.0007 5.59E-07 -0.024 0.00059 2.7599 -0.02 0.0003829 -0.032 0.001027 0.0328 0.00108 0.00209 0.001 0.0805196 0.00648 0.0004 0 0.0015 0.0532455 0.00284 0.093681 0.00878 0 0 630 2.7993 540 2.7324 0.0298 0.00089 0.031236 0.001 0.0669468 0.00448 0.014 0.0002 680 2.8325 560 2.7482 0.0629 0.00396 0.047031 0.0022 0.0843209 0.00711 520 430 2.6335 -0.054 0.00287 -0.067689 0.0046 0.0825349 0.00681 2.74 0.00196 0.04427 0.0078 -0.019916 2.716 xtb 2.77 Sr2 Sr Srpp= 5E-04 SR2 0.023 SR 0.0022 0.0472 0.0457 2.7 0.003 0.052 0.002 0.045 0.049 0.003 0.055 Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9977:2013 2.77 2.7924 2.8 2.68 2.72 2.77085 2.74 2.7993 2.8 2.716 2.7 2.75 2.8 2.68 2.68 2.732 2.7076 2.799 2.78533 2.74 TCVN4884-1:2015 2.76 2.7924 2.8 2.68 2.72 2.82607 2.76 2.7993 2.83 2.716 2.7 2.67 2.7 2.68 2.66 2.732 2.7634 2.732 2.74819 2.633 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9977:2013 20 55 2.75 TCVN4884-1:2015 20 55 2.74 ANOVA Source of Variation SS df MS Between 0.0021 Groups Within Groups 0.106 38 Total 0.108 F P-value F crit 0.74 0.39373 4.1 39 Nền mẫu thịt bò TCVN 9977:2013 TCVN 4884-1:2015 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR 670 2.826075 610 2.7853 0.0366 0.0013413 0.0197 0.000386 0.0407 0.00166 590 2.7709 570 2.7559 0.0461 0.00212 0.042428 600 2.778151 550 2.7404 -0.011 0.0001277 -0.025 0.000641 0.0378 0.00143 520 2.716 540 2.7324 -0.009 7.7E-05 0.018947 0.0004 -0.01639 0.00027 640 2.80618 540 2.7324 0.0167 0.0002798 -0.033 0.001107 0.0738 0.00544 550 2.7404 720 2.8573 0.0156 0.00024 0.143886 0.0207 -0.11697 0.01368 530 2.724276 650 2.8129 -0.065 0.0042479 0.0472 0.002232 -0.089 0.00786 580 2.7634 500 2.699 0.0386 0.00149 -0.014477 0.0002 0.064458 0.00415 660 2.819544 650 2.8129 0.0301 0.0009056 0.0472 0.002232 0.0066 4.4E-05 450 2.6532 460 2.6628 -0.072 0.00512 -0.050689 0.0026 -0.009545 9.1E-05 670 2.826075 550 2.7404 0.0366 0.0013413 -0.025 0.000641 0.0857 0.00735 620 2.7924 490 2.6902 0.0676 0.00457 -0.023251 0.0005 0.1021956 0.01044 640 670 2.8261 0.0167 0.0002798 0.0604 0.003648 0.0004 550 2.7404 450 2.6532 0.0156 0.00024 -0.060234 0.0036 0.0871502 490 2.690196 470 2.6721 -0.099 0.0098516 -0.094 0.008756 0.0181 0.00033 510 2.7076 520 2.716 -0.017 0.0003 0.002556 7E-06 -0.008433 7.1E-05 610 590 2.7709 -0.004 1.699E-05 0.0052 2.68E-05 0.0145 0.00021 550 2.7404 530 2.7243 0.0156 0.00024 0.010829 0.0001 0.0160868 0.00026 580 2.7634 0.0431 0.0018539 -0.002 5.04E-06 0.0691 0.00477 420 2.6232 440 2.6435 -0.102 0.01031 -0.069994 0.0049 -0.020203 0.00041 2.80618 2.78533 680 2.832509 2.7895 2.77 0.00225 0.04743 0.04709 0.0022 0.0468 -0.02 xtb 2.72 Sr2 Sr Srpp= 0.001 SR2 0.038 SR 0.0018 0.0149772 0.00022 0.0076 2.71 0.003 0.052 0.004 0.062 0.06 0.002 0.043 Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9977:2013 2.83 2.7782 2.8 2.72 2.82 2.82607 2.81 2.6902 2.79 2.833 2.8 2.74 2.7 2.81 2.81 2.74 2.8261 2.672 2.77085 2.763 TCVN4884-1:2015 2.77 2.716 2.7 2.76 2.65 2.79239 2.74 2.7076 2.74 2.623 2.8 2.73 2.9 2.7 2.66 2.69 2.6532 2.716 2.72428 2.643 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9977:2013 20 56 2.78 TCVN4884-1:2015 20 54 2.72 ANOVA Source of Variation SS df MS Between 0.0342 Groups 0.03 Within Groups 0.1029 38 Total 0.1371 F P-value F crit 12.6 0.00104 4.1 39 64 3.2 Kết đếm E.coli tổng số Kết đếm tổng số E.coli (CFU/g) Nền mẫu thịt bò PP thay Lần lặp Ngày Ngày Nền mẫu thịt gà PP Tham chiếu Ngày Ngày PP thay Ngày Ngày PP Tham chiếu Ngày Ngày L1 1550 1520 1550 1300 1470 1620 1470 1380 L2 1690 1370 1690 1380 1600 1660 1630 1500 L3 1820 1710 1820 1560 1670 1480 1670 1510 L4 1590 1410 1590 1450 1650 1460 1800 1460 L5 1700 1690 1700 1700 1650 1360 1650 1690 L6 1610 1540 1610 1630 1480 1620 1480 1490 L7 1620 1470 1680 1680 1730 1380 1730 1560 L8 1510 1360 1510 1390 1690 1570 1690 1560 L9 1610 1710 1690 1500 1490 1520 1480 1400 L10 1590 1370 1590 1420 1620 1400 1650 1500 Ghi chú: PP thay thế: TCVN 9975:2013 PP tham chiếu: TCVN 7429-2:2008 65 Nền mẫu thịt gà TCVN 9975:2013 TCVN 7429-2:2008 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) 1470 3.167317 1620 3.2095 -0.037 0.0014051 0.0324 0.00105 -0.042 0.00178 1470 3.1673 1380 3.1399 -0.043 0.00181 -0.037005 0.0014 0.0274382 0.00075 L1 1600 3.20412 1660 3.2201 -7E-04 4.648E-07 0.043 0.001849 -0.016 0.00026 1630 3.2122 1500 3.1761 0.0023 5.3E-06 -0.000793 6E-07 0.0360963 0.0013 L2 1670 3.222716 1480 3.1703 0.0179 0.0003209 -0.007 4.68E-05 0.0525 0.00275 1670 3.2227 1510 3.179 0.0128 0.00016 0.002093 4E-06 0.0437395 0.00191 L3 1650 3.217484 1460 3.1644 0.0127 0.0001608 -0.013 0.000163 0.0531 0.00282 1800 3.2553 1460 3.1644 0.0454 0.00206 -0.012531 0.0002 0.0909196 0.00827 L4 L5 1650 3.217484 1360 3.1335 0.0127 0.0001608 -0.044 0.001898 0.0839 0.00705 1650 3.2175 1690 3.2279 0.0076 5.8E-05 0.051003 0.0026 -0.010403 0.00011 1480 3.170262 1620 3.2095 -0.035 0.001193 0.0324 0.00105 -0.039 0.00154 1480 3.1703 1490 3.1732 -0.04 0.00157 -0.003698 1E-05 -0.002925 8.6E-06 L6 L7 1730 3.238046 1380 3.1399 0.0332 0.0011052 -0.037 0.001386 0.0982 0.00964 1730 3.238 1560 3.1931 0.0282 0.00079 0.01624 0.0003 0.0449215 0.00202 1690 3.227887 1570 3.1959 0.0231 0.0005329 0.0188 0.000353 0.032 0.00102 1690 3.2279 1560 3.1931 0.018 0.00032 0.01624 0.0003 0.0347621 0.00121 L8 1490 3.173186 1520 3.1818 -0.032 0.0009995 0.0047 2.25E-05 -0.009 7.5E-05 1480 3.1703 1400 3.1461 -0.04 0.00157 -0.030756 0.0009 0.0241337 0.00058 L9 L10 1620 3.209515 1400 3.1461 0.0047 2.221E-05 -0.031 0.00096 0.0634 0.00402 1650 3.2175 1500 3.1761 0.0076 5.8E-05 -0.000793 6E-07 0.0413927 0.00171 xtb 3.2048 3.18 xtb 3.21 3.18 Sr2 0.00066 0.001 Sr2 0.008 0.006 Sr 0.02561 0.0312 Sr 0.092 0.075 0.0286 Srpp= Srpp= 0.0838 SR2 0.002 SR2 9E-04 SR 0.039 SR 0.03 Kiểm định phương sai PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9975:2013 3.17 3.2041 3.2 3.22 3.22 3.17026 3.24 3.2279 3.17 3.21 3.2 3.22 3.2 3.16 3.13 3.21 3.1399 3.196 3.18184 3.146 TCVN7429-2:2008 3.17 3.2122 3.2 3.26 3.22 3.17026 3.24 3.2279 3.17 3.217 3.1 3.18 3.2 3.16 3.23 3.173 3.1931 3.193 3.14613 3.176 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9975:2013 20 64 3.19 TCVN7429-2:2008 20 64 3.19 ANOVA Source of Variation SS df MS Between6E-05 Groups Within Groups 0.038 38 Total 0.0381 F P-value F crit 0.06 0.80892 4.1 39 Nền mẫu thịt Bò TCVN 9975:2013 TCVN 7429-2:2008 x1(CFU/g) y1(logx1)x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb(x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) x1(CFU/g) y1(logx1) x2(CFU/g) y2(logx2) x1-x1tb(x1-x1tb)(x1-x1tb) x2-x2tb (x2-x2tb)(x2-x2tb) y1-y2 (y1-y2)(y1-y2) 1550 L1 1690 L2 1820 L3 1590 L4 1700 L5 1610 L6 1620 L7 1510 L8 1610 L9 L10 1590 xtb Sr2 Sr Srpp= SR2 SR 3.190332 1520 3.1818 -0.021 0.0004425 0.0032 1E-05 0.0085 7.2E-05 1550 3.1903 1300 3.1139 -0.025 0.00061 -0.060822 0.0037 0.0763883 0.00584 3.227887 1370 3.1367 0.0165 0.0002729 -0.042 0.00176 0.0912 0.00831 1690 3.2279 1380 3.1399 0.0128 0.00016 -0.034886 0.0012 0.0880076 0.00775 3.260071 1710 3.233 0.0487 0.0023721 0.0543 0.002951 0.0271 0.00073 1820 3.2601 1560 3.1931 3.201397 1410 3.1492 0.045 0.00203 0.018359 0.0003 0.0669468 0.00448 -0.01 9.941E-05 -0.029 0.000868 0.0522 0.00272 1590 3.2014 1450 3.1614 -0.014 0.00019 -0.013398 0.0002 0.0400291 3.230449 1690 3.2279 0.0191 0.0003641 0.0492 0.002422 0.0026 6.6E-06 1700 3.2304 1700 3.2304 0.0154 0.00024 0.055683 0.0031 3.206826 1540 3.1875 -0.005 2.063E-05 0.0088 7.82E-05 0.0193 0.00037 1610 3.2068 1630 3.2122 -0.008 3.206826 1710 3.2114 0 0.001 0.0359621 0.00129 3.233 -0.005 2.063E-05 0.0543 0.002951 -0.026 0.00068 1690 3.2279 1500 3.1761 0.0128 0.00016 0.001326 2E-06 0.0517954 0.00268 -0.01 9.941E-05 -0.042 0.00176 0.0647 0.00418 1590 3.2014 1420 3.1523 -0.014 0.00019 -0.022477 0.0005 0.0491088 0.00241 3.18 3.22 0.00053 0.02296 3.143 -0.036 0.0013 -0.031751 3.201397 1370 3.1367 3.179 1390 0.0016 6.8E-05 0.037422 0.0014 -0.005362 2.9E-05 3.209515 1470 3.1673 -0.002 3.432E-06 -0.011 0.000129 0.0422 0.00178 1680 3.2253 1680 3.2253 0.0103 0.00011 0.050544 0.0026 3.178977 1360 3.1335 -0.032 0.0010492 -0.045 0.002037 0.0454 0.00206 1510 0.0017 0.0408 3.17 6E-04 0.024 0.03 0.002 0.039 0.0325 0.001 0.032 0.001 0.036 PP L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 L12 L13 L14 L15 L16 L17 L18 L19 L20 TCVN9975:2013 3.19 3.2279 3.3 3.2 3.23 3.20683 3.21 3.179 3.21 3.201 3.2 3.14 3.2 3.15 3.23 3.188 3.1673 3.134 3.233 3.137 TCVN7429-2:2008 3.19 3.2279 3.3 3.2 3.23 3.20683 3.23 3.179 3.23 3.201 3.1 3.14 3.2 3.16 3.23 3.212 3.2253 3.143 3.17609 3.152 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count SumAverage Variance TCVN9975:2013 20 64 3.2 TCVN7429-2:2008 20 64 3.19 ANOVA Source of Variation SS df MS Between1E-07 Groups Within Groups 0.0522 38 Total 0.0522 F P-value F crit 0.9924 4.1 39 66 3.3 kết phát Salmonella enteritidic Lần 2CFU lặp KH KQ TCCS 03:2016/TYV2-CĐ TCVN 4829:2005 Nồng độ vi khuẩn gây nhiễm/25g Nồng độ vi khuẩn gây nhiễm/25g 4CFU KH 9CFU KQ KH KQ 18 CFU 32 CFU 2CFU KH KH KH KQ KQ 4CFU KQ KH 9CFU KQ KH KQ 18 CFU 32 CFU KH KH KQ KQ Nền mẫu thịt bò B1 - B11 + B21 + B31 + B41 + IB1 - IB11 + IB21 + IB31 + IB41 + B2 - B12 + B22 + B32 + B42 + IB2 + IB12 + IB22 + IB32 + IB42 + B3 + B13 + B23 + B33 + B43 + IB3 - IB13 + IB23 + IB33 + IB43 + B4 + B14 + B24 + B34 + B44 + IB4 - IB14 + IB24 + IB34 + IB44 + B5 + B15 + B25 + B35 + B45 + IB5 + IB15 + IB25 + IB35 + IB45 + B6 + B16 + B26 + B36 + B46 + IB6 + IB16 + IB26 + IB36 + IB46 + B7 + B17 + B27 + B37 + B47 + IB7 + IB17 + IB27 + IB37 + IB47 + B8 + B18 + B28 + B38 + B48 + IB8 + IB18 + IB28 + IB38 + IB48 + B9 + B19 + B29 + B39 + B49 + IB9 + IB19 + IB29 + IB39 + IB49 + 10 B10 + B20 + B30 + B40 + B50 + IB10 + IB20 + IB30 + IB40 + IB50 + Nền mẫu thịt gà 67 CFU 3CFU 5CFU 10CFU 20 CFU 1CFU KH KQ KH KH KH KH KQ KH G1 - G11 + G21 + G31 + G41 + IG1 - IG11 - IG21 + IG31 + IG41 + G2 + G12 + G22 + G32 + G42 + IG2 + IG12 + IG22 + IG32 + IG42 + G3 + G13 + G23 + G33 + G43 + IG3 + IG13 + IG23 + IG33 + IG43 + G4 - G14 + G24 + G34 + G44 + IG4 - IG14 - IG24 + IG34 + IG44 + G5 - G15 - G25 + G35 + G45 + IG5 - IG15 + IG25 + IG35 + IG45 + G6 - G16 - G26 + G36 + G46 + IG6 - IG16 + IG26 + IG36 + IG46 + G7 + G17 + G27 + G37 + G47 + IG7 + IG17 + IG27 + IG37 + IG47 + G8 + G18 + G28 + G38 + G48 + IG8 - IG18 + IG28 + IG38 + IG48 + G9 + G19 + G29 + G39 + G49 + IG9 + IG19 + IG29 + IG39 + IG49 + 10 G10 + G20 + G30 + G40 + G50 + IG10 + IG20 + IG30 + IG40 + IG50 + KQ KH KQ KQ KQ 3CFU 5CFU KQ KH KQ 10CFU 20CFU KH KH KQ KQ Ghi chú: KH: Kí hiệu mẫu KQ: Kết (+): kết dương tính (-): kết âm tính 30 mẫu âm tính bổ sung chủng Escherichia coli ATCC® 11303™ Vibrio parahaemolyticus ATCC® 17802TM Staphylococus aureus subsp aureus ATCC® 29213TM D1 D2 D3 xét nghiệm theo phương pháp cho kết âm tính 68 PHỤ LỤC KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐỘ NHẠY, ĐỘ ĐẶC HIỆU, ĐỘ ĐÚNG, CHỈ SỐ TƯƠNG ĐỒNG PP ĐỊNH TÍNH SALMONELLA 4.1 Nền mẫu thịt bò (PP thay thế) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 48 48 Negative 30 32 50 30 80 Estimate Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 96% (86.54, 98.9¹ ) Specificity 100% (88.65, 100¹ ) Positive Predictive Value 100% (92.59, 100¹ ) Negative Predictive Value 93.75% (79.85, 98.27¹ ) Diagnostic Accuracy 97.5% (91.34, 99.31¹ ) Parameter Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.04 (0.01501 - 0.1066) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9474 (0.7285 - 1.166) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a 42.78% Negative Test Bias Index -0.025 69 Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score 4.2 Nền mẫu thịt bò (PP Tham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 47 47 Negative 30 33 50 30 80 Estimate Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 94% (83.78, 97.94¹ ) Specificity 100% (88.65, 100¹ ) Positive Predictive Value 100% (92.44, 100¹ ) Negative Predictive Value 90.91% (76.43, 96.86¹ ) Diagnostic Accuracy 96.25% (89.55, 98.72¹ ) Parameter Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.06 (0.03122 - 0.1153) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9216 (0.7031 - 1.14) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 35.69% Test Bias Index -0.0375 70 Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score 4.3 Nền mẫu thịt gà (PP Thay thế, tham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 38 38 Negative 30 32 40 30 70 Estimate Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 95% (83.5, 98.62¹ ) Specificity 100% (88.65, 100¹ ) Positive Predictive Value 100% (90.82, 100¹ ) Negative Predictive Value 93.75% (79.85, 98.27¹ ) Diagnostic Accuracy 97.14% (90.17, 99.21¹ ) Parameter Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.05 (0.01877 - 0.1332) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9421 (0.7083 - 1.176) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 44.91% Test Bias Index -0.02857 71 Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score 4.4 Kết phân tích mẫu (PPthay thế) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 86 86 Negative 60 64 90 60 150 Estimate Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 95.56% (89.12, 98.26¹ ) Specificity 100% (93.98, 100¹ ) Positive Predictive Value 100% (95.72, 100¹ ) Negative Predictive Value 93.75% (85, 97.54¹ ) Diagnostic Accuracy 97.33% (93.34, 98.96¹ ) Parameter Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.04444 (0.02723 - 0.07255) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9451 (0.7853 - 1.105) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 43.92% Test Bias Index -0.02667 72 Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score 4.5 Kết phân tích mẫu (PPtham chiếu) Results Diagnostic or Screening Test Evaluation Single Table Analysis PositiveNegativeTotal Positive 85 85 Negative 60 65 90 60 150 Estimate Lower - Upper 95% CIs Sensitivity 94.44% (87.65, 97.6¹ ) Specificity 100% (93.98, 100¹ ) Positive Predictive Value 100% (95.68, 100¹ ) Negative Predictive Value 92.31% (83.22, 96.67¹ ) Diagnostic Accuracy 96.67% (92.43, 98.57¹ ) Parameter Likelihood ratio of a Positive Test 'undefined' ('?' - 'undefined') Likelihood ratio of a Negative 0.05556 (0.03754 - 0.08222) Test Diagnostic Odds 'undefined' ('?' - 'undefined') Cohen's kappa (Unweighted) 0.9315 (0.7718 - 1.091) Entropy reduction after a Positive '?'% Test Entropy reduction after a Negative 40.18% Test Bias Index -0.03333 73 Method Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score Wilson Score PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM THÀNH THẠO TCCS 03:2016/TYV2-CĐ Phiếu kết thử nghiệm QPT 02/17 - Beef 17A17 & 17B17 Mã số PTN (1) Tên mẫu Beef 17A17 Beef 17B17 Tên tiêu Định tính Salmonella spp Định tính Salmonella spp Phương pháp thử TCCS 03:2016/TYV2 -CĐ TCCS 03:2016/TYV2 -CĐ 74 Kết Không phát hiện/Not detected 03 Đơn vị /25 g Phát hiện/Detected Không phát hiện/Not detected Phát hiện/Detected /25 g PHỤ LỤC Tóm tắt tiêu chuẩn TCVN 9977:2013 Phương pháp sử dụng đĩa cấy chứa môi trường dinh dưỡng khô chất tạo đông tan nước lạnh Cho ml dịch huyền phù nồng độ pha loãng vào đĩa Dàn dung dịch huyền phù diện tích khoảng 20cm2 Chất tạo đơng có thành phần đĩa làm mơi trường dinh dưỡng đĩa đông lại Đĩa ủ ấm 35oC ± 1oC 48 ± 3h đếm khuẩn lạc Nước dùng để pha loãng (dung dịch nước đệm phosphat) Hòa tan 34g kali dihydro phosphat (KH2PO4) vào 500ml nước đựng bình định mức 1lít chỉnh pH đến 7.2 khoảng 175ml dung dịch natri hydroxit M thêm nước đến vạch Pha loãng 1.25ml dung dịch đến lít nước đun sôi để nguội hấp áp lực 15 phút 121oC Nước dùng để pha lỗng khơng chứa xitrat bisulfit thiosulfat gây ức chế phát triển vi sinh vật Cách tiến hành: Đặt đĩa đếm vi sinh vật hiếu khí PetrifilmTM lên bề mặt phẳng Nhấc màng mỏng phía nhỏ 1ml huyền phù mẫu thử vào màng Đậy cẩn thận màng mỏng phía xuống chất cấy Dàn huyền phù diện tích 20cm2 cách ấn nhẹ xuống tâm dụng cụ dàn mẫu (mặt gờ dụng cụ dàn mẫu hướng xuống dưới) Lấy dụng cụ dàn mẫu để yên đĩa phút cho gel đông đặc lại Đặt đĩa vào tủ ấm theo phương nằm ngang với nắp hướng lên không chồng cao 20 đĩa ủ ấm đĩa nhiệt độ 35oC ± 1oC 48 h ± 3h Sau ủ xong bảo quản đông lạnh nhiệt độ nhỏ - 15oC đến ngày cần Đếm khuẩn lạc đĩa sau giai đoạn ủ sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc Có thể sử dụng khuếch đại rọi sáng để thuận tiện cho việc đếm Đếm tất khuẩn lạc có màu đỏ đĩa chứa từ 30 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc Tính kết quả: Để tính số lượng vi sinh vật hiếu khí nhân tổng số lượng khuẩn lạc đĩa (hoặc số lượng trung bình khuẩn lạc đĩa đếm đĩa kép độ pha loãng) với số nghịch đảo độ pha loãng tương ứng Khi đếm khuẩn lạc đĩa kép độ pha lỗng tính số lượng trung bình khuẩn lạc cho độ pha loãng trước xác định trung bình số đếm tổng vi sinh vật hiếu khí Nếu khơng có đĩa có số đếm lớn 30 khuẩn lạc có màu đỏ ghi lại số đếm xác đĩa có độ pha lỗng thấp (tương ứng với dung dịch pha lỗng nhất) Nếu tất đĩa có số đếm lớn 300 xác định số đếm ước tính cách 75 đếm số khuẩn lạc nhiều ô vng đại diện tính số đếm trung bình ô vuông nhân số đếm với 20 (diện tích vùng sinh trưởng khoảng 20 cm2) Trong trường hợp phải báo cáo số ước tính Nếu đĩa có mật độ khuẩn lạc lớn để ước tính số đếm kết báo cáo "quá nhiều để đếm" Tóm tắt phương pháp TCVN 9975: 2013 Nguyên lý: Phương pháp sử dụng đĩa cấy chứa môi trường dinh dưỡng khô chất tạo đông tan nước lạnh Cho dung dịch huyền phù mẫu thử chưa pha loãng pha loãng vào đĩa với lượng ml đĩa Dàn dung dịch huyền phù diện tích khoảng 20 cm2 Chất tạo đơng có thành phần đĩa làm môi trường dinh dưỡng đĩa đông lạnh Đĩa ủ ấm 35 °C ± °C thời gian thích hợp đếm khuẩn lạc Cách tiến hành: Đặt đĩa đếm E coli/Coliform PetrifilmTM lên bề mặt phẳng Nhấc màng mỏng phía nhỏ 1ml huyền phù mẫu thử vào màng Đậy cẩn thận màng mỏng phía xuống chất cấy Dàn huyền phù diện tích 20cm2 cách ấn nhẹ xuống tâm dụng cụ dàn mẫu (mặt láng dụng cụ dàn mẫu hướng xuống dưới) Lấy dụng cụ dàn mẫu để yên đĩa phút cho gel đông đặc lại Đặt đĩa vào tủ ấm theo phương nằm ngang với nắp hướng lên không chồng cao 20 đĩa ủ ấm đĩa nhiệt độ 35°C ± 1°C 48h ± 4h Sau ủ xong bảo quản đông lạnh nhiệt độ nhỏ -15°C đến ngày cần Đếm khuẩn lạc đĩa sau giai đoạn ủ sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc Có thể sử dụng khuếch đại rọi sáng để thuận tiện cho việc đếm Các khuẩn lạc E coli có màu xanh kèm theo bọt khí Đếm tất khuẩn lạc có màu xanh kèm theo nhiều bọt khí (trong vịng đường kính khuẩn lạc) đĩa chứa từ 15 khuẩn lạc đến 150 khuẩn lạc Khơng đếm khuẩn lạc phát triển ngồi vịng trịn giới hạn mơi trường chọn lọc khơng đếm bọt khí giả tạo thao tác chưa trình cấy mẫu lên đĩa Tính kết quả: Để tính số lượng E coli nhân tổng số lượng khuẩn lạc đĩa (hoặc số lượng trung bình khuẩn lạc đĩa đếm đĩa kép độ pha loãng) với số nghịch đảo độ pha loãng tương ứng Khi đếm khuẩn lạc đĩa kép độ pha lỗng tính số lượng trung bình khuẩn lạc cho độ pha lỗng trước xác định trung bình số đếm E coli 76 Nếu khơng có đĩa có số đếm lớn 15 khuẩn lạc với màu đặc trưng kèm bọt khí trở lên ghi lại số đếm xác đĩa có độ pha lỗng thấp (tương ứng với dung dịch pha lỗng nhất) Nếu tất đĩa có số đếm lớn 150 xác định số đếm ước tính cách đếm số khuẩn lạc nhiều vng đại diện tính số đếm trung bình vng nhân số đếm với 20 (diện tích vùng sinh trưởng khoảng 20 cm2) Trong trường hợp phải báo cáo số ước tính Nếu đĩa có mật độ khuẩn lạc lớn để ước tính số đếm kết báo cáo “quá nhiều để đếm” Tóm tắt TCCS 03:2016/TYV2-CĐ Q trình phát Salmonella thực phẩm theo TCCS 03:2016/TYV2-CĐ cần qua giai đoạn nhau: Giai đoạn 1: giai đoạn cộng gộp tăng sinh sơ với tăng sinh chọn lọc mẫu đồng vừa đảm bảo phát lượng Salmonella bị suy giảm hoạt tính đồng thời ức chế phát triển số lồi vi sinh vật khác có mẫu Giai đoạn 2: Phân lập nhằm tách nhận dạng Salmonella khỏi quần thể vi sinh vật khác mẫu Giai đoạn 3: Khẳng định test thử phản ứng huyết học → kết luận Cách tiến hành: - Tăng sinh bước 1: Cân 25g mẫu trung bình cắt nhỏ vào túi PE vơ trùng chun dụng bổ sung thêm 225ml dung dịch đệm peptone đơn vị chất bổ sung đồng máy dập mẫu Stomacher tốc độ 260 vòng/phút phút thu huyễn dịch có nồng độ 10-1.Ủ huyễn dịch mẫu đồng độ pha loãng 10-1 tủ ấm 41.5°C/18±2h - Phân lập môi trường đặc chọn lọc nhận dạng: Sau ủ chuyển 10µl tương đương vịng que cấy dịch tăng sinh ria cấy lên bề mặt đĩa thạch Iris agar Lật úp đĩa đặt tủ ấm 37°C/24h - Khẳng định: Trên môi trường Iris agar khuẩn lạc Salmonella có màu tím hồng đến hồng mơi trường giữ màu trắng Đánh dấu khuẩn lạc đặc trưng tiến hành khảng định test comfirm cung cấp từ nhà sản xuất Bản chất test comfirm phản ứng ngưng kết huyết học gồm thành phần: R1: dùng để test mẫu R2: test kiểm sốt dương tính R3: test kiểm sốt âm tính 77 ... cho doanh nghiệp đặt lên hàng đầu Với lí nêu trên, tơi tiến hành thực đề tài: ? ?Xác định giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu? ?? 1.2 MỤC... ngữ khác sử dụng để khái niệm như: Định trị phương pháp, đánh giá phương pháp, xác nhận giá trị sử dụng phương pháp, phê duyệt phương pháp Tất thuật ngữ cách gọi khác thẩm định phương pháp (Trần... 03/2016/TYV2-CĐ 3.2.2 Ứng dụng Kiểm nghiệm số mẫu thịt đông lạnh nhập - Kiểm nghiệm lơ thịt bị đơng lạnh - Kiểm nghiệm lô thịt đùi gà đông lạnh - Kiểm nghiệm lô thịt gà nguyên đông lạnh 3.3 NGUYÊN