Tạp chí Khoa học – Công nghệ Thủy sản: Số 1/2018

Tạp chí Khoa học – Công nghệ Thủy sản: Số 1/2018 với các bài viết nghiên cứu sử dụng Chitosan từ vỏ tôm làm chất điện ly cho siêu tụ điện; nghiên cứu bổ sung chế phẩm Astaxanthin có nguồn gốc từ vi khuẩn Paracoccus carotinifaciens vào thức ăn nuôi thương phẩm cá Hồi vân (Oncorhyncus mykiss); mô hình sinh năng lượng học cho cá mú chấm đen (Epinephelus Malabaricus) dự báo sinh trưởng, lượng thức ăn cá sử dụng, thành phần của mức tăng khối lượng và thể trọng chuyển hóa...

Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 MỤC LỤC THƠNG BÁO KHOA HỌC Phân tích PEPTIDE nọc độc ốc nón CONUS MARMOREUS vùng biển Khánh Hòa LC MALDI-TOF MS Nguyễn Bảo, Trần Văn Khoa, Jean-Pière LECAER, Ngô Đăng Nghĩa, Bùi Trần Nữ Thanh Việt, Phan Thị Khánh Vinh Nghiên cứu sử dụng Chitosan từ vỏ tôm làm chất điện ly cho siêu tụ điện 11 Võ Xuân Đại, Phạm Anh Đạt, Nguyễn Văn Hòa Nghiên cứu ngưỡng số yếu tố môi trường quan trọng cho ấu trùng cá mặt quỷ 17 (Synanceia verrucosa Bloch & Schneider, 1801) sản xuất giống nhân tạo Võ Thế Dũng, Võ Thị Dung, Dương Văn Sang Đánh giá hoạt tính ức chế Enzyme α-Glucosidase dịch chiết từ số loài rong biển 24 Nguyễn Thế Hân, Nguyễn Thị Kim Ngân, Nguyễn Văn Minh Nghiên cứu bổ sung chế phẩm Astaxanthin có nguồn gốc từ vi khuẩn Paracoccus 34 carotinifaciens vào thức ăn nuôi thương phẩm cá Hồi vân (Oncorhyncus mykiss) Nguyễn Quang Huy, Nguyễn Văn Khang, Nguyễn Thanh Hải, Nguyễn Thị Diệu Phương,Nguyễn Hải Sơn Nghiên cứu chế tạo thiết bị sấy thủy sản sử dụng gốm hồng ngoại kết hợp với đối lưu 41 Nguyễn Văn Phúc, Trần Đại Tiến, Lê Như Chính Mơ hình sinh lượng học cho cá mú chấm đen (Epinephelus Malabaricus): Dự báo 47 sinh trưởng, lượng thức ăn cá sử dụng, thành phần mức tăng khối lượng thể trọng chuyển hóa Lê Anh Tuấn, Trương Hà Phương Ảnh hưởng độ mặn chế độ cho ăn lên tốc độ tăng trưởng tỉ lệ sống tôm he Ấn Độ Penaeus indicus Hoàng Tùng, Trương Ái Nguyên, Hồ Hải Cơ, Võ Thị Minh Thư 56 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 THÔNG BÁO KHOA HỌC PHÂN TÍCH PEPTIDE TRONG NỌC ĐỘC CỦA ỐC NÓN CONUS MARMOREUS Ở VÙNG BIỂN KHÁNH HOÀ BẰNG LC MALDI-TOF MS STUDY ON VENOM PEPTIDE DERIVED FROM CONUS MARMOREUS COLLECTED IN KHANH HOA USING LC MALDI-TOF MS Nguyễn Bảo1, Trần Văn Khoa1, Jean-Pière LECAER2, Ngô Đăng Nghĩa3, Bùi Trần Nữ Thanh Việt1, Phan Thị Khánh Vinh1 Ngày nhận bài: 30/1/2018; Ngày phản biện thơng qua: 1/4/2018; Ngày duyệt đăng:27/4/2018 TĨM TẮT Độc tố ốc nón có chứa hàm lượng lớn peptide công lên kênh ion thụ thể thần kinh khác Độc tố loài Conus nguồn dược liệu tiềm chưa khai thác Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo RP-HPLC để phân tách độc tố Conus marmoreus vịnh Nha Trang, sau phân đoạn phân tích khối lượng phân tử kỹ thuật MALDI-TOF-MS Kết chạy RP-HPLC cho thấy nọc độc thơ có chứa nhiều peptide kị nước Sử dụng kỹ thuật MALDI-TOF-MS xác định tổng cộng 7543 liệu khối lượng thơ Bên cạnh đó, quan sát 1751 peptide nọc độc thô Conus marmoreus Vịnh Nha Trang Trong số đó, chúng tơi xác định khối lượng phân tử 39 peptide nọc độc loài C marmoreus Việt Nam so với tổng số 92 phân tử peptide C.marmoreus định danh trước Từ khố: Conus marmoreus, Peptide, Nọc độc, LC MALDI-TOF MS ABTRACT The venom of cone snails is composed highly conopeptides that target a variety of ion channels and receptors on the nerve system The venom of Conus genus represents unexploited resources of potential pharmaceutical compounds The venom of Conus marmoreus collected in Nha Trang Bay was separated by reversed–phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC), and fractions were analyzed using matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) The results of RP-HPLC showed that the crude venom consists mainly hydrophobic peptides Using MALDI-TOF MS analysis of crude venom yielded a total of 7543 distinct masses Besides, there were 1751 compounds found in crude venom of Conus marmoreus in Nha Trang Bay Among them, we determined the molecular weights of 39 peptides of C marmoreus venom in Vietnam compared to the total 92 peptides of C marmoreus previously identified Key words: Conus marmoreus, Peptide, Venom, LC MALDI-TOF MS I ĐẶT VẤN ĐỀ Conopeptide nhóm hợp chất peptide từ nọc độc ốc nón Conus Các nhà phân loại học ốc ước tính có 500-700 lồi Conus chia làm nhóm theo chế độ ăn: cá, nhuyễn thể, giun biển Mỗi lồi Conus sản sinh hàng trăm hàng ngàn peptide dược tính khác cơng phổ rộng protein xuyên màng (kênh ion, thụ thể bắt cặp protein G, kênh vận chuyển xuyên màng) (Olivera Teichert 2007, Lewis, Dutertre cộng sự., 2012) Các phân tử cung cấp nhiều công cụ nghiên cứu vô Khoa Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Nha Trang Natural Product Chemistry Institute, National Center for Scientific Research, Gif-sur-Yvette 91198, France Viện Công nghệ Sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang 2 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản giá để khảo sát tỉ mỉ vai trò sinh lý thần kinh loại kênh ion chuyên biệt (McIntosh, Hasson cộng sự., 1995, McIntosh, Santos cộng sự., 1999) Conopeptide xem nguồn dược liệu đầy hứa hẹn để tìm thuốc điều trị đặc hiệu bệnh rối loạn thần kinh phân tử peptide nhỏ, dễ tổng hợp, tính đặc hiệu cao Ở vùng biển Việt Nam có khoảng 76 lồi ốc nón khác nhau, nguồn dược liệu phong phú để khai thác có số lồi ốc chưa nghiên cứu chuyên sâu, chủ yếu tập trung nhóm săn mồi giun biển nhuyễn thể Bên cạnh có nhiều lồi ốc nón nhiều nhà nghiên cứu chuyên sâu nọc độc, số phải kể đến Conus marmoreus Việc nghiên cứu nọc độc Conus marmoreus vùng biển Khánh Hòa cần thiết, sở đánh giá tiềm nọc độc loài này, cho nghiên cứu ứng dụng Hơn nữa, thành phần hoạt tính conopeptide từ nọc độc ốc nón thay đổi có ảnh hưởng lớn điều kiện địa lý, môi trường sống phương pháp lấy tách chiết Một công cụ hiệu để đánh giá mức độ phức tạp thành phần peptide/ protein độc tố kết hợp kỹ thuật phân tách sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phân tích khối phổ (Mass spectromatry-MS) Ở chúng tơi phân tách độc tố cột C18 phân đoạn độc tố phân tích kỹ thuật MALDI-TOF-MS (Rodriguez, Dutertre cộng sự., 2015) Phép đo khối phổ phương pháp giúp xác định khối lượng phân tử hóa học có mẫu cách đo tỷ lệ khối lượng điện tích số lượng ion pha khí Trong đó, MALDI (Matrix-assisted laser desorption/-ionization) kỹ thuật ion hóa Số 1/2018 mẫu dựa hỗ trợ chất (acid hữu yếu) lượng laser Kỹ thuật xem phương pháp phân tích khối phổ có độ phân giải tốt cho kết với độ xác cao Tóm lại, HPLC kết hợp kỹ thuật khối phổ MS phương pháp thường sử dụng để đánh giá độ phức tạp khác biệt thành phần-cường độ peptide nọc độc lồi Chính lý đó, nghiên cứu chúng tơi sử dụng phương pháp RP-HPLC kết hợp MALDI-TOF MS đối tượng ốn nón Conus marmoreus vùng biển Khánh Hồ II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Ốc nón Conus khai thác từ bờ biển Kê Gà vịnh Nha Trang (tỉnh Khánh Hòa), giữ sống bể nhỏ nước biển vận chuyển Trung tâm thí nghiệm thực hành (Đại học Nha Trang) Sau phân loại học ốc theo phương pháp ghi nhận trước (Rưckel, Korn cộng sự., 1995), chúng tơi thu mẫu ốc nón C marmoreus (Linnaeus, 1758) (chiều dài 60 - 70 mm) lồi ốc nón Conus khai thác Ốc sau vệ sinh vỏ bên bảo quản đông -80°C tủ đông sâu (Ultra-Low Temperature Freezer -86°C, MDF 236 Lab, Hàn Quốc) Phương pháp nghiên cứu 2.1 Phương pháp phân tích 2.1.1 Phẫu tách tuyến độc chiết nọc độc thô Mẫu ốc C marmoreus đập vỡ vỏ ốc thu nhận phần thịt ốc Tiến hành phẩu tách phần thịt kẹp kéo nhọn để lấy tuyến nọc độc Tuyến nọc độc cắt nhỏ, nghiền cối sứ chiết 0,1% trifluoroacetic acid (TFA) qua lần Phần dịch chiết sau ly tâm đông khô bảo quản đông nhiệt độ -80°C Cho mg bột nọc độc đơng khơ hịa tan TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản mL 0,1% TFA ly tâm phút 2000xg để loại bỏ phần nguyên liệu không tan Phần dịch thu hồi, lọc qua màng lọc Amicon Ultra 10 kDa (Millipore), ly tâm 12,000xg 20 phút 4°C Nồng độ protein nọc độc thô xác định theo phương pháp Bradford máy đo phổ NanoDrop 2000c (Thermo Scientific), kết đối chiếu với mẫu protein huyết bò chuẩn insulin 2.1.2 Phân tích phân đoạn nọc độc C marmoreus sắc ký lỏng cao áp pha đảo Phân đoạn nọc độc thô C marmoreus thực lặp lại lần chạy hệ thống sắc ký lỏng cao áp (Shimadzu LC-class 10) sử dụng cột phân tích Vydac C18 (300 Å, 5mm, 4.6 mm i.d 250 mm) Các phân tử peptide nọc độc xác định bước sóng UV (220 nm, 254 nm, 280 nm) rửa giải chương trình gradient với pha động A (1000 mL H2O/1 mL TFA) pha động B (900 mL CH3CN/100 mL H2O/1 mL TFA) Chương trình gradient gồm 0% pha động B 10 phút đầu, tăng 0-100% pha động B 90 phút với tốc độ dịng 1mL.phút-1 (Hình 1) Mỗi phân đoạn thực thu dung dịch pha động qua cột Vydac C18 ngồi thời gian phút Chương trình sắc ký thực 100 phút việc thu mẫu phân đoạn thực cẩn thận lặp lại lần Tổng thể tích phân đoạn lần thu mL, sau mẫu sấy ly tâm chân không (ở nhiệt độ 25ºC thiết bị SpeedVac™ Concentrator) 12 để chuẩn bị cho phân tích khối phổ 2.1.3 Phân tích khối phổ phân đoạn độc tố phẩu tách theo phương pháp MALDI-TOF-MS Các phân đoạn nọc độc C.marmoreus phân tích máy phân tích khối phổ 4800 MALDI TOF/TOF™ (AB Sciex, Pháp) Thiết bị trang bị laser Nd: YAG hoạt động bước sóng 355 nm Mỗi phân đoạn • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Số 1/2018 RP-HPLC sấy khơ hịa tan lại 20 µL 60 % acetonitrile/0,1 % trifluoroacetic axitaxit Lấy phân đoạn 0,5 µL trộn với 0,5 µL dung dịch axit cyano-4-hydroxycinnamic (với nồng độ mg/ml acetonitrile/methanol 55:30), sau nhỏ nhẹ nhàng lên vị trí đặt mẫu đĩa từ 96-lỗ (AB Sciex) chờ mẫu khô trước phân tích Kết thu nhận thực chế độ bay phản hồi điện tích dương 2.2 Phương pháp xử lý số liệu Nhận dạng phổ khối MS conopeptide Dữ liệu thô phổ khối lượng (các giá trị m/z phát phân đoạn) xuất Excel 2010 Microsoft Office, tiền xử lý công cụ "Remove duplicate masses" công cụ "Compare mass lists" trang web ConoServer (http://www.conoserver.org) Các phổ khối lượng chênh lệch khoảng 0,1 Da loại bỏ (Kaas, Yu cộng sự., 2012) Dữ liệu khối lượng phân tử lọc tiếp để phát peptide có liên kết với Na+ K+ Dữ liệu xử lý nọc độc C marmoreus (vùng biển Khánh Hòa, Việt Nam) so sánh khối lượng phân tử với sở liệu chuỗi conopeptide cơng bố C marmoreus trích xuất từ sở liệu ConoServer III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Sắc ký đồ pha đảo nọc độc thô C marmoreus Kết sắc ký đồ pha-đảo (viết tắt RPHPLC) nọc độc thơ ốc nón C marmoreus thể Hình Chương trình gradient phút thứ 10 (với chương trình gradient 0-100% B 90 phút) thể đường nét đứt sắc ký đồ Các sắc ký đồ chồng lên theo thời gian bước sóng UV khác đặc trưng cho đặc điểm thành phần peptide, bước sóng 220 nm (xanh) đặc trưng liên kết peptide (-CH-NH-); bước sóng 254 nm (màu xanh mạ) hấp thụ mạnh đặc trưng cho Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản tyrosine; bước sóng 280 nm (màu đỏ) hấp thụ mạnh đặc trưng cho tryptophane Từ phút 70 trở khơng thể Hình khơng cịn phân tử peptide hấp thụ thêm, nhiên tổng thể sắc ký đồ (tương ứng 90 phút) thể Hình Kết sắc ký đồ đa bước sóng UV cung cấp số thơng tin sơ Số 1/2018 thành phần phân bố ưa nước-kỵ nước hỗn hợp peptide nọc độc, hàm lượng tương đối thành phần peptide nọc độc theo thời gian lưu cột pha đảo (ở bước sóng 220 nm) thành phần peptide có khả diện tyrosine, tryptophane bên Hình Sắc ký đồ pha-đảo (RP-HPLC) nọc độc thơ ốc nón C marmoreus qua cột Vydac C18 (300 Å, 5mm, 4.6 mm i.d 250 mm) với tốc độ dòng 1mL.phút-1 chuỗi peptide (theo thời gian lưu), cụ thể phân tử có thời gian lưu phút 27 50 Với nọc độc thơ C.marmoreus thành phần conopeptide đa phần tập trung vào vùng kị nước từ phút 35 trở đi, so với nọc độc ốc nón Conus bandanus cơng bố trước (Nguyen, Caer cộng sự., 2014) Kết conopeptide rửa giải nọc độc C.marmoreus vùng biển Khánh Hòa sắc ký đồ cột phân tích tương đồng với kết sắc ký đồ ion nọc độc C.marmoreus vùng biển Great Barrier Reef (Queensland, Úc) (Dutertre, Jin cộng sự., 2013) Tuy nhiên, có khác số lượng hàm lượng thành phần conopeptide hai nghiên cứu Điều giải thích yếu tố điều kiện địa lý sinh thái khác làm việc sản sinh độc tố khác nhau, chí cá thể ốc nón sản sinh độc tố không giống vào thời điểm khác làm rõ nọc độc thu nhận từ cá thể sống Conus purpurascens (Rodriguez, Dutertre cộng sự., 2015) Phân tích MALDI-TOF-MS phân đoạn độc tố Phân tích phần nọc độc phẫu tách phương pháp MALDI-TOF-MS mang lại nhiều ưu điểm mức khác Các giá trị m/z thành phần phân đoạn ghi lại chế độ phản xạ (m/z 8005500 Da), cho phép đo khối lượng phân tử (KLPT) có độ phân giải độ xác cao so với chế độ tuyến tính Phương pháp đặt mẫu giọt-để khơ (dried-droplet-spotting) để TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 Hình Phổ khối [M+H]+ MALDI-TOF MS phân đoạn phút thứ 26 nọc độc C.marmoreus phân tích phân đoạn nọc độc phẫu tách có độ nhạy cao phát KLPT Với cách tiếp cận này, phương pháp MALDI-TOF-MS xác định tổng cộng 7543 liệu khối lượng thô, riêng biệt Các khối lượng trùng khoảng 0,1 Da loại bỏ Bên cạnh đó, phân tử liên kết với Na K hai kim loại này, 14, 14 KLPT Tổng cộng có 1751 hợp chất nhận diện với KLPT riêng biệt nọc độc thô ốc nón C marmoreus vịnh Nha Trang Kết thấp nhiều so với nghiên cứu loài vùng biển nước Úc, cụ thể xác định 2710 peptide (Dutertre, Jin cộng sự., 2013) Sự khác biệt lớn giải thích ảnh hưởng địa lý, mơi trường sống, mà lồi ốc C marmoreus sản sinh thành phần độc tố khác Bên cạnh có khác biệt nhiều phương pháp thu độc tố Trong nghiên cứu này, ốc nón khai thác vào thời điểm định độc tố thu theo phương pháp phẩu tách, Sébastien D cộng sự, tiến hành thu độc tố định kỳ từ ốc nón cịn sống bể nước biển Phổ MALDI-TOF-MS phân đoạn nọc độc kiểm tra trực quan • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG cách cẩn thận để xác định diện cường độ xuất conopeptide Hình thể phổ khối [M +H] + MALDI-TOF MS phân đoạn sắc ký phút thứ 26 đồ nọc độc C.marmoreus Trong phân đoạn thể sắc ký đồ peak hấp thụ cao bước sóng UV có λ220nm, nhiên phân đoạn chứa nhiều khối lượng đồng vị (monoisotopic mass) [M +H] + với m/z 1462,60, 1377,59, 912,38, 861,03 Điều cho thấy phân tử có KLPT xác tự nhiên 1461,59 Da, 1376,58 Da phân tử tích điện proton H + nên z = Bên cạnh đó, tiêu cường độ xuất phân tử thể tương quan tỉ lệ thuận đến hàm lượng chất diện bên hỗn hợp Điều có ý nghĩa quan trọng nghiên cứu tách chiết chất có hoạt tính sinh học, cho phép đánh giá độ tinh phân đoạn sắc ký, đồng thời đánh giá mức độ tạp hợp chấp để điều chỉnh phương pháp tách chiết-tinh phù hợp Như phân đoạn phút 26, ta thấy tồn phân tử peptide có cường độ gần ngang Nếu phân đoạn hoạt tính việc tiến hành bước “tinh sạch” cần thiết Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Nhận dạng phổ khối MS conopeptide Dữ liệu phổ khối lượng xuất từ DataExplorer 4.9 (AB Sciex) vào bảng tính Excel 2010 Microsoft Office Đồng thời, 92 conopeptide C.marmoreus (đã cơng bố tính đến ngày 3/1/2018, tổng hợp ConoServer), biên tập bảng tính Excel Bảng kết so sánh khối lượng đồng vị conopeptide nọc độc Số 1/2018 C.marmoreus (biển Khánh Hịa) từ phương pháp MALDI-MS với liệu lồi công bố nhằm nhận dạng phân tử sản sinh tuyến độc Vì đa phần kết thông tin chuỗi peptide xuất phát từ nghiên cứu transcriptome (Lavergne, Dutertre cộng sự., 2013) Chúng nhận dạng 39 phân tử conopeptide công bố có tổng số 92 phân tử C.marmoreus Hình Sắc ký đồ pha-đảo (RP-HPLC) nọc độc thơ ốc nón C marmoreus qua cột Vydac C18 (300 Å, 5mm, 4.6 mm i.d 250 mm) với tốc độ dòng 1mL.phút-1 Ghi chú: sắc ký đồ màu xanh (mẫu nọc độc) màu đen nét đứt (đường nền) bước sóng λ220nm Điểm đáng ý chuỗi conopeptide (xuất phất từ nghiên cứu proteome, MrIIIA, MrIIIB, MrIIIC…) hầu hết nhận diện Còn chuỗi từ nghiên cứu transcriptome nhận diện phần liệu Trong số phân tử nhận diện ốc nón C.marmoreus Khánh Hịa, có phân tử Mr1.8 (cịn gọi MrIC) thuộc liên họ A (A superfamily) có khung cysteine -CCXaCXbC-, thông thường gọi độc tố alpha 4/7 conotoxin tác động ức chế thụ thể nicotinic achetycholine hệ thần kinh Tuy nhiên nghiên cứu chế độc học lần phát hiện, phân tử có tác dụng trái ngược kích hoạt thụ thể nicotinic acetycholine, giống phân tử hữu nhỏ (bao gồm PNU12059, TQS SB-206553) bán nghiên cứu điều trị bệnh lý thần kinh (Mueller, Starobova cộng sự., 2015) TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Bảng So sánh KLPT conopeptide quan sát nọc độc C marmoreus biển Nha Trang với sở liệu C marmoreus ConoServer (Kaas, Yu cộng sự., 2012) Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Số 1/2018 Ghi chú: nh2: C-ter amidation; O: Hydroxyproline; Gla: Gamma carboxylic glutamic acid; w: D-tryptophan; f: D-phenylalanine; BTr: Bromotryptophan; Z: Pyroglutamic acid; Độ dung sai: 0.05Da (tiếp tục) Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 1/2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Ngồi ra, kết Bảng kết hợp với liệu khối phổ phân đoạn nọc độc, ta thấy nhiều phân tử conopeptide chưa định danh Đây sở tiềm để khai khác nguồn dược quí từ nọc độc ốc nón C marmoreus vùng biển Khánh Hịa Hình thể kết tổng thể phân đoạn độc tố bước sóng λ220nm tích hợp phổ khối [M] conopeptide phát với cường độ cao định danh-định vị phân tử công bố C.marmoreus sắc ký đồ pha đảo Kết Hình cho thấy tổng thể sắc ký đồ nọc độc thơ ốc nón C.marmoreus thể độ phức tạp thành phần nọc độc Kết khối lượng phân tử độc tố conotoxin phù hợp với conotoxin, định danh nghiên cứu trước, sắc ký đồ IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết nghiên cứu thể rõ tính đa dạng thành phần nọc độc ốc nón Số 1/2018 C.marmoreus vùng biển Khánh Hòa, cụ thể xác định 1751 hợp chất nọc độc thơ Trong số đó, chúng tơi quan sát khối lượng phân tử 39 peptide nọc độc loài C.marmoreus Việt Nam so với tổng số 92 phân tử peptide C.marmoreus ghi nhận trước Đa phần số phân tử phát thuộc liên họ M (như MrIIIA, MrIIIB, MrIIIC…), mà conopeptide liên họ có xu hướng tương tác với kênh ion Na Ka hệ thần kinh Những kết bước đầu sở để nghiên cứu ứng dụng số sản phẩm chức nọc độc C.marmoreus tương lai LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) cho đề tài mã số 106-NN.022015.14 TÀI LIỆU THAM KHẢO Dutertre, S., A H Jin, Q Kaas, A Jones, P F Alewood and R J Lewis (2013) "Deep venomics reveals the mechanism for expanded peptide diversity in cone snail venom." Mol Cell Proteomics 12(2): 312-329 Kaas, Q., R Yu, A H Jin, S Dutertre and D J Craik (2012) "ConoServer: updated content, knowledge, and discovery tools in the conopeptide database." Nucleic Acids Res 40(Database issue): D325-330 Lavergne, V., S Dutertre, A H Jin, R J Lewis, R J Taft and P F Alewood (2013) "Systematic interrogation of the Conus marmoreus venom duct transcriptome with ConoSorter reveals 158 novel conotoxins and 13 new gene superfamilies." BMC Genomics 14: 708 Lewis, R J., S Dutertre, I Vetter and M J Christie (2012) "Conus venom peptide pharmacology." Pharmacol Rev 64(2): 259-298 McIntosh, J M., A Hasson, M E Spira, W R Gray, W Li, M Marsh, D R Hillyard and B M Olivera (1995) "A new family of conotoxins that blocks voltage-gated sodium channels." J Biol Chem 270(28): 16796-16802 McIntosh, J M., A D Santos and B M Olivera (1999) "Conus peptides targeted to specific nicotinic acetylcholine receptor subtypes." Annu Rev Biochem 68: 59-88 Mueller, A., H Starobova, M C Inserra, A H Jin, J R Deuis, S Dutertre, R J Lewis, P F Alewood, N L Daly and I Vetter (2015) "alpha-Conotoxin MrIC is a biased agonist at alpha7 nicotinic acetylcholine receptors." Biochem Pharmacol 94(2): 155-163 Nguyen, B., J P Caer, G Mourier, R Thai, H Lamthanh, D Servent, E Benoit and J Molgo (2014) "Characterization of a novel Conus bandanus conopeptide belonging to the M-superfamily containing bromotryptophan." Mar Drugs 12(6): 3449-3465 Olivera, B M and R W Teichert (2007) "Diversity of the neurotoxic Conus peptides: a model for concerted pharmacological discovery." Mol Interv 7(5): 251-260 10 Röckel, D., W Korn and A Kohn (1995) "Manual of the Living Conidae, Volume 1: Indo-Pacific Region: 1-517." Hackenheim Verlag Christa Hemmen 11 Rodriguez, A M., S Dutertre, R J Lewis and F Mari (2015) "Intraspecific variations in Conus purpurascens injected venom using LC/MALDI-TOF-MS and LC-ESI-TripleTOF-MS." Anal Bioanal Chem 407(20): 6105-6116 10 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản lượng động vật: phương pháp xác định lượng trực tiếp gián tiếp Tuy nhiên, hầu hết nhà nghiên cứu sử dụng phương pháp gián tiếp cá Phương pháp ước tính nhu cầu lượng cá gián tiếp thông qua số đo tiêu thụ oxy, bao gồm phân tích so sánh thể Kỹ thuật giải phẫu so sánh áp dụng nghiên cứu nhằm xác định giá trị lượng mơ sử dụng suốt q trình cá bị bỏ đói Phương pháp chọn phương pháp khả thi mang tính ứng dụng nhất: cá lưu giữ thành nhóm bể, di chuyển tự thời gian kỳ kiểm tra đủ dài Sự thất lượng protein hàng ngày tính tốn dễ dàng Để xác định thất thoát lượng protein sau bị bỏ đói, cá cho nhóm nhóm cá cần nghiên cứu (Bảng 1) lưu giữ bể 150 L 11-40 ngày tùy theo kích cỡ cá cá không cấp thức ăn Sau thời gian bỏ đói, cá xử lý bảo quản -20°C phân tích Trong việc tính tốn thất lượng protein bỏ đói, mẫu cá nhóm kích cỡ, phân tích ban đầu xem đại diện hàm lượng chất thể để từ tính tốn thất theo thời gian bỏ đói Các phương pháp phân tích 2.1 Phân tích hố học Việc phân tích tiến hành Viện Nghiên cứu ứng dụng công nghệ Nha Trang Trung tâm Thí nghiệm – Thực hành, Trường Đại học Nha Trang Các mẫu nguyên liệu thức ăn, thức ăn, cá mú chủ yếu phân tích theo Hệ thống phân tích thơ (Proximate Analysis System) hay cịn gọi Phương pháp Weende (AOAC, 2005) Phân tích proteindùng phương pháp Kjeldahl Phân tích lipid tổng số dùng phương pháp Folch (Folch et al., 1957) 2.2 Phân tích thống kê Số liệu xử lý thống kê phần mềm SPSS (phiên 16.0) Excel 50 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Số 1/2018 Phép kiểm định Duncan’s Multiple Range sử dụng để kiểm tra khác trung bình nghiệm thức Các sai khác đánh giá có ý nghĩa mức P < 0,05 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Sinh trưởng cá mú nuôi lượng thức ăn cá ăn vào Để thiết lập mơ hình dự báo tiềm sinh trưởng cá mú chấm đen suốt trình tăng trưởng, số liệu sinh trưởng cá lượng thức ăn cá ăn thu từ nhiều thí nghiệm khác mơ tả hàm tốn học Mối quan hệ mức tăng khối lượng (g) dạng biến phụ thuộc thể trọng (g) dạng biến độc lập phi tuyến số liệu mơ tả thích hợp với hàm logarithm tự nhiên Đối logarithm hàm hàm mũ thường áp dụng để mô tả mối quan hệ tăng trưởng phổ biến sinh học: Trong đó, BW = thể trọng (g) cá có kích cỡ khoảng 5-1800g T = nhiệt độ, khoảng 20 – 32°C n = kích cỡ mẫu, 130 Mức tăng khối lượng: WG (g/cá/ngày) = 0,056 * BW(g)0.684 (1) Với r2 = 0,976 (Hình 1) Hoặc bao gồm tác động nhiệt độ biến phụ, qua phân tích hồi quy, ta có mức tăng khối lượng (WG): WG (g/cá/ngày) = (0.000179*T3 – 0,01714*T2 + 0,522468*T – 5,00525)*BW0,56 (2) Với r2 = 0,816 (Hình 3A) Từ đó, tá dự báo khối lượng cá thu sau t ngày nuôi (BWt) từ khối lượng cá ban đầu (BWo) sau: BWt = BWo + WG*t ↔ BWt = BWo + [(0,000179*T3 – 0,01714*T2 + 0,522468*T – 5,00525)* BWo0,56]*t (3) Lượng thức ăn cá ăn vào mô tả theo cách tương tự Lượng thức ăn cá ăn vào: FI (g/cá/ngày) = 0,062*BW0,75 (4) Với r2 = 0,978 (Hình 1) Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 Và bao gồm tác động nhiệt độ nước, qua phân tích hồi quy, ta có: Lượng thức ăn cá ăn vào: FI (g/cá/ngày) = (-0,00021*T3 + 0,014847*T2 – 0,33092*T + 2,411174)*BW0,7 (5) Với r2 = 0,923 (Hình 3B) Hình Mức tăng khối lượng cá (g) lượng thức ăn cá ăn vào hàng ngày (g) mối liên hệ với thể trọng tăng lên cá mú chấm đen cho ăn đến thỏa mãn Hình thể mối liên hệ mức tăng khối lượng cá (g) lượng thức ăn cá ăn vào (g) hàng ngày thể trọng cá mú chấm đen (g) Các đường cong mô tả mối quan hệ nhiệt độ nước trung bình 28oC cho lượng thức ăn cá ăn vào mức tăng khối lượng cá Từ Hình thấy: mức tăng khối lượng tuyệt đối lượng thức ăn cá ăn tăng lên với gia tăng thể trọng cá Lượng thức ăn cá ăn vào tăng mức độ cao so với mức tăng khối lượng Hình (A B) thể mối liên hệ mức tăng khối lượng cá (g) lượng thức ăn cá ăn vào (g) hàng ngày thể trọng cá mú chấm đen (g) với tác động bổ sung nhiệt độ nước Hình cho thấy, nhiệt độ nước nằm khoảng 25-30oC, lượng thức ăn cá ăn vào mức tăng khối lượng tuyệt đối cá tăng lên kích cỡ cá tăng lên Điều kiện tiên việc ước tính nhu cầu thức ăn đối tượng nuôi phải xác định tiềm sinh trưởng tối đa Mơ hình địi hỏi phải có số liệu sinh trưởng cá từ thí nghiệm mà nguồn cung cấp thức ăn góc độ lượng dưỡng chất không chịu giới hạn điều kiện cho sinh trưởng tối ưu phải thỏa mãn Vì vậy, bước để xác định nhu cầu lượng protein phải Hình Biểu đồ thể Mức tăng khối lượng (A) lượng thức ăn cá sử dụng (B) cá mú chấm đen có kích cỡ khác mối liên hệ với nhiệt độ nước TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 51 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản thiết lập Mơ hình sinh trưởng mức nhiệt độ khác với đánh giá lượng thức ăn cá chủ động ăn vào (Hình 1) Do lượng lượng protein thu vào hàm số lượng thức ăn cá ăn vào chất lượng thức ăn, nên việc dự báo lượng thức ăn mà cá tiêu thụ cần thiết Điều cần có để điều chỉnh hàm lượng lượng protein thức ăn tiềm Cá mú chấm đen nuôi thức ăn tổng hợp tự sản xuất cho thấy kết khả quan Theo dự báo tăng trưởng, cá mú chấm đen tăng trưởng từ g đến khoảng kg thời gian nuôi khoảng năm nhiệt độ nước 27ºC (Phương trình (3)) Sinh trưởng tương tự với sinh trưởng cá mú chấm cam E coioides cá mú mỡ E tauvina nuôi ao đăng lưới cá mú trắng Số 1/2018 E aeneus ni bể ngồi trời đối tượng cá mú loài cá biển có tốc độ sinh trưởng nhanh (Chou and Wong, 1985; Bombeo-Tuburan et al., 2001; Lupatsch and Kissil, 2005) Trong lồi cá mú có giá trị kinh tế khác Địa Trung Hải E guaza, lại có tốc độ sinh trưởng thấp điều kiện ni, chí cho ăn thức ăn sống (Castello-Orvay et al., 1992) Thành phần mức tăng khối lượng Thành phần sinh hóa tồn thể cá mú chấm đen từ 5-700 g thể Hình Các hàm lượng protein tro khơng thay đổi kích cỡ cá tăng lên có giá trị trung bình 169,4 ± 7,4 mg/g 41,5 ± 6,9 mg/g (hàm lượng tro khơng thể Hình 3A) Trong đó, độ ẩm, hàm Hình Thành phần(A) hàm lượng lượng (B) cá mú chấm đen theo khối lượng cá lượng lipid lượng thay đổi đáng kể khối lượng thể cá tăng lên thể tốt phương trình hồi quy sau (n = 21) Năng lượng (kJ/g) = 3,51 x BW0,102 với r2 = 0,937 (6); Lipid (mg/g) = 9,288 x BW0,291 với r2 = 0,951 (7); Độ ẩm (mg/g) = 845,5 x BW-0,03 với r2 = 0,936 (8) Do phần lớn lượng protein cá tiêu thụ tích lũy dạng tăng trưởng, nên thành phần sinh hóa thể cá xem nhân tố quan trọng khác bên cạnh tăng trưởng, xác định nhu cầu lượng protein cá Ở cá mú chấm đen, hàm lượng lượng tăng lên khối lượng cá tăng lên tăng nhẹ từ 4,4 đến 7,0 kJ (Hình 3B) 52 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG cho cá có kích cỡ từ 4,6 đến 700,5 g Điều tương phản với cá chẽm châu Âu cá hanh đầu vàng có kích cỡ 400 g, chúng có hàm lượng lượng đạt 10 kJ chí 11,5 kJ/g khối lượng cá sống, theo thứ tự tương ứng (Lupatsch et al., 2003a) Các giá trị từ kết nghiên cứu thấp so với với giá trị cá mú trắng E aeneus (4,8 – 7,5 kJ/g), nhiên mú trắng lại có phạm vi kích cỡ lớn (1 – 1600 g) (Lupatsch and Kissil, 2005) Hàm lượng protein nhìn chung không thay đổi nhiều cá mú chấm đen với kích cỡ cá nghiên cứu giá trị trung bình 169,4 mg/g Diễn biến hàm lượng protein theo kích cỡ giá trị trung bình gần với Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản kết nghiên cứu cá mú trắng (Lupatsch and Kissil, 2005) Việc hàm lượng protein ổn định cịn hàm lượng lượng tăng lên kích cỡ cá tăng lên mang tính đặc thù cho hầu hết lồi cá mơ tả trước (Lupatsch et al., 2003a) Vì vậy, việc ước tính nhu cầu tích lũy mơ tăng trưởng, biến động lớn lồi khía cạnh lượng kỳ vọng dựa thành phần mô khác Số 1/2018 Chẳng hạn, cá chẽm châu Âu, cá hanh đầu vàng cá hồi Đại Tây Dương có mật độ lượng tương đối dày nên chúng đòi hỏi lượng thức ăn đơn vị thể trọng sống nhiều so với loài cá béo cá mú Dù cần lưu ý nhu cầu protein thức ăn đơn vị mức tăng khối lượng cá loài cá (Lupatsch et al., 2003a) Thể trọng chuyển hóa (Metabolic Body Weight – MBW) Hình Thất thoát lượng (kJ) protein (g) hàng ngày cá mú chấm đen thí nghiệm bỏ đói theo mức tăng khối lượng cá (ở nhiệt độ nước 28,0 ± 1,79ºC) Những mối quan hệ thất thoát lượng (kJ) protein (g) hàng ngày với khối lượng cá (g) cá mú chấm đen thể Hình (A & B) Do thí nghiệm tiến hành mơi trường nước biển có nhiệt độ dao động phạm vi 24 – 31oC, nên tỷ lệ chuyển hóa mơ tả cho phạm vi nhiệt độ Ngoài ra, tác động nhiệt độ không lớn so với tác động khối lượng cá đưa nhân tố nhiệt độ vào phương trình dạng hàm mũ khơng có thêm cải thiện đáng kể hệ số tương quan Như vậy, thất thoát lượng protein (n = 42) thể phương trình sau: Thất lượng (kJ/cá/ngày) = 0,111 x BW0,827 với r2 = 0,909 (9); Thất thoát protein (g/cá/ngày) = 0,003 x 0,701 BW với r2 = 0,822 (10) Qua đó, ta thấy: số mũ (kg)0,8 (kg)0,7 mô tả thể trọng chuyển hóa cho lượng protein cá mú chấm đen Những giá trị gần với kết nghiên cứu trước cá hanh đầu vàng, cá chẽm châu Âu cá mú trắng (Lupatsch et al, 2003a & b 2005) IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1) Sinh trưởng cá mú chấm đen (dưới dạng WG) thể phương trình: WG (g/cá/ngày) = (0,000179*T3 – 0,01714*T2 + 0,522468*T – 5,00525)*BW0,56 T nhiệt độ nước 2) Lượng thức ăn cá sử dụng thể qua phương trình: FI (g/cá/ngày) = (-0,00021*T3 + 0,014847*T2 – 0,33092*T + 2,411174)*BW0,7 T nhiệt độ nước 3) Thành phần mức tăng khối lượng cá mú chấm đen sau: - Các hàm lượng protein tro khơng thay đổi kích cỡ cá tăng lên có TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 53 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản giá trị trung bình 169,4 ± 7,4 mg/g 41,5 ± 6,9 mg/g - Độ ẩm, hàm lượng lipid lượng thay đổi khối lượng thể cá tăng lên thể phương trình: Độ ẩm (mg/g) = 845,5 x BW-0,03; Lipid (mg/g) = 9,288 x BW0,291; Năng lượng (kJ/g) = 3,51 x BW0,102 4) Sự thất thoát lượng protein (n = 42) thể phương trình: Thất lượng (kJ/cá/ngày) = 0,111 x BW0,827; Thất thoát protein (g/cá/ngày) = 0,003 x BW0,701 Qua đó, số mũ (kg)0,8 (kg)0,7 mơ tả thể trọng chuyển hóa cho Số 1/2018 lượng protein cá mú chấm đen Kiến nghị Nên triển khai thực nghiệm nuôi thịt trọn chu kỳ để kiểm chứng thông số kỹ thuật hiệu chỉnh thơng số (nếu có) để hồn thiện Mơ hình sinh lượng học cho cá mú chấm đen LỜI CẢM ƠN Chúng cảm ơn hỗ trợ dự án Australian Centre for International Agricultural Research (ACIAR) Project FIS-2006-141 Đề tài cấp Trường TR2017-13-04 TÀI LIỆU THAM KHẢO Baldwin and Sainz, 1995 Energy partitioning and modeling in animal nutrition Annu Rev Nutr 1995, 15: 191-211 Bombeo-Tuburan, I., Coniza, E.B., Rodriguez, E.M., Agbayani, R.F., 2001 Culture and economics of wild grouper (Epinephelus coioides) using three feed types in ponds Aquaculture, 201, 229–240 Brett, J.R., 1962 Some considerations in the study of respiratory metabolism in fish, particularly salmon J Fisheries Research Board Canada 19: 1025-1038 Castello-Orvay, F., Fernandez-Vilar, A., Llaurado, F., Vinas, R., 1992 Effect of different types of food on growth in captive grouper (Epinephelus guaza, L.) Mar Life, 1, 57– 62 Cho, C.Y., 1992 Feeding systems for rainbow trout and other salmonids with reference to current estimates of energy and protein requirements Aquaculture 100: 107-123 Cho, C.Y & Bureau, D.P., 1998 Development of bioenergetic models and the Fish-PrFEQ software to estimate production, feeding ration and waste output in aquaculture Aquat Living Resour., 11, 199–210 Cho, C.Y., Slinger, S.J and Bayley, M.S., 1982 “Bioenergertics of salmonid fishes: energy intake, expenditure and productivity”, Com Biochem Physiol 73B, pp 25-41 Chou, R., Wong, F.J., 1985 Preliminary observations on the growth and dietary performance of grouper, Epinephelus tauvina, in floating netcages and fed dry pelleted diet from autofeeders Singap J Prim Ind., 13, 84– 91 Folch, J., Lees, M., Sloane-Stanley, G.H., 1957 Simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues J Biol Chem., 226, 497– 507 10 Fry, F.E.J., 1957 The aquatic respiration of fish In: The Physiology of Fishes (Brown, M.E ed) Vol I Academic Press, New York, pp 1-63 11 Glencross, B.D., 2008 A factorial growth and feed utilisation model for barramundi, Lates calcarifer based on Australian production conditions Aquac Nutr., 14, 360–373 12 Jobbling, M., 1994 Fish Bioenergetics Chapman & Hall 2-6 Boundary Row, London SE1 8HN, UK, 54 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 310 p 13 Lupatsch, I., Kissil, G.W., Sklan, D., Pfeffer, E., 1998 Energy and protein requirements for maintenance and growth in gilthead seabream (Sparus aurata L.) Aquac Nutr 4, 165–173 14 Lupatsch, I., Kissil, G.Wm., Sklan, D., 2001a Optimization of feeding regimes for European seabass Dicentrarchus labrax: a factorial approach Aquaculture, 202, 289– 302 15 Lupatsch, I., Kissil, G.Wm., Sklan, D., Pfeffer, E., 2001b Effects of varying dietary protein and energy supply on growth, body composition and protein utilization in gilthead seabream (Sparus aurata L.) Aquac Nutr., 7, 71– 80 16 Lupatsch, 2003 Factorial Approach to Determining Energy and Protein Requirements of Gilthead seabream (Sparus aurata) for Optimal Efficiency of Production PhD thesis, Institut für Tierernährung, Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität 17 Lupatsch, I., Kissil, G.Wm., Sklan, D., 2003a Comparison of energy and protein efficiency among three fish species: gilthead seabream (Sparus aurata), European seabass (Dicentrarchus labrax) and white grouper (Epinephelus aeneus): energy expenditure for protein and lipid deposition Aquaculture, 225, 175– 189 18 Lupatsch, I., Kissil, G.Wm., Sklan, D., 2003b Defining energy and protein requirements of gilthead seabream (Sparus aurata) to optimize feeds and feeding regimes Isr J Aquac.-Bamidgeh, 55, 243– 257 19 LupatschT I., Kissil, G.W., 2005 Feed formulations based on energy and protein demands in white grouper (Epinephelus aeneus) Aquaculture 248, 83– 95 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 55 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 THÔNG BÁO KHOA HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA ĐỘ MẶN VÀ CHẾ ĐỘ CHO ĂN LÊN TỐC ĐỘ TĂNG TRƯỞNG VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA TÔM HE ẤN ĐỘ Penaeus indicus EFFECTS OF SALINITY AND FEEDING REGIME ON GROWTH AND SURVIVAL OF INDIAN SHRIMP Penaeus indicus Hoàng Tùng1, Trương Ái Nguyên1, Hồ Hải Cơ1, Võ Thị Minh Thư1 Ngày nhận bài: 7/12/2017; Ngày phản biện thông qua: 6/3/2018; Ngày duyệt đăng: 27/4/2018 TÓM TẮT Nghiên cứu kiểm chứng giả thuyết tác dụng tích cực việc cho tôm ăn 30% phần ăn vào ban đêm ảnh hưởng độ mặn lên tỉ lệ sống, tốc độ tăng trưởng hệ số chuyển đổi thức ăn FCR tơm he Ấn Độ Penaeus indicus Thí nghiệm thiết kế theo kiểu Split-plot với yếu tố độ mặn (15 30 ppt) yếu tố phụ chế độ cho ăn (ban lẫn đêm) Kết cho thấy độ mặn ảnh hưởng đến tất thông số quan sát Tơm ni độ mặn 30 ppt có tỉ lệ sống, FCR tốc độ tăng trưởng cao so với độ mặn 15 ppt (P < 0,05) Trong đó, cho tơm ăn 30% phần vào ban đêm cải thiện tốc độ tăng trưởng (P < 0,05) không ảnh hưởng đến tỉ lệ sống FCR tơm thí nghiệm (P > 0,05) Kiểm định thống kê không ghi nhận tương tác yếu tố nghiên cứu độ mặn chế độ cho ăn (P > 0,05) Chúng đề xuất nên nuôi tôm he Ấn Độ độ mặn 30 ppt cho tôm ăn ban ngày lẫn đêm để cải thiện tốc độ tăng trưởng, rút ngắn thời gian nuôi tiết kiệm chi phí thức ăn Từ khóa: Penaeus indicus, tăng trưởng, độ mặn, chế độ cho ăn ABSTRACT In this study we examined possible effects of night feeding (30% of daily ration) and salinity on survival, growth and feed conversion ratio (FCR) of the Indian shrimp Penaeus indicus via a split-plot experiment with salinity as the main-plot factor (15 and 30 ppt) and feeding regime as the sub-plot factor (DO: day only, and DAN: day and night) Results show that salinity srongly affect all the observed parameters Shrimps grown at 30 ppt had significantly higher survival, FCR and growth than those grown at 15 ppt (P < 0.05) Feeding shrimp 30% of daily ration at night improved growth (P < 0.05), but had no effect on survival or FCR (P > 0.05) There was, however, no interaction between the two examined factors: salinity and feeding regime (P > 0.05) We therefore suggest that salinity of 30 ppt and night feeding should be applied in farming Penaeus indicus for growth improvement, reduction of crop length and feed cost Key words: Penaeus indicus, growth, salinity, feeding regime I ĐẶT VẤN ĐỀ Tôm he Ấn độ Penaeus indicus đối tượng nuôi quan trọng khu vực Nam Đông Nam Á (FAO 2016) Tôm thường nuôi hình thức quảng canh, đầm nước lợ ven biển (Akiyama & Anggawa 1999) Kết nuôi Các Tiểu vương quốc Ả rập, Việt Nam, Iran, Cộng hòa Mozambique, Nam Phi Ấn độ cho suất cao, hiệu kinh tế tốt Quan trọng hơn, P indicus có khả kháng số tác nhân gây bệnh nguy hiểm Whitetailed Nodavirus (MrNV), siêu vi khuẩn (XSV), virus gây bệnh đốm trắng có tần suất nhiễm bệnh đầu vàng thấp tôm thẻ chân trắng P vannamei hay tôm sú P monodon điều kiện tự nhiên (Rajendran et al 1999; Senapin et al 2010) Các quan sát ban đầu Việt Nam Các tiểu vương quốc Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Quốc tế - Đại học Quốc Gia Hồ Chí Minh 56 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Ả rập cho thấy P indicus chưa bị tác động bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (AHPND) hay cịn gọi hội chứng chết sớm EMS AHPND coi loại bệnh nguy hiểm ngành nuôi tôm giới Độ mặn yếu tố quan trọng nuôi tôm đa phần đối tượng nuôi thuộc loại rộng muối Đã có nhiều nghiên cứu cho thấy độ mặn ảnh hưởng đến tỉ lệ sống (Ogle et al 1992), tần suất lột xác (Pante 1990), tiêu hao oxy hòa tan (Villarreal et al 1994) tốc độ tăng trưởng tôm (Huang 1983; Wyban et al 1995) Theo Bray et al (1994) độ mặn thấp ppt khiến P vannamei suy giảm khả đồng hóa thức ăn, giảm tốc độ tăng trưởng mẫn cảm với tác nhân gây bệnh Nước có độ mặn thấp thường thiếu khoáng chất Ca2+, Mg2+ K+ gây ảnh hưởng đến trình trao đổi chất tạo vỏ tôm lột xác tăng trưởng (Hồng Tùng 2016) Thơng thường, yếu tố đảm bảo thời gian lần lột xác ngắn lại, tơm có tăng trưởng tốt độ mặn thấp (Diwan & Laxminarayana 1989) Tương tự, Chen et al (1992) cho biết độ mặn tối ưu cho tôm nương P chinensis 20 – 25 ppt Tỉ lệ sống tốc độ tăng trưởng P chinensis sau 60 ngày nuôi thấp độ mặn ppt 35 – 40 ppt Nghiên cứu khả thích ứng với độ mặn P indicus chưa có nhiều Kumlu (1998) thử nghiệm ương ấu trùng P indicus giai đoạn sản xuất giống nhiều độ mặn khác kết luận 25 ppt phù hợp Thông tin ban đầu từ nghiên cứu cho thấy tôm he Ấn Độ P indicus nuôi quảng canh đầm nước lợ tỉnh Kiên Giang Cà Mau, đồng thời chúng có khả thích ứng tốt với nhiệt độ cao khu vực miền Trung nơi độ mặn dễ dàng đạt 30 ppt cao mùa nắng nóng (Hồng Tùng, số liệu chưa cơng bố) Vì vậy, qua nghiên cứu này, chúng tơi muốn đánh giá Số 1/2018 tốc độ tăng trưởng tôm he Ấn Độ độ mặn đại diện cho khu vực sinh thái ven biển 30 ppt vùng nước lợ 15 ppt Một vấn đề quan trọng nuôi tôm thương phẩm chế độ cho ăn Về bản, cho tôm ăn vào ban đêm khơng khuyến khích, ngoại trừ đối tượng nuôi tôm he Nhật Bản P japonicus đối tượng hoạt động trời tối (Cuzon et al 1982) Lý ao ni tơm thường bị thiếu oxy hồ tan đêm Tôm thẻ chân trắng P vannamei không bắt mồi hàm lượng oxy hòa tan nước mức thấp mg/L (Hoàng Tùng 2016) Tuy nhiên, việc không cho tôm ăn vào ban đêm thiếu logic xem xét tập tính tự nhiên tơm he Các đối tượng tôm bạc thẻ Penaeus merguiensis, tôm rằn P esculentus hay tôm thẻ chân trắng bắt mồi nhiều vào ban đêm (Hill & Wassenberg 1987; Wassenberg & Hill 1993; Napaumpaiporn et al 2013) Quan sát thực tế sở nuôi thâm canh tôm thẻ chân trắng qua nhiều vụ cho thấy tốc độ tăng trưởng tôm cải thiện khoảng 20 - 30% cho tôm ăn từ 20:00 đến 04:00 ngày hôm sau với điều kiện đảm bảo hàm lượng oxy hòa tan mg/L Trong nghiên cứu này, muốn kiểm chứng giả thuyết (i) tôm he Ấn Độ tăng trưởng tốt cho ăn đêm 30% phần ăn hàng ngày so với cho ăn vào ban ngày khuyến cáo kỹ thuật thông thường, (ii) độ mặn 30 ppt tốt so với 15 ppt xét tốc độ tăng trưởng lẫn tỉ lệ sống tôm he Ấn Độ có phân bố tự nhiên khu vực có độ mặn cao Thơng tin thu góp phần hồn thiện chế độ cho ăn tơm he ni thương phẩm nói chung hỗ trợ q trình xây dựng qui trình kỹ thuật ni tơm he Ấn Độ Việt Nam II ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Tôm he Ấn Độ (Penaeus indicus) sản TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 57 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản xuất Cà Mau nguồn tôm bố mẹ thu thập khu vực Cà Mau – Kiên Giang Tôm giống PL10 chuyển nuôi độ mặn 20 ppt Khu thực nghiệm Công nghệ Sinh học Trường Đại học Quốc tế thêm 60 ngày Trước tiến hành thí nghiệm 10 ngày, tơm chia làm nhóm độ mặn 30 ppt 15 ppt Các cá thể có kích thước đồng đều, bơi lội khỏe mạnh, khơng bị tổn thương chọn ngẫu nhiên để tiến hành thí nghiệm Xét nghiệm phương pháp PCR khẳng định đàn tơm thí nghiệm âm tính với bệnh hoại tử gan tụy cấp tính Chiều dài khối lượng thân trung bình tơm thời điểm bắt đầu thí nghiệm 20,3 ±1,5 mm 50,0 ± 4,0 mg Thiết kế thí nghiệm Thí nghiệm hai yếu tố thiết kế theo kiểu Split-plot với yếu tố - main plot factor độ mặn (15 30 ppt) với lần lặp sử dụng hệ thống tuần hoàn yếu tố phụ chế độ cho ăn (ban ngày - DO ngày lẫn đêm - DAN) với lần lặp (2 bể hệ thống tuần hồn) Đơn vị thí nghiệm bể composite thể tích 250 lít chứa 100 lít nước với mật độ nuôi 40 con/bể Nước biển sử dụng cho thí nghiệm có độ mặn 30 ppt cung cấp Trung tâm Giống Hải sản Quốc gia Khu vực Nam Trung Bộ Số 1/2018 Vũng Tàu Nước lọc qua lọc cát, xử lý Chlorine 20 ppm, sục khí mạnh liên tục 72 cho hết dư lượng chlor Nước có độ mặn 15 ppt tạo cách pha trộn nước biển xử lý với nước máy phục vụ sinh hoạt, kiểm tra lại khúc xạ kế Atago Trong thời gian thí nghiệm, nước hệ thống tuần hồn thay 10 – 20% tuần để đảm bảo chất lượng Các chế phẩm vi sinh gồm Chính Floc EMG (của Công ty Green Guard) sử dụng định kỳ giúp xử lý chất thải hệ thống, kiểm soát hàm lượng NH3 NO2- Các yếu tố môi trường quan trọng độ mặn, nhiệt độ, độ kiềm, độ pH, oxy hòa tan, NO2- NH3, độ kiềm đo đạc hang ngày trì khoảng tối ưu suốt thời gian thí nghiệm (Bảng 1) Chế độ cho ăn ban ngày (DO) có đợt cho ăn: 08:00 – 12:00 14:00 – 18:00, đợt 50% phần ăn hàng ngày Chế độ cho ăn ngày lẫn đêm (DAN) có đợt cho ăn vào lúc 08:00 – 12:00, 14:00 – 18:00 20:00 – 24:00, lần sử dụng 1/3 phần ăn hàng ngày Thức ăn sử dụng cho thí nghiệm MEGA (40% protein Nutreco International Vietnam), rải khoảng thời gian định máy cho ăn tự động với phần ăn 5% khối lượng thân/ngày Bảng 1: Các yếu tố môi trường q trình thí nghiệm Thu thập xử lý số liệu Số lượng tôm chết bể nuôi ghi nhận ngày, làm sở tính tỉ lệ sống Tại thời điểm thí nghiệm (ngày 21) kết thúc thí nghiệm (ngày 42), khối lượng thân chiều 58 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG dài thân tơm xác định cho bể thí nghiệm Số liệu sử dụng để tính tốc độ tăng trưởng Để ước tính lượng thức ăn tơm không sử dụng, thực nghiệm ngâm thức ăn nước nuôi tôm độ mặn Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản 15 30 ppt thấy hệ số qui đổi 1,0 g thức ăn khô sau thời gian cho ăn tương ứng 1,93 g độ mặn 15 ppt 1,96 g độ mặn 30 ppt Tỉ lệ chuyển đổi thức ăn (FCR) tính dựa lượng thức ăn tôm sử dụng chia cho sinh khối gia tăng tơm thời gian thí nghiệm Tồn số liệu phân tích kiểm định ANOVA yếu tố cho thiết kế dạng split-plot mức ý nghĩa 0,05 sử dụng phần mềm SPSS ver 22.0 for Windows (Sokal & Rohlf 2009) Số liệu tỉ lệ sống chuyển dạng arcsin trước phân tích để thoả mãn giả định ANOVA độ đồng phương sai III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Độ mặn ảnh hưởng mạnh đến tỉ lệ sống, hệ số chuyển đổi thức ăn - FCR tốc độ tăng trưởng tôm he Ấn Độ thí nghiệm (P < 0,05) (Bảng 2, Hình 1) Trong đó, cho ăn vào ban đêm cải thiện tốc độ tăng trưởng tôm (P < 0,05) không ảnh hưởng đến tỉ lệ sống FCR (P < 0,05) Kiểm định ANOVA yếu tố không ghi nhận tương tác yếu tố nghiên cứu độ mặn chế độ cho ăn (P < 0,05) Tỉ lệ sống đạt 75% độ mặn 30 ppt; cao gấp 2,8 lần so với độ mặn 15 ppt (P < 0,05) (Hình 1) Quan sát chúng tơi cho thấy tơm hao hụt thí nghiệm tượng ăn thịt lẫn vào kỳ lột xác Tôm sử dụng thức ăn tốt 30 ppt bắt mồi 15 ppt Vì mà FCR độ mặn 30 ppt tốt nhiều, 44% độ mặn 15% (P < 0,05) Về tốc độ tăng trưởng, tôm độ mặn 30 ppt có chiều dài khối lượng thân cao tôm độ mặn 15 ppt 13 25% kết thúc thí nghiệm (Hình 1) Mặc dù không cải thiện đáng kể FCR tôm cho ăn ban ngày lẫn ban đêm có tốc độ tăng trưởng cao so với tôm cho ăn vào ban ngày, khoảng 7% chiều dài 25% khối lượng thân (P < 0,05) Nghiên cứu thành công việc kiểm chứng giả thuyết đề Số 1/2018 ảnh hưởng độ mặn chế độ cho ăn đến tỉ lệ sống, FCR tốc độ tăng trưởng tôm he Ấn Độ Penaeus indicus Kết tốt ghi nhận cho nghiệm thức với độ mặn 30 ppt sử dụng chế độ cho ăn vào ban đêm Kết phù hợp với phân bố sinh thái tôm he Ấn Độ tập tính bắt mồi tơm he (Dall 1992) Tơm he Ấn Độ coi lồi rộng muối, có khả thích ứng với độ mặn từ – 40 ppt (ParadeEstepa at al 1987, Diwan & Laximinarayana 1989) khả tốt ngưỡng độ mặn cao (Kumlu & Jones 1995) Khả thích ứng khác quần đàn tôm tự nhiên tự nhiên Tơm có nguồn gốc từ Red Sea nơi độ mặn dao động trọng khoảng 36 – 41 ppt có tỉ lệ sống tốc độ tăng trưởng tốt nuôi độ mặn 50 ppt so với độ mặn từ 10 – 40 ppt (Bukhari et al 1994) Trong đó, tơm có nguồn gốc từ khu vực đầm phá ven biển Ấn Độ lại phát triển tốt độ mặn – 25 ppt (Raj & Raj 1982) Quần đàn tôm sử dụng thí nghiệm chúng tơi có nguồn gốc từ vùng biển Kiên Giang – Cà Mau Tôm phát triển 30 ppt tốt nhiều so với 15 ppt Sự khác biệt phản ánh khả đáp ứng khoáng chất cần thiết Ca2+, Mg2+ K+ cho trình tăng trưởng tôm nước độ mặn khác Nước có độ mặn thấp hơn, thường thiếu khống chất để tơm sử dụng lột xác lại kích thích tơm lột nhiều Tơm thiếu khống chất ăn thịt nhỏ yếu hơn, đặc biệt thời điểm lột xác để tích lũy thêm chất cần thiết Chính mà tượng ăn thịt diễn mạnh độ mặn 15 ppt thí nghiệm này, khiến cho tỉ lệ sống đạt 26,9% Chen et al (1992) có quan sát giống nghiên cứu ảnh hưởng độ mặn từ – 30 ppt lên tỉ lệ sống tốc độ tăng trưởng tôm nương P chinensis Các tác giả cho biết tôm lột xác nhiều độ mặn thấp chết đa phần thời điểm lột xác TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 59 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 Bảng 2: Tỉ lệ sống, hệ số chuyển đổi thức ăn kích thước tơm kết thúc thí nghiệm Số liệu trình bày giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn DAN: cho ăn ngày lẫn đêm; DO: cho ăn vào ban ngày Độ mặn 15 ppt gây stress cho tôm khiến chúng bắt mồi kém, thức ăn thừa nhiều khả chuyển hóa thức ăn thành mơ thịt khơng tốt FCR trung bình nghiệm thức sử dụng nước có độ mặn 15 ppt lên tới 3,53; cao nhiều so với mức 1,55 nghiệm thức sử dụng nước có độ mặn 30 ppt Kết không giống với kết luận Vijayan & Diwan (1995) phù hợp với nghiên cứu Kumlu & Jones (1995) Theo tác giả này, tôm he Ấn Độ giai đoạn ấu niên phát triển tốt độ mặn 20 – 30 ppt Tỉ lệ chết cao tôm nuôi độ mặn 10 ppt Jiang et al (2000) cho biết, tôm thẻ chân trắng P vannamei giai đoạn ấu niên nuôi 10 ppt thải NH4+ nhiều so với 25 ppt có tốc độ tăng trưởng Độ mặn 25 ppt cho tối ưu đối để P vannamei tăng trưởng chúng thích ứng từ – 50 ppt (Pante 1990, Stern et al 1990) Như vậy, tôm he Ấn Độ có khả thích ứng với độ mặn thấp so với đối tượng nuôi phổ biến khác tôm thẻ chân trắng P vannamei tôm sú P monodon Zhang et al (1989) cho biết tôm sú sống tăng trưởng tốt độ mặn ppt Trong đến 50% sản lượng tôm thẻ chân trắng nuôi vùng nước Trung Quốc (Hoàng Tùng et al 2016) Về mặt kỹ thuật, điểm thú vị 60 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG nghiên cứu cải thiện tốc độ tăng trưởng tôm he Ấn Độ tiến hành cho ăn vào ban đêm, thay cho ăn vào ban ngày khuyến cáo nuôi tôm thẻ chân trắng tôm sú qui mơ bán thâm canh, thâm canh (Hồng Tùng et al 2016) Trong thực tế, khuyến cáo có sở đa phần người ni tơm cho tơm ăn tay có đến 50% ao ni tơm Việt Nam có tượng thiếu oxy hòa tan vào ban đêm tháng nuôi cuối sinh khối đạt mức cao Cho ăn vào ban đêm phát huy hiệu đảm bảo oxy hòa tan mức cao mg/L sử dụng máy cho ăn tự động để rải thức ăn khoảng thời gian định, tránh dư thừa làm ảnh hưởng xấu đến chất lượng nước giảm hàm lượng oxy hòa tan Tại sở nuôi tôm thẻ chân trắng thâm canh đầu tư tốt hệ thống cung cấp oxy hòa tan sử dụng máy cho ăn, tốc độ tăng trưởng tôm cải thiện đáng kể cho tôm ăn khoảng 30% phần ăn ngày từ 20:00 đến 04:00 sáng hôm sau từ ngày nuôi thứ 45 trở Nhờ rút ngắn thời gian ni, khoảng 15 - 20 ngày so với bình thường Điều đặc biệt có ý nghĩa thời điểm giá tôm thị trường mức cao vùng ni tơm có dịch bệnh bùng phát rút ngắn thời gian đồng nghĩa với giảm thiểu rủi ro Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 Hình 1: Tỉ lệ sống, hệ số chuyển đổi thức ăn, khối lượng thân (g) chiều dài thân (mm) tơm kết thúc thí nghiệm Ghi chú: DAN: ngày lẫn đêm DO: ban ngày Số liệu trình bày giá trị trung bình ± sai số chuẩn Các chữ khác biểu thị khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) hai độ mặn hai chế độ cho ăn Robertson et al (1993) cho cho ăn hoàn toàn vào ban ngày hay hoàn toàn vào ban đêm cho kết tương đương tốc độ tăng trưởng tôm thẻ chân trắng Kết thí nghiệm cho thấy khác biệt FCR chế độ cho ăn (2,20 cho ăn ngày lẫn đêm 2,88 cho ăn vào ban ngày) khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) Tuy nhiên, khác biệt lại có ý nghĩa nhiều mặt kinh tế Tiết kiệm 0,68 thức ăn để sản xuất tôm he Ấn Độ thành phẩm tương đương với 20,4 triệu đồng giả định giá thức ăn nuôi tôm 30 triệu đồng/tấn Như vậy, ao nuôi tôm thẻ chân trắng 1.500 – 2.000 m² mật độ 200 – 400 con/m² với suất khoảng 4,0 10,0 tôm/vụ chuyển sang cho tôm ăn vào ban đêm tiết giảm 20,2 – 51,0 triệu đồng vụ với giả định khác biệt FCR 0,17 hay 25% trị số quan sát thí nghiệm Chúng tơi tin kết hợp cho ăn ngày đêm đem lại hiệu cao nhất, kiểm chứng giả thuyết đối tượng nuôi thâm canh TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 61 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản chủ lực Việt Nam tôm thẻ chân trắng nghiên cứu IV KẾT LUẬN Tôm he Ấn Độ Penaeus indicus giai đoạn ấu niên phát triển tốt độ mặn 30 ppt so với 15 ppt Tốc độ tăng trưởng tôm cải thiện đáng kể cho ăn 30% phần ngày vào ban đêm từ 20:00 máy cho ăn tự động Giải pháp kỹ thuật giúp sở ni tơm rút ngắn thời gian ni tiết kiệm chi phí sản xuất, đặc biệt chi phí thức ăn Số 1/2018 LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu phần đề tài 106-NN.05-2015.70 Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) tài trợ Chúng xin chân thành cảm ơn NAFOSTED, Trường Đại học Quốc tế - ĐHQG TPHCM, bà Nguyễn Thị Thủy (Trường Đại học Đồng Tháp), ông Phan Thanh Sơn (Hợp tác Đồng Khởi, Cà Mau) ông Nguyễn Dũng (Trại tôm giống Nguyễn Dũng, Năm Căn) nhiệt tình giúp đỡ trình thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hoàng Tùng, Trần Quang Đại, Trần Hoàng Anh Sử, Michael Leger, Nguyễn Thị Thùy Vân (2016) Nuôi tôm thẻ chân trắng bền vững hiệu NXB Nông nghiệp, CN TPHCM Tiếng Anh Akiyama & Anggawa (1999) Polyculture of shrimp and tilapia in East Java American Soybean Association (ASA) Technical Bulletin AQ 47-1999, p Bray W.A., A.L Lawrence, J.R Leung-Trujillo (1993) The effect of salinity on Growth and Survival of Penaeus vannamei, with observations on the interaction of IHHN virus and salinity Shrimp Mariculture Project, Texas Agricultural Experiment Station, Texas A&M University System, 4301 Waldron Road, Corpus Christi, TX, USA Bukhari F.A., Jones D.A., Salama, A.J (1994) Optimal salinities for the culture of Penaeus indicus from the Red Sea In: Proceedings of the First International Symposium on Aquaculture Technology and Investment Opportunities, Riyadh, Saudi Arabia, 1-14 April 1993, pp 379-389 Chen J.C., Lin M.N., Lin J.L., Ting Y.Y (1992) Effect of salinity on growth of Penaeus chinensis juveniles Comp Biochem Physiol 102A: 343-346 Cuzon, Gérard ; Hew, Meng ; Cognie, Daniel ; Soletchnik, Patrick (1982) Time lag effect of feeding on growth of juvenile shrimp, Penaeus japonicus Bate Aquaculture 29(1): 33-44 Dall W (1992) The biology of the penaeid Academic Press 489 p Diwan, A ; Laxminarayana, A (1989) Osmoregulatory ability of Penaeus indicus H Milne Edwards in relation to varying salinities Proceedings of Animal Sciences 98: 105-111 FAO (2016) The state of world fisheries and aquaculture 2016, contributing to food security and nutrition for all Rome 200 pp 10 Hill, B.J., Wassenberg, T.J (1987) Feeding behaviour of adult tiger prawns, Penaeus esculentus, under laboratory conditions Marine and Freshwater Research 38: 183-190 11 Huang, H.J (1983) Factors affecting the successful culture of Penaeus stylirostris and Penaeus vannamei at an estuarine power plant site: temperature, salinity, inherent growth variability, damselfly nymph predation, 62 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 1/2018 population density and distribution, and polyculture Texas A&M University, College Station, TX, USA, Ph.D Dissertation 12 Jiang Dong-Huo, Addison L Lawrence, William H Neill, Hui Gonga (2000) Effects of temperature and salinity on nitrogenous excretion by Litopenaeus vannamei juveniles Journal of Experimental Marine Biology and Ecology 253: 193–209 13 Kumlu M & Jones D.A (1995) Salinity tolerance of hatchery-reared postlarvae of Penaeus indicus H Milne Edwards originating from India Aquaculture 130: 287-296 14 Kumlu, M (1998) The effect of salinity on larval growth and survival of Penaeus indicus (Decapoda: Penaeidae) Turkish Journal of Zoology 22(2): 163-167 15 Napaumpaiporn, T., Chuchird, N., Taparhudee, W (2013) Study on the Efficiency of Three Different Feeding Techniques in the culture of Pacific White Shrimp (Litopenaeus vannamei) Kasetsart University Fisheries Research Bulletin 37: 8-16 16 Ogle, J.T., Beaugez, K., Lotz, J.M (1992) Effects of salinity on survival and growth of postlarval Penaeus vannamei Gulf Res Rep 8: 415–421 17 Pante, M.J.R (1990) Influence of environmental stress on the heritability of molting frequency and growth rate of the penaeid shrimp, Penaeus vannamei University of Houston-Clear lake, Houston, TX, USA, M.Sc Thesis 18 Parade-Estepa F., Ferraris R.P., Ladja J.M., Dejesus F.G (1987) Response of intermolt Penaeus indicus to large fluctuations in environmental salinity Aquaculture 64: 175-184 19 Raj P.R., Raj P.J.S (1982) Effect of salinity on growth and survival of three species of penaeid prawns Proc Symp Coastal Aquaculture 1: 236-243 20 Rajendran, K V and Vijayan, K K and Santiago, T C and Krol, R M (1999) Experimental host range and histopathology of white spot Syndrome virus (WSSV) infection in shrimp, prawns, crabs and lobsters from India Journal of Fish Diseases 22: 183-191 21 Robertson L., Lawrence A.L., Castil F.L (1993) Effect of feeding frequency and feeding time on growth of Penaeus vannamei (Boone) Aquaculture and Fisheries Management 24: 1-6 22 Senapin, S ; Thaowbut, Y ; Gangnonngiw, W ; Chuchird, N ; Sriurairatana, S ; Flegel, T W (2010) Impact of yellow head virus outbreaks in the whiteleg shrimp, Penaeus vannamei (Boone), in Thailand Journal of Fish Diseases 33: 421-430 23 Stern, S., Daniels, H., Letellier, E (1990) Tolerance of post larvae and juvenile Penaeus vannamei to low salinity In: World Aquaculture 90, Halifax, Nova Scotia, Canada, T30 12 National Research Council Canada, Ottawa, Canada, Abstract 24 Vijayan, K., Diwan, A.D., 1995 Influence of temperature, salinity, pH and light on moulting and growth in the Indian white prawn Penaeus indicus (Crustacea: Decapoda: Penaeidae) under laboratory conditions Asian Fish Sci 8, 63 – 72 25 Villarreal, H., Hinojosa, P., Naranjo, J (1994) Effect of temperature and salinity on the oxygen consumption of laboratory produced Penaeus vannamei postlarvae Comp Biochem Physiol 108A: 331–336 26 Wassenberg, T., Hill, B (1993) Diet and feeding behaviour of juvenile and adult banana prawns Penaeus merguiensis in the Gulf of Carpentaria, Australia Marine Ecology Progress Series 94: 287-295 27 Wyban, J.,Walsh,W.A., Godin, D.M (1995) Temperature effects on growth, feeding rate and feed conversion of the Pacific white shrimp (Penaeus vannamei) Aquaculture 138: 267–279 28 Zhang, Dong; Wang, Jiangang ; Huang, Ningyu Zhang, Dong (1989) The effect of low salinity on growth and survival of juvenile Penaeus monodon Fabricius Transactions of oceanology and limnology 2: 66-70 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 63 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 INSTRUCTIONS FOR AUTHORS JOURNAL OF FISHERIES SCIENCE AND TECHNOLOGY I GENERAL INSRUCTIONS - Manuscript presented on A4 paper vertically (portrait), not more than pages including tables, figures, and references - Page margin: Top: cm; Bottom: cm; Left: cm; Right: cm; Header: cm; Footer: cm; - Font: Times New Roman; font size: 11, line spacing: single - Letters density: normal, not compressed or stretched spacing between letters - Details in the following format: II RESEARCH ARTICLES Abstract 1.1 Abstract in English: An abstract of no more than 250 words is a summary of the most important points of the article The abstract should contain objectives and scope of the study, describes the methods used and the results of the study All that is stated in the abstract must be present in the body of the article 1.2 Abstract in Vietnamese: translation from the summary in English (only for Vietnamese authors) 1.3 Keywords: List 3-5 keywords Introduction The introduction should state in several sentences that give what the main research hypothesis/question(s) are interested and introduce the main idea of the research and capture the interest of readers and tell why the topic is important Materials and methods In this paragraph, the author should describe the materials used in the study, explain how the materials were prepared for the study, describe the research protocol, explain how measurements were made and what calculations were performed, and state which statistical tests were done to analyze the data All abbreviations used should be explained Results and discussion Results are presented in the text integrated with effective tables and/or figures not to describe results in the text in a way that is not highly redundant with information already presented in tables and/or figures The discussion answers where the results make sense in terms of practice or theorical considerations; interpretation of findings, limitations and implications or recommendations for future research, what are limitations and unsettled points in results Conclusion Conclusion demonstrates new findings in the research and how the ideas in the paper connect to what the author(s) have described in the introduction and discussed Acknowledgements In acknowledgments, author(s)’s thanks should be expressed to all organizations or individuals who provide the assistance and supports for the research done References References are only references cited in the paper References are presented in the order A, B, C The references 64 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG in Vietnamese are ranked first, foreign language is close behind The references should follow the formats of the examples listed below precisely: Journal Article Lohot V D., Sharma-Natu P., Pandey R., Ghildiyal M C., 2010 ADP-glucose pyrophosphorylase activity in relation to starch accumulation and grain growth in wheat cultivars Curr Sci., 98(3): 427-430 Hoshino T., Kawashita N., Takagi Y., Anai Y., 2011 Molecular characterization and marker development of mid-oleic-acid mutant M23 for the development of high-oleic-cultivars of soybean Plant Breed., DOI: 10.1111/j.14390523.2011.01871.x Book Weissbach A., Weissbach H., 1988 Methods for Plant Molecular Biology Academic Press Inc, California, USA Book Chapter Smith S and Helentjaris T., 1996 DNA Fingerprinting and Plant Variety Protection In: Paterson AH (ed) Genome Mapping in Plant, Academic Press Inc, California, USA: 95-110 Proceedings Nguyen Anh, 2008 Species composition of freshwater crabs of Mekong River Delta Proceedings of the First National Conference on Agricultural and Biological Sciences Publishing House Agriculture, Hanoi: xx-xx From website Wikipedia, 2011 Thong nưoc Open encyclopedia http://vi.wikipedia.org/wiki Th%C3%B4ng_n%C6%B0%E1%BB%9Bc Access 28 Nov.2014 III MANUSCRIPTS UNDER THE CATEGORY OF REFERENCE AND EXCHANGE IDEAS INCLUDE THE FOLLOWING: Abstract Opening Contents MANUSCRIPT SUBMISSION Electronic submission of manuscripts to: vjbio@vjs.ac.vn, tapchidhnt@gmail.com Printed submission send to postal address Department of Research Affairs 02, Nguyen Dinh Chieu street, Nha Trang, Viẹtnam Phone: (+84) 258.2220767; Fax: (+84) 258.3831147; Email: tapchidhnt@gmail.com ... Pyroglutamic acid; Độ dung sai: 0.05Da (tiếp tục) Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Ngoài ra, kết Bảng kết hợp với liệu... performance Advanced Materials, 25, 330 2–3 306 16 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 1/2018 THÔNG BÁO KHOA HỌC NGHIÊN CỨU NGƯỠNG MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG QUAN TRỌNG CỦA... g-1 body Viện Nuôi trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 47 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 1/2018 mass and can be