Nghiên cứu bào chế cao chuẩn hóa từ cây rau đắng đất (glinus oppositifolius (l ) aug dc)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO CHUẨN HÓA TỪ CÂY RAU ĐẮNG ĐẤT (Glinus oppositifolius (L.) Aug DC) Luận văn Thạc sĩ Dược học Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2019 ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO CHUẨN HÓA TỪ CÂY RAU ĐẮNG ĐẤT (Glinus oppositifolius (L.) Aug DC) Ngành : Công nghệ Dược phẩm Bào chế Thuốc Mã số : 8720202 Luận văn Thạc sĩ Dược học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUYỄN NGỌC VINH TS LÊ THỊ THU CÚC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2019 iii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình Trần Thị Tâm Nguyên iv BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG VIỆT Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học – Năm học 2017 – 2019 “NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO CHUẨN HÓA TỪ CÂY RAU ĐẮNG ĐẤT (Glinus oppositifolius (L.) Aug DC)” TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Ngọc Vinh TS Lê Thị Thu Cúc Đặt vấn đề Rau đắng đất dược liệu thuộc họ Rau đắng đất chứng minh có tác dụng hạ đường huyết Tuy nhiên, thị trường chưa có chế phẩm hỗ trợ hạ đường huyết chứa Rau đắng đất, việc nghiên cứu bào chế chế phẩm nhu cầu cần thiết có tiềm Để nâng cao ổn định chất lượng thuốc có nguồn gốc từ dược liệu, việc chuẩn hóa chất lượng cao dược liệu cần thiết Trong nghiên cứu này, chúng tơi trình bày kết bào chế cao chuẩn hóa Rau đắng đất với hàm lượng chất có hoạt tính cao tiêu chuẩn hóa chất lượng cho cao Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng: Dược liệu Rau đắng đất cao Rau đắng đất Công ty cổ phần BV Pharma cung cấp Phương pháp nghiên cứu: (1) Kiểm tra chất lượng dược liệu Rau đắng đất theo DĐVN V (2) Xây dựng thẩm định A Quy trình định lượng vicenin-2 vitexin B Quy trình định lượng saponin triterpen cao khô Rau đắng đất (3) Bào chế cao Rau đắng đất chuẩn hóa (4) Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho cao khô Rau đắng đất (5) Xác định độc tính cấp cao Kết nghiên cứu (1) Dược liệu Rau đắng đất đạt yêu cầu chất lượng theo DĐVN V (2) Đã xây dựng thẩm định quy trình định lượng vicenin-2 vitexin quy trình định lượng saponin triterpen cao khơ Rau đắng đất (3) Cao khơ Rau đắng đất chuẩn hóa bào chế phương pháp đun hồi lưu với dung môi ethanol 90%, thực chiết lần với lần 140 phút, tỉ lệ dược liệu : dung môi : 13 (4) Tiêu chuẩn chất lượng cao gồm tiêu: cảm quan, khối lượng làm khơ, định tính, định lượng, kim loại nặng giới hạn nhiễm khuẩn (5) Cao thu có LD50 = 11,72 g/kg Kết luận Đã nghiên cứu quy trình bào chế cao khơ Rau đắng đất chuẩn hóa phương pháp đun hồi lưu với ethanol 90% Cao quy định hàm lượng vicenin-2 từ 2,2 – 2,7%, hàm lượng vitexin từ 0,4 – 0,5%, hàm lượng saponin triterpen toàn phần từ 22,2 – 27,1% v BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG ANH Final essay for the degree as a Master of Pharmacy – Year 2017–2019 “A STUDY OF PROCEDURE FOR PREPARATION A STANDARDISED EXTRACT FROM GLINUS OPPOSITIFOLIUS (L.) AUG DC” TRAN THI TAM NGUYEN Supervisor: Assoc Prof PharmD Nguyen Ngoc Vinh PharmD Le Thi Thu Cuc Introduction Glinus oppositifolius is a medicine plant belonging to Molluginaceae family and is proved to decrease blood sugar level However, there is no product containing Glinus oppositifolius for blood sugar level decrease on the market, so it is necessary and potential that the above products would be studied and prepared The standardization of the extracts is necessary to improve and stabilize the product quality According to this issue, a study of procedure for preparation a standardised extract from Glinus oppositifolius is conducted Materials and methods Materials: Glinus oppositifolius herbal and extract were provided by BV Pharma Co Methods: (1) Test the quality of the Glinus oppositifolius herbal as per Vietnamese Pharmacopoeia (2) Establish and validate the assay of A vicenin-2 and vitexin and B total saponin triterpene in Glinus oppositifolius dried extract (3) Identify the conditions to prepare the standardised dried extract containing Glinus oppositifolius (4) Establish the specification of the standardised dried extract containing Glinus oppositifolius (5) Evaluate the acute oral toxicity of the extract Results (1) Glinus oppositifolius herbal complied with the requirements of the specifications as per VNP (2) The assays of vicenin-2 and vitexin and total saponin triterpene in Glinus oppositifolius dried extract were established and validated (3) The standardised dried extract was prepared with ethanol 90% using reflux extraction method and other conditions of 1:13 material ratio for 140 minutes extraction duration in two cycles of extractions (4) The specifications include appearance, loss on drying, identification, assay, heavy metals and microbial contamination (5) The LD50 value was 11.72 kg.g-1 Conclusions The preparation of standardised dried extract containing Glinus oppositifolius was established with ethanol 90% using reflux extraction method The vicenin-2, vitexin and total saponin triterpene content were 2.2 – 2.7%, 0.4 – 0.5% and 22.2 – 27.1%, respectively vi MỤC LỤC MỤC LỤC vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT x DANH MỤC HÌNH .xi DANH MỤC BẢNG .xii DANH MỤC BIỂU ĐỒ xiv MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây Rau đắng đất 1.1.1 Danh pháp vị trí phân loại 1.1.2 Nguồn gốc, phân bố, thu hái 1.1.3 Sinh thái 1.1.4 Mô tả 1.1.5 Thành phần hóa học 1.1.6 Tác dụng dược lý – Công dụng 1.1.7 Các chế phẩm thị trường chứa Rau đắng đất 10 1.2 Chiết xuất dược liệu điều chế cao thuốc 11 1.2.1 Một số phương pháp chung chiết xuất dược liệu 11 1.2.2 Cao thuốc 11 1.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình điều chế cao thuốc 12 1.2.4 Một số nghiên cứu chiết xuất hợp chất flavonoid saponin dược liệu điều chế cao thuốc 13 vii 1.3 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cao thuốc 15 1.3.1 Nội dung tiêu chuẩn chất lượng cao thuốc 15 1.3.2 Một số nghiên cứu quy trình định lượng flavonoid saponin Rau đắng đất số dược liệu khác 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu, chất đối chiếu, dung môi hóa chất thiết bị 18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.1.2 Chất đối chiếu, dung môi, thuốc thử, trang thiết bị, dụng cụ 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Kiểm tra chất lượng dược liệu Rau đắng đất 19 2.2.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời vicenin-2 vitexin cao Rau đắng đất 21 2.2.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng saponin triterpen toàn phần (STP) cao dược liệu 24 2.2.4 Điều chế cao khô Rau đắng đất chuẩn hóa 28 2.2.5 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho cao khô Rau đắng đất 33 2.2.6 Xác định độc tính cấp cao Rau đắng đất 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Kiểm tra chất lượng dược liệu Rau đắng đất 37 3.1.1 Mô tả 37 3.1.2 Bột 37 3.1.3 Vi phẫu 39 3.1.4 Định tính 40 viii 3.1.5 Độ ẩm 41 3.1.6 Tro toàn phần 41 3.1.7 Tạp chất 41 3.1.8 Chất chiết dược liệu 41 3.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời vicenin-2 vitexin cao dược liệu Rau đắng đất 42 3.2.1 Xây dựng quy trình định lượng 42 3.2.2 Thẩm định quy trình phân tích 44 3.2.3 Quy trình định lượng vicenin-2 vitexin thẩm định 49 3.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng saponin triterpen toàn phần cao dược liệu 50 3.3.1 Xác định bước sóng hấp thu cực đại 50 3.3.2 Xác định lượng thuốc thử 51 3.3.3 Xác định thời gian ủ 51 3.3.4 Thẩm định quy trình phân tích 52 3.3.5 Quy trình định lượng STP thẩm định 55 3.4 Điều chế cao khô Rau đắng đất chuẩn hóa 56 3.4.1 Xác định quy trình làm khơ dịch chiết 56 3.4.2 Quy trình điều chế cao khơ để thực bước khảo sát 56 3.4.3 Khảo sát nồng độ dung môi chiết 56 3.4.4 Khảo sát phương pháp chiết 59 3.4.5 Khảo sát kích thước dược liệu 60 ix 3.4.6 Khảo sát tỉ lệ dược liệu : dung môi 60 3.4.7 Khảo sát số lần chiết 61 3.4.8 Khảo sát thời gian chiết 63 3.4.9 Khảo sát điều kiện phù hợp để điều chế cao dược liệu Rau đắng đất 63 3.5 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho cao dược liệu Rau đắng đất 65 3.5.1 Kiểm tra chất lượng lô cao dược liệu 65 3.5.2 Tiêu chuẩn sở cao dược liệu Rau đắng đất 67 3.6 Xác định độc tính cấp cao dược liệu 68 3.6.1 Tiến hành 68 3.6.2 Kết 68 CHƯƠNG BÀN LUẬN 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 80 x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt As AOAC DĐVN V DPPH HL% HPLC HPTLC RSD 10 11 12 13 Rs S/N STP Spic tR Từ nguyên Symmetry factor High performance liquid chromatography High performance thin layer chromatography Relative standard deviation Resolution Signal/Noise Retention time Ý nghĩa Hệ số bất đối Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức Dược điển Việt Nam V 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl Hàm lượng % Sắc ký lỏng hiệu cao Sắc ký lớp mỏng hiệu cao Độ lệch chuẩn tương đối Độ phân giải Tỉ lệ tín hiệu/nhiễu Saponin triterpen tồn phần Diện tích pic Thời gian lưu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Lặp lại mức Tiến đến vùng gần dừng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-46 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 32 – Sắc ký đồ liệu định lượng vicenin-2 vitexin lơ cao Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-47 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 33 – Độ hấp thu định lượng STP lô cao Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-48 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 34 – Kết xác định kim loại nặng lô cao Kết xác định kim loại nặng lô cao - Đường chuẩn arsen, cadimi Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-49 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kết xác định kim loại nặng lô cao - Đường chuẩn thủy ngân, chì Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-50 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Kết xác định kim loại nặng lô cao - Kết đo kim loại nặng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-51 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 35 - Phiếu kiểm nghiệm Kim loại nặng– Lơ NC01 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-52 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 36 - Phiếu kiểm nghiệm Kim loại nặng cao Rau đắng đất – Lô NC02 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-53 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 37 - Phiếu kiểm nghiệm Kim loại nặng cao Rau đắng đất – Lô NC03 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-54 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 38 - Phiếu kiểm nghiệm Giới hạn nhiễm khuẩn cao Rau đắng đất Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-55 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC 39 – Tiêu chuẩn sở thẩm định Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-56 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-57 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-58 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-59 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-60 ... phát từ nhu cầu trên, đề tài ? ?Nghiên cứu bào chế cao chuẩn hóa từ Rau MỞ ĐẦU đắng đất (Glinus oppositifolius (L. ) Aug DC)? ?? thực với mục tiêu bào chế tiêu chuẩn hóa chất lượng cho cao tồn phần từ. .. - BỘ Y TẾ TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO CHUẨN HÓA TỪ CÂY RAU ĐẮNG ĐẤT (Glinus oppositifolius (L. ) Aug DC) Ngành : Công nghệ Dược phẩm Bào chế Thuốc Mã số : 8720202 Luận văn... “NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ CAO CHUẨN HÓA TỪ CÂY RAU ĐẮNG ĐẤT (Glinus oppositifolius (L. ) Aug DC)? ?? TRẦN THỊ TÂM NGUYÊN Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Ngọc Vinh TS Lê Thị Thu Cúc Đặt vấn đề Rau