Nghiên cứu điều chế và chuẩn hóa cao đặc bài thuốc testin

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DOÃN THỊ PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ CHUẨN HÓA CAO ĐẶC BÀI THUỐC TESTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DOÃN THỊ PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ CHUẨN HÓA CAO ĐẶC BÀI THUỐC TESTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Văn Điền Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Văn Điền, người thầy đã tận tình dìu dắt và hướng dẫn tôi hoàn thành tốt khóa luận này. Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược học cổ truyền và bộ môn Hóa phân tích – Độc chất đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi xin gửi tới các thầy cô và cán bộ Trường đại học Dược Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì đã dạy dỗ, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập dưới mái trường Đại học Dược Hà Nội. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình và bạn bè, những người đã luôn động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu. Hà Nội ngày 21 tháng 5 năm 2013 Sinh viên DOÃN THỊ PHƯỢNG MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: TỔNG QUAN 2 1.1. Vài nét về bài thuốc 2 1.2. Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc 3 Chương 2. NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1. Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu 15 2.2. Phương pháp nghiên cứu 15 2.2.1. Bào chế cao đặc 15 2.2.2. Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 16 2.2.3. Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc 17 Chương 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN 18 3.1. Bào chế cao đặc 18 3.1.1. Bào chế cao đặc từ nước sắc 18 3.1.2. Bào chế cao đặc chiết ethanol 40%: 19 3.1.3. Bào chế cao đặc chiết ethanol 70%: 20 3.2. Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 21 3.2.1. Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc 21 3.2.2. Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM: 31 3.2.3. Định lượng flavonoid toàn phần 36 3.2.4. Xác định các chỉ tiêu hóa lý 37 3.3. Dự kiến tiêu chuẩn cơ sở cao đặc 41 3.3.1. Yêu cầu kỹ thuật 41 3.3.2. Phương pháp thử 42 3.4. Bàn luận 44 3.5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1. Tiêu chuẩn cơ sở của cao đặc chiết ethanol 70% bài thuốc Testin PHỤ LỤC 2. Tiêu chuẩn cơ sở của cao đặc chiết ethanol 40% bài thuốc Testin DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ dầy đủ 1 SKLM Sắc ký lớp mỏng 2 C40 Cao đặc chiết ethanol 40% 3 C70 Cao đặc chiết ethanol 70% 4 Đ Đương quy 5 H Hoàng kỳ 6 BK Ba kích 7 CKC Cốt khí củ 8 XS Xà sàng tử 9 CKT Câu kỷ tử 10 TL Bạch tật lê 11 BB Bá bệnh 12 DĐVN Dược điển Việt Nam 13 NXB Nhà xuất bản DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Số trang Bảng 1 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc từ nước sắc 19 Bảng 2 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 40% 21 Bảng 3 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 70% 21 Bảng 4 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc chiết ethanol 70% và cao đặc chiết ethanol 40% 30 Bảng 5 Kết quả định lượng flavonoid trong cao đặc chiết ethanol 70% 37 Bảng 6 Kết quả định lượng flavonoid trong cao đặc chiết ethanol 40% 37 Bảng 7 Kết quả xác định độ ẩm của cao đặc chiết ethanol 70% 38 Bảng 8 Kết quả xác định độ ẩm của cao đặc chiết ethanol 40% 38 Bảng 9 Độ pH của cao đặc chiết ethanol 70% 39 Bảng 10 Độ pH của cao đặc chiết ethanol 40% 39 Bảng 11 Hàm lượng chất chiết được bằng nước trong cao đặc chiết ethanol 70% 39 Bảng 12 Hàm lượng chất chiết được bằng nước trong cao đặc chiết ethanol 40%. 40 Bảng 13 Kết quả xác định tro toàn phần của cao đặc chiết ethanol 70% 40 Bảng 14 Kết quả xác định tro toàn phần của cao đặc chiết ethanol 40% 41 DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Số trang Hình 3.1 Sơ đồ bào chế cao đặc nước sắc 3 : 1 19 Hình 3.2 Sơ đồ bào chế cao đặc chiết ethanol 40% 4 : 1 25 Hình 3.3 Sắc ký đồ đương quy và cao đặc 32 Hình 3.4 Sắc ký đồ hoàng kỳ và cao đặc 32 Hình 3.5 Sắc ký đồ cốt khí củ và cao đặc 33 Hình 3.6 Sắc ký đồ ba kích và cao đặc 33 Hình 3.7 Sắc ký đồ xà sàng tử và cao đặc 34 Hình 3.8 Sắc ký đồ câu kỷ tử và cao đặc 34 Hình 3.9 Sắc ký đồ bạch tật lê và cao đặc 35 Hình 3.10 Sắc ký đồ bá bệnh và cao đặc 35 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bài thuốc Testin là bài thuốc do PGS.TS Văn Điền xây dựng nên, với mục đích làm thuốc hỗ trợ điều trị suy giảm chức năng sinh dục nam. Để có thể đưa bài thuốc vào sử dụng được, cần phải tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng dược lí, độc tính trên thực nghiệm và nghiên cứu dạng bào chế hiện đại để tiện sử dụng và đánh giá tác dụng trên lâm sàng. Cao đặc là một sản phẩm trung gian quan trọng trong quá trình nghiên cứu, dùng cao đặc để đánh giá tác dụng, độc tính trên thực nghiệm và nghiên cứu dạng bào chế hiện đại. Cao điều chế theo các phương pháp khác nhau, mức độ tác dụng khác nhau, để chọn được phương pháp điều chế có tác dụng chúng tôi tiến hành điều chế cao qua nhiều phương pháp và thử tác dụng sơ bộ để chọn phương pháp điều chế có tác dụng cao nhất, dùng cao đó để nghiên cứu tiếp theo và cao đó phải được chuẩn hóa, để làm cơ sở cho kiểm soát chất lượng cao điều chế lần sau và các kết quả nghiên cứu mới có ý nghĩa. Chính vì vậy mà chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu điều chế và chuẩn hóa cao đặc bài thuốc Testin với các mục tiêu: 1. Bào chế cao đặc bài thuốc. 2. Sơ bộ xây dựng tiêu chuẩn cao đặc bài thuốc. 2 Chương 1: TỔNG QUAN 1.1. Vài nét về bài thuốc + Công thức bài thuốc Bá bệnh 14g Bạch tật lê 14g Xà sàng tử 12g Hoàng kì 16g Cốt khí củ 10g Câu kỉ tử 16g Đương quy 12g Ba kích 12g + Xuất xứ bài thuốc: Bài thuốc do chúng tôi thiết kế, đã được sử dụng trên một số bênh nhân tự nguyện biểu hiện suy giảm chức năng sinh lý, sử dụng có kết quả khả quan + Cơ sở thiết kế bài thuốc: - Dựa vào lý luận của Y học cổ truyền về các bệnh do thận hư gây ra, trong đó đi sâu vào các chứng liên quan đến suy giảm sinh sản, sinh dục nam. - Dựa vào tính năng của các vị thuốc để chọn vị thuốc kê đơn cho phù hợp với điều trị bệnh suy giảm chức năng sinh sản nam. - Dựa vào tác dụng dược lý và thành phần hoá học của các vị thuốc đã được chứng minh có tác dụng điều trị bệnh suy giảm chức năng sinh dục, sinh sản. - Trong bài thuốc có 4 vị thuốc là Bá bệnh, Bạch tật lê, Xà sàng tử và Ba kích đã chứng minh có tác dụng cải thiện sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam, phối hợp thêm Hoàng kì, Đương quy và Câu kỉ tử để bổ khí huyết, bổ can thận, thêm Cốt khí củ làm tăng cường lưu thông máu và có tác dụng dược lí hướng sinh dục. Như vậy khi có cả thuốc cải thiện chức năng sinh dục lẫn thuốc bồi bổ cơ thể và thuốc tăng cường lưu thông huyết thì tác dụng cải thiện sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục sẽ tốt hơn. + Tác dụng của bài thuốc: Bổ thận sinh tinh, ích khí huyết. + Công dụng: Chữa suy giảm sinh dục nam. + Cách dùng: Ngày uống 1 thang, sắc 3 lần, cô còn 3 bát thuốc, chia 3 lần uống trong ngày. [...]... lượng tương ứng có trong 1g cao đặc bài thuốc bằng ethanol 96%, chấm riêng 3 vết ( cao đặc chiết ethanol 70%, cao đặc chiết ethanol 40% và vị thuốc) trên cùng 1 bản mỏng với thể tích như nhau Căn cứ vào số vết tương ứng giữa vị thuốc và cao đặc để đánh giá Nếu trong cao có các vết tương đương các vết của vị thuốc cả về màu sắc và Rf thì sơ bộ xác định vị thuốc đó có trong bài thuốc + Định lượng flavonoid... chuẩn cao đặc Theo mẫu chung của bộ y tế gồm 2 phần: Yêu cầu chất lượng và phương pháp đánh giá 18 Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN 3.1 Bào chế cao đặc Dược liệu đã được kiểm tra đạt tiêu chuẩn DĐVN IV, bào chế thành dạng thuốc phiến dùng để điều chế cao đặc; tùy từng phương pháp điều chế cao mà tiếp tục xử lí dược liệu cho thích hợp 3.1.1 Bào chế cao đặc từ nước sắc + Dùng ấm sắc thuốc. .. cao đặc [3] - Điều chế cao nước: Bài thuốc được chiết bằng phương pháp sắc, nấu 3 lần với nước, mỗi lần 1h, gộp dịch chiết, lọc, cô cách thủy đến khi thu được cao đặc [3] Mỗi loại làm 6 mẫu làm lấy kết quả trung bình 16 2.2.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc Qua thăm dò tác dụng dược lí của 3 loại cao thấy rằng cao điều chế từ ethanol 40% và 70% có tác dụng rõ rệt vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên. .. cốc (g) m3: Tổng khối lượng cốc và cao Kết quả: Được ghi ở bảng 2 Quy trình điều chế cao đặc chiết ethanol 40% 4:1 được tóm tắt ở hình 3.2 (trang 26) 3.1.3 Bào chế cao đặc chiết ethanol 70% Tiến hành tương tự như bào chế cao đặc chiết ethanol 40%, thay dung môi chiết bằng ethanol 70% Kết quả: Được ghi ở bảng 3 Quy trình điều chế cao đặc chiết ethanol 70% 5:1 tương tự cao đặc chiết ethanol 40% thay ethanol... Hà Nội + Hóa chất – dung môi: Hóa chất dung môi dùng trong nghiên cứu hóa học mua tại công ty TNHH hóa học ứng dụng số 18A Lê Thánh Tông – Hà Nội Bản mỏng sắc ký Silicagel GF254 (MERCK) 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Bào chế cao đặc - Điều chế cao ethanol: Dược liệu đã được kiểm tra chất lượng đạt tiêu chuẩn DĐVN IV, được bào chế thành thuốc phiến, dùng ethanol 40% và 70% để chiết, chiết theo phương... 38,80 28,20 28,91 33,76 32,95 32,80 Quy trình điều chế cao đặc nước sắc 3:1 được tóm tắt ở hình 3.1 (trang 19) Dược liệu Rửa sạch, thái phiến, sấy ở 700C Dược liệu sau khi sấy Sắc nước Dịch chiết nước Lọc qua bông Dịch chiết sau khi lọc Cô cách thủy Cao đặc bài thuốc 3:1 Hình 3.1 Sơ đồ bào chế cao đặc nước sắc 3:1 3.1.2 Bào chế cao đặc chiết ethanol 40% + Chuẩn bị dung môi chiết: mua ethanol 96% dược... lượng cao đem thử (g) + Định tính các nhóm chất hữu cơ Căn cứ vào các nhóm chất có trong các vị thuốc của bài thuốc để định hướng định tính Tiến hành các phản ứng định tính với các thuốc chung và thuốc thử đặc hiệu của từng nhóm chất theo phương pháp thường quy được ghi trong các tài liệu hóa thực vật [5], [6], [13] + Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM Quy trình: Chiết riêng từng vị thuốc. .. cam 23 Kết quả: - Cao đặc chiết ethanol 70%: dung dịch chuyển từ màu vàng → hồng → đỏ cam (phản ứng dương tính) - Cao đặc chiết ethanol 40%: dung dịch chuyển từ màu vàng → hồng nhạt → đỏ cam (phản ứng dương tính) Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định cao đặc chiết ethanol 70% và cao đặc chiết ethanol 40% có flavonoid 3.2.1.2 Định tính saponin Chiết xuất: Hòa tan 2g cao đặc vào 10ml nước, đun... 20,10 3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc 3.2.1.1 Định tính flavonoid Chiết xuất: Hòa tan 2g cao đặc vào 10ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan, lọc (gấp nếp) Lắc với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần với 10ml để loại tạp Lấy lớp nước, đem lắc với ethyl acetat 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp dịch chiết ethyl acetat, bốc hơi dung môi đến cắn, hòa tan cắn vào 10ml... rượu và chữa lưng đau mỏi do thấp [14] - Quả chữa lỵ [14] - Rễ chữa ngộ độc và tẩy giun [14] - Lá nấu nước tắm chữa ghẻ lở [14] + Kiêng kỵ: phụ nữ có thai [14] 15 Chương 2 NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu + Nguyên liệu: Bài thuốc nghiên cứu gồm 8 vị: đương quy, hoàng kỳ, cốt khí củ, ba kích, xà sàng tử, câu kỷ tử, bạch tật lê, bá bệnh Các vị thuốc . PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ CHUẨN HÓA CAO ĐẶC BÀI THUỐC TESTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DOÃN THỊ PHƯỢNG NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ CHUẨN HÓA CAO ĐẶC. sau và các kết quả nghiên cứu mới có ý nghĩa. Chính vì vậy mà chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu điều chế và chuẩn hóa cao đặc bài thuốc Testin với các mục tiêu: 1. Bào chế cao đặc bài thuốc. 2 đương quy và cao đặc 32 Hình 3.4 Sắc ký đồ hoàng kỳ và cao đặc 32 Hình 3.5 Sắc ký đồ cốt khí củ và cao đặc 33 Hình 3.6 Sắc ký đồ ba kích và cao đặc 33 Hình 3.7 Sắc ký đồ xà sàng tử và cao đặc 34 Hình