Nghiên cứu điều chế và chuẩn hóa cao đặc bài thuốc testin

Bảng 1 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc từ nước sắc 19Bảng 2 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 40% 21Bảng 3 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc ch

DOÃN THỊ PHƯỢNG

NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ VÀ CHUẨN HÓA CAO ĐẶC BÀI THUỐC TESTIN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Văn Điền Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền

HÀ NỘI – 2013

khóa luận này.

Đồng thời tôi cũng xin chân thành cảm ơn các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược học cổ truyền và bộ môn Hóa phân tích – Độc chất đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận này.

Tôi xin gửi tới các thầy cô và cán bộ Trường đại học Dược

Hà Nội lời cảm ơn chân thành vì đã dạy dỗ, chỉ bảo, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập dưới mái trường Đại học Dược Hà Nội.

Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình và bạn bè, những người đã luôn động viên, khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu.

Hà Nội ngày 21 tháng 5 năm 2013

Sinh viên

DOÃN THỊ PHƯỢNG

DANH MỤC HÌNH

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 1: TỔNG QUAN 2

1.1 Vài nét về bài thuốc 2

1.2 Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc 3

Chương 2 NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu 15

2.2 Phương pháp nghiên cứu 15

2.2.1 Bào chế cao đặc 15

2.2.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 16

2.2.3 Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc 17

Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN 18

3.1 Bào chế cao đặc 18

3.1.1 Bào chế cao đặc từ nước sắc 18

3.1.2 Bào chế cao đặc chiết ethanol 40%: 19

3.1.3 Bào chế cao đặc chiết ethanol 70%: 20

3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc 21

3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc 21

3.2.2 Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM: 31

3.3.1 Yêu cầu kỹ thuật 41

3.3.2 Phương pháp thử 42

3.4 Bàn luận 44

3.5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC 1 Tiêu chuẩn cơ sở của cao đặc chiết ethanol 70% bài thuốc Testin

PHỤ LỤC 2 Tiêu chuẩn cơ sở của cao đặc chiết ethanol 40% bài thuốc Testin

2 C40 Cao đặc chiết ethanol 40%

3 C70 Cao đặc chiết ethanol 70%

Bảng 1 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc từ nước sắc 19Bảng 2 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 40% 21Bảng 3 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 70% 21Bảng 4 Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc chiết

ethanol 70% và cao đặc chiết ethanol 40% 30Bảng 5 Kết quả định lượng flavonoid trong cao đặc chiết ethanol 70% 37Bảng 6 Kết quả định lượng flavonoid trong cao đặc chiết ethanol 40% 37Bảng 7 Kết quả xác định độ ẩm của cao đặc chiết ethanol 70% 38Bảng 8 Kết quả xác định độ ẩm của cao đặc chiết ethanol 40% 38Bảng 9 Độ pH của cao đặc chiết ethanol 70% 39Bảng 10 Độ pH của cao đặc chiết ethanol 40% 39Bảng 11 Hàm lượng chất chiết được bằng nước trong cao đặc chiết

Hình 3.2 Sơ đồ bào chế cao đặc chiết ethanol 40% 4 : 1 25Hình 3.3 Sắc ký đồ đương quy và cao đặc 32Hình 3.4 Sắc ký đồ hoàng kỳ và cao đặc 32Hình 3.5 Sắc ký đồ cốt khí củ và cao đặc 33Hình 3.6 Sắc ký đồ ba kích và cao đặc 33Hình 3.7 Sắc ký đồ xà sàng tử và cao đặc 34Hình 3.8 Sắc ký đồ câu kỷ tử và cao đặc 34Hình 3.9 Sắc ký đồ bạch tật lê và cao đặc 35Hình 3.10 Sắc ký đồ bá bệnh và cao đặc 35

ĐẶT VẤN ĐỀ

Bài thuốc Testin là bài thuốc do PGS.TS Văn Điền xây dựng nên, với mục đíchlàm thuốc hỗ trợ điều trị suy giảm chức năng sinh dục nam Để có thể đưa bài thuốcvào sử dụng được, cần phải tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng dược lí, độctính trên thực nghiệm và nghiên cứu dạng bào chế hiện đại để tiện sử dụng và đánhgiá tác dụng trên lâm sàng Cao đặc là một sản phẩm trung gian quan trọng trongquá trình nghiên cứu, dùng cao đặc để đánh giá tác dụng, độc tính trên thực nghiệm

và nghiên cứu dạng bào chế hiện đại Cao điều chế theo các phương pháp khácnhau, mức độ tác dụng khác nhau, để chọn được phương pháp điều chế có tác dụngchúng tôi tiến hành điều chế cao qua nhiều phương pháp và thử tác dụng sơ bộ đểchọn phương pháp điều chế có tác dụng cao nhất, dùng cao đó để nghiên cứu tiếptheo và cao đó phải được chuẩn hóa, để làm cơ sở cho kiểm soát chất lượng caođiều chế lần sau và các kết quả nghiên cứu mới có ý nghĩa Chính vì vậy mà chúng

tôi tiến hành đề tài: Nghiên cứu điều chế và chuẩn hóa cao đặc bài thuốc Testin

với các mục tiêu:

1 Bào chế cao đặc bài thuốc.

2 Sơ bộ xây dựng tiêu chuẩn cao đặc bài thuốc.

Chương 1: TỔNG QUAN

1.1 Vài nét về bài thuốc

+ Công thức bài thuốc

Bá bệnh 14g Bạch tật lê 14g

Xà sàng tử 12g Hoàng kì 16g

Cốt khí củ 10g Câu kỉ tử 16g

Đương quy 12g Ba kích 12g

+ Xuất xứ bài thuốc: Bài thuốc do chúng tôi thiết kế, đã được sử dụng trên một số

bênh nhân tự nguyện biểu hiện suy giảm chức năng sinh lý, sử dụng có kết quả khảquan

+ Cơ sở thiết kế bài thuốc:

- Dựa vào lý luận của Y học cổ truyền về các bệnh do thận hư gây ra, trong đó đisâu vào các chứng liên quan đến suy giảm sinh sản, sinh dục nam

- Dựa vào tính năng của các vị thuốc để chọn vị thuốc kê đơn cho phù hợp với điềutrị bệnh suy giảm chức năng sinh sản nam

- Dựa vào tác dụng dược lý và thành phần hoá học của các vị thuốc đã được chứngminh có tác dụng điều trị bệnh suy giảm chức năng sinh dục, sinh sản

- Trong bài thuốc có 4 vị thuốc là Bá bệnh, Bạch tật lê, Xà sàng tử và Ba kích đãchứng minh có tác dụng cải thiện sự suy giảm chức năng sinh sản, sinh dục nam,phối hợp thêm Hoàng kì, Đương quy và Câu kỉ tử để bổ khí huyết, bổ can thận,thêm Cốt khí củ làm tăng cường lưu thông máu và có tác dụng dược lí hướng sinhdục Như vậy khi có cả thuốc cải thiện chức năng sinh dục lẫn thuốc bồi bổ cơ thể

và thuốc tăng cường lưu thông huyết thì tác dụng cải thiện sự suy giảm chức năngsinh sản, sinh dục sẽ tốt hơn

+ Tác dụng của bài thuốc: Bổ thận sinh tinh, ích khí huyết.

+ Công dụng: Chữa suy giảm sinh dục nam.

+ Cách dùng: Ngày uống 1 thang, sắc 3 lần, cô còn 3 bát thuốc, chia 3 lần uống

trong ngày

+ Kiêng kị: Thận trọng người tiêu chảy, không dùng cho phụ nữ có thai, trẻ em

dưới 16 tuổi

1.2 Tóm tắt đặc điểm các vị thuốc

1 2.1 Đương quy

+ Tên khoa học vị thuốc: Radix angelicae sinensis [2], [8], [12], [16].

+ Bộ phận dùng: Rễ đã phơi hay sấy khô của cây Đương quy [ Angelica sinensis (Oliv.) Diels.], họ Hoa tán (Appiaceae) [2], [8], [12], [14], [16].

1.2.1.1 Thành phần hóa học

- Tinh dầu: 0,2 – 0,4% , là chất lỏng màu vàng sẫm, tỷ trọng ở 150C là 0,955 [4],[5] Tinh dầu có: các terpen, các hợp chất phenolic, các dẫn chất phtalid (n-

butylphtalid, ligustilid, n- butylidenphtalid…) [14]

- Coumarin: umbeliferon, scopoletin, xanthotoxin….[14]

- Acid hữu cơ: acid vanilic, acid palmitic, acid linoleic, acid nicotinic, acid succinic[14]

- Polysaccharid: khi thủy phân cho arabinose, D-galactose, D-glucose,

L-rhamnose [14]

- Acid amin: alanin, valin, isoleucin, serin,threonin….[14]

- Vitamin: vitamin B1, B12, E [14]

- Polyacetylen: falcarinol, falcarindiol, falcarinolon [14]

- Sterol: β-sitosterol, stigmasterol, β-stigmasteryl-β-D-glucosid [14]

- Nguyên tố vi lượng: Mg 48, 10 ppm, Ca 60, 50 ppm, Al 12, 50 ppm, Cr

0,214ppm…[14]

1.2.1.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tác dụng trên cơ trơn

Đương quy có tác dụng ức chế sự co thắt cơ trơn ruột cô lập gây bởi acetylcholin vàhistamin [2], [9], [12], [14]

- Tác dụng tăng cường miễn dịch

Làm tăng cường hệ thống miễn dịch đối với bệnh nhân ung thư vòm họng đang điềutrị bằng tia xạ, làm tăng số lượng tế bào lympho T nói chung và số lượng tế bàolympho T hoạt động; làm phục hồi khả năng tạo hoa hồng của tế bào lympho T bị

ức chế bởi theophylin; làm tăng họat tính thực bào của đại thực bào trên thựcnghiệm [14]

- Tác dụng trên tử cung

Tinh dầu có tác dụng ức chế sự co bóp tử cung

Thành phần tan trong nước và trong ethanol có tác dụng kích thích sự co bóp tửcung

Tăng sinh tử cung: Chuột nhắt được nuôi với chế độ ăn có 5% đương quy trong tuầnthấy năng lực sử dụng glycogen của tử cung tăng, lượng DNA tăng rõ rệt, chứng tỏ

có sự tăng sinh tử cung [2], [9], [12], [14]

- Tác dụng trên tim, huyết áp

Cao chiết nước hoặc ether có tác dụng đối kháng với chứng cuồng động tâm nhĩ gâybởi acetylcholin hoặc kích thích điện và đối kháng với hoạt tính gây tăng nhịp của

cà độc dược; có thể dùng để điều trị chứng loạn nhip Ligustilid có tác dụng chống

co thắt được dùng để điều trị cơn đau thắt ngực do co thắt mạch vành

Nước sắc hoặc cao ethanol tiêm tĩnh mạch đông vật gây mê có tác dụng gây hạ áp[2], [12], [14]

- Tác dung gây trấn tĩnh

Dịch chiết nước, chiết bằng ether có tác dụng gây trấn tĩnh trên đông vật thí nghiệm[2], [12], [14]

- Tác dụng hướng sinh dục theo kiểu vitamin E

Cho chuột cống đực ăn chế độ có 5-6% đương quy có tác dụng phục hồi tinh hoàn

bị thoái hoá do thiếu vitamin E gây nên [2], [14]

- Tác dụng chống thiếu máu

Thiếu máu ác tính do thiếu vitamin B12 và thiếu acid flolic, vì thành phần củađương quy có hai yếu tố này nhiều [2], [14]

- Tác dụng kháng khuẩn

Đương quy ức chế vi khuẩn dịch hạch, trực khuẩn thương hàn, phó thương hàn,phảy khuẩn tả, phế cầu khuẩn [2], [14].

- Ức chế ngưng tập tiểu cầu

Cao nứơc ức chế kết tập tiểu cầu invitro và invivo trên chuột cống trắng và ức chế

sự giải phóng serotonin từ tiểu cầu chuột cống trắng gây bởi thrombin

Tác dụng này để chống nghẽn mạch máu não, tĩnh mạch do huyết khối gây nên [2],[14]

- Tác dụng chống hen

Chất Ligustilid có tác dụng ức chế phản ứng hen, chống co thắt khí quản gây bởiacetylcholin và histamin hoặc bari clorid [14]

Chất Phtalid có tác dụng ức chế co thắt khí quản gây bởi acetylcholin và histamin,

ức chế co thắt cơ trơn phế quản gây bởi bari clorid nhanh và mạnh [14]

- Mụn nhọt kéo dài khó phát ra( nhọt bọc), vết thương lâu liền miệng

- Chữa táo bón do huyết hư tân dịch giảm gây ra( Huyết hư trường táo)

- Bệnh về tim mạch( RL nhịp tim, xơ cứng mạch máu não đau đầu, viêm tắc độngmạch, mất ngủ hay quên, tâm phiền bứt rứt)

- Chữa huyết ứ gây đau nhức ( tán ứ chỉ thống) như sang chấn bầm tím sưngđau, đau bụng sau khi sinh

- Trừ phong thấp mạn tính

- Chữa hen suyễn.

- Bệnh viêm gan, thận cấp và mạn tính

- Rụng tóc trọc đầu

- U xơ tiền liệt tuyến, tiểu dầm

+ Cách dùng, liều dùng: 5-15g/ ngày sắc uống.

+ Kiêng kị: Tỳ thấp ỉa chảy, thận trọng với phụ nữ có thai (quy vĩ ).

1.2.2 Hoàng kỳ

+ Tên khoa học vị thuốc: Radix Astragali membranacei [2], [8], [12].

+ Bộ phận dùng: Rễ phơi hay sấy khô của cây Hoàng kỳ Mông Cổ [Astragalus

membranaceus (Fisch.) Bge var mongholicus (Bge.) Hsiao, hoặc cây Hoàng Kỳ

Mạc Giáp ( Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.], họ Đậu (Fabaceae) [2], [8],

[12], [14]

1.2.2.1 Thành phần hóa học

- Polysaccharid: tinh bột, gôm, chất nhầy, glucose, saccharose [14]

- Saponin: gồm 9 astragalosid và isoastragalosid và 2 saponin kiểu olean [14]

- Ngoài ra còn có: Acid amin, cholin betain, hơi có phản ứng alkaloid, mới đây pháthiện trong hoàng kỳ có chất selenium [12]

1.2.2.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Gây hưng phấn sự co bóp tử cung cô lập của chuột cống có thai [14]

- Có tác dụng làm thời kỳ động dục của chuột bạch thông thường là 1 ngày kéo dàithành 10 ngày [12], [14]

- Tác dụng trên tim: làm tăng co bóp của tim bình thường [12], [14]

- Tác dụng giãn mạch hạ huyết áp: hoàng kỳ làm giãn mạch, làm cho máu tới các cơquan nhiều hơn, sự dinh dưỡng tốt hơn, đồng thời làm huyết áp giảm [12], [14]

- Tác dụng kích thích phát triển cơ thể [14];

- Tác dụng lợi niệu [12], [14]; tác dụng bảo vệ gan [14]; tác dụng chống viêm,kháng khuẩn [14]; tác dụng ức chế aldose reductase [14]

- Độc tính: Hoàng kỳ có độc tính cấp thấp Cho chuột nhắt trắng uống liều 100g/kg,

là liều gấp 500 lần liều thường dùng cho người, không có chuột chết và không thấy

có biểu hiện tác dụng phụ có hại [14]

b Tác dụng theo YHCT

- Tính vị, quy kinh: vị ngọt, tính ấm; quy kinh : vào 2 kinh phế, tỳ [2], [8], [14]

- Công năng: Bổ khí, ích khí sinh huyết, Cố biểu liễm hãn, Thăng dương khí, Giảiđộc sinh cơ, Lợi thuỷ [2], [8], [9], [10]

1.2.2.3 Công dụng, cách dùng

+ Công dụng

- Điều tri cơ thể suy nhược, chân tay vô lực, yếu hơi, chóng mặt,kém ăn, các bệnh

sa giáng tạng phủ, tử cung, tả lị lâu ngày, băng lậu của phụ nữ [2]

- Chữa huyết hư, thiếu máu [2]

- Chữa bệnh ra nhiều mồ hôi, mồ hôi trộm [2], [8], [10]

- Chữa phù thũng: khi tỳ hư, vận hóa nước kém, tâm thận dương hư, tay chân, mặtmắt phù thũng [2], [8], [10]

- Chữa mụn nhọt ở thể hư[2], [8], [9], [10]

+ Cách dùng, liều dùng : Liều 4 – 20g, dưới dạng thuốc săc và các dạng bào chế

khác [ 2]

1.2.3 Cốt khí củ

+ Tên khoa học vị thuốc: Radix polygoni cuspidate [2], [8], [12].

+ Bộ phận dùng: Rễ củ phơi hay sấy khô của cây Cốt khí (Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc.), họ Rau răm (Polygonaceae) [2], [8], [12], [14].

1.2.3.1 Thành phần hóa học

- Anthranoid: physcion, emodin, emodin - 8 - O - β – glucosid… [4], [14]

- Stilben: resveratrol, polydatin [14]

- Quinon: 2 – methoxy – 6 – acetyl – 7 – methyljuglon [14]

- Phenol: acid protocatechuic [14]

- Các thành phần khác: catechin, 7 – hydroxyl – 4 – methoxy – 5 – methyl –

coumarin…Ngoài ra có các nguyên tố Cu, Fe, Mn, Zn, K [14]

1.2.3.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tác dụng hạ cholesterol, cầm máu [2]

- Tác dụng chống viêm [2], [14]

- Tác dụng chống oxy hóa, chống lão hóa [2]

- Tác dụng kháng khuẩn: có tác dụng ức chế trực khuẩn mủ xanh, trực khuẩn phóthương hàn, trực khuẩn lỵ [2]

b Tác dụng theo YHCT

- Tính vị, quy kinh: vị đắng, tính ấm; quy kinh: can, tâm bào [2]

- Công năng: Trừ thấp, chỉ ho, hóa đờm, hoạt huyết [2]

1.2.3.3 Công dụng, cách dùng

+ Công dụng

- Điều trị rối loạn kinh nguyệt: có kinh đau bụng, hoặc bế kinh [2]

- Điều bệnh viêm khớp, đau nhức lưng gối [2]

- Điều trị bệnh viêm gan, viêm túi mật, sỏi mật, sỏi tiết niệu [2]

- Điều trị bệnh viêm phổi, viêm phế quản mạn tính, viêm âm đạo [2]

+ Cách dùng, liều dùng: 12 – 20g, dạng thuốc sắc hoặc các dạng bào chế khác [2].

+ Kiêng kị: Phụ nữ có thai.

1 2.4 Ba kích

+ Tên khoa học vị thuốc: Radix Morindae officinalis [2], [8], [12], [1].

+ Bộ phận dùng: Rễ đã phơi hay sấy khô của cây Ba kích (Morinda officinalis How), họ Cà phê (Rubiaceae) [2], [8], [12], [14].

1.2.4.1 Thành phần hóa học

- Anthraglucosid: tectoquinon, alizarin - 1- methyl ether…[14]

- Iridoid glucosid: asperulosid, monotropein, morindolid…[14]

- Các sterol: β – sitosterol, oxositosterol, 1 triterpen loại ursan [14]

- Lacton: (4R, 5S) 5 – hydroxyl hexan – 4 – olid [14]

- Các chất vô cơ: K, Na, Mg, …[14]

- Đường, nhựa, acid hữu cơ, ít tinh dầu [10], [12], [14]

1.2.4.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tác dụng tăng lực: bằng phương pháp chuột bơi thực hiện trên chuột nhắt trắng,

ba kích với liều 5 – 10g/kg dùng liên tiếp 7 ngày trước lúc thí nghiệm có tác dụngkéo dài thời gian chuột bơi.[10], [14]

- Tác dụng chống độc: có tác dụng tăng cường sức đề kháng chung của cơ thể đốivới yếu tố độc hại [10], [14]

- Điều trị chứng thận dương hư gây liệt dương [1], [2], [8], [10]

- Chứng lạnh đau bụng dưới, rối loạn kinh nguyệt [1], [2], [8], [10]

- Chứng can thận bất túc gây gân cốt mềm yếu, đau lưng [1], [10]

+ Cách dùng, liều dùng: 4 – 12g [2], dạng thuốc sắc, ngâm rượu.

+ Kiêng kỵ: những người âm hư hỏa thịnh [2].

1.2.5 Xà sàng tử

+ Tên khoa học vị thuốc: Fructus Cnidii [1], [8], [12].

+ Bộ phận dùng: Quả chín đã phơi hay sấy khô của cây Xà sàng (Cnidium monnieri L.), họ Hoa tán (Apiaceae) [8], [12], [14].

1.2.5.1 Thành phần hóa học

- Tinh dầu: chiếm 1,3%, mùi hắc đặc biệt Thành phần chủ yếu là chất L – pinen,camphen và bocnylisovalerianat, β – sitosterol, acid coumaric, acid palmitic [12],[14].

- Chất ostola tinh thể không màu [12]

- Chất dầu màu đen xanh gồm 92,66% acid béo không no, 4,56% acid béo no,0,38% chất không xà phòng hóa được, 3,27% glyxerin [9], [12]

- Coumarin: Osthol, Umbeliferon, Bergapten…[14]

- Auraptenol, isogosferol, demethyl – auraptenol cniforin A, cniforin B, cnidimol A,

B và diosmetin [14]

1.2.5.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tác dụng chống loạn nhịp tim: dạng chiết nước của xà sàng tử với liều 5,00 g/kg

có thể phòng ngừa được rung thất do chloroform gây nên ở chuột nhắt trắng [14]

- Tác dụng ức chế đối với trùng roi [14]

- Điều trị ngứa bộ phận sinh dục, eczema, ghẻ, hắc lào [1].

- Khứ phong, tán hàn [1], [8]

+ Cách dùng, liều dùng: 3 – 9g, dạng thuốc sắc [8].

+ Kiêng kỵ: người thận suy, hỏa bốc hay cường dương.

1 2.6 Câu kỷ tử

+ Tên khoa học vị thuốc: Fructus Lycii [1], [2], [8].

+ Bộ phận dùng: Quả chín phơi hay sấy khô của cây Câu kỷ (Lycium barbarum L.),

họ Cà (Solanaceae) [1], [8].

1.2.6.1 Thành phần hóa học

- Tinh dầu: có 36 thành phần trung tính đã được nhận dạng bằng sắc ký khí liên hợpvới phổ khối [14]

- Hai sesquiterpen: dehydro – α – cyperon và solavetivon [14]

- Betain, zeaxanthin, physalien [8], [14]

- Trong 100g quả có 3,96mg carotene, 150mg canxi, 6,7mg P, …[12]

- Lyxin, cholin, 2,2% chất béo và 4,6% chất protein, acid xyanhydric [12]

1.2.6.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tăng cường miễn dịch: tăng cường khả năng thực bào của đại thực bào trongxoang bụng chuột nhắt, tăng cường khả năng hoạt động của men lysozym tronghuyết thanh và nâng cao hiệu quả kháng thể kháng hồng cầu cừu của huyết thanh,tăng số lượng tế bào có kháng thể hình thành trong tổ chức lách [1], [14]

- Hạ cholesterol huyết, đường huyết, bảo vệ gan: trên lâm làng, những người trên 60tuổi uống dạng chiết từ câu kỷ với liều 100mg liên tục trong 4 tuần lễ thì cholesterolhuyết, β – lipoprotein và triglyceride đều giảm [14]

- Tác dụng làm chậm sự suy lão [1], [14]

- Tác dụng đối với hệ thống máu: tăng bạch cầu máu ngoại vi, tăng khả năng tạomáu [1], [14]

- Các tác dụng khác:

Betain làm tăng trọng lượng gà nuôi thịt so với lô đối chứng, làm tăng lượng trứng

- Trị bệnh tiêu khát, di tinh, hoạt mộng tinh, liệt dương [1], [2]

- Trị phế âm hư, ho khan [2]

- Người già khí hư, huyết kém [2]

+ Cách dùng, liều dùng: 8 – 16g [2].

+ Kiêng kỵ: những người tỳ vị hư hàn, ỉa chảy [2], [8].

1 2.7 Bạch tật lê

+ Tên khoa học vị thuốc: Fructus Tribuli terrestris [2], [8].

+ Bộ phận dùng: Quả chín phơi khô của cây Bạch tật lê (Tribulus terrestris L.), họ Tật lê (Zygophyllaceae) [2], [8], [12], [14].

1.2.7.1 Thành phần hóa học

- Saponin sterolic: trong đó genin là diosgenin, ruscogenin…[12]

- β – sitosterol, stigmasterol, kaempferol…[12]

- 5 chất thuộc nhóm lignanamid: tribulusamid A, tribulusamid B, N –

transferuloyltyramin, terestriamid và N – trans – coumaroyl – tyramin và β –

sitosterol [12]

- Alcaloid, tinh dầu, chất nhựa, chất phylloerythrin, tanin, flavonoid [12]

1.2.7.2 Tác dụng sinh học

a Tác dụng dược lý

- Tác dụng giảm đau, hạ lipid máu [12]

- Đối với hệ thống tim mạch: chống lại sự xơ cứng động mạch và huyết dính kếttiểu cầu [10]

- Tác dụng làm cho thân thể cường tráng, chống lão suy [10]

- Tác dụng hạ huyết áp, lợi niệu, ức chế trực khuẩn tụ cầu vàng, trực khuẩn lỵ [1]

- Tác dụng giãn cơ trơn, hóa đàm, bình suyễn Gần đây phát hiện bạch tật lê dùng trịbệnh thận dương kém, sinh lý yếu của nam giới [2]

b Tác dụng theo YHCT

- Tính vị, quy kinh: vị cay, đắng, tính ấm, hơi độc; quy vào kinh can, phế [8], [12]

- Công năng: : Sơ can giải uất, thanh can minh mục, bổ thận [2]

1.2.7.3 Công dụng, cách dùng

+ Công dụng

- Điều trị can khí uất kết, dẫn đến đau sườn ngực, đau dây thần kinh liên sườn [2]

- Đau đầu, hoa mắt, chóng mặt do can thượng dương cường [2]

- Điều trị chứng phong chẩn gây ngứa ngoài da do can phong [1], [8]

+ Cách dùng, liều dùng: 8 – 16g [2].

1.2.8 Bá bệnh:

+ Tên khoa học cây thuốc: Eurycoma longifolia Jack [9], [12], [14].

+ Bộ phận dùng: Vỏ thân, rễ, lá phơi hoặc sấy khô [14]

1.2.8.1 Thành phần hóa học:

- Các hợp chất quassinosid: eurycomalacton, longilacton,…[14]

- Các hợp chất triterpen loại tirucalan: niloticin, dihydroniloticin, piscidinol

A…[14]

- Các alcaloid loại canthin – 6 – on, các alkaloid carbolin [14]

- Hai chất đắng: euricomalacton và 2,6 – dimethoxybenzoquinon [14]

1.2.8.2 Tác dụng sinh học

- Tác dụng kháng ký sinh trùng sốt rét trong thử nghiệm nuôi cấy invitro [14]

- Tác dụng tăng dục: thân và rễ làm tăng lượng testosterone trong huyết thanh củađộng vật [14].

1.2.8.3 Công dụng, cách dùng

+ Công dụng:

- Vỏ thân dùng chữa các trường hợp ăn uống không tiêu, nôn mửa, đầy bụng tiêu

chảy, chữa sốt rét, giải độc do uống nhiều rượu và chữa lưng đau mỏi do thấp [14]

- Quả chữa lỵ [14]

- Rễ chữa ngộ độc và tẩy giun [14]

- Lá nấu nước tắm chữa ghẻ lở [14]

+ Kiêng kỵ: phụ nữ có thai [14].

Chương 2 NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu

+ Nguyên liệu: Bài thuốc nghiên cứu gồm 8 vị: đương quy, hoàng kỳ, cốt khí củ,

ba kích, xà sàng tử, câu kỷ tử, bạch tật lê, bá bệnh Các vị thuốc mua tại nhà thuốcHARPHACO số 59 phố Lãn Ông – Hà Nội, đem về sơ chế để nghiên cứu

+ Phương tiện nghiên cứu:

- Thiết bị:

Tủ sấy: Memmert, Shellab

Cân phân tích Sartorius – TE214S, cân kỹ thuật Precisa – XB320C

Kính hiển vy Labomed

Máy cất quay: Buchi R – 200 (Germany)

Đèn tử ngoại Vilber Lourmat

Bếp cách thủy Baths

Các dụng cụ thí nghiệm khác thuộc bộ môn Dược học cổ truyền trường Đại họcDược Hà Nội

+ Hóa chất – dung môi:

Hóa chất dung môi dùng trong nghiên cứu hóa học mua tại công ty TNHH hóa họcứng dụng số 18A Lê Thánh Tông – Hà Nội

- Điều chế cao nước: Bài thuốc được chiết bằng phương pháp sắc, nấu 3 lần vớinước, mỗi lần 1h, gộp dịch chiết, lọc, cô cách thủy đến khi thu được cao đặc [3].Mỗi loại làm 6 mẫu làm lấy kết quả trung bình

2.2.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc

Qua thăm dò tác dụng dược lí của 3 loại cao thấy rằng cao điều chế từ ethanol 40%

và 70% có tác dụng rõ rệt vì vậy chúng tôi tiến hành nghiên cứu xây dựng tiêuchuẩn 2 loại cao điều chế từ ethanol

+ Xác định độ ẩm: Bằng phương pháp dung môi theo phụ lục 12.13 DĐVN IV [8].

Nguyên tắc: Qua 2 bước:

- Bước 1: Bão hòa nước vào dung môi toluen

- Bước 2: Xác định độ ẩm cao

Độ ẩm của cao đặc được tính theo công thức:

H =100.(Vm2- V1) (1)Trong đó: H: Độ ẩm của cao (%)

V1: Thể tích nước cất được sau lần cất đầu tiên (ml)

V2: Thể tich nước cất được sau 2 lần cất (ml)

m: Khối lượng cao đem thử (g)

+ Định tính các nhóm chất hữu cơ

Căn cứ vào các nhóm chất có trong các vị thuốc của bài thuốc để định hướng địnhtính Tiến hành các phản ứng định tính với các thuốc chung và thuốc thử đặc hiệucủa từng nhóm chất theo phương pháp thường quy được ghi trong các tài liệu hóathực vật [5], [6], [13]

+ Kiểm tra các vị thuốc trong cao đặc bằng SKLM

Quy trình: Chiết riêng từng vị thuốc với lượng tương ứng có trong 1g cao đặc bài

thuốc bằng ethanol 96%, chấm riêng 3 vết ( cao đặc chiết ethanol 70%, cao đặcchiết ethanol 40% và vị thuốc) trên cùng 1 bản mỏng với thể tích như nhau Căn cứvào số vết tương ứng giữa vị thuốc và cao đặc để đánh giá Nếu trong cao có các vếttương đương các vết của vị thuốc cả về màu sắc và Rfthì sơ bộ xác định vị thuốc đó

có trong bài thuốc

+ Định lượng flavonoid toàn phần

Tiến hành theo phương pháp cân

+ Xác định chất chiết được bằng nước: Phương pháp chiết lạnh [8].

Nguyên tắc: Xác định khối lượng cắn khô thu được, tính tỷ lệ phần trăm chất chiết

được bằng nước theo khối lượng cao khô tuyệt đối

Tiến hành theo phương pháp ghi trong DĐVN IV [8]

2.2.3 Dự kiến tiêu chuẩn cao đặc

Theo mẫu chung của bộ y tế gồm 2 phần: Yêu cầu chất lượng và phương pháp đánhgiá

Chương 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN VÀ KẾT LUẬN

3.1 Bào chế cao đặc

Dược liệu đã được kiểm tra đạt tiêu chuẩn DĐVN IV, bào chế thành dạng thuốcphiến dùng để điều chế cao đặc; tùy từng phương pháp điều chế cao mà tiếp tục xử

lí dược liệu cho thích hợp

3.1.1 Bào chế cao đặc từ nước sắc

+ Dùng ấm sắc thuốc bằng điện (Hàn Quốc): Korean Natural Medicine ElectricBrewing POT

+ Cân 1272g dược liệu (12 thang thuốc), chia làm 6 mẻ, mỗi mẻ gồm 2 thang

(212g)

+ Cách tiến hành 1 mẻ:

- Lần 1: Dược liệu dưới dạng thuốc phiến, cho xà sàng tử, bạch tật lê vào túi nhỏ,thắt chặt miệng lại, các dược liệu còn lại vào giỏ sắc thuốc Cho nước vào ngập đáygiỏ 1 – 2cm Bật công tắc điên để bắt đầu sắc và đặt thời gian sắc trong 1 giờ; sau

đó để nguội gạn lấy nước sắc

- Lần 2: cho nước vào ngập đáy giỏ 1 – 2cm, tiếp tục sắc trong 1 giờ, để nguội, gạnlấy nước sắc

- Lần 3: tiến hành tương tự lần 2

- Gộp dịch chiết 3 lần, lọc qua bông, cô cách thủy thành cao đặc 3:1 (3g dượcliệu/1g cao)

Tiến hành chiết 3 mẻ lấy kết quả trung bình

Hiệu suất chiết cao được tính theo công thức:

H=(m3 - mm2).100

1

Trong đó: m1: Khối lượng dược liệu (g)

m2: Khối lượng cốc (g)

m3: Tổng khối lượng cốc và cao

Kết quả: Được ghi ở bảng 1

Bảng 1 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc từ nước sắc

Quy trình điều chế cao đặc nước sắc 3:1 được tóm tắt ở hình 3.1 (trang 19)

Hình 3.1 Sơ đồ bào chế cao đặc nước sắc 3:1

3.1.2 Bào chế cao đặc chiết ethanol 40%

+ Chuẩn bị dung môi chiết: mua ethanol 96% dược dụng, pha với nước cất thànhethanol 40% để chiết

+ Chuẩn bị bình chiết: rửa sạch các bình cầu bằng nước cất, sấy khô, tráng bằngethanol 40%

Rửa sạch, thái phiến, sấy

ở 700C

Dược liệu saukhi sấy

Sắc nướcDịch chiết nước

Lọc qua bôngDịch chiết sau khi lọc

Cô cách thủyCao đặc bài thuốc 3:1

Dược liệu

+ Chuẩn bị dược liệu: Các vị thuốc đã đạt tiêu chuẩn chất lượng được cắt nhỏ Cân1272g dược liệu (12 thang thuốc), chia làm 6 mẻ chiết xuất, mỗi mẻ 2 thang (212g).+ Cách chiết 1 mẻ:

- Lần 1: Cho dược liệu vào bình cầu, cho ethanol 40% vào đến ngập dược liệu 1 –2cm, lắp ống sinh hàn, đun trên bếp điện, đun sôi 1 giờ, sau đó gạn lấy dịch chiết

- Lần 2 : Cho ethanol 40% vào ngập dược liệu 1 – 2cm, lăp ống sinh hàn, tiếp tụcđun sôi trong 1 giờ, sau đó gạn lấy dịch chiết

m3: Tổng khối lượng cốc và cao

Kết quả: Được ghi ở bảng 2

Quy trình điều chế cao đặc chiết ethanol 40% 4:1 được tóm tắt ở hình 3.2 (trang 26)

3.1.3 Bào chế cao đặc chiết ethanol 70%

Tiến hành tương tự như bào chế cao đặc chiết ethanol 40%, thay dung môi chiếtbằng ethanol 70%

Kết quả: Được ghi ở bảng 3

Quy trình điều chế cao đặc chiết ethanol 70% 5:1 tương tự cao đặc chiết ethanol40% thay ethanol 40% bằng ethanol 70%

Bảng 2 Kết quả xác định hiệu suất bào chế cao đặc chiết ethanol 40%

3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao đặc

3.2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ trong cao đặc

3.2.1.1 Định tính flavonoid

Chiết xuất: Hòa tan 2g cao đặc vào 10ml nước cất, đun nóng nhẹ cho tan, lọc (gấp

nếp) Lắc với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần với 10ml để loại tạp Lấy lớp nước, đemlắc với ethyl acetat 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp dịch chiết ethyl acetat, bốc hơi dungmôi đến cắn, hòa tan cắn vào 10ml ethanol 90% được dịch chiết để làm phản ứngđịnh tính

Định tính:

a Phản ứng với dung dịch kiềm loãng

Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt NaOH 10%, lắc kỹ.

Phản ứng dương tính khi màu vàng của dung dịch tăng lên rõ rệt

b Phản ứng với hơi NH3

Tiến hành: Nhỏ 2 giọt dịch chiết lên 2 vị trí khác nhau của giấy lọc, để khô, 1 vết

che kín, 1 vết hơ trên miệng lọ chứa NH3đặc Phản ứng dương tính khi vết được hơ

có màu vàng tăng lên

Kết quả:

- Cao đặc chiết ethanol 70%: vết được hơ có màu da cam nhạt (phản ứng dươngtính)

- Cao đặc chiết ethanol 40%: vết được hơ có màu da cam (phản ứng dương tính)

c Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%

Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt FeCl3 5%, lắc đều.Phản ứng dương tính nếu xuất hiện màu xanh đen

Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 1 ít bột magie, nhỏ từ từ 3

giọt HCl đặc, đun nóng cách thủy Phản ứng dương tính nếu có màu từ vàng, đỏ đếnxanh lá

Kết quả:

- Cao đặc chiết ethanol 70%: dung dịch chuyển từ màu vàng → đỏ → xanh đen

(đun cách thủy khoảng 10 phút mới chuyển màu rõ) Phản ứng dương tính

- Cao đặc chiết ethanol 40%: dung dịch chuyển từ màu vàng sang đỏ (phản ứng

dương tính)

e Phản ứng diazo hóa

Tiến hành: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2ml dung dịch NaOH, thêm 3

giọt TT diazoni, lắc đều, đun nóng cách thủy trong vài phút Phản ứng dương tínhnếu xuất hiện màu hồng, đỏ, đỏ cam

Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định cao đặc chiết ethanol 70% và cao

đặc chiết ethanol 40% có flavonoid

3.2.1.2 Định tính saponin

Chiết xuất: Hòa tan 2g cao đặc vào 10ml nước, đun nóng nhẹ cho tan hết Để nguội,

lắc với ether dầu hỏa 3 lần, mỗi lần 10ml để loại tạp, lấy lớp nước, đun nóng đểđuổi hết ether dầu hỏa Chiết với n – butanol 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp các dịchchiết n – butanol lại, bốc hơi dung môi đến cắn, hòa tan cắn vào 10ml ethanol 90%được dịch chiết để làm phản ứng định tính

Định tính:

a Quan sát hiện tượng tạo bọt

Tiến hành: Lấy 1g cao đặc, thêm 10ml nước cất, đun cách thủy cho tan hết, để

nguội, lắc mạnh theo chiều dọc ống trong vòng 5 phút Phản ứng dương tính nếu cộtbọt bền sau 15 phút

Tiến hành: Lấy 1ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, bốc hơi đến cắn, hòa tan cắn

trong 1ml anhydride acetic, thêm 1 giọt H2SO4 đặc Phản ứng dương tính khi: chomàu xanh lá (dẫn chất steroid), màu đỏ (dẫn chất triterpenoid)

Kết quả:

- Cao đặc chiết ethanol 70%: dung dịch chuyển từ màu vàng sang đỏ sẫm (phản ứng

dương tính)

- Cao đặc chiết ethanol 40%: dung dịch chuyển từ màu vàng sang đỏ sẫm (phản ứng

dương tính)

c Phản ứng Salkowski

Tiến hành: Lấy 1ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, bốc hơi tới cắn Hòa tan cắn

bằng 1ml Cloroform, thêm 1 giọt H2SO4đặc Phản ứng dương tính nếu có màu vàngchuyển sang đỏ sẫm hay xanh, xanh tím

- Cao đặc chiết ethanol 70%: cột bọt ở 2 ống bằng nhau (phản ứng dương tính) sơ

bộ kết luận cao đặc có saponin triterpenoid

- Cao đặc chiết ethanol 40%: cột bọt ở 2 ống bằng nhau (phản ứng dương tính) sơ

bộ kết luận cao đặc có saponin triterpenoid

Nhận xét: Qua các phản ứng trên sơ bộ nhận định cao đặc chiết ethanol 70% và cao

đặc chiết ethanol 40% có saponin