Đánh giá tồn lưu tế bào ác tính bằng kỹ thuật rq pcr của tái sắp xếp gen ig tcr trên bệnh nhân bạch cầu cấp dòng lympho

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - DƯƠNG THỊ MINH NHẬT ĐÁNH GIÁ TỒN LƯU TẾ BÀO ÁC TÍNH BẰNG KỸ THUẬT RQ-PCR CỦA TÁI SẮP XẾP GEN IG/TCR TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ NỘI TRÚ Chuyên ngành: Huyết Học - Truyền Máu Mã số: NT 62 72 25 01 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - DƯƠNG THỊ MINH NHẬT ĐÁNH GIÁ TỒN LƯU TẾ BÀO ÁC TÍNH BẰNG KỸ THUẬT RQ-PCR CỦA TÁI SẮP XẾP GEN IG/TCR TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH CẦU CẤP DÒNG LYMPHO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SĨ NỘI TRÚ Chuyên ngành: Huyết Học - Truyền Máu Mã số: NT 62 72 25 01 Người Hướng Dẫn Khoa Học: PGS.TS.BS PHAN THỊ XINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả luận văn DƯƠNG THỊ MINH NHẬT MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG i DANH MỤC BIỂU ĐỒ ii DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT .iv ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐỊNH NGHĨA 1.2 DỊCH TỄ HỌC 1.3 YẾU TỐ NGUY CƠ 1.4 BIỂU HIỆN LÂM SÀNG CỦA BCCDL Ở TRẺ EM 1.5 TRIỆU CHỨNG SINH HỌC 1.6 CHẨN ĐOÁN 14 1.7 ĐIỀU TRỊ 15 1.8 THEO DÕI BTLTT TRONG BCCDL 17 1.9 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ TỒN LƯU TẾ BÀO ÁC TÍNH 20 1.10 SỰ TÁI SẮP XẾP GEN IG/TCR 25 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP CHỌN MẪU 33 2.1 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 33 2.2 CỠ MẪU, ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 33 2.3 CÁC BƯỚC THỰC HIỆN 34 2.4 PHƯƠNG PHÁP THU THẬP VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU 42 CHƯƠNG KẾT QUẢ 46 3.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA CÁC BỆNH NHI TRONG NGHIÊN CỨU 46 3.2 XÁC ĐỊNH BIỂU HIỆN MẠNH CỦA TSX GEN IG/TCR BẰNG PHẢN ỨNG PCR VÀ TRÌNH TỰ VÙNG NỐI IG/TCR 50 3.3 ĐỊNH LƯỢNG SỐ BẢN SAO TSX GEN IG/TCR LÚC CHẨN ĐỐN VÀ SAU GIAI ĐOẠN TẤN CƠNG 56 3.4 SO SÁNH KẾT QUẢ BTLTT CỦA KỸ THUẬT RQ-PCR TSX GEN IG/TCR VÀ TBDC 62 CHƯƠNG BÀN LUẬN 65 4.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA BỆNH NHI TRONG NGHIÊN CỨU 65 4.2 XÁC ĐỊNH BIỂU HIỆN MẠNH CỦA TSX GEN IG/TCR BẰNG PHẢN ỨNG PCR VÀ TRÌNH TỰ VÙNG NỐI IG/TCR 69 4.3 ĐỊNH LƯỢNG SỐ BẢN SAO TSX IG/TCR LÚC CHẨN ĐỐN VÀ SAU GIAI ĐOẠN TẤN CƠNG 71 4.4 SO SÁNH KẾT QUẢ BTLTT CỦA KỸ THUẬT RQ-PCR TSX GEN IG/TCR VÀ TBDC 74 4.5 GIỚI HẠN CỦA ĐỀ TÀI 75 KẾT LUẬN 76 KIẾN NGHỊ……………………………………………………………………… 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Đánh giá tiên lượng BCCDL theo di truyền học phân tử [26] 13 Bảng 2.1 Các cặp mồi sử dụng phản ứng PCR khảo sát 19 kiểu TSX gen Ig/TCR kích thước sản phẩm tương ứng [46] 38 Bảng 3.1 Đặc điểm huyết học bệnh nhân lúc nhập viện 48 Bảng 3.2 Đặc điểm số lượng bạch cầu blast máu ngoại vi 48 Bảng 3.3 Đặc điểm tủy đồ 49 Bảng 3.4 Đặc điểm dấu ấn miễn dịch 49 Bảng 3.5 Đặc điểm bất thường NST (xác định với FISH, PCR karyotype) 49 Bảng 3.6 LDH BN lúc nhập viện 50 Bảng 3.7 Đặc điểm DNT (ngày 8) BN 50 Bảng 3.8 Tỷ lệ biểu mạnh kiểu TSX gen 52 Bảng 3.9 Kết BTLTT kỹ thuật RQ-PCR 57 Bảng 3.10 Số BN định lượng số copy TSX gen Ig/TCR 58 Bảng 3.11 Tương quan số lượng BC lúc chẩn đoán với BTLTT mức 10-2 59 Bảng 3.12 Tương quan số lượng BC lúc chẩn đoán với BTLTT mức 10-4 60 Bảng 3.13 Tương quan tuổi lúc chẩn đoán với BTLTT mức 10-2 61 Bảng 3.14 Tương quan tuổi lúc chẩn đoán với BTLTT mức 10-4 61 Bảng 3.15 Tương quan BTLTT mức 10-2 với nhóm BN có TEL/AML1 đa bội nhóm có BCR/ABL MLL/AF4 61 Bảng 3.16 Tương quan BTLTT mức 10-4 với nhóm BN có TEL/AML1 đa bội nhóm có BCR/ABL MLL/AF4 62 Bảng 3.17 Kết tương đồng RQ – PCR TSX gen Ig/TCR TBDC sau giai đoạn công 63 Bảng 3.18 So sánh kết khác RQ-PCR TSX gen Ig/TCR TBDC 64 Bảng 4.1 So sánh gen IgK, TCRD, TCRG chúng tơi, nghiên cứu nước ngồi 69 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân nhóm theo tuổi .46 Biểu đồ 3.2 Phân nhóm bệnh nhân theo giới 47 Biểu đồ 3.3 Đặc điểm lâm sàng bệnh nhân 47 Biểu đồ 3.4 Tỷ lệ BN có biểu mạnh 19 vùng nối .51 Biểu đồ 3.5 BN mang 1, kiểu TSX Ig/TCR có biểu mạnh .52 Biểu đồ 3.6 Đặc điểm dịng BN có kiểu TSX 54 Biểu đồ 3.7 Trình tự vùng nối TSX gen bệnh nhân kiểu TSX 55 Biểu đồ 3.8 Trình tự 11 vùng nối .55 Biểu đồ 3.9 Tương quan BC BTLTT 59 Biểu đồ 3.10 Tương quan tuổi BTLTT 60 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc gen IgH [29] 26 Hình 1.2 Cấu trúc gen IgK [29] 27 Hình 1.3 Cấu trúc gen IgL [29] 28 Hình 1.4 Các trình tự tín hiệu tái tổ hợp đoạn gen V J gen IgK, IgL, IgH [35] 29 Hình 1.5 Tái sếp Ig/TCR [35] .30 Hình 1.6 Cấu trúc TCRA TCRD [30] 31 Hình 1.7 Cấu trúc TCRB [30] 31 Hình 1.8 Cấu trúc TCRγ TCRδ[30] 32 Hình 2.1 Sơ đồ thực nghiên cứu 35 Hình 2.2 Minh họa thang điểm đánh giá mức độ biểu kiểu TSX gen Ig/TCR dựa độ đậm băng điện di sản phẩm PCR gel agarose 39 Hình 2.3 Sơ đồ quy trình thực kỹ thuật giải trình tự gen Ig/TCR .40 Hình 3.1 Điện di sản phẩm PCR vùng nối Vk2-Kde 51 Hình 3.2 Trình tự đa dịng Vd2-Dd3 53 Hình 3.3 Trình tự đơn dịng Vk1-Kde 53 Hình 3.4.Kết RQ – PCR vùng nối Vd2-Dd3 BN ALL-09 56 Hình 3.5 Kết RQ –PCR vùng nối Vk2 – kde BN ALL-46 57 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT TIẾNG VIỆT BCC Bạch cầu cấp BCCDL Bạch cầu cấp dòng Lympho BCCDT Bạch cầu cấp dòng tủy BN Bệnh nhân BTLTT Bệnh tồn lưu tối thiểu NST Nhiễm sắc thể TBDC Tế bào dòng chảy TLTBAC Tồn lưu tế bào ác tính TSX Tái xếp TIẾNG ANH ALL Acute lymphoblastic leukemia/ bạch cầu cấp dòng lympho CD Cluster of differentiation/ dấu ấn miễn dịch CNS Central nervous system/ hệ thần kinh trung ương CT Threshold cycle/ chu kỳ ngưỡng EGIL European Group for the Immunological characterization (danh từ riêng) FC Flow cytometry/ tế bào dòng chảy FISH Fluorescent In Situ Hybridization/ Lai chỗ phát huỳnh quang Ig/TCR Immunoglobulin T-cell receptor (danh từ riêng) LAIPs Leukemia-associated immunophenotypes / Kiểu hình liên quan đến bệnh bạch cầu LDH Lactate dehydrogenase (danh từ riêng) MRD Minimal residual disease / Bệnh tồn lưu tốn thiểu MRD-HR Minimal residual disease - high risk/ Bệnh tồn lưu tốn thiểu- nguy cao MRD-IR Minimal residual disease - intermediate risk/ Bệnh tồn lưu tốn thiểu- nguy trung bình MRD-SR Minimal residual disease - standard risk/ / Bệnh tồn lưu tốn thiểu- nguy chuẩn PCR Polymerase chain reaction/ phản ứng chuỗi polymerase pEFS Probability of event free survival / Xác suất sống không cố RQ-PCR Real time- Polymerase chain reaction/ phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực SCV Superior vena cava / Tĩnh mạch chủ Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh [47] Zipf TF , S B., et al (2000), "Childhood leukemias In: Clinical Oncology ", pp2402-2429 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh PHỤ LỤC TRÌNH TỰ ĐOẠN DÒ VÀ ĐOẠN MỒI TSX GEN IG/TCR STT Mã số ALL-01 Vùng nối Vk3-kde ALL-03 Vd2-Dd3 ALL-06 Vk3-kde ALL-09 Vd2-Dd3 ALL-12 Vg2Jg1.3/2.3 ALL-15 Vd2-Dd3 ALL-20 Vd2-Dd3 ALL-21 Vd2-Dd3 ALL-23 Vd2-Dd3 10 ALL-24 Vd2-Dd3 11 ALL-25 Vd2-Dd3 Trình tự đoạn dị đoạn mồi TSX gen Ig/TCR IGK-F1: 5'-TCAGCAGACTGGAGCCTGAAGAT-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' TGT CAG CAG TAT GGT AGC TCA TCG A 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' TTA CTA CTG TGC CTG TGA CAC CGG 3' (TAMRA) IGK-F1: 5'-TCAGCAGACTGGAGCCTGAAGAT-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' GTC AGC AGT ATG GTA GCT CAC CTC A 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' AGA GAT GAA GGG TCT TCC TAT GGG A 3' (TAMRA) Vg2-F2: 5'- TGA ACG TCT ACA TCC ACT CTC A -3' TCRG-1R: 5'-GGAAATGTTGTATTCTTCCGATACTTAC-3' Probe: (FAM) 5' TAC TGT GCC TTG TGG GAG GTG CGA 3' (TAMRA) TCRD-2F: 5’-GCAAAGAACCTGGCTGTACTTAAG- 3’ TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' TAC TAC TGT GCC TGT GTG GCG ACC A 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' GTC TTA CTA CTG TGT CTG GGG GAT A 3'(TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' CTT ACT ACT GTG CCT GTG ACC CGT A 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' TCT TAC TAC TGT GCC TGC CGA GGT 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5’ GGT CTT ACT ACT GTG CCT GTC CCC A 3’ (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 12 ALL-28 Vg1Jg1.1/2.1 13 ALL-34 Vd2-Jd1 14 ALL-35 VkIII-kde 15 ALL-36 Vg2Jg1.3/2.3 16 ALL-37 Vd2-Dd3 17 ALL-39 Vk2-Kde 18 ALL-40 Vd2-Dd3 TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' TTA CTA CTG TGC CTG TGA CCG TAC T 3' (TAMRA) TCRG-1F: 5'-GCATGAGGAGGAGCTGGA-3' Jg-R1: 5'- GAG CTT AGT CCC TTC AGC AA -3' Probe: (FAM) 5’ TAT TAC TGT GCC ACC TGG GAG CAT 3’ (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' Jd1-R2: 5'- CAC ACG GGT TCC TTT TCC AA -3' Probe: (FAM) 5' CTA CTG TGC CTG TGA CAC GCC TTA A 3' (TAMRA) IGK-F1: 5'-TCAGCAGACTGGAGCCTGAAGAT-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' TCA GCA GTA TGG TAG CTC ACC TCC A 3' (TAMRA) Vg2-F3: 5'- CGT CTA CAT CCA CTC TCA CCA T -3' TCRG-1R: 5'-GGAAATGTTGTATTCTTCCGATACTTAC-3' Probe: (FAM) 5' AGG TGC AGT GTG ATG GAC TGG AAT 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' CTA CTG TGC CTG TGA CAC CTA TCT A 3' (TAMRA) IGK-F1: 5'-TCAGCAGACTGGAGCCTGAAGAT-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' TTA CTG CAT GCA AGG TAC ACA CTG G 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' TTA CTA CTG TGC CTG TGA CAC CCT 3' (TAMRA) 19 ALL-41 Vk2-Kde 20 ALL-44 Vd2-Dd3 IGK-F8: 5'- GAG TGG AGG CTG AGG ATG TT -3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' ACT GCA TGC AAG CTC TAC AAA GTC C 3' (TAMRA) TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' CTT ACT ACT GTG CCT GTG TCA CGG T 3' (TAMRA) 21 ALL-46 VkII-Kde 22 ALL-47 VkI-Kde IGK-F1: 5'-TCAGCAGACTGGAGCCTGAAGAT-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' TGC ATG CAA GGT ACA CAC TGG CCT 3' (TAMRA) IGK-F7: 5'-GGGACAGATTTCACTCTCACCA-3' IGK-1R: 5'-AAAAATGCAGCTGCAGACTCA-3' Probe: (FAM) 5' CTA CTG TCA ACA GAG TTA CAG TAC C 3' (TAMRA) 23 ALL-48 Vd2-Dd3 TCRD-1F: 5'-GTACTTAAGATACTTGCACCATCAGAGA-3' TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 24 ALL-49 Vd2-Dd3 25 ALL-50 Vg1Jg1.1/2.1 Probe: (FAM) 5’ GGG TCT TAC TAC TGT GCC TGT TTG T3’ (TAMRA) TCRD-2F: 5’-GCAAAGAACCTGGCTGTACTTAAG- 3’ TCRD-2R: 5’-GTTTTTGTACAGGTCTCTGTAGGTTTTGTA-3’ Probe: (FAM) 5' CTT ACT ACT GTG CCT GTG ACA CGA T 3' (TAMRA) TCRG-3F: 5'- TAC GGA AGC ACA AGG CAG AA -3' Jg-R1: 5'- GAG CTT AGT CCC TTC AGC AA -3' Probe: (FAM) 5' GTC TAT TAC TGT GCC ACC TGG GAC T 3' (TAMRA) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh DANH SÁCH BỆNH NHÂN TRONG NGHIÊN CỨU STT Họ tên 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Hồ Sĩ H Hồ Minh A Trương Kiến L Đồn Ngọc Linh Đ Nguyễn Khánh B Ngơ Xuần T Phạm Trần Anh T Hoàng Bảo H Lương Thế K Nguyễn Thảo N Nguyễn Ngọc Phương N Nguyễn Thành N Nguyễn Minh K Trần Duy A Trần Ngọc Châu Cát T Bùi Lê Đăng Kh Vũ Thành A Nguyễn Quốc B Trần Phước H Lê Minh H Lê Nguyễn Khánh N Nguyễn Bảo T Nguyễn Lương Chấn H Ngô Chấn Thiên Nguyễn Thiên T Trần Thiện N Phạm Nguyễn Minh Đ Phạm Bình M Huỳnh Viết H Nguyễn Ngọc Gia H Nguyễn Hoàng N Đỗ Như Q Trần Hải Đ Phan Phúc V Hồ Hải Đ Trần Công M Nguyễn Đức T Tô Xuân T Năm sinh Nam Nữ 2014 2007 2011 2014 2016 2010 2015 2011 2009 2014 2011 2013 2012 2014 2015 2010 2016 2004 2012 2014 2012 2004 2013 2014 2015 2008 2017 2015 2013 2012 2009 2005 2013 2014 2016 2015 2009 2004 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Chẩn đoán BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-T BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 Nguyễn Phúc Gia B Mai Nguyễn Quỳnh A Thái Quỳnh G Trần Lê H Lê Thiên T Võ Thu N Trần Khơi N Ngơ Minh H Hồng Nguyễn Trung H Nguyễn Ngọc Anh N Phạm Hiếu A Phan Hoàng A 2015 BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B BCCDL-B 2015 2016 2014 2010 2012 2014 2016 2014 2011 2012 2014 Xác nhận Bệnh Viện Truyền Máu Huyết Học TpHCM Ngày Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn tháng Năm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh BẢNG THƠNG TIN DÀNH CHO ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên nghiên cứu: “Đánh giá tồn lưu tế bào ác tính kỹ thuật RQ-PCR tái xếp gen Ig/TCR bệnh nhân bạch cầu cấp dòng Lympho” Nghiên cứu viên chính: Dương Thị Minh Nhật Đơn vị chủ trì: Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh I.THƠNG TIN VỀ NGHIÊN CỨU Mục đích tiến hành nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành nhằm đánh giá tồn lưu tế bào ác tính bệnh nhân bạch cầu cấp dòng Lympho sau điều trị phác đồ Fralle 2000 Bệnh viện Truyền máu huyết học TPHCM, đồng thời mô tả đặc điểm lâm sàng, sinh học bệnh nhân bạch cầu cấp dòng Lympho đánh giá tồn lưu tế bào ác tính bằnh kỹ thuật RQ-PCR TSX gen Ig/TCR bệnh nhân bạch cầu cấp dòng Lympho BV TMHH TPHCM - Đây nghiên cứu mô tả hàng loạt ca Đối tượng tham gia khám, chẩn đốn điều trị theo quy trình thông thường bệnh viện Truyền Máu Huyết Học TPHCM Khoảng thời gian tiến hành nghiên cứu từ tháng 01/2017 đến tháng 05/2018, theo dõi tiến cứu hồ sơ bệnh án vào tháng 12/2017 đến tháng 05/2018 Tiêu chuẩn chọn lựa: chẩn đoán BCCDL dựa tủy đồ dấu ấn miễn dịch, trẻ em có tuổi từ 0-15 tuổi, mẩu tủy sau ngày 35 sau giai đoạn công neut≥ 1000/ul, bệnh nhân điều trị phác đồ Fralle 2000 ;.Tiêu chuẩn loại trừ: Bệnh nhân nghi ngờ BCCDL kết tủy đồ dấu ấn miễn dịch không trùng khớp nhau, Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh tuổi > 15 Bệnh nhân không điều trị theo phác đồ Fralle 2000.Số người dự kiến tham gia nghiên cứu 40 • Khi tham gia nghiên cứu, chúng tơi xin lấy thêm mẫu máu mẫu tủy để xét nghiệm theo qui trình khám điều trị bệnh BV Truyền Máu Huyết Học cháu ông bà để làm xét nghiệm , đối tương tham gia nghiêm cứu hỏi bệnh khám lâm sàng đủ, tư vấn hướng điều trị giải đáp thắc mắc liên quan đần bệnh nhân bạch cầu cấp dịng Lympho Các nguy bất lợi • Nguy khơng lớn q trình khám chữa bệnh thơng thường • Những lợi ích có người tham gia: khám bệnh, xét nghiệm đầy đủ, chẩn đốn bệnh xác, điều trị theo dõi theo phác đồ, giải đáp thắc mắc liên quan đến bệnh bạch cầu cấp dịng Lympho Lợi ích xét nghiệm đánh giá tồn lưu tế bào ác tính bệnh nhân bạch cầu cấp dịng Lympho để tiên lượng bệnh lựa chọn phác đồ thích hợp cho NB • Xét nghiệm đánh giá tồn lưu tế bào ác tính Kỹ thuật RQ-PCR tái xếp gen Ig/TCR bệnh nhân bạch cầu cấp dòng Lympho nghiêm cứu viên chi trả Bồi thường/điều trị có tổn thương liên quan đến nghiên cứu: • Q trình nghiên cứu khơng can thiệp vào q trình khám chữa bệnh thơng thường sở y tế nên khơng gây tổn hại mặt điều trị • Tuy nhiên, đối tượng tham gia có xảy vấn đề sức khỏe nghiên cứu viên hướng dẫn cách xử trí Người liên hệ • Họ tên: Dương Thị Minh Nhật, số điện thoại: 01236901779 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Sự tự nguyện tham gia • Người tham gia quyền tự định, khơng bị ép buộc tham gia • Người tham gia rút lui thời điểm mà khơng bị ảnh hưởng đến việc điều trị/chăm sóc mà họ đáng hưởng Tính bảo mật • Mọi thông tin người tham gia giữ bí mật, nghiên cứu viên chịu trách nhiệm lưu trữ Các thơng tin mang tính định dạng nghiên cứu viên sử dụng cần thiết phải liên lạc trực tiếp với người tham gia, không tiết lộ công bố cho người khác II CHẤP THUẬN THAM GIA NGHIÊN CỨU Tôi đọc hiểu thơng tin đây, có hội xem xét đặt câu hỏi thông tin liên quan đến nội dung nghiên cứu này.Tôi nói chuyện trực tiếp với nghiên cứu viên trả lời thỏa đáng tất câu hỏi Tôi nhận Bản Thông tin cho đối tượng nghiên cứu chấp thuận tham gia nghiên cứu Tôi tự nguyện đồng ý tham gia Chữ ký người tham gia: Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Chữ ký người làm chứng người đại diện hợp pháp (nếu áp dụng): Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Chữ ký Nghiên cứu viên/người lấy chấp thuận: Tôi, người ký tên đây, xác nhận bệnh nhân/người tình nguyện tham gia nghiên cứu ký chấp thuận đọc tồn thơng tin đây, thơng tin giải thích cặn kẽ cho Ơng/Bà Ông/Bà hiểu rõ chất,các nguy lợi ích việc Ơng/Bà tham gia vào nghiên cứu Họ tên _ Chữ ký _ Ngày tháng năm _ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - DƯƠNG THỊ MINH NHẬT ĐÁNH GIÁ TỒN LƯU TẾ BÀO ÁC TÍNH BẰNG KỸ THUẬT RQ- PCR CỦA TÁI SẮP XẾP GEN IG/ TCR TRÊN BỆNH NHÂN BẠCH... 90% bệnh nhân BCCDL, mặc khác độ nhạy phản ứng RQ- PCR TSX gen Ig/ TCR đạt 10-4 90%[24] Vì lý trên, chúng tơi ứng dụng kỹ thuật RQ- PCR sử dụng TaqMan probe đánh giá BTLTT dựa kiểu tái xếp gen Ig/ TCR. .. sánh kết BTLTT kỹ thuật tế bào dòng chảy RQ- PCR tái xếp gen Ig/ TCR CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐỊNH NGHĨA BCCDL rối loạn ác tính chuyển dạng bất thường tế bào đầu dòng lympho Bệnh có đặc điểm