Luận văn dược sĩ (HOÀN CHỈNH) nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật sản xuất cao diếp cá houttuynia cordata thunb

i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG iv DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ vii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ DIẾP CÁ 1.1.1 Mô tả thực vật 1.1.2 Phân bố, sinh thái 1.1.3 Thành phần hóa học .4 1.1.4 Công dụng 1.1.5 Tác dụng dược lý nghiên cứu lâm sàng .5 1.1.6 Các chế phẩm có chứa Diếp cá thị trường 1.2 ĐIỀU CHẾ CAO THUỐC [7] 1.2.1 Chiết xuất .9 1.2.2 Cô đặc, sấy khô 10 1.2.3 Cao thuốc .11 1.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 12 1.3.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết xuất 12 1.3.2 Mơ hình thực nghiệm 13 1.3.3 Nghiên cứu liên quan nhân 14 1.3.4 Tối ưu hóa thơng số quy trình 15 1.4 NỘI DUNG CỦA MỘT TIÊU CHUẨN CAO DƯỢC LIỆU [1] 16 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, DUNG MÔI, TRANG THIẾT BI .18 2.1.1 Dược liệu chất chuẩn .18 2.1.2 Hóa chất, dung mơi 18 2.1.3 Trang thiết bị 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.2.1 Xử lý nguyên liệu 19 2.2.2 Kiểm nghiệm dược liệu 19 2.2.3 Quy trình chiết xuất cao Diếp cá 19 2.2.4 Quy trình chiết xuất cắn CHCl3 từ cao Diếp cá để định lượng quercetin 20 2.2.5 Phương pháp HPLC định lượng quercetin cao Diếp cá 21 2.2.6 Thiết lập tối ưu hóa quy trình chiết xuất cao Diếp cá 23 ii 2.2.7 Xây dựng phương pháp kiểm nghiệm cao Diếp cá 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU DIẾP CÁ 28 3.1.1 Mô tả 28 3.1.2 Vi phẫu 28 3.1.3 Soi bột 29 3.1.4 Định tính 29 3.1.5 Độ ẩm 29 3.1.6 Tro toàn phần .30 3.1.7 Tạp chất .30 3.1.8 Tỷ lệ vụn nát 30 3.1.9 Định lượng tinh dầu .31 3.2 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐINH LƯỢNG QUERCETIN TRONG CAO DIẾP CÁ 31 3.2.1 Quy trình chiết xuất cắn CHCl3 từ cao Diếp cá để định lượng quercetin 31 3.2.2 Thẩm định quy trình định lượng quercetin cao Diếp cá 32 3.3 TỐI ƯU HÓA QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT CAO DIẾP CÁ .35 3.3.1 Liên quan điều kiện chiết xuất kết thực nghiệm .35 3.3.2 Liên quan nhân 36 3.3.3 Tối ưu hóa thơng số .38 3.3.4 Thực nghiệm kiểm chứng quy trình tối ưu 39 3.4 KIỂM NGHIỆM CAO DIẾP CÁ 40 3.4.1 Hình thức cảm quan .40 3.4.2 Độ tan nước 40 3.4.3 Độ tan cồn 40 3.4.4 Cắn không tan nước 40 3.4.5 Độ ẩm 40 3.4.6 Độ tro 40 3.4.7 pH 41 3.4.8 Kim loại nặng (Pb) .41 3.4.9 Định tính 41 3.4.10 Định lượng 42 3.5 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM CAO DIẾP CÁ .43 CHƯƠNG BÀN LUẬN 45 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHI 47 5.1 KẾT LUẬN 47 5.2 ĐỀ NGHI 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT CHCl3 Chloroform CH3CN Acetonitril DĐVN Dược điển Việt Nam DL/DM Dược liệu/dung môi HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) MeOH Methanol RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự TB Trung bình tR Thời gian lưu TT Thuốc thử UV Tử ngoại (Ultra Violet) iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách hóa chất, dung mơi 18 Bảng 2.2 Danh sách trang thiết bị .18 Bảng 2.3 Mơ hình D-Optimal 23 Bảng 3.1 Định tính dược liệu Diếp cá 29 Bảng 3.2 Độ ẩm dược liệu Diếp cá .30 Bảng 3.3 Tro toàn phần dược liệu Diếp cá 30 Bảng 3.4 Tạp chất dược liệu Diếp cá 30 Bảng 3.5 Tỷ lệ vụn nát dược liệu Diếp cá 30 Bảng 3.6 Hàm lượng tinh dầu dược liệu Diếp cá 31 Bảng 3.7 Các thông số sắc ký mẫu quercetin chuẩn 32 Bảng 3.8 Các thông số sắc ký mẫu thử .32 Bảng 3.9 Sự tương quan nồng đợ và diện tích đỉnh 33 Bảng 3.10 Độ lặp lại phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 34 Bảng 3.11 Độ phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 35 Bảng 3.12 Liên quan điều kiện chiết xuất và kết thực nghiệm 36 Bảng 3.13 Liên quan nhân quy trình chiết xuất cao Diếp cá 36 Bảng 3.14 Đánh giá mơ hình nhân cao Diếp cá 38 Bảng 3.15 Kết thực nghiệm và giá trị dự đoán dược liệu Diếp cá .39 Bảng 3.16 Cắn không tan nước cao Diếp cá 40 Bảng 3.17 Độ ẩm cao Diếp cá 40 Bảng 3.18 Tro toàn phần cao Diếp cá 40 Bảng 3.19 Tro không tan acid hydrochlorid cao Diếp cá 41 Bảng 3.20 Tro tan nước cao Diếp cá 41 Bảng 3.21 pH cao Diếp cá 41 Bảng 3.22 Giới hạn kim loại nặng cao Diếp cá 41 Bảng 3.23 Kết định tính cao Diếp cá 41 Bảng 3.24 Kết định lượng quercetin cao Diếp cá 42 v Bảng 3.25 Đề xuất tiêu chuẩn và kết kiểm nghiệm cao Diếp cá .43 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Lá và hoa Diếp cá Hình 3.2 Soi bợt Diếp cá .29 Hình 3.3 SKLM dịch chiết quercetin CHCl3 32 Hình 3.3 Sự liên quan nồng đợ và diện tích đỉnh .34 Hình 3.6 Ảnh hưởng đợ cồn và tỷ lệ DL/DM hiệu suất chiết 37 Hình 3.7 Ảnh hưởng độ cồn và số lần chiết hàm lượng quercetin 38 Hình 3.8 SKLM cao Diếp cá .42 Hình 3.9 Sắc ký đồ quercetin chuẩn và thử .43 Hình phụ lục Xu hướng liên quan hiệu suất chiết với độ cồn 53 Hình phụ lục Xu hướng liên quan hàm lượng quercetin với độ cồn và tỷ lệ DL/DM 53 Hình phụ lục Ảnh hưởng độ cồn và tỷ lệ DL/DM hàm lượng quercetin 55 Hình phụ lục Ảnh hưởng tỷ lệ DL/DM và số lần chiết hàm lượng quercetin 55 vii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Sơ đồ điều chế một cao thuốc Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao Diếp cá .20 Sơ đồ 2.2 Quy trình xử lý mẫu để định lượng quercetin/cao Diếp cá .21 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần xu hướng giới dùng thuốc từ dược liệu ngày nhiều Mợt số dạng chế phẩm từ dược liệu có thể kể đến cao thuốc, cồn thuốc, rượu thuốc, thuốc bợt, thuốc cốm, thuốc hồn, thuốc thang…Trong số đó, cao thuốc biết đến một loại chế phẩm sản xuất quy mô công nghiệp phổ biến Cao thuốc có ưu điểm vượt trội dạng chế phẩm từ dược liệu khác như: bao bì nhỏ gọn, thuận tiện việc sử dụng, có thể tiến hành sản xuất mức đợ công nghiệp dễ dàng, hàm lượng hoạt chất cao thuốc đậm đặc nên với liều lượng thấp vẫn có thể đạt hiệu trị liệu Ngoài ra, cao thuốc xem chế phẩm trung gian để điều chế dạng thuốc khác Nước ta nằm vùng khí hậu nhiệt đới, chịu ảnh hưởng gió mùa, nhiệt đợ trung bình năm 250C, đợ ẩm cao tạo điều kiện thuận lợi cho cối phát triển nên nguồn dược liệu phong phú Đó một lợi để ngành công nghiệp dược nước ta phát triển theo hướng đại hóa thuốc y học cổ truyền, thuốc có nguồn gốc dược liệu Trong đó, Diếp cá loại dược liệu thảo mộc phổ biến nhân dân ta sử dụng hàng ngày bữa ăn, ngồi cịn sử dụng làm thuốc với công dụng trị ho, mụn nhọt, đặc biệt chữa bệnh trĩ lợi tiểu hiệu [15] Trên thị trường có nhiều sản phẩm từ Diếp cá như: Helaf ®, Cenditan®… Số lượng chế phẩm từ Diếp cá sử dụng nhiều, đó, cơng nghiệp chiết xuất dược liệu Việt Nam chưa phát triển mạnh, phương pháp chiết xuất dạng thô sơ nấu cao, cô cao trực tiếp Chính vậy, việc điều chế sản xuất cao Diếp cá thực tế khả thi Tuy nhiên, hạn chế lớn việc khai thác sử dụng thuốc nước ta vấn đề tiêu chuẩn chất lượng Yêu cầu cao một dược phẩm sử dụng người tính an tồn hiệu trị liệu Để đánh giá thống chuẩn mực đánh giá cho mợt ngun liệu có thể sử dụng làm thuốc hay mợt thành phẩm có thể đưa thị trường, người ta phải xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn Đặt vấn đề Vì lý trên, đề tài “Nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật sản xuất cao Diếp cá Houttuynia cordata Thunb.” thực nhằm mục đích cụ thể sau: - Kiểm nghiệm dược liệu Diếp cá - Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng quercetin/cao Diếp cá - Tối ưu quy trình chiết xuất cao Diếp cá - Đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Diếp cá Ý nghĩa đề tài: - Tìm quy trình chiết cao Diếp cá tối ưu - Giảm bớt chi phí quy trình chiết xuất áp dụng quy mô công nghiệp - Đề xuất hướng kiểm nghiệm cao Diếp cá - Quy trình chiết xuất cao Diếp cá sở cho nghiên cứu sau quy mô pilot công nghiệp Đặt vấn đề CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ DIẾP CÁ Cây Diếp cá cịn có tên Giấp cá, Lá giấp, Ngư tinh thảo Tên khoa học Houttuynia cordata Thunb Họ Saururaceae.[9,12] 1.1.1 Mô tả thực vật Diếp cá mợt loại thảo, sống lâu năm, có thân rễ mọc ngầm đất Phần thân mặt đất cao 15-50 cm, màu lục tím đỏ Lá mọc so le Cuống dài Phiến hình tim dài 4-6 cm, rợng 3-4 cm, có 5-7 gân gốc [2, 9, 12] Hoa nở vào tháng – Cụm hoa hình bơng dài 2,5 cm bao bắc màu trắng, chứa nhiều hoa nhỏ màu vàng nhạt Trơng tồn bợ bề ngồi cụm hoa bắc giống một hoa đơn độc Quả nang mở đỉnh, hạt hình trái xoan, nhẵn [5,12] Hình 1.1 Lá hoa Diếp cá 1.1.2 Phân bố, sinh thái Phân bố từ Nhật Bản, Trung Quốc tới Nêpan, Ấn Độ, nước Đông Dương Indonesia Ở nước ta, mọc phổ biến Thường gặp mọc hoang nơi ẩm ướt bãi ven suối, bờ sông Cũng thường trồng làm rau ăn làm thuốc Diếp Đặt vấn đề 41 Tro toàn phần (%) 18,38 16,53 18,29 17,73 3.4.6.2 Tro không tan acid hydrochlorid Bảng 3.19 Tro không tan acid hydrochlorid cao Diếp cá Số lần thực TB Tro không tan acid (%) 0,58 0,52 0,55 0,55 3.4.6.3 Tro tan nước Bảng 3.20 Tro tan nước cao Diếp cá Số lần thực Tro không tan acid (%) 5,581 5,719 5,915 TB 5,73 3.4.7 pH Bảng 3.21 pH cao Diếp cá Số lần thực TB pH 4,62 4,57 4,61 4,6 3.4.8 Kim loại nặng (Pb) Bảng 3.22 Giới hạn kim loại nặng cao Diếp cá Số lần thực Giới hạn kim loại nặng (Pb) < 20 ppm < 20 ppm < 20 ppm 3.4.9 Định tính Bằng phản ứng hóa học Bảng 3.23 Kết định tính cao Diếp cá Kết nghiên cứu 42 Thuốc thử Kết NaOH 10% Màu vàng sáng (+) FeCl3 5% Màu xanh dương (+) Mg + HClđđ Màu đỏ (+) Kết luận: cao Diếp cá cho phản ứng dương tính với phản ứng định tính Bằng SKLM Kết quả: C: dung dịch chuẩn T: dung dịch thử Hình chụp phun TT FeCl3 5% Hình chụp UV 254 nm Hình 3.8 SKLM cao Diếp cá Kết luận: sắc ký đồ dung dịch thử cao Rau má có chứa vết có Rf màu sắc tương ứng với vết quercetin chuẩn 3.4.10 Định lượng Tiến hành: cân khoảng 1g cao, chiết lấy cắn chlorohorm theo Sơ đồ 2.2, chuẩn bị dung dịch thử mục 2.2.5.2, ta có kết định lượng Bảng 3.24 Bảng 3.24 Kết định lượng quercetin cao Diếp cá Số lần thực Hàm lượng quercetin (%) 0,31 Kết nghiên cứu 0,293 0,289 TB 0,29 43 Hình 3.9 Sắc ký đồ quercetin chuẩn thử 3.5 ĐỀ XUẤT TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM CAO DIẾP CÁ Dựa kết kiểm nghiệm cao Diếp cá, đề tiêu chuẩn sau : Bảng 3.25 Đề xuất tiêu chuẩn kết kiểm nghiệm cao Diếp cá STT Chỉ tiêu Hình thức cảm quan Yêu cầu chất lượng Bột nửa mịn, màu nâu sẫm, mùi đặc trưng, dễ hút ẩm Kết Đạt Độ tan nước Cao khó tan nước Đạt Đợ tan cồn Cao tan cồn thấp độ (10-60%) Đạt Kết nghiên cứu 44 Cao khó tan cồn cao độ (70-96%) Độ ẩm Độ tro - Tro tồn phần Khơng q 10% Đạt (5,667%) - Không 20% - Đạt (17,73%) - Tro không tan/acid HCl - Không 1% - Đạt (0,55%) - Tro tan nước - Không 10% - Đạt (5,73%) pH 4-6 Kim loại nặng (Pb) Không 20 ppm Định tính - NaOH 10% - Màu vàng sáng (+) - FeCl3 5% - Màu xanh dương(+) - Mg + HClđđ - Màu đỏ (+) - SKLM - Dung dịch thử có vết Rf màu Đạt (4,6) Đạt Đúng sắc tương ứng với vết quercetin chuẩn Định lượng quercetin Kết nghiên cứu Hàm lượng quercetin không 0,15% Đạt (0,29%) CHƯƠNG BÀN LUẬN Quy trình chiết xuất cao Diếp cá xây dựng kiểm soát chặt chẽ chất lượng qua giai đoạn: từ kiểm nghiệm dược liệu, xây dựng quy trình định lượng đến việc xác định mối liên hệ nhân quả, tối ưu hóa, thực nghiệm kiểm chứng đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Giai đoạn kiểm nghiệm dược liệu đề xuất phương pháp kiểm nghiệm cao Diếp cá thực dựa sở kết thực nghiệm tham khảo tiêu chuẩn có cao, dược liệu khác theo Dược điển Việt Nam III tài liệu tham khảo Quy trình định lượng quercetin cao Diếp cá phương pháp HPLC xây dựng thẩm định việc khảo sát tính tương thích hệ thống, tính tuyến tính, độ chính xác, độ Kết cho thấy quy trình định lượng phương pháp HPLC có tính chính xác đợ tin cậy cao Điều thể tính tương thích hệ thống tốt, tính tuyến tính khoảng nồng độ phù hợp có R > 0,99, đợ chính xác cao với RSD = 2,8% dựa theo nồng độ khảo sát độ đạt với tỷ lệ phục hồi trung bình nằm khoảng từ 98 đến 102% Phần mềm thông minh FormRules giúp khảo sát xu hướng, mức độ quy luật liên quan nhân quả, giúp hiểu rõ biến độc lập x (nhân) ảnh hưởng đến biến phụ thuộc y (quả) có ảnh hưởng ảnh hưởng theo quy luật Kết từ phần mềm FormRules cho thấy: - Hiệu suất chiết cao Diếp cá chịu ảnh hưởng yếu tố độ cồn, tỷ lệ dược liệu/dung môi, số lần chiết - Hàm lượng quercetin cao Diếp cá chịu ảnh hưởng chủ yếu độ cồn, tỷ lệ dược liệu/dung môi, số lần chiết Phần mềm INForm giúp tối ưu hóa thơng số quy trình chiết xuất cao Diếp cá Kết tối ưu kiểm chứng lại thực nghiệm cho thấy giá trị Bàn luận Dương Huỳnh Điểm thực nghiệm có tính lặp lại cao phù hợp với giá trị đưa phần mềm INForm Như vậy, quy trình chiết xuất cao Diếp cá với hiệu suất chiết tối đa, hàm lượng hoạt chất cao xây dựng thành công nhờ hỗ trợ phần mềm Design-Expert, FormRules INForm Việc kết hợp phương pháp truyền thống với hỗ trợ phần mềm thông minh giúp giảm chi phí, công sức thời gian giai đoạn nghiên cứu Kiểm nghiệm cao Diếp cá xây dựng đề xuất tiêu chất lượng phù hợp cho một cao chiết từ dược liệu Đặc biệt, đề tài hồn thiện quy trình định lượng hoạt chất chính có dược liệu phương pháp HPLC thẩm định, nâng cao mức chất lượng cho cao Diếp cá Bàn luận Dương Huỳnh Điểm CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHI 5.1 KẾT LUẬN Trong đề tài luận văn này, thực công việc sau: - Kiểm nghiệm dược liệu Diếp cá tiêu sau: cảm quan, soi bột, độ ẩm, độ tro, tạp chất, định tính, định lượng tinh dầu Tất tiêu đạt đúng, trừ phần định lượng hàm lượng tinh dầu Diếp cá chưa đạt (0,05% < 0,08% theo yêu cầu) - Xây dựng phương pháp định lượng quercetin cao Diếp cá phương pháp HPLC Quy trình định lượng thẩm định tính tương thích hệ thống, tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, chứng tỏ quy trình có tính chính xác đợ tin cậy cao - Dùng mơ hình D-Optimal với biến số độc lập: độ cồn, tỷ lệ dược liệu/dung môi, số lần chiết, tiến hành 14 thí nghiệm thay đổi biến số Việc tối ưu chiết xuất cao Diếp cá dựa vào hoạt chất chất đánh dấu tương ứng quercetin Kết xác định thông số tối ưu sau: + Độ cồn: B + Tỷ lệ dược liệu/dung môi: 1/8 + Số lần chiết: lần - Xây dựng hồn chỉnh quy trình chiết xuất cao Diếp cá quy mơ phịng thí nghiệm theo thơng số tối ưu để chiết xuất cao đạt tiêu chuẩn chất lượng tốt - Kiểm nghiệm cao Diếp cá tiêu: cảm quan, độ tan nước, độ tan cồn, độ ẩm, độ tro, pH, giới hạn kim loại nặng, định tính, định lượng Từ xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao Diếp cá Quy trình chiết xuất cao Diếp cá vừa xây dựng dự kiến sở cho nghiên cứu sau quy mô pilot công nghiệp Kết luận đề nghị Dương Huỳnh Điểm 5.2 ĐỀ NGHI Sau tiến hành nghiên cứu thực nghiệm, kết cho thấy vẫn cịn nhiều thiếu sót cần phải khắc phục Tuy nhiên điều kiện thời gian thực đề tài có giới hạn, xin đề nghị sau: - Nâng cấp quy trình chiết xuất cao Diếp cá quy mơ pilot quy mô công nghiệp - Kiểm tra xây dựng tiêu giới hạn nhiễm khuẩn, dư lượng thuốc trừ sâu cho cao Diếp cá - Theo dõi độ ổn định cao Diếp cá - Xây dựng tiêu chuẩn sở cho cao Diếp cá - Xây dựng cơng thức quy trình bào chế cho viên có chứa cao Diếp cá Kết luận đề nghị Dương Huỳnh Điểm Dược liệu TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ môn Dược liệu Đại học Y Dược TPHCM (2008), Giáo trình Phương pháp nghiên cứu dược liệu, tr.105-118, 139-141 Bộ môn Dược liệu Đại học Y Dược TPHCM- Bộ môn Dược liệu Đại học Dược Hà Nội (1998), Bài giảng Dược liệu-tập 1, Bộ Y tế Bộ Giáo dục đào tạo, tr.259-289 Bộ môn Hóa phân tích-Kiểm nghiệm Đại học Y Dược TPHCM (2008-2009), Giáo trình lý thuyết Kiểm nghiệm thuốc, tr.58-60, 87-118 Đặng Văn Giáp Thiết kế & tối ưu hóa cơng thức quy trình Nhà xuất Y học (2002) Bộ môn Thực vật Đại học Y Dược TPHCM (2005), Giáo trình Phân loại thực vật, tr.51 Bợ Y tế (2002), Dược Điển Việt Nam III, Nhà xuất Y Học, tr.350 Bộ Y tế-Vụ Khoa học Đào tạo (2007), Bào chế sinh dược học-tập 1, Nhà xuất Y Học, tr.221-223, 230-232, 247-252 Đại học Y Dược TPHCM (2009), “Xây dựng quy trình định lượng flavonoid toàn phần cao Bạch quả, viên bao phim O.P.Can quercetin huyết tương người phương pháp HPLC”, Y học TPHCM-Chuyên đề Dược, 13 (1), tr.78-83 Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y Học, tr.40-41 10 Hoàng Thanh Hương, Trần Quỳnh Hoa, Hà Việt Bảo, Nguyễn Danh Thục (2002), ‘‘Góp phần nghiên cứu thành phần flavonoid chiết xuất từ Diếp cá Houttuynia cordata Thunb Việt Nam’’, Tạp chí Dược học, Nhà xuất Bộ y tế, Hà Nội, 9, tr.13-15 11 Nguyễn Thị Châu Oanh, (2004), Khảo sát tác dụng sinh học bước đầu tiêu chuẩn hóa tinh dầu Diếp cá, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học, Đại học Y Dược TPHCM 12 Phạm Hồng Hợ (1999), Cây cỏ Việt Nam-quyển 1, Nhà xuất Trẻ, tr.288 13 Phạm Xuân Sinh, Cao Văn Thu, Đinh Thị Thanh Thủy (1997), ‘‘Nghiên cứu thành phần hóa học Diếp cá’’, Tạp chí Dược học, Nhà xuất Bợ y tế, Hà Nội, 7, tr.7-9 14 Trần Việt Hưng (1998), Thuốc nam đất Mỹ-tập 1, Nhà xuất HK publishing Co 15 Võ Văn Chi (2004), Tự điển thực vật thông dụng-tập 2, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 1386-1387 16 Nguyễn Thị Ngọc Phượng, (2009), Tiêu chuẩn hóa bột cao Diếp cá, Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ dược học, Đại học Y Dược TPHCM TIẾNG NƯỚC NGOÀI 17 Chiang L C., Chang J S., Chen C C., Liu L T., Wang K C., Lin C C (2001), “Antileukemic activity of Bidens pilosa L var minor (blume) Sherff and Houttuynia cordata Thunb.”, Am J Chin Med , 29 (2), pp.303-312 18 Chiang Y Y., Chang J S., Chen C C., Ng L T., Lin C C (2003), ‘‘Anti – herpes simplex virus activity of Bidens pilosa and Houttuynia cordata’’, Am J Chin Med., 31 (3), pp.355-362 19 Cho E J., Yokozawa T., Rhyu D Y., Kim H Y , Shibahara N., Park J C (2003), “The inhibitory effects of 12 medicinal plants and their compoment compound on lipid peroxidation”, Am J Chin Med , 31 (6), pp.907-917 20 Cho E J., Yokozawa T., Rhyu D Y., Kim S C., Shibahara N., and Park J C (2003), “Study on the inhibitory effects of korean medicinal plants and their main compounds on the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical”, Phytomedicine, 10 (6-7), pp.544-551 21 Corlett J L., Clegg M S., Keen C L., Grivetti L E (2002), ‘‘Mineral content of culinary and medicinal plants cultivated by Hmong refugees living in Sacramento, California’’, Int J Food Sci Nutr , 53 (2), pp.117-128 22 Cowan M M (1999), ‘‘Plant products as antimicrobial agents’’, Clinical Microbiology Reviews, 12 (4), pp.569 23 Kim I S., Kim J H., Yun C Y., Kim D H., Lee J S (2007), “The inhibitory effect of Houtuynia cordata extract on stem cell factor-induced HMC-1 cell migration”, J Ethnopharmacol, 112 (1), pp.90-95 24 Kim S K., Ryu S Y., No J., Choi S U., Kim Y S (2001), “Cytotoxic alkaloids from Houttuynia cordata”, Arch Pharm Res , 24 (6), pp.518-521 25 Li C., Zhao Y., Liang C., An H (2001), ‘‘Observations of the curative effect with various liquid for post operative irrigation of ESS of treating chronic sinusitis and nasal polyps’’, Lin Chuang Er bi yan Hou Ke Za Zhi, 15 (2), pp.53-54 26 Liang M M., Qi M L., Fu R N (2005), ‘‘Flash evaporation and headspace solid-phase microextraction for the analysis of the essential oils in traditional Chinese medicine, Houttuynia cordata Thunb.’’, Chinese Chemical Letters, 16 (5), pp.659-662 27 Liang M., Qi M., Zhang C., Zhou S., Fu R., Huang J (2005), ‘‘Gas chromatography-mass spectrometry analysis of volatile compounds from Houttuynia cordata Thunb after extraction by solid-phase microextraction, flash evaporation and steam distillation’’, Analytica Chimica Acta, 531, pp.97-104 28 Lu H., Wu X., Liang Y., Zhang J (2006), ‘‘Variation in chemical composition and antibacterial activities of essential oils from two species of Houttuynia Thunb.’’, Chem Pharm Bull , 54 (7), pp.936-940 29 Lu H M., Liang Y Z., Yi L Z., Wu X J (2006), ‘‘Anti-inflammatory effect of Houttuynia cordata injection’’, Journal of Ethnopharmacology, 104, pp.245-249 30 Lu H M., Liang Y Z., Chen S (2006), ‘‘Identification and quality assessment of Houttuynia cordata injection using GC – MS fingerprint : A standardization approach’’, Journal of Ethnopharmacology,105, pp.436-440 PL - PHỤ LỤC Hình phụ lục Xu hướng liên quan hiệu suất chiết với độ cồn Hình phụ lục Xu hướng liên quan hàm lượng quercetin với độ cồn tỷ lệ DL/DM PL - Hình phụ lục Ảnh hưởng độ cồn số lần chiết hiệu suất chiết Hình phụ lục Ảnh hưởng tỷ lệ DL/DM số lần chiết hiệu suất chiết PL - Hình phụ lục Ảnh hưởng đợ cồn tỷ lệ DL/DM hàm lượng quercetin Hình phụ lục Ảnh hưởng tỷ lệ DL/DM số lần chiết hàm lượng quercetin ... 2.2.3 Quy trình chiết xuất cao Diếp cá Diếp cá Đun hồi lưu với cồn Dịch chiết cồn Sấy phun sương Cao Diếp cá Đặt vấn đề 20 Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cao Diếp cá Cân khoảng 150 g dược liệu Diếp. .. phải xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn Đặt vấn đề Vì lý trên, đề tài ? ?Nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật sản xuất cao Diếp cá Houttuynia. .. nghiệm cao Diếp cá - Quy trình chiết xuất cao Diếp cá sở cho nghiên cứu sau quy mô pilot công nghiệp Đặt vấn đề CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ DIẾP CÁ Cây Diếp cá cịn có tên Giấp cá,