LUẬN án TIẾN sỹ (KIỂM NGHIỆM) nghiên cứu xây dựng quy trình phát hiện và xác định hàm lượng một số chất bị cấm sử dụng trong mỹ phẩm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM CHUYÊN NGÀNH: Kiểm nghiệm thuốc - Độc chất Mà SỐ: Người hướng dẫn khoa học: HÀ NỘI LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi hướng dẫn Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình khác LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập tiến hành nội dung luận án hướng dẫn PGS.TS.Thái Nguyễn Hùng Thu TS Đoàn Cao Sơn, Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu, Phó hiệu trưởng trường đại học Dược Hà Nội, trưởng mơn Hóa Phân tích-Độc chất TS Đoàn Cao Sơn, Viện trưởng viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, hai người Thày tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cho tơi kiến thức q báu để tơi hồn thành luận án Ban Giám đốc viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận án thời gian quy định PGS.TS Trần Tử An, nguyên trưởng mơn Hóa Phân tích-Độc chất trường đại học Dược Hà Nội, PGS.TS Trịnh Văn Quỳ, nguyên Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, người Thày đóng góp ý kiến, dẫn động viên tơi thực luận án Các anh chị em khoa Mỹ phẩm – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, động viên, giúp đỡ chia sẻ khó khăn với công việc Các thầy, cô anh chị mơn Hóa Phân tích-Độc chất, phịng Sau đại học, Trường đại học Dược Hà Nội giúp đỡ tơi q trình học tập trường Và cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè quan tâm động viên tơi q trình học tập thực luận án MỤC LỤC Trang DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương I-TỔNG QUAN 1.1 QUẢN LÝ VÀ KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG MỸ PHẨM 1.1.1 Một số nét quản lý kiểm tra chất lượng mỹ phẩm giới 1.1.2 Quá trình hình thành hồn thiện cơng tác quản lý chất lượng mỹ phẩm Việt Nam 1.1.3 Một số nội dung quản lý kiểm tra chất lượng mỹ phẩm theo Thông tư 06/2011/TT-BYT 1.2 MỘT SỐ HỢP CHẤT CẤM SỬ DỤNG VÀ CẦN KIỂM SOÁT HÀM LƯỢNG NGHIÊN CỨU TRONG ĐỀ TÀI 1.2.1 Một số hợp chất màu bị cấm sử dụng mỹ phẩm 1.2.2 Một số hợp chất có tác dụng dược lý mà bị cấm giới hạn hàm lượng sử dụng mỹ phẩm 1.2.3 Các nguyên tố độc 1.3 MỘT SỐ KỸ THUẬT THƯỜNG DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM MỸ PHẨM 1.3.1 Một số kỹ thuật phân tích mỹ phẩm 1.3.2 Một số phương pháp hóa lý ASEAN dùng phân tích mỹ phẩm Chương II- ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu đặc điểm đối tượng nghiên cứu 2.1.2 Mẫu dùng để nghiên cứu xây dựng, thẩm định quy trình 2.2 CHẤT CHUẨN, DUNG MƠI, HĨA CHẤT 2.2.1 Chất chuẩn 2.2.2 Dung mơi, hóa chất 2.3 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.4.1 Phương pháp HPLC 2.4.2 Phương pháp AAS 2.4.3 Thẩm định tính khả thi qui trình ASEAN 2.4.4 Phương pháp xử lý số liệu phân tích Chương III-KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM 3.1.1 Metanil yellow 3.1.2 Rhodamin B 3.1.3 Pigment red 53 3.1.4 Pigment orange 3.1.5 Crystal violet 3.1.6 Các chất Sudan 3.1.7 Định tính, định lượng đồng thời Metanil yellow, Rhodamin B, Pigment red 53, Pigment orange 3.2 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÂN TÍCH MỘT SỐ HỢP CHẤT CÓ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ BỊ CẤM HOẶC CÓ GIỚI HẠN SỬ DỤNG TRONG 3 10 10 17 19 26 26 26 41 41 41 41 43 43 43 44 45 45 50 53 53 55 55 55 60 65 69 75 80 88 97 MỸ PHẨM 3.2.1 Hydroquinon 3.2.2 Tretinoin 3.2.3 Các steroid 3.3 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUI TRÌNH PHÂN TÍCH CÁC KIM LOẠI NẶNG 3.3.1 Thủy ngân 3.3.2 Chì (Pb) 3.3.3 Arsen (As) 3.4 KẾT QUẢ KIỂM TRA MỘT SỐ HỢP CHẤT BỊ CẤM VÀ CÓ GIỚI HẠN SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM LƯU HÀNH TRÊN THỊ TRƯỜNG 3.4.1 Metanil yellow 3.4.2 Rhodamin B 3.4.3 Pigment red 53 3.4.4 Pigment orange 3.4.5 Crystal violet (Tím tinh thể) 3.4.6 Sudan 3.4.7 Kiểm tra đồng thời Metanil yellow, Rhodamin B, Pigment red 53, Pigment orange 3.4.8 Hydroquinon 3.4.9 Tretinoin 3.4.10 Các glucocorticoid 3.4.11 Thủy ngân 3.4.12 Chì Chương IV-BÀN LUẬN 4.1 VỀ VIỆC TRIỂN KHAI CÁC PHƯƠNG PHÁP CỦA ASEAN 4.2 VỀ CÁC QUI TRÌNH PHÂN TÍCH MỚI THIẾT LẬP 4.2.1 Về qui trình phát chất màu cấm 4.2.2 Về qui trình định tính, định lượng Hydroquinon 4.2.3 Về qui trình định tính 12 chất steroid kem bơi da 4.2.4 Về qui trình phân tích thủy ngân mỹ phẩm dạng kem phấn bơi da 4.3 TĨM TẮT NHỮNG ĐỔI MỚI TRONG TỪNG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 4.3.1 Quy trình phân tích đồng thời chất màu cấm son môi 4.3.2 Quy trình phát hiện, định lượng đồng thời chất Sudan 4.3.3 Quy trình phát đồng thời 12 chất steroid kem bơi da 4.3.4 Quy trình phân tích thủy ngân mỹ phẩm dạng kem phấn bôi da 4.3.5 Về qui trình định tính, định lượng Hydroquinon 4.3.6 Về quy trình phân tích chất màu riêng biệt lại 4.4 VỀ KHẢ NĂNG ÁP DỤNG CỦA CÁC QUI TRÌNH 4.5 VỀ TÌNH HÌNH NHIỄM CÁC CHẤT CẤM TRONG MỸ PHẨM 4.6 VỀ NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI 4.5.1 Về xây dựng thẩm định qui trình phân tích 4.5.2 Về đào tạo chun mơn kỹ thuật 4.5.3 Về đánh giá thực trạng tình hình chất lượng mỹ phẩm Chương V- KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 97 102 105 109 109 118 122 125 125 126 127 128 129 130 130 131 131 131 132 132 133 133 135 135 139 139 140 141 141 142 143 143 144 144 145 146 147 147 147 148 149 149 150 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt AAS ACC ACD ACSB ACTLC AOAC ASEAN CFS CGMP CIR COLIPA DMPM DMF DSC EEC EDL Tiếng Anh tên khoa học Tiếng việt Atomic Absorption Spectrophotometry Asean Cosmetic Committee Asean Cosmetic Directive Asean Cosmetic Science Body Asean Cosmetic Testing Laboratory Council Association of Official Analytical Chemists Association of Southeast Asian Nations Certificate of Free Sale Cosmetic Good Manufacturing Practices US Cosmetic Ingredient Review Board Quang phổ hấp thụ nguyên tử Ủy ban Mỹ phẩm Asean Định hướng mỹ phẩm Asean Hội đồng khoa học mỹ phẩm Asean Ủy ban kiểm nghiệm mỹ phẩm Asean Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức Hiệp hội quốc gia Đông Nam Á European Cosmetic, Toiletry and Perfumery Association N,N dimethylformamid Differential Scanning calorimetry European Economic Community Electrodeless Discharge Lamp ETA-AAS Electro-Thermal Atomization Atomic Absorption Spectrophotometry EU European Union EUCD European Union Cosmetic Directive F-AAS FDA GLP HPLC IARC Flame Atomic Absorption Spectrophotometry Food and Drug Administration Good Laboratory Practices High Performance Liquid Chromatography International Agency for Research on Giấy chứng nhận lưu hành tự Thực hành tốt sản xuất mỹ phẩm Ủy ban xem xét thành phần mỹ phẩm Mỹ Hiệp hội mỹ phẩm, vật dụng vệ sinh nước hoa châu Âu Dung môi pha mẫu Quét nhiệt vi sai Khối thị trường chung châu Âu Đèn phóng điện khơng điện cực Kỹ thuật ngun tử hóa khơng lửa Cộng đồng châu Âu Định hướng mỹ phẩm cộng đồng nước châu Âu Kỹ thuật nguyên tử hóa lửa Cục Quản lý Thực Phẩm Dược phẩm Hoa kỳ Thực hành tốt phịng thí nghiệm Sắc ký lỏng hiệu cao Cơ quan nghiên cứu ung thư quốc tế Từ viết tắt ICH ICP-AES IFRA ISO Tiếng Anh tên khoa học Cancer International Conference on Harmonisation Inductively Coupled Plasma - Atomic Emission Spectroscopy International Fragrance Association International Organization for Standardization KH & CN Ministry of Health Mutual Recognition Agreement MY PAL PIF PO PR ppb ppm RB SCCP Metanil yellow Pharmaceutical Affairs Law Product Information File Pigment orange Pigment red 53 parts per billion parts per million Rhodamin B EU Scientific Committee on Consumer Products the State Food and Drug Administration SKĐ SPF TBA TGA THF TLC US Hội nghị hòa hợp quốc tế Quang phổ phát xạ nguyên tử Plasma Hiệp hội hương liệu quốc tế Tổ chức tiêu chuẩn quốc tế Khoa học công nghệ MoH MRA SFDA Tiếng việt Sun protect factor Tetrabutylamonium hydroxyd Thermogravimetric analysis Tetrahydrofuran Thin layer chromatography Unites States Bộ Y tế Hiệp định thừa nhận lẫn Luật công tác Dược Hồ sơ thông tin sản phẩm Phần tỷ Phần triệu Hội đồng khoa học sản phẩm tiêu dùng châu Âu Cục quản lý Dược thực phẩm Sắc ký đồ Hệ số chống nắng Phân tích nhiệt trọng lực Sắc ký lớp mỏng Hợp chủng quốc Hoa kỳ DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số quy định EU, Mỹ Nhật Bản nội dung cần quản lý mỹ phẩm Bảng 1.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng chất Glucocorticoid Bảng 1.3 Điều kiện vơ hóa mẫu lị vi sóng Bảng 1.4 Chế độ đo lị graphit Bảng 1.5 Các điều kiện phân tích arsen thủy ngân kỹ thuật hydrid Bảng 1.6 Giới hạn phát giới hạn định lượng nguyên tố Bảng 1.7 Giới hạn kim loại nặng (ACM THA 05 Testing Method) Bảng 2.1 Giới hạn chấp nhận độ phương pháp theo AOAC Bảng 2.2 Giới hạn chấp nhận độ xác phương pháp theo AOAC Bảng 3.1 Khảo sát tính thích hợp hệ thống sắc ký với Metanil yellow Bảng 3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Metanil yellow Bảng 3.3 Độ lặp lại ngày khác ngày Metanil yellow mẫu tự tạo có son mơi (MY01) Bảng 3.4 Độ lặp lại ngày khác ngày MY mẫu tự tạo có mẫu sơn móng tay (MY02) Bảng 3.5 Độ Metanil yellow mẫu: son mơi sơn móng Bảng 3.6 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính RB Bảng 3.7 Độ lặp lại ngày khác ngày RB mẫu RB14 (phát có Rhodamin B) Bảng 3.8 Độ lặp lại ngày khác ngày RB mẫu N1 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ lặp lại độ mẫu có thêm chất chuẩn mẫu có chứa RB Bảng 3.10 Kết khảo sát độ tuyến tính Pigment red 53 Bảng 3.11 Khảo sát độ đúng, độ lặp lại mẫu son nước (PR07)có thêm chuẩn Bảng 3.12 Khảo sát độ đúng, độ lặp lại mẫu son rắn (PR10) có thêm chuẩn Bảng 3.13 Khảo sát độ - độ lặp lại với PR mẫu tự tạo Bảng 3.14 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính Pigment orange Bảng 3.15 Khảo sát độ lặp lại phương pháp Bảng 3.16 Kết khảo sát độ phương pháp mẫu PO02 Bảng 3.17 Kết khả tìm lại Pigment orange mẫu PO01 Bảng 3.18 Kết khả tìm lại Pigment orange mẫu PO03 Bảng 3.19 Kết khảo sát độ lặp lại -và độ mẫu N1 (CV13) Bảng 3.20 Kết khảo sát độ đúng-độ lặp lại mẫu tự tạo N2 (CV15) Bảng 3.21 Kết khảo sát độ đúng-độ lặp lại mẫu tự tạo N3 (CV11) Bảng 3.22 Kết khảo sát độ đúng-độ lặp lại mẫu tự tạo (CV03) Bảng 3.23 Độ thích hợp hệ thống sắc ký phân tích Sudan Bảng 3.24 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính Sudan Bảng 3.25 Độ lặp lại phương pháp mẫu tự tạo Bảng 3.26 Độ phương pháp phân tích đồng thời Sudan mẫu SD03 Bảng 3.27 Độ phương pháp phân tích đồng thời Sudan mẫu Trang 31 38 39 39 39 40 48 49 56 58 58 59 60 63 64 64 65 68 68 69 69 71 72 73 73 74 78 78 79 79 81 83 84 85 86 SD05 Bảng 3.28 Tính thích hợp hệ thống sắc ký với phát đồng thời chất mầu Bảng 3.29 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính hỗn hợp chất màu cấm Bảng 3.30 Kết khảo sát độ xác phương pháp với chất màu Bảng 3.31 Kết khảo sát độ với MY RB Bảng 3.32 Kết khảo sát độ với PR PO Bảng 3.33 Giới hạn phát MY, RB, PR PO Bảng 3.34 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính Hydroquinon Bảng 3.35 Khảo sát độ lặp lại Hydroquinon số mẫu Bảng 3.36 Khả tìm lại Hydroquinon số mẫu Bảng 3.37 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính Tretinoin Bảng 3.38 Khảo sát độ lặp lại Tretinoin Bảng 3.39 Khảo sát khả tìm lại Tretinoin Bảng 3.40 Tính thích hợp hệ thống sắc ký Bảng 3.41 Kết xác định khoảng nồng độ tuyến tính corticoid Bảng 3.42 Kết khảo sát độ xác corticoid Bảng 3.43 Kết khảo sát độ corticoid Bảng 3.44 LOD LOQ corticoid Bảng 3.45 - Chương trình nhiệt độ cho thiết bị vơ hóa mẫu vi sóng Bảng 3.46 Các hỗn hợp thử nghiệm vô hóa mẫu kem bơi da Bảng 3.47 Các hỗn hợp thử nghiệm vơ hóa mẫu phấn bơi da Bảng 3.48 Kết khảo sát tính đặc hiệu Bảng 3.49 Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính thủy ngân Bảng 3.50 Kết đánh giá độ lặp lại mẫu mỹ phẩm dạng kem bôi da Bảng 3.51 Kết đánh giá độ lặp lại mẫu mỹ phẩm dạng phấn bôi da Bảng 3.52 Kết đánh giá độ mẫu mỹ phẩm dạng kem bôi da Bảng 3.53 Kết đánh giá độ mẫu mỹ phẩm dạng phấn bôi da Bảng 3.54 Chương trình vơ hóa mẫu lị vi sóng Bảng 3.55 Chương trình nhiệt độ tối ưu để phân tích chì Bảng 3.56 Khoảng tuyến tính phương pháp Bảng 3.57 Kết đánh giá độ lặp lại, độ phương pháp mẫu không chứa chì Bảng 3.58 Kết độ lặp lại độ phương pháp mẫu có chứa chì Bảng 3.59 Chương trình vơ hóa mẫu lị vi sóng Bảng 3.60 Khoảng tuyến tính phương pháp định lượng arsen Bảng 3.61 Kết đánh giá độ lặp lại, độ phương pháp mẫu Bảng 3.62 Danh sách mẫu mỹ phẩm kiểm tra Metanil yellow Bảng 3.63 Danh sách mẫu mỹ phẩm kiểm tra Rhodamin B Bảng 3.64 Kết kiểm tra mẫu mỹ phẩm để phát Pigment red 53 Bảng 3.65 Kết định lượng mẫu phát có Pigment Red 53 Bảng 3.66 Danh sách mẫu mỹ phẩm kiểm tra Crystal violet Bảng 3.67 Kết phân tích Sudan số mẫu son Bảng 3.68 Kết phân tích đồng thời chất màu cấm MY, PR53, PO5, RB Bảng 3.69 Kết phân tích đồng thời glucocorticoid Bảng 3.70 Kết xác định hàm lượng thủy ngân số mẫu mỹ phẩm 90 93 94 95 96 96 100 100 101 104 104 104 106 107 108 109 109 110 111 111 115 115 116 116 117 117 118 119 120 121 121 122 124 125 126 127 128 128 129 130 131 132 132 BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 11/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA a) b) c) Hình Chồng phổ UV píc từ mẫu thử tự tạo mẫu chuẩn bước sóng 435 nm của: MY:a), PR53:b) PO5: c) a) b) BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 12/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA c) d) Hình Sắc ký đồ mẫu trắng (a), mẫu chuẩn hỗn hợp (b), mẫu tự tạo (c) chồng phổ UV pic RB mẫu tự tạo mẫu chuẩn (d) 535 nm Rhodamin B 6.3.3 Khoảng tuyến tính: Pha dãy dung dịch chuẩn dung dịch pha mẫu có nồng độ MY từ: 0,8 – 10,4 µg/ml, RB từ: 0,8 – 9,8 µg/ml, PR từ: 2,3 – 28,1 µg/ml, PO% từ: 2,0 – 24,5 µg/ml tiến hành sắc ký theo điều kiện Kết thể Bảng Bảng Kết khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính hỗn hợp chất màu cấm Metanil yellow STT Rhodamin B Pigment red 53 Pigment orange Nồng độ S pic Nồng độ S pic Nồng độ S pic Nồng độ S pic (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) 0,86 30748 0,82 75536 2,34 34985 2,04 52854 1,73 62407 1,63 152158 4,68 71328 4,08 111263 4,32 158323 4,08 386129 11,70 181858 10,20 300977 6,91 254161 6,53 619756 18,72 293610 16,32 482294 8,64 254161 8,16 773960 23,40 367429 20,40 608220 10,37 382929 9,79 930822 28,08 442756 24,48 739349 Phương trình hồi y = 37029x - 1528 y = 95291x - 2737 y = 15839x - 2733 y = 30511x - 11710 1,0000 1,0000 1,0000 0,9999 0,97 0,71 1,50 3,89 qui Hệ số tương quan r y-intercept (%) BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 13/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA Như có tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ MY, RB, PR53, PO5 khoảng nồng độ khảo sát với hệ số tương quan 1,0000; 1,0000; 0,9999; 1,0000 với giá trị y-intercept < 5% 3.4 Độ xác  Độ xác phương pháp: Bảng Kết khảo sát độ xác phương pháp với chất màu Lượng cân (g) Với MY Ngày 1, KNV1 Diện tích Lượng tìm pic(mAU.s) thấy (µg) Lượng cân (g) Ngày 2, KNV2 Diện tích Lượng tìm pic (mAU.s) thấy (µg) 0,5002 159422 87,0 0,5172 158756 86,6 0,5102 159485 87,0 0,5176 157986 86,2 0,5089 159900 87,3 0,5208 159122 86,8 0,5016 159836 87,2 0,5062 158997 86,8 0,5108 159775 87,2 0,5177 158789 86,7 0,5128 159227 86,9 0,5116 159022 86,8 Trung bình (n = 6) 87,1 86,6 RSD (%) (n = 6) 0,17 0,26 Hàm lượng MY tìm thấy trung bình (n = 12): 86,90 µg ; RSD (%) (n = 12): 0,35 Với RB 0,5002 452687 95,7 0,5128 451128 95,3 0,5102 454964 96,1 0,5169 452298 95,6 0,5089 454730 96,1 0,5172 454312 96,0 0,5016 454349 96,0 0,5211 452063 95,5 0,5108 454388 96,0 0,5153 453112 95,8 0,5128 454450 96,0 0,5119 454012 95,9 Trung bình 96,0 95,7 RSD (%) 0,15 0,27 Hàm lượng RB tìm thấy trung bình (n = 12): 95,83 µg ; RSD (%) (n = 12): 0,27 Với PR 0,5002 180921 232,8 0,5109 180221 231,9 0,5102 180581 232,4 0,5216 179856 231,4 0,5089 182059 234,3 0,5143 178632 229,8 0,5016 181181 233,1 0,5197 180244 231,9 0,5108 181015 232,9 0,5226 180369 232,1 0,5128 180950 232,8 0,5074 178698 229,9 Trung bình 233,0 231,2 RSD (%) 0,28 0,45 BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 14/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA Hàm lượng PR tìm thấy trung bình (n = 12): 232,11 µg ; RSD (%) (n = 12): 0,55 Với PO 0,5002 249249 168,9 0,5202 255632 173,3 0,5102 252074 170,9 0,5146 253654 171,9 0,5089 256365 173,8 0,5134 250122 169,5 0,5016 253461 171,8 0,5121 252008 170,8 0,5108 254832 172,7 0,5067 254122 172,2 0,5128 253078 171,5 0,5212 248079 168,1 Trung bình (n = 6) 171,6 171,0 RSD (%) (n = 6) 0,97 1,10 Hàm lượng tìm thấy trung bình (n = 12): 171,28 µg ; RSD (%) (n = 12): 1,02 Độ xác phương pháp đánh giá bao gồm độ lặp lại độ xác trung gian Kết thể bảng Độ lặp lại phương pháp đánh giá dựa độ lệch chuẩn tương đối kết mẫu thử phân tích riêng biệt theo qui trình phân tích Độ xác trung gian đánh giá dựa độ lệch chuẩn tương đối kết 12 mẫu thử phân tích riêng biệt ngày khác hai kiểm nghiệm viên (KNV) khác Kết cho thấy phương pháp có độ xác cao, độ lặp lại ngày có giá trị độ lệch chuẩn tương MY, RB, PR, PO 0,18% 0,26%; 0,15% 0,27%; 0,28% 0,45%; 0,97% 1,10%; (với n = 6) khác ngày 0,35%; 0,55%; 1,00%; 0,27% (với n=12) Hàm lượng chất trung bình xác định mẫu tự tạo (n = 12) với MY 86,90 µg (RSD = 0,35%); với RB 95,83 µg (RSD = 0,27%); với PR 232,11 µg (RSD = 0,55%) với PO 171,28 µg (RSD = 1,02) 3.5.Độ Thêm xác lượng chất chuẩn MY, PR53, PO5, RB vào mẫu son không chứa MY, PR53, PO5, RB, cho sau xử lý theo qui trình phân tích nồng độ dung dịch cuối MY, PR53, PO5, RB đem tiêm sắc ký phải nằm khoảng 50 - 120% so với nồng độ định lượng Tiến hành mức nồng độ khác nhau, nồng độ thực lần Dựa vào đường chuẩn tuyến tính để tính lượng chất chuẩn tìm thấy Kết thể Bảng 3, Bảng BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 15/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA Bảng 3.31 Kết khảo sát độ với MY RB STT Lượng mẫu nền(g) Diện tích pic (mAu.s) MY Lượng Lượng tìm thấy thêm (µg) vào (µg) Tỷ lệ thu hồi (%) Diện tích pic (mAu.s) RB Lượng Lượng tìm thấy thêm (µg) vào (µg) Tỷ lệ thu hồi (%) 0,5122 79670 43,86 43,2 101,52 225800 47,97 48,8 98,29 0,5026 79430 43,73 43,2 101,22 226531 48,12 48,8 98,61 0,5039 79413 43,72 43,2 101,20 226211 48,05 48,8 98,47 0,5268 158750 86,57 86,4 100,20 451316 95,30 97,6 97,64 0,5344 158975 86,69 86,4 100,34 452377 95,52 97,6 97,87 0,5219 159211 86,82 86,4 100,48 452067 95,46 97,6 97,80 0,5279 190840 103,90 103,68 100,21 544060 114,76 117,12 97,99 0,5173 191586 104,30 103,68 100,60 544940 114,95 117,12 98,15 0,5211 191404 104,21 103,68 100,51 543837 114,72 117,12 97,95 Trung bình RSD (%) 100,70 0,48 Trung bình 98,09 RSD (%) 0,33 Bảng 3.32 Kết khảo sát độ với PR PO STT Khối lượng mẫu thử (g) Diện tích pic (mA.s) 0,5122 0,5026 0,5039 0,5268 0,5344 0,5219 0,5279 0,5173 0,5211 90244 90164 90180 179194 179833 179913 217027 216906 217252 PR Lượng Lượng tìm thấy thêm (µg) vào (µg) Tỷ lệ thu hồi (%) Diện tích pic (mAu.s) 117,40 118,8 117,30 118,8 117,32 118,8 229,72 237,6 230,53 237,6 230,63 237,6 277,49 285,12 277,34 285,12 277,78 285,12 Trung bình RSD (%) 98,82 98,74 98,75 96,68 97,02 97,07 97,32 97,27 97,43 97,68 0,87 122719 119930 120806 252048 249332 254218 305214 304449 307581 PO Lượng Lượng tìm thấy thêm (µg) vào (µg) Tỷ lệ thu hồi (%) 88,12 91 86,29 91 86,86 91 172,89 182 171,11 182 174,32 182 207,74 218,4 207,24 218,4 209,30 218,4 Trung bình RSD (%) 96,83 94,82 95,46 94,99 94,02 95,78 95,12 94,72 95,66 95,27 0,83 BỘ Y TẾ VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW THƯỜNG QUY KỸ THUẬT Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 16/ 16 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: VIỆN KIỂM NGHIỆM THUỐC TW XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI CHẤT MÀU BỊ CẤM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 VÀ PIGMENT ORANGE TRONG SON MÔI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI DETECTOR PDA Kết cho thấy phương pháp có độ tương đối tốt đới với mẫu mỹ phẩm phức tạp giới hạn chất cấm nhỏ 3.6 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng Tiêm dung dịch mẫu vào hệ thống sắc ký, tiến hành lần, tính độ lệch chuẩn tín hiệu lớn thu quanh thời điểm thời gian lưu pic tương ứng LOD= 3SD/a Stt TB SD a LOD LOQ Metanil yellow 125 644 556 623 207 144 383.2 249,1 37029 0,022 0,073 Pigment red 1102 218 225 271 115 122 342.2 377,3 15839 0,079 0,259 Pigment orange 227 242 131 115 165 113 165.5 56,8 30511 0,0061 0,0202 Rodamin B 111 149 61 58 99 96 95.7 33,8 95291 0,0012 0,0040 Kết luận Phương pháp xác định đồng thời MY, PR53, PO5 PO5 thẩm định chặt chẽ tính đặc hiệu, độ xác độ đúng, LOD, LOQ Phương pháp thẩm định hoàn toàn phù hợp để định tính, định lượng chất cấm son môi lưu hành thị trường TÀI LIỆU VIỆN DẪN -Sổ tay chất lượng: +Chương 04: Kiểm soát tài liệu VKN/STCL/04 +Chương 19: Phương pháp thử nghiệm, hiệu chuẩn phê duyệt phương pháp VKN/STCL/19 -Thủ tục “Kiểm soát tài liệu”: VKN/TT/04.02 -Thủ tục “Nhận biết truy tìm”: VKN/TT/03.01 -Thủ tục “Quản lý thiết bị thử nghiệm”: VKN/TT/20.19 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW th-êng quy kü thuËt Ký hiÖu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 1/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hµnh: ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA MỤC ĐÍCH Mơ tả q trình bước tiến hành để định tính đồng thời 12 chất steroid kem bơi da mỹ phẩm ph¹m vi áp dụng Đ-ợc áp dụng Viện Kiểm nghiệm c ỏp dng xỏc nh 12 cht cán đà đ-ợc đào tạo phù steroid kem bụi da m phm hợp Tài liệu tham khảo: Bài giảng hoá d-ợc tập II, tr-ờng Đại học d-ợc Hà nội 2.Vin Kim nghim Thuc T, Đảm bảo chất l-ợng thuốc số ph-ơng pháp kiểm nghiệm thuốc Hiệp định hệ thống hoà hợp ASEAN quản lý mü phÈm USP 34 5.ASEAN, Identification of hydrocortisone acetate, dexamethsone, betamethasone, triamcinolone acetonide and betamethasone valerate in cosmetics by TLC and HPLC Người biên soạn Tr-ëng khoa Ngµy: ThS Lê thị h-ờng hoa Ký tên: Ng-ời thẩm xét Phã ViƯn tr-ëng : TS TRẦN VIỆT HÙNG Ngµy: Ký tªn: Ng-êi phª dut ViƯn tr-ëng : TS Đoàn cao sơn Ngày: Ký tên đóng dấu: Số bản: số: Ng-ời giữ: Ngµy nhËn: Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thuèc TW th-êng quy kü thuËt Ký hiÖu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 2/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA néi dung 1.Nguyªn lý ph-ơng pháp Cỏc steroid c chit nn mẫu mỹ phẩm hỗn hợp dung môi dicloromethan – methanol (9 : 1), bốc cách thủy tới khơ Hịa cắn thu hỗn hợp dung mơi Acetonitril – methanol – nước (20:30:30) Sau đó, steroid phân tích thiết bị HPLC trang bị detector PDA dặt bước sóng 240 nm Sự có mặt steroid khẳng định cách so sánh thời gian lưu phổ UV-VIS pic nghi ngờ săc ký đồ mẫu thử với pic steroid tương ứng sắc ký đồ mẫu chuẩn 2.ThiÕt bị, thuốc thử chất chuẩn 2.1 Cht chun, hoá chÊt thuèc thö: - Các chất chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (10 chất chuẩn quốc gia chuẩn phịng thí nghiệm (PTN)) Prednison, SKS: WS.0107235; HL:98,6%; ẩm: 0,15% Dexamethason, SKS: 0197025, HL: 99,61%; ẩm: 0,13% Triamcinolon acetonid, Số lô: M 191077a; HL: 99,11%; ẩm: 1,84% Flucinolon acetonid, SKS:0199049; HL: 97,2%; ẩm: 0,6% Prednison acetate, SKS: 0102149; HL: 99,64%; ẩm: 0,06% Hydrocortison acetat, SKS:0198038; HL: 99,5%; ẩm: 0,1% Cortison acetat, SKS: 0103092; HL: 100,01%; ẩm:0,05% Dexamethason acetat, SKS:0200014; HL:99,6% Betamethason dipropionat, chuẩn phịng thí nghiệm, HL: 101,2% 10 Betamethason valerat, SKS: 0103125; HL: 100,43%; ẩm: 0,14% 11 Clobetasol propionat, SKS:0103170; HL: 99,4%, ẩm: 0,12% 12 Mometasone furoat: chuẩn phịng thí nghiệm, HL: 100,0% - Acetonitril HPLC (Merck) - Dicloromethan t tinh khiết phân tích (Merck) - Methanol tinh khiết phân tích (Merck) - Methanol HPLC (Merck) 2.2 ThiÕt bị dung cụ:(đà đ-ợc hiệu chuẩn theo chuẩn mực ISO/IEC 17025) - Máy sắc ký lỏng Shimadzu với module: + Bơm: Model LC- 10Atvp + Detector mảng diod: Mode SPD-M10Avp + Module điều khiển: Model SCL-10Avp + Degasser: loại DGU- 14A + Bộ trộn dung môi: loại FCV- 10Alvp - Cân phân tích xác tới 0,1 mg - Máy lắc siêu âm - Dụng cụ thủy tinh: Bình định mức, cốc thủy tinh, đũa thủy tinh - Mẫu mỹ phẩm nghiên cứu để xây dựng, thẩm định phương pháp: Kem dưỡng trắng da Impress IC Kanebo, Nhật - Các mẫu để kiểm tra: Cream nám one today 43L381 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW th-êng quy kü thuËt Ký hiÖu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 3/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA Cream nám shui Jing bai 43L382 Kem dưỡng trắng da làm mờ vết thâm Hazelin 43L 383 Kem nám Cô Tiên (Day whitening & spot removing set)43L384 Cream ngừa mụn tác dụng One Today 43L390 Cream dưỡng trắng da mặt One Today 43L391 Kem mắt Whoo 43L398 Nước hoa hồng In Yang Balancer 43L397 Tinh chất dưỡng da Qi & Jin Essence 43L396 Sữa dưỡng da In Yang Lotion 43L395 Kem dưỡng da đêm Whoo 43L399 3.Quy trình thử 3.1 Chuẩn bị mẫu thử: Cân khoảng 0,2 g chế phẩm, thêm 50ml hỗn hợp dicloromethan-methanol (9 :1), khuấy kỹ đặt cách thủy ấm 5-10 phút, lấy ra, để nguội nước đá 1giờ, sau lọc qua giấy lọc thấm ướt hỗn hợp dung môi dicloromethan-methanol (9 :1), bốc dịch lọc cách thủy tới khơ Hịa lại cắn 25ml Acetonitril methanol - nước (20:30:30) Lọc qua màng lc 0,45àm 3.2 Chuẩn bị mẫu chuẩn : Cõn chớnh xác khoảng 25mg chất chuẩn pha vào 25ml methanol, pha loãng tiếp pha động để dung dịch chuẩn gốc có nồng độ khoảng 12µg/ml Các dung dịch sử dụng để pha dãy chuẩn pha dung dịch hỗn hợp chuẩn 3.3 Quy trình phân tích : - Ct Phenomenex Luna C18, (250 x 4,6 mm), µm lơ 5550654 - Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng - Pha động: Acetonitril - nước (48:52) - Tốc độ dòng: 1,0 ml/ phút - Bước sóng phát hiện: 240 nm - Thể tích tiêm: àl 3.4 Cách tiến hành: Tiêm riêng biệt dung dịch thử, dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký lỏng sử dụng điều kiện Tiến hành sắc ký khoảng 30-35 phút Ghi lại sắc ký đồ 3.5 Cách đánh giá kết - Dựa vào thời gian l-u: so sánh thời gian l-u pic thu đ-ợc từ dung dịch thử pic thu đ-ợc từ dung dÞch chn - So sánh phổ UV-VIS píc thu từ dung dịch thử có thời gian lưu tương ứng với píc thu từ dung dịch chuẩn tính hệ số chồng phổ pic Yêu cầu kỹ đào tạo cần thiết ¸p dơng Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW th-êng quy kü thuËt Ký hiÖu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 4/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA Kiểm nghiệm viên phải đ-ợc đào tạo ph-ơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng thành thạo máy sắc ký lỏng hiệu cao, bit c v phõn tớch ph 5.Đánh giá quy trình Do c thự ca mu m phm có chứa chất cấm thường hàm lượng nhỏ nên chọn vùng giới hạn định lượng để đánh giá phương pháp bao gồm nội dung: độ thích hợp hệ thống sắc ký, tính đặc hiệu , khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ 5.1 Lùa chän dung m«i Sau khảo sát số hệ dung mơi hồ tan mẫu, hệ dung mơi dicloromethan methanol (9:1) nhận thấy hệ mà nhóm chất steroid tan tốt, dung dịch mẫu thử khơng bị lẫn nhiều tạp chất Sau đó, loại bỏ dung mơi hịa cắn hỗn hợp Acetonitril - methanol - nước (20:30:30) Hỗn hợp dung mơi có thành phần gần với pha động, cho pic cân đối hịa tan cắn methanol, chọn làm dung mơi hịa tan cắn để tạo dung dch tiờm sc ký 5.2 Thẩm định ph-ơng pháp 5.2.1.Đánh giá độ thích hợp hệ thống: Tiêm lần dung dịch đối chiếu hỗn hợp có nồng độ corticoid khoảng 10 µg/ml vào hệ thống sắc ký, ghi lại sắc ký đồ, kết thể bảng sau: Bảng Độ thích hợp hệ thống sắc ký phân tích 12 chất steroid S T T 10 11 Tên pic Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Thời gian lưu (phút) Trung RSD bình (%) 4,19 0,15 5,38 0,17 6,33 0,19 6,87 0,23 7,82 0,23 8,28 0,26 8,83 0,27 11,04 0,32 17,41 0,26 22,63 0,35 24,97 0,39 Diện tích pic Số đĩa (mAU.s) lý Trung RSD thuyết bình (%) 32205 0,36 8041 34776 0,51 9997 38421 0,37 11295 42488 0,45 12016 43317 0,36 12957 48867 0,84 13463 35218 0,75 13971 54520 0,37 14215 80684 0,11 30962 97432 0,24 23493 140097 0,51 20409 Hệ số bất đối T 1,42 1,23 1,26 1,23 1,23 1,20 1,20 1,04 1,17 1,11 1,10 Độ phân giải Rs 5,96 4,20 2,20 3,64 1,64 1,89 6,63 16,74 10,64 3,66 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW th-êng quy kü tht Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 5/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiÖm thuèc TW PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CĨ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BƠI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA 12 Betamethason propionat 26,47 0,41 164637 1,43 15161 1,12 1,93 Kết cho thấy hệ thống sắc ký có: Độ lặp lại tốt với RSD thời gian lưu 0,4% diện tích pic 1,4 %; số đĩa lý thuyết 8000; hệ số bất đối 1,4 độ phân giải 1,6 Do đáp ứng yêu cầu phân tích cho 12 hợp chất 5.2.1 §é ®Ỉc hiƯu: Tiến hành sắc ký theo điều kiện chọn mẫu sau: - Dung dịch mẫu placebo: Cân xác khoảng 0,2 g mẫu kem dưỡng trắng da Impress IC white emulsion II (Kanebo, Nhật Bản) xử lý chuẩn bị mẫu thử - Dung dịch mẫu tự tạo mẫu thử, dung dịch chuẩn xử lý theo mục 3.1 3.2 a) b) Hình 3.19 Sắc ký đồ đánh giá độ đặc hiệu với 12 corticoid a) mẫu placebo b) mẫu hỗn hợp chuẩn c) mẫu tự tạo c) Kết thu hình 3.19, cho thấy: Trên sắc ký đồ mẫu placebo không xuất pic thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu chất số 12 corticoid nghiên cứu Trên sắc ký đồ dung dịch mẫu tự tạo cho 12 pic có thời gian Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 6/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiÖm thuèc TW th-êng quy kü thuËt PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA lưu tương ứng với thời gian lưu 12 pic thu từ sắc ký đồ dung dịch hỗn hợp chuẩn Thứ tự rửa giải: Prednison : 4,14 ph Dexamethason : 5,32 Triamcinolon acetonid: 6,25 Fluocinolon acetonid: 6,78 Hydrocortison acetat: 7,72 Prednison acetat:7,84 Cortison acetat: 8,71 Dexamethason acetat: 10,88 Betamethason valerat: 17,27 Clobetason propionat: 22,37 Mometason fuorat: 24,66 Betamethason propionat: 26,11 5.2.2 Khảo sát khoảng tuyến tính Bảng Kết xác định khoảng nồng độ tuyến tính corticoid TT 10 11 Tên chất phân tích (Phương trình hồi qui) Prednison (y=79401.x+818) Dexamethason (y=59945.x+942) Triamcinolon acetonid (y=37356.x+1389) Flucinolon acetonid (y=41949.x+949) Prednison acetat (y=48229.x+750) Hydrocortison acetat (y=42663.x+1035) Cortison acetat (y=43484.x+629) Dexamethason acetat (y=54206.x+810) Betamethason valerat (y=21644.x+3856) Clobetason propionat (y=9534.x+949) Mometason furoat C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) C (µg/ml) 0,2 16884 0,3 17301 0,5 20359 0,5 22387 0,5 22677 0,5 25191 0,4 18204 0,6 28289 1,8 44272 2,2 50726 1,6 0,32 26044 0,48 27568 0,8 30908 0,8 34175 0,8 34881 0,8 38947 0,64 28165 0,96 43741 2,88 64531 3,52 78688 2,56 0,4 32442 0,6 34745 1,0 38714 42558 43475 1,0 48804 0,8 35328 1,2 54805 3,6 81282 4,4 98386 3,2 0,48 38962 0,72 42434 1,2 46146 1,2 51093 1,2 52230 1,2 58730 0,96 42606 1,44 65972 4,32 97197 5,28 118244 3,84 0,6 48559 0,9 53076 1,5 57597 1,5 64281 1,5 65227 1,5 73224 1,2 52781 1,8 82276 5,4 121592 6,6 146956 4,8 Hệ số tương quan r 0,9998 0,9996 0,9997 0,9994 0,9998 0,9997 0,9997 0,9998 0,9983 0,9994 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 7/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW th-êng quy kü tht PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA 12 (y=137515.x+4471) Betamethason propionat (y=20274.x+2605) S(mAU.s) C (µg/ml) S(mAU.s) 73326 4,0 84444 115287 6,4 130868 140770 8,0 165190 169318 9,6 197586 211231 12,0 245900 0,9998 0,9998 5.2.3 §é lặp lại: Độ xác tiến hành thử nghiệm mẫu tự tạo Cân 0,2g mẫu placebo thêm vào 4,0ml dung dịch chuẩn gốc có nồng độ bảng Xử lý mẫu tiến hành sắc ký, xử lý kết tổng hợp vào bảng Bảng Độ lặp lại phương pháp mẫu tự tạo Tỷ lệ tìm lại (%) C dd gốc Tên chất phân tích (µg/ml) 5 5 18 22 16 40 102,0 105,4 104,5 104,7 103,1 102,7 102,2 102,9 102,4 103,3 106,6 100,1 102,5 104,8 104,1 105,3 102,0 101,9 102,2 102,6 101,9 102,7 105,9 99,3 103,2 107,4 104,7 105,1 103,3 103,5 103,7 102,9 102,4 103,1 107,0 100,4 102,5 105,9 105,3 106,2 103,2 102,9 103,0 103,4 103,2 103,7 107,4 100,9 101,1 105,0 105,1 106,8 102,4 102,2 101,6 102,6 101,7 102,9 105,8 98,7 101,7 105,8 104,6 105,3 102,6 102,6 102,5 103,2 102,6 103,9 107,0 99,8 Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Betamethason propionat Trung bình 102,2 105,7 104,7 105,5 102,7 102,6 102,5 102,9 102,4 103,3 106,6 99,9 RSD (%) 0,7 0,9 0,4 0,7 0,5 0,6 0,7 0,3 0,5 0,4 0,6 0,8 5.2.4 Đánh giá độ đúng: Thêm xác lượng chất chuẩn corticoid vào mẫu placebo, cho sau xử lý theo quy trình phân tích nồng độ dung dịch cuối đem sắc ký phải nằm khoảng 50 - 150% so với nồng độ định lượng Tiến hành mức nồng độ khác nhau: mức 50% (A), mức 100% (B) mức 150% (C); nồng độ thực lần Dựa vào diện tích pic chất tương ứng dung dịch chuẩn hỗn hợp để tính lượng chất chuẩn tìm thấy Kết thể bảng Bảng Kết khảo sát độ corticoid Chất phân tích Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid A1 98,40 100,70 98,90 A2 101,10 99,60 101,50 A3 102,00 99,40 102,20 B1 99,70 103,30 101,60 Tỷ lệ tìm lại (%) B2 B3 100,90 101,40 105,00 104,10 104,10 102,90 C1 100,20 104,00 102,70 C2 97,70 101,30 99,90 C3 100,00 103,40 102,30 T.bình 100,16 102,31 101,79 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiƯm thc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 8/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiÖm thuèc TW th-êng quy kü thuËt PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CÓ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BÔI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Betamethason propionat 99,50 96,50 97,80 96,30 97,00 97,50 95,80 96,20 95,20 100,10 99,60 100,10 99,40 98,80 99,00 99,00 100,10 97,00 100,60 99,50 99,70 98,90 99,50 101,00 99,80 100,20 97,90 102,50 100,80 100,80 100,50 101,70 101,00 101,30 104,10 97,80 105,30 101,50 102,10 102,00 101,70 101,50 102,30 105,50 99,20 103,70 102,30 102,40 101,90 102,60 102,50 103,00 106,60 100,30 103,60 100,90 100,70 100,60 102,20 101,00 102,00 102,40 99,10 101,30 99,50 99,60 99,40 99,60 99,20 100,30 100,60 97,30 103,80 100,50 100,80 100,90 101,70 100,30 101,00 101,80 98,10 102,27 100,12 100,44 99,99 100,53 100,33 100,50 101,94 97,99 5.2.5.Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) Tiến hành tương tự chất phân tích khác Kết xác định giá trị LOD LOQ corticoid bảng 3.44 Bảng 3.44 LOD LOQ corticoid STT Tên chất phân tích Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat 10 Clobetason propionat 11 Mometason furoat 12 Betamethason propionat LOD (µg/ml) 0,1 0,15 0,25 0,25 0,25 0,25 0,2 0,3 0,9 1,1 0,8 2,0 LOQ (µg/ml) 0,3 0,45 0,75 0,75 0,75 0,75 0,6 0,9 2,7 3,3 2,4 6,0 5.2.6 Áp dụng kiểm tra mẫu kem Kiểm tra 11 mẫu kem mỹ phẩm, kết thể bảng 3.69 Bảng 3.69 Kết phân tích đồng thời glucocorticoid Mã số GC01 GC02 GC03 GC04 GC05 GC06 Tên mẫu Cream nám one today Cream nám shui Jing bai 43L382 Kem dưỡng trắng da làm mờ vết thâm Hazelin Kem nám Cô Tiên (Day whitening & spot removing set) Cream ngừa mụn tác dụng One Today Cream dưỡng trắng da mặt One Today Số ĐKKN Kết 43L381 + + + 43L 383 43L384 43L390 43L391 Bé Y TÕ ViƯn kiĨm nghiÖm thuèc TW th-êng quy kü thuËt Ký hiÖu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 9/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI 12 CHẤT STEROID CĨ MẶT TRÁI PHÉP TRONG KEM BƠI DA MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI DETECTOR PDA GC07 GC08 GC09 GC10 GC11 Kem mắt Whoo Nước hoa hồng In Yang Balancer Tinh chất dưỡng da Qi & Jin Essence Sữa dưỡng da In Yang Lotion Kem dưỡng da đêm Whoo 43L398 43L397 43L396 43L395 43L399 - Mẫu GC01, GC05 GC06 có pic có thời gian lưu tương ứng với pic clobetason dipropionat, chồng phổ với phổ chuẩn clobetason dipropionat cho hệ số chồng phổ xấp xỉ (lần lượt l 0,9933; 0,9954; 0,9968) 6.Kết luận -ó la chn đ-ợc dung m«i phương pháp xử lý mẫu cho phÐp chiÕt hồn tồn 12 chất steroid khảo sát, nỊn mẫu - Khảo sát lựa chọn đ-ợc điều kiện sắc ký lỏng hiệu cao phù hợp cột, pha động, detector, tốc độ dòng, thể tích tiêm mÉu cho phÐp ph¸t hiƯn đặc hiệu với 12 chất steroid mẫu kem bôi da Các pic steroid tách riêng biệt, rửa giải không sớm với giới hạn phát nhỏ iu kin sc ký đơn giản, đẳng dòng, dễ thực , nhiên píc gần địi hỏi chất lượng cột sắc ký phải có khả tách tốt (số đĩa lý thuyết >8000), hệ thống sắc ký ổn nh - Ph-ơng pháp xây dựng ó c ỏnh giỏ độ thích hợp hệ thống sắc ký, tÝnh đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ đúng, giới hạn phát v gii hn nh lng ca 12 chất thuộc nhóm steroid - Quy trình phân tích phù hợp để xác định sàng lọc chất cấm steroid mẫu kem bôi da Khi phát píc nghi ngờ với chất tương ứng sắc ký đồ dung dịch chuẩn, nên chạy sắc ký riêng cho chất (có thể điều chỉnh tỷ lệ thành phần pha động cho phù hợp) TÀI LIỆU VIỆN DẪN -Sổ tay chất lượng: +Chương 04: Kiểm soát tài liệu VKN/STCL/04 +Chương 19: Phương pháp thử nghiệm, hiệu chuẩn phê duyệt phương pháp VKN/STCL/19 -Thủ tục “Kiểm soát tài liệu”: VKN/TT/04.02 -Thủ tục “Nhận biết truy tìm”: VKN/TT/03.01 -Thủ tục “Quản lý thiết bị thử nghiệm”: VKN/TT/20.19 ... chất lượng mỹ phẩm theo Thông tư 06/2011/TT-BYT 1.2 MỘT SỐ HỢP CHẤT CẤM SỬ DỤNG VÀ CẦN KIỂM SOÁT HÀM LƯỢNG NGHIÊN CỨU TRONG ĐỀ TÀI 1.2.1 Một số hợp chất màu bị cấm sử dụng mỹ phẩm 1.2.2 Một số. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM CHUYÊN NGÀNH: Kiểm nghiệm thuốc - Độc chất. .. thành phần cần ý 1.2 MỘT SỐ HỢP CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG VÀ CẦN KIỂM SOÁT HÀM LƯỢNG NGHIÊN CỨU TRONG ĐỀ TÀI 1.2.1 Một số hợp chất màu bị cấm sử dụng mỹ phẩm Các hợp chất màu chất có màu trạng thái