KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (dược LIỆU và dược cổ TRUYỀN) chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất trong cây cỏ nhọ nồi (eclipta alba)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI (Eclipta alba) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI (Eclipta alba) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : Người hướng dẫn: Hà Nội – 2019 LỜI CẢM ƠN Khóa luận kết cho trình học tập, rèn luyện em Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Trong trình nghiên cứu hoàn thành luận văn này, em nhận nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy, Cô giáo, nhà khoa học Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Viện Dược Liệu gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể Ban Giám hiệu Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Dương Thị Ly Hương, PGS.TS Đỗ Thị Hà, Ths Nguyễn Thị Hồng Anh, TS Trần Thanh Hà cán nghiên cứu Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu giúp đỡ em trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2019 Sinh viên DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 (Cacbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) CC Sắc ký cột (Column Chromatography) DCM Dicloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DM Dung môi DMSO Dimethyl sulfoxide DL/DM Tỉ lệ dược liệu/dung mơi ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử (Electronspray Ionization Mass Spectrum) EtOAc Etylacetat HMBC Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết of (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity) HSQC Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết (Heteronuclear Single Quantum Coherence) MeOH Methanol MS Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) SKĐ Sắc ký đồ TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) UV-Vis Phổ tử ngoại (Ultra violet- Visible) DANH MỤC CÁC BẢNG, CÁC HÌNH Bảng 3.1 Dữ liệu phổ hợp chất N01 wedelolacton 19 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất N02 quercetin .20 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất N03 methyl gallat 22 Hình 1.1 Cây Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) Hình 1.2 Cấu trúc hợp chất Alkaloid .5 Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất Coumestan Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất Flavonoid Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất Sterol Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.8 Cấu trúc dẫn xuất thiophen polyacetylen .8 Hình 3.1 Sơ đồ phương pháp chiết xuất phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao phân đoạn EtOAc Cỏ nhọ nồi 16 Hình 3.3 SKĐ TLC N01 cao EtOAc .17 Hình 3.4 SKĐ TLC N02 cao EtOAc .17 Hình 3.5 SKĐ TLC N03 cao EtOAc .17 Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất N01 (Wedelolacton) .18 Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất N02 (Quercetin) .21 Hình 3.8 Cấu trúc hợp chất N03 (Methyl gallat) 23 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.3 Thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) .4 1.2.4 Tác dụng sinh học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng 12 2.2 Hoá chất, thiết bị .12 2.2.1 Hoá chất 12 2.2.2 Thiết bị 12 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết .13 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 13 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc .14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 15 3.1 Chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi phân lập hợp chất từ cao phân đoạn etyl acetat 15 3.1.1 Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 18 3.2.2 Biện luận cấu trúc N02 20 3.2.3 Biện luận cấu trúc N03 21 3.3 Bàn luận 23 3.3.1 Về chiết xuất 23 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất .23 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia có khí hậu nhiệt đới thuận lợi cho phát triển nhiều loại thuốc Với đa dạng, phong phú thuốc tạo nguồn tài nguyên dược liệu vô quý báu cho nước ta Từ xa xưa, ông cha ta sử dụng thuốc cổ truyền từ loại để chữa trị số bệnh thường gặp như: cảm, sốt, chảy máu, đau bụng,… Đó thuốc sử dụng phổ biến truyền lại từ đời sang đời khác Tuy nhiên thuốc dựa kinh nghiệm cha ơng ta mà chưa có sở khoa học Ngày nay, khoa học kỹ thuật phát triển người sâu vào nghiên cứu làm sáng tỏ thành phần, cấu trúc, tác dụng,… loài thường sử dụng thuốc dân gian Trong nghiên cứu y dược đại, hợp chất hữu từ thuốc flavonoid, saponin, alkaloid, coumarin,… nguồn cung cấp hợp chất có tiềm để thử hoạt tính sinh học, phục vụ cho nhiều lĩnh vực khoa học, đặc biệt y học Một số loài sử dụng phổ biến thuốc cổ truyền cỏ nhọ nồ cứu nhiều nước quốc tế Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, Thái Lan,…với nhiều tác dụng kháng viêm, kháng nấm, cầm máu, chống ung thư… sử dụng thuốc cổ truyền để điều trị bệnh như: nôn, chảy máu cam, rụng tóc, suy nhược thần kinh, nấm, viêm loét, lở ngứa, ban chẩn,…[2] Trước đa dạng cấu trúc lý hóa, hoạt tính sinh học mối tương quan cấu trúc tác dụng, để hiểu rõ vai trị hợp chất có cỏ nhọ nồi đặt sở khoa học cho việc sử dụng thuốc, ta cần tiếp tục tiến hành tách chiết xác định cấu trúc thành phần hóa học đặc biệt thành phần chưa phân lập cây, từ đặt tiền đề để nghiên cứu thêm tác dụng, hoạt tính sinh học hợp chất @ Để góp phần nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi, thực đề tài: “Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)” với mục tiêu: Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn Ethyl acetat Xác định cấu trúc chất phân lập phân đoạn Ethyl acetat CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) Trong lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), họ Cúc (Asteraceae hay Compositae) họ lớn lớp này, với 1.600 chi 23.000 loài Chúng thường tập trung chủ yếu đồng cỏ thảm thực vật núi, gặp vùng rừng nhiệt đới ẩm với độ cao thấp Họ Cúc họ thực vật bật số loài thực vật sử dụng dân tộc văn hóa địa tất nơi giới, đặc biệt cho mục đích y học [8] Các lồi thuộc họ Cúc có đặc điểm: cụm hoa dạng đầu, bao phấn hữu tính, chùm lơng quả, loại bế tạo thành từ nỗn khơng nẻ chín [1] Họ Cúc có chứa chất chuyển hóa thứ cấp phong phú đa dạng, phát triển hợp chất quan trọng tiến hóa họ Nguồn thông tin hợp chất có giá trị việc phân loại; xuất vắng mặt hợp chất hóa học cụ thể nhóm hợp chất thường biểu thị mối quan hệ phân loại phân họ cấp thấp [8] 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) Cây Cỏ nhọ nồi hay gọi cỏ mực, hạn liên thảo có tên khoa học Eclipta alba Eclipta prostrata (L.), thuộc họ Cúc Asteraceae (Compositae) [1], [2] Theo “Từ điển thuốc Việt Nam” tác giả Võ Văn Chi [1], Cỏ nhọ nồi có vị trí phân loại sau: Giới Thực vật: Plantae Ngành Ngọc lan: Magnoliophyta Lớp Ngọc lan: Magnoliopsida Phân lớp Cúc: Asteridae Bộ Cúc: Asterales Họ Cúc: Asteraceae Loài: Eclipta alba Phụ lục 1.52 Phổ HMBC hợp chất N01 Phụ lục 1.55 Phổ HSQC hợp chất N01 Phụ lục Phổ hợp chất N02 (Quercetin) Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR hợp chất N02 Phụ lục 2.2 Phổ 1H-NMR hợp chất N02 Phụ lục 2.59 Phổ 13C-NMR hợp chất N02 Phụ lục 2.61 Phổ DEPT hợp chất N02 Phụ lục Phổ hợp chất N03 (Methyl gallat) Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất N03 Phụ lục 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất N03 Phụ lục 3.65 Phổ 13C-NMR hợp chất N03 ... 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Đề tài: ? ?Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)? ?? thực nhiệm vụ phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ cỏ nhọ nồi Đề tài...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI (Eclipta alba) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa :... Cỏ nhọ nồi 15 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 18 3.2.2 Biện luận cấu trúc