NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VÀ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG MỘT SỐ CHẤT BỊ CẤM SỬ DỤNG TRONG MỸ PHẨM

B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC DC H NI Lấ TH HNG HOA NGHIấN CU XY DNG QUY TRèNH PHT HIN V XC NH HM LNG MT S CHT B CM S DNG TRONG M PHM LUN N TIN S DC HC H NI - 2013 B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC DC H NI Lấ TH HNG HOA NGHIấN CU XY DNG QUY TRèNH PHT HIN V XC NH HM LNG MT S CHT B CM S DNG TRONG M PHM CHUYấN NGNH: Kim nghim thuc - c cht M S: 62 72 04 10 Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS Thỏi Nguyn TS on Cao Sn H NI - 2013 Hựng Thu LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi di s hng dn ca PGS.TS Thỏi Nguyn Hựng Thu v TS on Cao Sn Cỏc s liu, kt qu nờu lun ỏn l trung thc v cha tng c cụng b bt k cụng trỡnh no khỏc Tỏc gi lun ỏn Lờ Th Hng Hoa LI CM N Sau thi gian hc v tin hnh ni dung ca lun ỏn di s hng dn ca PGS.TS.Thỏi Nguyn Hựng Thu v TS on Cao Sn, Tụi xin by t lũng bit n sõu sc ti: PGS.TS Thỏi Nguyn Hựng Thu, Phú hiu trng trng i hc Dc H Ni, trng b mụn Húa Phõn tớch-c cht v TS on Cao Sn, Vin trng vin Kim nghim thuc Trung ng, l hai ngi Thy ó tn tỡnh hng dn, giỳp v cho tụi nhng kin thc quý bỏu tụi hon thnh lun ỏn Ban Giỏm c vin Kim nghim thuc Trung ng ó to iu kin thun li cho tụi hon thnh lun ỏn ỳng thi gian quy nh PGS.TS Trn T An, nguyờn trng b mụn Húa Phõn tớch-c cht trng i hc Dc H Ni, PGS.TS Trnh Vn Qu, nguyờn Vin trng Vin Kim nghim thuc Trung ng, nhng ngi Thy ó úng gúp ý kin, ch dn v ng viờn tụi thc hin lun ỏn Cỏc anh ch em khoa M phm Vin Kim nghim thuc Trung ng, ó ng viờn, giỳp v chia s nhng khú khn vi tụi cụng vic Cỏc thy, cụ v cỏc anh ch b mụn Húa Phõn tớch-c cht, phũng Sau i hc, Trng i hc Dc H Ni ó giỳp tụi quỏ trỡnh hc ti trng V cui cựng, tụi xin chõn thnh cm n gia ỡnh, bn bố ó quan tõm ng viờn tụi quỏ trỡnh hc v thc hin lun ỏn Tỏc gi lun ỏn Lờ Th Hng Hoa MC LC Trang DANH MC CH VIT TT DANH MC BNG DANH MC HèNH T VN Chng I-TNG QUAN 1.1 QUN Lí V KIM TRA CHT LNG M PHM 1.1.1 Mt s nột c bn v qun lý v kim tra cht lng m phm trờn th gii 1.1.2 Quỏ trỡnh hỡnh thnh v hon thin cụng tỏc qun lý cht lng m phm ti Vit Nam 1.1.3 Mt s ni dung v qun lý v kim tra cht lng m phm theo Thụng t 06/2011/TT-BYT 1.2 MT S HP CHT CM S DNG V CN KIM SOT HM LNG NGHIấN CU TRONG TI 1.2.1 Mt s hp cht mu b cm s dng m phm 1.2.2 Mt s hp cht cú tỏc dng dc lý m b cm hoc gii hn hm lng s dng m phm 1.2.3 Cỏc nguyờn t c 1.3 MT S K THUT THNG DNG TRONG KIM NGHIM M PHM 1.3.1 Mt s k thut phõn tớch m phm 1.3.2 Mt s phng phỏp húa lý c ASEAN dựng phõn tớch m phm Chng II- I TNG, NGUYấN VT LIU, THIT B V PHNG PHP NGHIấN CU 2.1 I TNG NGHIấN CU 2.1.1 i tng nghiờn cu v c im ca i tng nghiờn cu 2.1.2 Mu dựng nghiờn cu xõy dng, thm nh cỏc quy trỡnh 2.2 CHT CHUN, DUNG MễI, HểA CHT 2.2.1 Cht chun 2.2.2 Dung mụi, húa cht 2.3 THIT B, DNG C 2.4 PHNG PHP NGHIấN CU 2.4.1 Phng phỏp HPLC 2.4.2 Phng phỏp AAS 2.4.3 Thm nh tớnh kh thi ca qui trỡnh ASEAN 2.4.4 Phng phỏp x lý s liu phõn tớch Chng III-KT QU NGHIấN CU 3.1 KT QU XY DNG QUI TRèNH PHN TCH MT S HP CHT B CM S DNG TRONG M PHM 3.1.1 Metanil yellow 3.1.2 Rhodamin B 3.1.3 Pigment red 53 3.1.4 Pigment orange 3.1.5 Crystal violet 3.1.6 Cỏc cht Sudan 3.1.7 nh tớnh, nh lng ng thi Metanil yellow, Rhodamin B, Pigment red 53, Pigment orange 3.2 KT QU XY DNG QUI TRèNH PHN TCH MT S HP CHT Cể TC DNG DC Lí B CM HOC Cể GII HN S DNG TRONG 3 10 10 17 19 26 26 26 41 41 41 41 43 43 43 44 45 45 50 53 53 55 55 55 60 65 69 75 80 88 97 M PHM 3.2.1 Hydroquinon 3.2.2 Tretinoin 3.2.3 Cỏc steroid 3.3 KT QU XY DNG QUI TRèNH PHN TCH CC KIM LOI NNG 3.3.1 Thy ngõn 3.3.2 Chỡ (Pb) 3.3.3 Arsen (As) 3.4 KT QU KIM TRA MT S HP CHT B CM V Cể GII HN S DNG TRONG M PHM LU HNH TRấN TH TRNG 3.4.1 Metanil yellow 3.4.2 Rhodamin B 3.4.3 Pigment red 53 3.4.4 Pigment orange 3.4.5 Crystal violet (Tớm tinh th) 3.4.6 Sudan 3.4.7 Kim tra ng thi Metanil yellow, Rhodamin B, Pigment red 53, Pigment orange 3.4.8 Hydroquinon 3.4.9 Tretinoin 3.4.10 Cỏc glucocorticoid 3.4.11 Thy ngõn 3.4.12 Chỡ Chng IV-BN LUN 4.1 V VIC TRIN KHAI CC PHNG PHP CA ASEAN 4.2 V CC QUI TRèNH PHN TCH MI THIT LP 4.2.1 V cỏc qui trỡnh phỏt hin cỏc cht mu cm 4.2.2 V qui trỡnh nh tớnh, nh lng Hydroquinon 4.2.3 V qui trỡnh nh tớnh 12 cht steroid kem bụi da 4.2.4 V qui trỡnh phõn tớch thy ngõn m phm dng kem v phn bụi da 4.3 TểM TT NHNG I MI TRONG TNG QUY TRèNH PHN TCH 4.3.1 Quy trỡnh phõn tớch ng thi cht mu cm son mụi 4.3.2 Quy trỡnh phỏt hin, nh lng ng thi cht Sudan 4.3.3 Quy trỡnh phỏt hin ng thi 12 cht steroid kem bụi da 4.3.4 Quy trỡnh phõn tớch thy ngõn m phm dng kem v phn bụi da 4.3.5 V qui trỡnh nh tớnh, nh lng Hydroquinon 4.3.6 V quy trỡnh phõn tớch tng cht mu riờng bit cũn li 4.4 V KH NNG P DNG CA CC QUI TRèNH 4.5 V TèNH HèNH NHIM CC CHT CM TRONG M PHM 4.6 V NHNG ểNG GểP CA TI 4.5.1 V xõy dng v thm nh cỏc qui trỡnh phõn tớch 4.5.2 V o to chuyờn mụn k thut 4.5.3 V ỏnh giỏ thc trng tỡnh hỡnh cht lng m phm Chng V- KT LUN V KIN NGH KT LUN KIN NGH TI LIU THAM KHO PH LC 97 102 105 109 109 118 122 125 125 126 127 128 129 130 130 131 131 131 132 132 133 133 135 135 139 139 140 141 141 142 143 143 144 144 145 146 147 147 147 148 149 149 150 DANH MC CH VIT TT T vit tt AAS ACC ACD ACSB ACTLC AOAC ASEAN CFS CGMP CIR COLIPA DMPM DMF DSC EEC EDL Ting Anh hoc tờn khoa hc Ting vit Atomic Absorption Spectrophotometry Asean Cosmetic Committee Asean Cosmetic Directive Asean Cosmetic Science Body Asean Cosmetic Testing Laboratory Council Association of Official Analytical Chemists Association of Southeast Asian Nations Certificate of Free Sale Cosmetic Good Manufacturing Practices US Cosmetic Ingredient Review Board Quang ph hp th nguyờn t y ban M phm Asean nh hng m phm Asean Hi ng khoa hc m phm Asean y ban kim nghim m phm Asean Hip hi nhng nh húa hc phõn tớch chớnh thc Hip hi cỏc quc gia ụng Nam European Cosmetic, Toiletry and Perfumery Association N,N dimethylformamid Differential Scanning calorimetry European Economic Community Electrodeless Discharge Lamp ETA-AAS Electro-Thermal Atomization Atomic Absorption Spectrophotometry EU European Union EUCD European Union Cosmetic Directive F-AAS FDA GLP HPLC IARC Flame Atomic Absorption Spectrophotometry Food and Drug Administration Good Laboratory Practices High Performance Liquid Chromatography International Agency for Research on Giy chng nhn lu hnh t Thc hnh tt sn xut m phm y ban xem xột thnh phn m phm ca M Hip hi m phm, vt dng v sinh v nc hoa chõu u Dung mụi pha mu Quột nhit vi sai Khi th trng chung chõu u ốn phúng in khụng in cc K thut nguyờn t húa khụng ngn la Cng ng chõu u nh hng m phm ca cng ng cỏc nc chõu u K thut nguyờn t húa ngn la Cc Qun lý Thc Phm v Dc phm Hoa k Thc hnh tt phũng thớ nghim Sc ký lng hiu nng cao C quan nghiờn cu ung th quc t T vit tt ICH ICP-AES IFRA ISO Ting Anh hoc tờn khoa hc Cancer International Conference on Harmonisation Inductively Coupled Plasma - Atomic Emission Spectroscopy International Fragrance Association International Organization for Standardization KH & CN Ministry of Health Mutual Recognition Agreement MY PAL PIF PO PR ppb ppm RB SCCP Metanil yellow Pharmaceutical Affairs Law Product Information File Pigment orange Pigment red 53 parts per billion parts per million Rhodamin B EU Scientific Committee on Consumer Products the State Food and Drug Administration SK SPF TBA TGA THF TLC US Hi ngh v hũa hp quc t Quang ph phỏt x nguyờn t Plasma Hip hi hng liu quc t T chc tiờu chun quc t Khoa hc v cụng ngh MoH MRA SFDA Ting vit Sun protect factor Tetrabutylamonium hydroxyd Thermogravimetric analysis Tetrahydrofuran Thin layer chromatography Unites States B Y t Hip nh tha nhn ln Lut cụng tỏc Dc H s thụng tin sn phm Phn t Phn triu Hi ng khoa hc cỏc sn phm tiờu dựng chõu u Cc qun lý Dc v thc phm Sc ký H s chng nng Phõn tớch nhit trng lc Sc ký lp mng Hp chng quc Hoa k DANH MC BNG Bng 1.1 Mt s quy nh ca EU, M v Nht Bn v cỏc ni dung cn qun lý i vi m phm Bng 1.2 Gii hn phỏt hin v gii hn nh lng ca cỏc cht Glucocorticoid Bng 1.3 iu kin vụ c húa mu lũ vi súng Bng 1.4 Ch o lũ graphit Bng 1.5 Cỏc iu kin phõn tớch arsen v thy ngõn bng k thut hydrid Bng 1.6 Gii hn phỏt hin v gii hn nh lng ca cỏc nguyờn t Bng 1.7 Gii hn kim loi nng (ACM THA 05 Testing Method) Bng 2.1 Gii hn chp nhn v ỳng ca phng phỏp theo AOAC Bng 2.2 Gii hn chp nhn v chớnh xỏc ca phng phỏp theo AOAC Bng 3.1 Kho sỏt tớnh thớch hp ca h thng sc ký vi Metanil yellow Bng 3.2 Kt qu kho sỏt khong tuyn tớnh ca Metanil yellow Bng 3.3 lp li ngy v khỏc ngy ca Metanil yellow trờn mu t to cú nn son mụi (MY01) Bng 3.4 lp li ngy v khỏc ngy ca MY trờn mu t to cú nn mu sn múng tay (MY02) Bng 3.5 ỳng ca Metanil yellow trờn nn mu: son mụi v sn múng Bng 3.6 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca RB Bng 3.7 lp li ngy v khỏc ngy ca RB trờn nn mu RB14 (phỏt hin cú Rhodamin B) Bng 3.8 lp li ngy v khỏc ngy ca RB trờn nn mu N1 Bng 3.9 Kt qu ỏnh giỏ lp li v ỳng trờn cỏc nn mu cú thờm cht chun v mu cú cha RB Bng 3.10 Kt qu kho sỏt tuyn tớnh ca Pigment red 53 Bng 3.11 Kho sỏt ỳng, lp li trờn nn mu son nc (PR07)cú thờm chun Bng 3.12 Kho sỏt ỳng, lp li trờn nn mu son rn (PR10) cú thờm chun Bng 3.13 Kho sỏt ỳng - lp li vi PR trờn nn mu t to Bng 3.14 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca Pigment orange Bng 3.15 Kho sỏt lp li ca phng phỏp Bng 3.16 Kt qu kho sỏt ỳng ca phng phỏp trờn nn mu PO02 Bng 3.17 Kt qu kh nng tỡm li ca Pigment orange trờn mu PO01 Bng 3.18 Kt qu kh nng tỡm li ca Pigment orange trờn mu PO03 Bng 3.19 Kt qu kho sỏt lp li -v ỳng trờn mu nn N1 (CV13) Bng 3.20 Kt qu kho sỏt ỳng- lp li trờn mu t to nn N2 (CV15) Bng 3.21 Kt qu kho sỏt ỳng- lp li trờn mu t to nn N3 (CV11) Bng 3.22 Kt qu kho sỏt ỳng- lp li trờn mu t to nn (CV03) Bng 3.23 thớch hp ca h thng sc ký phõn tớch cỏc Sudan Bng 3.24 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca cỏc Sudan Bng 3.25 lp li ca phng phỏp trờn cỏc mu t to Bng 3.26 ỳng phng phỏp phõn tớch ng thi Sudan trờn nn mu SD03 Bng 3.27 ỳng phng phỏp phõn tớch ng thi Sudan trờn nn mu Trang 31 38 39 39 39 40 48 49 56 58 58 59 60 63 64 64 65 68 68 69 69 71 72 73 73 74 78 78 79 79 81 83 84 85 86 SD05 Bng 3.28 Tớnh thớch hp ca h thng sc ký vi phỏt hin ng thi cỏc cht mu Bng 3.29 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca hn hp cỏc cht mu cm Bng 3.30 Kt qu kho sỏt chớnh xỏc ca phng phỏp vi cỏc cht mu Bng 3.31 Kt qu kho sỏt ỳng vi MY v RB Bng 3.32 Kt qu kho sỏt ỳng vi PR v PO Bng 3.33 Gii hn phỏt hin ca MY, RB, PR v PO Bng 3.34 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca Hydroquinon Bng 3.35 Kho sỏt lp li ca Hydroquinon trờn mt s nn mu Bng 3.36 Kh nng tỡm li ca Hydroquinon trờn mt s nn mu Bng 3.37 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca Tretinoin Bng 3.38 Kho sỏt lp li ca Tretinoin Bng 3.39 Kho sỏt kh nng tỡm li ca Tretinoin Bng 3.40 Tớnh thớch hp ca h thng sc ký Bng 3.41 Kt qu xỏc nh khong nng tuyn tớnh ca cỏc corticoid Bng 3.42 Kt qu kho sỏt chớnh xỏc ca cỏc corticoid Bng 3.43 Kt qu kho sỏt ỳng ca cỏc corticoid Bng 3.44 LOD v LOQ ca cỏc corticoid Bng 3.45 - Chng trỡnh nhit cho thit b vụ c húa mu bng vi súng Bng 3.46 Cỏc hn hp ó th nghim vụ c húa mu kem bụi da Bng 3.47 Cỏc hn hp ó th nghim vụ c húa mu phn bụi da Bng 3.48 Kt qu kho sỏt tớnh c hiu Bng 3.49 Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca thy ngõn Bng 3.50 Kt qu ỏnh giỏ lp li trờn mu m phm dng kem bụi da Bng 3.51 Kt qu ỏnh giỏ lp li trờn mu m phm dng phn bụi da Bng 3.52 Kt qu ỏnh giỏ ỳng trờn mu m phm dng kem bụi da Bng 3.53 Kt qu ỏnh giỏ ỳng trờn mu m phm dng phn bụi da Bng 3.54 Chng trỡnh vụ c húa mu lũ vi súng Bng 3.55 Chng trỡnh nhit ti u phõn tớch chỡ Bng 3.56 Khong tuyn tớnh ca phng phỏp Bng 3.57 Kt qu ỏnh giỏ lp li, ỳng ca phng phỏp trờn mu khụng cha chỡ Bng 3.58 Kt qu lp li v ỳng ca phng phỏp trờn mu cú cha chỡ Bng 3.59 Chng trỡnh vụ c húa mu lũ vi súng Bng 3.60 Khong tuyn tớnh ca phng phỏp nh lng arsen Bng 3.61 Kt qu ỏnh giỏ lp li, ỳng ca phng phỏp trờn mu Bng 3.62 Danh sỏch mu m phm kim tra Metanil yellow Bng 3.63 Danh sỏch mu m phm kim tra Rhodamin B Bng 3.64 Kt qu kim tra cỏc mu m phm phỏt hin Pigment red 53 Bng 3.65 Kt qu nh lng cỏc mu phỏt hin cú Pigment Red 53 Bng 3.66 Danh sỏch mu m phm kim tra Crystal violet Bng 3.67 Kt qu phõn tớch Sudan mt s mu son Bng 3.68 Kt qu phõn tớch ng thi cỏc cht mu cm MY, PR53, PO5, RB Bng 3.69 Kt qu phõn tớch ng thi cỏc glucocorticoid Bng 3.70 Kt qu xỏc nh hm lng thy ngõn mt s mu m phm 90 93 94 95 96 96 100 100 101 104 104 104 106 107 108 109 109 110 111 111 115 115 116 116 117 117 118 119 120 121 121 122 124 125 126 127 128 128 129 130 131 132 132 B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 11/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA a) b) c) Hỡnh Chng ph UV ca pớc t mu th t to v mu chun ti bc súng 435 nm ca: MY:a), PR53:b) v PO5: c) a) b) B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 12/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA c) d) Hỡnh Sc ký ca mu trng (a), ca mu chun hn hp (b), ca mu t to (c) v chng ph UV ca pic RB mu t to v mu chun (d) ti 535 nm ca Rhodamin B 6.3.3 Khong tuyn tớnh: Pha mt dóy cỏc dung dch chun dung dch pha mu cú nng MY t: 0,8 10,4 àg/ml, RB t: 0,8 9,8 àg/ml, PR t: 2,3 28,1 àg/ml, PO% t: 2,0 24,5 àg/ml tin hnh sc ký theo iu kin nh trờn Kt qu c th hin Bng Bng Kt qu kho sỏt khong nng tuyn tớnh ca hn hp cỏc cht mu cm Metanil yellow STT Rhodamin B Pigment red 53 Pigment orange Nng S pic Nng S pic Nng S pic Nng S pic (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) (g/ml) (mAU.s) 0,86 30748 0,82 75536 2,34 34985 2,04 52854 1,73 62407 1,63 152158 4,68 71328 4,08 111263 4,32 158323 4,08 386129 11,70 181858 10,20 300977 6,91 254161 6,53 619756 18,72 293610 16,32 482294 8,64 254161 8,16 773960 23,40 367429 20,40 608220 10,37 382929 9,79 930822 28,08 442756 24,48 739349 Phng trỡnh hi y = 37029x - 1528 y = 95291x - 2737 y = 15839x - 2733 y = 30511x - 11710 1,0000 1,0000 1,0000 0,9999 0,97 0,71 1,50 3,89 qui H s tng quan r y-intercept (%) B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 13/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA Nh vy cú s tng quan tuyn tớnh cht ch gia din tớch pic v nng ca MY, RB, PR53, PO5 khong nng kho sỏt vi h s tng quan ln lt l 1,0000; 1,0000; 0,9999; v 1,0000 vi cỏc giỏ tr y-intercept < 5% 3.4 chớnh xỏc chớnh xỏc ca phng phỏp: Bng Kt qu kho sỏt chớnh xỏc ca phng phỏp vi cỏc cht mu Lng cõn (g) Vi MY Ngy 1, KNV1 Din tớch Lng tỡm pic(mAU.s) thy (àg) Lng cõn (g) Ngy 2, KNV2 Din tớch Lng tỡm pic (mAU.s) thy (àg) 0,5002 159422 87,0 0,5172 158756 86,6 0,5102 159485 87,0 0,5176 157986 86,2 0,5089 159900 87,3 0,5208 159122 86,8 0,5016 159836 87,2 0,5062 158997 86,8 0,5108 159775 87,2 0,5177 158789 86,7 0,5128 159227 86,9 0,5116 159022 86,8 Trung bỡnh (n = 6) 87,1 86,6 RSD (%) (n = 6) 0,17 0,26 Hm lng MY tỡm thy trung bỡnh (n = 12): 86,90 àg ; RSD (%) (n = 12): 0,35 Vi RB 0,5002 452687 95,7 0,5128 451128 95,3 0,5102 454964 96,1 0,5169 452298 95,6 0,5089 454730 96,1 0,5172 454312 96,0 0,5016 454349 96,0 0,5211 452063 95,5 0,5108 454388 96,0 0,5153 453112 95,8 0,5128 454450 96,0 0,5119 454012 95,9 Trung bỡnh 96,0 95,7 RSD (%) 0,15 0,27 Hm lng RB tỡm thy trung bỡnh (n = 12): 95,83 àg ; RSD (%) (n = 12): 0,27 Vi PR 0,5002 180921 232,8 0,5109 180221 231,9 0,5102 180581 232,4 0,5216 179856 231,4 0,5089 182059 234,3 0,5143 178632 229,8 0,5016 181181 233,1 0,5197 180244 231,9 0,5108 181015 232,9 0,5226 180369 232,1 0,5128 180950 232,8 0,5074 178698 229,9 Trung bỡnh 233,0 231,2 RSD (%) 0,28 0,45 B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 14/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA Hm lng PR tỡm thy trung bỡnh (n = 12): 232,11 àg ; RSD (%) (n = 12): 0,55 Vi PO 0,5002 249249 168,9 0,5202 255632 173,3 0,5102 252074 170,9 0,5146 253654 171,9 0,5089 256365 173,8 0,5134 250122 169,5 0,5016 253461 171,8 0,5121 252008 170,8 0,5108 254832 172,7 0,5067 254122 172,2 0,5128 253078 171,5 0,5212 248079 168,1 Trung bỡnh (n = 6) 171,6 171,0 RSD (%) (n = 6) 0,97 1,10 Hm lng tỡm thy trung bỡnh (n = 12): 171,28 àg ; RSD (%) (n = 12): 1,02 chớnh xỏc ca phng phỏp c ỏnh giỏ bao gm lp li v chớnh xỏc trung gian Kt qu c th hin bng lp li ca phng phỏp c ỏnh giỏ da trờn lch chun tng i ca kt qu mu th c phõn tớch riờng bit theo qui trỡnh phõn tớch trờn chớnh xỏc trung gian c ỏnh giỏ da trờn lch chun tng i ca kt qu 12 mu th c phõn tớch riờng bit ngy khỏc v hai kim nghim viờn (KNV) khỏc Kt qu cho thy phng phỏp cú chớnh xỏc cao, lp li ngy cú giỏ tr lch chun tng i vi MY, RB, PR, PO ln lt l 0,18% v 0,26%; 0,15% v 0,27%; 0,28% v 0,45%; 0,97% v 1,10%; (vi n = 6) v khỏc ngy l 0,35%; 0,55%; 1,00%; 0,27% (vi n=12) Hm lng cht trung bỡnh xỏc nh c mu t to (n = 12) vi MY l 86,90 àg (RSD = 0,35%); vi RB l 95,83 àg (RSD = 0,27%); vi PR l 232,11 àg (RSD = 0,55%) v vi PO l 171,28 àg (RSD = 1,02) 3.5. ỳng Thờm chớnh xỏc mt lng cht chun MY, PR53, PO5, RB vo nn mu son khụng cha MY, PR53, PO5, RB, cho sau x lý theo qui trỡnh phõn tớch nng dung dch cui cựng ca MY, PR53, PO5, RB em tiờm sc ký phi nm khong 50 - 120% so vi nng nh lng Tin hnh mc nng khỏc nhau, mi nng thc hin ln Da vo ng chun tuyn tớnh tớnh lng cht chun tỡm thy Kt qu c th hin Bng 3, Bng B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 15/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA Bng 3.31 Kt qu kho sỏt ỳng vi MY v RB STT Lng mu nn(g) Din tớch pic (mAu.s) MY Lng Lng tỡm thy thờm (àg) vo (àg) T l thu hi (%) Din tớch pic (mAu.s) RB Lng Lng tỡm thy thờm (àg) vo (àg) T l thu hi (%) 0,5122 79670 43,86 43,2 101,52 225800 47,97 48,8 98,29 0,5026 79430 43,73 43,2 101,22 226531 48,12 48,8 98,61 0,5039 79413 43,72 43,2 101,20 226211 48,05 48,8 98,47 0,5268 158750 86,57 86,4 100,20 451316 95,30 97,6 97,64 0,5344 158975 86,69 86,4 100,34 452377 95,52 97,6 97,87 0,5219 159211 86,82 86,4 100,48 452067 95,46 97,6 97,80 0,5279 190840 103,90 103,68 100,21 544060 114,76 117,12 97,99 0,5173 191586 104,30 103,68 100,60 544940 114,95 117,12 98,15 0,5211 191404 104,21 103,68 100,51 543837 114,72 117,12 97,95 Trung bỡnh RSD (%) 100,70 0,48 Trung bỡnh 98,09 RSD (%) 0,33 Bng 3.32 Kt qu kho sỏt ỳng vi PR v PO STT Khi lng mu th (g) Din tớch pic (mA.s) 0,5122 0,5026 0,5039 0,5268 0,5344 0,5219 0,5279 0,5173 0,5211 90244 90164 90180 179194 179833 179913 217027 216906 217252 PR Lng Lng tỡm thy thờm (àg) vo (àg) T l thu hi (%) Din tớch pic (mAu.s) 117,40 118,8 117,30 118,8 117,32 118,8 229,72 237,6 230,53 237,6 230,63 237,6 277,49 285,12 277,34 285,12 277,78 285,12 Trung bỡnh RSD (%) 98,82 98,74 98,75 96,68 97,02 97,07 97,32 97,27 97,43 97,68 0,87 122719 119930 120806 252048 249332 254218 305214 304449 307581 PO Lng Lng tỡm thy thờm (àg) vo (àg) T l thu hi (%) 88,12 91 86,29 91 86,86 91 172,89 182 171,11 182 174,32 182 207,74 218,4 207,24 218,4 209,30 218,4 Trung bỡnh RSD (%) 96,83 94,82 95,46 94,99 94,02 95,78 95,12 94,72 95,66 95,27 0,83 B Y T VIN KIM NGHIM THUC TW THNG QUY K THUT Ký hiu: VKN/TQKT-MP/22 Trang: 16/ 16 Ban hnh ln: Ngy ban hnh: C quan ban hnh: VIN KIM NGHIM THUC TW XC NH NG THI CHT MU B CM METANIL YELLOW, RHODAMIN B, PIGMENT RED 53 V PIGMENT ORANGE TRONG SON MễI BNG PHNG PHP SC Kí LNG HIU NNG CAO VI DETECTOR PDA Kt qu cho thy phng phỏp cú ỳng tng i tt i vi nn mu m phm phc v gii hn cht cm nh 3.6 Gii hn phỏt hin, gii hn nh lng Tiờm dung dch nn mu vo h thng sc ký, tin hnh ln, tớnh lch chun ca tớn hiu ln nht thu c quanh thi im thi gian lu ca cỏc pic tng ng LOD= 3SD/a Stt TB SD a LOD LOQ Metanil yellow 125 644 556 623 207 144 383.2 249,1 37029 0,022 0,073 Pigment red 1102 218 225 271 115 122 342.2 377,3 15839 0,079 0,259 Pigment orange 227 242 131 115 165 113 165.5 56,8 30511 0,0061 0,0202 Rodamin B 111 149 61 58 99 96 95.7 33,8 95291 0,0012 0,0040 Kt lun Phng phỏp xỏc nh ng thi MY, PR53, PO5 v PO5 ó c thm nh cht ch v tớnh c hiu, chớnh xỏc v ỳng, LOD, LOQ Phng phỏp ó c thm nh hon ton phự hp nh tớnh, nh lng cỏc cht cm son mụi ang lu hnh trờn th trng TI LIU VIN DN -S tay cht lng: +Chng 04: Kim soỏt ti liu VKN/STCL/04 +Chng 19: Phng phỏp th nghim, hiu chun v phờ duyt phng phỏp VKN/STCL/19 -Th tc Kim soỏt ti liu: VKN/TT/04.02 -Th tc Nhn bit v truy tỡm: VKN/TT/03.01 -Th tc Qun lý thit b th nghim: VKN/TT/20.19 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 1/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA MC CH Mụ t quỏ trỡnh cỏc bc tin hnh nh tớnh ng thi 12 cht steroid cỏc kem bụi da m phm phạm vi áp dụng Đ-ợc áp dụng Viện Kiểm nghiệm c ỏp dng xỏc nh 12 cht cán đ-ợc đào tạo phù steroid kem bụi da m phm hợp Tài liệu tham khảo: Bài giảng hoá d-ợc tập II, tr-ờng Đại học d-ợc Hà nội 2.Vin Kim nghim Thuc T, Đảm bảo chất l-ợng thuốc số ph-ơng pháp kiểm nghiệm thuốc Hiệp định hệ thống hoà hợp ASEAN quản lý mỹ phẩm USP 34 5.ASEAN, Identification of hydrocortisone acetate, dexamethsone, betamethasone, triamcinolone acetonide and betamethasone valerate in cosmetics by TLC and HPLC Ngi biờn son Tr-ởng khoa Ngày: ThS Lê thị h-ờng hoa Ký tên: Ng-ời thẩm xét Phó Viện tr-ởng : TS TRN VIT HNG Ngày: Ký tên: Ng-ời phê duyệt Viện tr-ởng : TS Đoàn cao sơn Ngày: Ký tên đóng dấu: Số bản: số: Ng-ời giữ: Ngày nhận: Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 2/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA nội dung 1.Nguyên lý ph-ơng pháp Cỏc steroid c chit nn mu m phm bng hn hp dung mụi dicloromethan methanol (9 : 1), bc hi trờn cỏch thy ti khụ Hũa cn thu c hn hp dung mụi Acetonitril methanol nc (20:30:30) Sau ú, cỏc steroid c phõn tớch bng thit b HPLC trang b detector PDA dt ti bc súng 240 nm S cú mt cỏc steroid cú th c khng nh bng cỏch so sỏnh thi gian lu v ph UV-VIS ca pic nghi ng trờn sc ký mu th vi cỏc pic steroid tng ng sc ký mu chun 2.Thiết bị, thuốc thử chất chuẩn 2.1 Cht chun, hoá chất thuốc thử: - Cỏc cht chun ca Vin Kim nghim thuc Trung ng (10 cht chun quc gia v chun phũng thớ nghim (PTN)) Prednison, SKS: WS.0107235; HL:98,6%; m: 0,15% Dexamethason, SKS: 0197025, HL: 99,61%; m: 0,13% Triamcinolon acetonid, S lụ: M 191077a; HL: 99,11%; m: 1,84% Flucinolon acetonid, SKS:0199049; HL: 97,2%; m: 0,6% Prednison acetate, SKS: 0102149; HL: 99,64%; m: 0,06% Hydrocortison acetat, SKS:0198038; HL: 99,5%; m: 0,1% Cortison acetat, SKS: 0103092; HL: 100,01%; m:0,05% Dexamethason acetat, SKS:0200014; HL:99,6% Betamethason dipropionat, chun phũng thớ nghim, HL: 101,2% 10 Betamethason valerat, SKS: 0103125; HL: 100,43%; m: 0,14% 11 Clobetasol propionat, SKS:0103170; HL: 99,4%, m: 0,12% 12 Mometasone furoat: chun phũng thớ nghim, HL: 100,0% - Acetonitril HPLC (Merck) - Dicloromethan t tinh khit phõn tớch (Merck) - Methanol tinh khit phõn tớch (Merck) - Methanol HPLC (Merck) 2.2 Thiết bị dung cụ:(đã đ-ợc hiệu chuẩn theo chuẩn mực ISO/IEC 17025) - Mỏy sc ký lng Shimadzu vi module: + Bm: Model LC- 10Atvp + Detector mng diod: Mode SPD-M10Avp + Module iu khin: Model SCL-10Avp + Degasser: loi DGU- 14A + B trn dung mụi: loi FCV- 10Alvp - Cõn phõn tớch chớnh xỏc ti 0,1 mg - Mỏy lc siờu õm - Dng c thy tinh: Bỡnh nh mc, cc thy tinh, a thy tinh - Mu m phm nghiờn cu xõy dng, thm nh phng phỏp: Kem dng trng da Impress IC ca Kanebo, Nht bn - Cỏc mu kim tra: Cream nỏm one today 43L381 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 3/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA Cream nỏm shui Jing bai 43L382 Kem dng trng da lm m vt thõm Hazelin 43L 383 Kem nỏm Cụ Tiờn (Day whitening & spot removing set)43L384 Cream nga mn tỏc dng One Today 43L390 Cream dng trng da mt One Today 43L391 Kem mt Whoo 43L398 Nc hoa hng In Yang Balancer 43L397 Tinh cht dng da Qi & Jin Essence 43L396 Sa dng da In Yang Lotion 43L395 Kem dng da ờm Whoo 43L399 3.Quy trình thử 3.1 Chuẩn bị mẫu thử: Cõn khong 0,2 g ch phm, thờm 50ml hn hp dicloromethan-methanol (9 :1), khuy k v t trờn cỏch thy m 5-10 phỳt, ly ra, ngui nc ỏ 1gi, sau ú lc qua giy lc ó thm t bng hn hp dung mụi dicloromethan-methanol (9 :1), bc hi dch lc trờn cỏch thy ti khụ Hũa li cn 25ml Acetonitril methanol - nc (20:30:30) Lc qua mng lc 0,45àm 3.2 Chuẩn bị mẫu chuẩn : Cõn chớnh xỏc khong 25mg tng cht chun pha vo 25ml methanol, ri pha loóng tip bng pha ng c cỏc dung dch chun gc cú nng khong 12àg/ml Cỏc dung dch ny c s dng pha dóy chun hoc pha dung dch hn hp chun 3.3 Quy trình phân tích : - Ct Phenomenex Luna C18, (250 x 4,6 mm), àm lụ 5550654 - Nhit ct: nhit phũng - Pha ng: Acetonitril - nc (48:52) - Tc dũng: 1,0 ml/ phỳt - Bc súng phỏt hin: 240 nm - Th tớch tiờm: àl 3.4 Cách tiến hành: Tiêm riêng biệt dung dịch thử, dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký lỏng sử dụng điều kiện Tiến hành sắc ký khoảng 30-35 phút Ghi lại sắc ký đồ 3.5 Cách đánh giá kết - Dựa vào thời gian l-u: so sánh thời gian l-u pic thu đ-ợc từ dung dịch thử pic thu đ-ợc từ dung dịch chuẩn - So sỏnh ph UV-VIS ca pớc thu c t dung dch th cú thi gian lu tng ng vi pớc thu c t dung dch chun v tớnh h s chng ph ca cỏc pic ny Yêu cầu kỹ đào tạo cần thiết áp dụng Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 4/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA Kiểm nghiệm viên phải đ-ợc đào tạo ph-ơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng thành thạo máy sắc ký lỏng hiệu cao, bit c v phõn tớch ph 5.Đánh giá quy trình Do c thự ca mu m phm nu cú cha cht cm thng hm lng rt nh nờn chn vựng gii hn nh lng ỏnh giỏ phng phỏp bao gm cỏc ni dung: thớch hp ca h thng sc ký, tớnh c hiu , khong tuyn tớnh, lp li, ỳng 5.1 Lựa chọn dung môi Sau kho sỏt trờn mt s h dung mụi ho tan mu, h dung mụi dicloromethan methanol (9:1) c nhn thy l h m nhúm cht steroid tan rt tt, dung dch mu th khỏ sch khụng b ln nhiu cht Sau ú, loi b dung mụi v hũa cn hn hp Acetonitril - methanol - nc (20:30:30) Hn hp dung mụi ny cú thnh phn gn vi pha ng, cho pic cõn i hn nu ch hũa tan cn methanol, vỡ vy c chn lm dung mụi hũa tan cn to dung dch tiờm sc ký 5.2 Thẩm định ph-ơng pháp 5.2.1.ỏnh giỏ thớch hp h thng: Tiờm ln dung dch i chiu hn hp cú nng tng corticoid khong 10 àg/ml vo h thng sc ký, ghi li sc ký , kt qu th hin bng sau: Bng thớch hp ca h thng sc ký phõn tớch 12 cht steroid S T T 10 11 Tờn pic Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Thi gian lu (phỳt) Trung RSD bỡnh (%) 4,19 0,15 5,38 0,17 6,33 0,19 6,87 0,23 7,82 0,23 8,28 0,26 8,83 0,27 11,04 0,32 17,41 0,26 22,63 0,35 24,97 0,39 Din tớch pic S a (mAU.s) lý Trung RSD thuyt bỡnh (%) 32205 0,36 8041 34776 0,51 9997 38421 0,37 11295 42488 0,45 12016 43317 0,36 12957 48867 0,84 13463 35218 0,75 13971 54520 0,37 14215 80684 0,11 30962 97432 0,24 23493 140097 0,51 20409 H s bt i T 1,42 1,23 1,26 1,23 1,23 1,20 1,20 1,04 1,17 1,11 1,10 phõn gii Rs 5,96 4,20 2,20 3,64 1,64 1,89 6,63 16,74 10,64 3,66 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 5/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA 12 Betamethason propionat 26,47 0,41 164637 1,43 15161 1,12 1,93 Kt qu cho thy h thng sc ký cú: lp li tt vi RSD ca thi gian lu di 0,4% v din tớch pic di 1,4 %; s a lý thuyt trờn 8000; h s bt i di 1,4 v phõn gii trờn 1,6 Do vy ỏp ng yờu cu phõn tớch cho c 12 hp cht 5.2.1 Độ đặc hiệu: Tin hnh sc ký theo iu kin ó chn cỏc mu sau: - Dung dch mu placebo: Cõn chớnh xỏc khong 0,2 g mu kem dng trng da Impress IC white emulsion II (Kanebo, Nht Bn) ri x lý nh chun b mt mu th - Dung dch mu t to hoc mu th, dung dch chun c x lý theo mc 3.1 v 3.2 a) b) Hỡnh 3.19 Sc ký ỏnh giỏ c hiu vi 12 corticoid a) mu placebo b) mu hn hp chun c) mu t to c) Kt qu thu c nh hỡnh 3.19, cho thy: Trờn sc ký mu placebo khụng xut hin pic thi gian lu tng ng vi thi gian lu bt k cht no s 12 corticoid nghiờn cu Trờn sc ký ca dung dch mu t to cho 12 pic cú thi gian Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 6/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA lu tng ng vi thi gian lu ca 12 pic chớnh thu c t sc ký ca dung dch hn hp chun Th t gii: Prednison : 4,14 ph Dexamethason : 5,32 Triamcinolon acetonid: 6,25 Fluocinolon acetonid: 6,78 Hydrocortison acetat: 7,72 Prednison acetat:7,84 Cortison acetat: 8,71 Dexamethason acetat: 10,88 Betamethason valerat: 17,27 Clobetason propionat: 22,37 Mometason fuorat: 24,66 Betamethason propionat: 26,11 5.2.2 Kho sỏt khong tuyn tớnh Bng Kt qu xỏc nh khong nng tuyn tớnh ca cỏc corticoid TT 10 11 Tờn cht phõn tớch (Phng trỡnh hi qui) Prednison (y=79401.x+818) Dexamethason (y=59945.x+942) Triamcinolon acetonid (y=37356.x+1389) Flucinolon acetonid (y=41949.x+949) Prednison acetat (y=48229.x+750) Hydrocortison acetat (y=42663.x+1035) Cortison acetat (y=43484.x+629) Dexamethason acetat (y=54206.x+810) Betamethason valerat (y=21644.x+3856) Clobetason propionat (y=9534.x+949) Mometason furoat C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) C (àg/ml) 0,2 16884 0,3 17301 0,5 20359 0,5 22387 0,5 22677 0,5 25191 0,4 18204 0,6 28289 1,8 44272 2,2 50726 1,6 0,32 26044 0,48 27568 0,8 30908 0,8 34175 0,8 34881 0,8 38947 0,64 28165 0,96 43741 2,88 64531 3,52 78688 2,56 0,4 32442 0,6 34745 1,0 38714 42558 43475 1,0 48804 0,8 35328 1,2 54805 3,6 81282 4,4 98386 3,2 0,48 38962 0,72 42434 1,2 46146 1,2 51093 1,2 52230 1,2 58730 0,96 42606 1,44 65972 4,32 97197 5,28 118244 3,84 0,6 48559 0,9 53076 1,5 57597 1,5 64281 1,5 65227 1,5 73224 1,2 52781 1,8 82276 5,4 121592 6,6 146956 4,8 H s tng quan r 0,9998 0,9996 0,9997 0,9994 0,9998 0,9997 0,9997 0,9998 0,9983 0,9994 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 7/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA 12 (y=137515.x+4471) Betamethason propionat (y=20274.x+2605) S(mAU.s) C (àg/ml) S(mAU.s) 73326 4,0 84444 115287 6,4 130868 140770 8,0 165190 169318 9,6 197586 211231 12,0 245900 0,9998 0,9998 5.2.3 Độ lp li: chớnh xỏc c tin hnh th nghim trờn mu t to Cõn 0,2g mu placebo thờm vo ú 4,0ml dung dch chun gc cú nng nh bng X lý mu v tin hnh sc ký, x lý kt qu v tng hp vo bng Bng lp li ca phng phỏp trờn cỏc mu t to T l tỡm li (%) C dd gc Tờn cht phõn tớch (àg/ml) 5 5 18 22 16 40 102,0 105,4 104,5 104,7 103,1 102,7 102,2 102,9 102,4 103,3 106,6 100,1 102,5 104,8 104,1 105,3 102,0 101,9 102,2 102,6 101,9 102,7 105,9 99,3 103,2 107,4 104,7 105,1 103,3 103,5 103,7 102,9 102,4 103,1 107,0 100,4 102,5 105,9 105,3 106,2 103,2 102,9 103,0 103,4 103,2 103,7 107,4 100,9 101,1 105,0 105,1 106,8 102,4 102,2 101,6 102,6 101,7 102,9 105,8 98,7 101,7 105,8 104,6 105,3 102,6 102,6 102,5 103,2 102,6 103,9 107,0 99,8 Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Betamethason propionat Trung bỡnh 102,2 105,7 104,7 105,5 102,7 102,6 102,5 102,9 102,4 103,3 106,6 99,9 RSD (%) 0,7 0,9 0,4 0,7 0,5 0,6 0,7 0,3 0,5 0,4 0,6 0,8 5.2.4 ỏnh giỏ ỳng: Thờm chớnh xỏc mt lng cht chun corticoid vo nn mu placebo, cho sau x lý theo quy trỡnh phõn tớch nng dung dch cui cựng em sc ký phi nm khong 50 - 150% so vi nng nh lng Tin hnh mc nng khỏc nhau: mc 50% (A), mc 100% (B) v mc 150% (C); mi nng thc hin ln Da vo din tớch pic ca cht tng ng dung dch chun hn hp tớnh lng cht chun tỡm thy Kt qu c th hin bng Bng Kt qu kho sỏt ỳng ca cỏc corticoid Cht phõn tớch Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid A1 98,40 100,70 98,90 A2 101,10 99,60 101,50 A3 102,00 99,40 102,20 B1 99,70 103,30 101,60 T l tỡm li (%) B2 B3 100,90 101,40 105,00 104,10 104,10 102,90 C1 100,20 104,00 102,70 C2 97,70 101,30 99,90 C3 100,00 103,40 102,30 T.bỡnh 100,16 102,31 101,79 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 8/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat Clobetason propionat Mometason furoat Betamethason propionat 99,50 96,50 97,80 96,30 97,00 97,50 95,80 96,20 95,20 100,10 99,60 100,10 99,40 98,80 99,00 99,00 100,10 97,00 100,60 99,50 99,70 98,90 99,50 101,00 99,80 100,20 97,90 102,50 100,80 100,80 100,50 101,70 101,00 101,30 104,10 97,80 105,30 101,50 102,10 102,00 101,70 101,50 102,30 105,50 99,20 103,70 102,30 102,40 101,90 102,60 102,50 103,00 106,60 100,30 103,60 100,90 100,70 100,60 102,20 101,00 102,00 102,40 99,10 101,30 99,50 99,60 99,40 99,60 99,20 100,30 100,60 97,30 103,80 100,50 100,80 100,90 101,70 100,30 101,00 101,80 98,10 102,27 100,12 100,44 99,99 100,53 100,33 100,50 101,94 97,99 5.2.5.Gii hn phỏt hin (LOD), gii hn nh lng (LOQ) Tin hnh tng t nh cỏc cht phõn tớch khỏc Kt qu ó xỏc nh c giỏ tr LOD v LOQ i vi tng corticoid nh bng 3.44 Bng 3.44 LOD v LOQ ca cỏc corticoid STT Tờn cht phõn tớch Prednison Dexamethason Triamcinolon acetonid Flucinolon acetonid Prednison acetat Hydrocortison acetat Cortison acetat Dexamethason acetat Betamethason valerat 10 Clobetason propionat 11 Mometason furoat 12 Betamethason propionat LOD (àg/ml) 0,1 0,15 0,25 0,25 0,25 0,25 0,2 0,3 0,9 1,1 0,8 2,0 LOQ (àg/ml) 0,3 0,45 0,75 0,75 0,75 0,75 0,6 0,9 2,7 3,3 2,4 6,0 5.2.6 p dng kim tra cỏc mu kem Kim tra trờn 11 mu kem m phm, kt qu th hin bng 3.69 Bng 3.69 Kt qu phõn tớch ng thi cỏc glucocorticoid Mó s GC01 GC02 GC03 GC04 GC05 GC06 Tờn mu Cream nỏm one today Cream nỏm shui Jing bai 43L382 Kem dng trng da lm m vt thõm Hazelin Kem nỏm Cụ Tiờn (Day whitening & spot removing set) Cream nga mn tỏc dng One Today Cream dng trng da mt One Today S KKN Kt qu 43L381 + + + 43L 383 43L384 43L390 43L391 Bộ Y Tế Viện kiểm nghiệm thuốc TW th-ờng quy kỹ thuật Ký hiệu: VKN/TQKT-MP/23 Trang: 9/9 Ban hành lần: Ngày ban hành: Cơ quan ban hành: Viện kiểm nghiệm thuốc TW PHNG PHP PHT HIN NG THI 12 CHT STEROID Cể MT TRI PHẫP TRONG KEM BễI DA M PHM BNG PHNG PHP HPLC VI DETECTOR PDA GC07 GC08 GC09 GC10 GC11 Kem mt Whoo Nc hoa hng In Yang Balancer Tinh cht dng da Qi & Jin Essence Sa dng da In Yang Lotion Kem dng da ờm Whoo 43L398 43L397 43L396 43L395 43L399 - Mu GC01, GC05 v GC06 cú pic cú thi gian lu tng ng vi pic clobetason dipropionat, chng ph vi ph chun clobetason dipropionat cho h s chng ph xp x (ln lt l 0,9933; 0,9954; 0,9968) 6.Kết luận -ó la chn đ-ợc dung môi v phng phỏp x lý mu cho phép chiết hon ton c 12 cht steroid kho sỏt, mẫu - Khảo sát lựa chọn đ-ợc điều kiện sắc ký lỏng hiệu cao phù hợp cột, pha động, detector, tốc độ dòng, thể tích tiêm mẫu cho phép phát c hiu vi 12 cht steroid nn mu kem bụi da Cỏc pic cỏc steroid tỏch riờng bit, c gii khụng quỏ sm với giới hạn phát nhỏ iu kin sc ký n gin, ng dũng, d thc hin , nhiờn cỏc pớc khỏ gn ũi hi cht lng ct sc ký phi cú kh nng tỏch rt tt (s a lý thuyt >8000), h thng sc ký rt n nh - Ph-ơng pháp xây dựng ó c ỏnh giỏ v thớch hp ca h thng sc ký, tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ đúng, giới hạn phát v gii hn nh lng ca 12 cht thuc nhúm steroid - Quy trỡnh phõn tớch phự hp xỏc nh sng lc cỏc cht cm steroid cỏc mu kem bụi da Khi phỏt hin c pớc nghi ng vi cht tng ng sc ký ca dung dch chun, nờn chy sc ký riờng cho cht ú (cú th iu chnh t l cỏc thnh phn pha ng cho phự hp) TI LIU VIN DN -S tay cht lng: +Chng 04: Kim soỏt ti liu VKN/STCL/04 +Chng 19: Phng phỏp th nghim, hiu chun v phờ duyt phng phỏp VKN/STCL/19 -Th tc Kim soỏt ti liu: VKN/TT/04.02 -Th tc Nhn bit v truy tỡm: VKN/TT/03.01 -Th tc Qun lý thit b th nghim: VKN/TT/20.19