Khảo sát độc tính cấp và tác động hạ đường huyết, chống oxy hóa, bảo vệ gan của cao chiết từ cây rau rừng gynura sp , asteraceae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN THỊ NGUYỆT ÁNH KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC ĐỘNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT, CHỐNG OXY HÓA, BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ CÂY RAU RỪNG Gynura sp., Asteraceae LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN THỊ NGUYỆT ÁNH KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC ĐỘNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT, CHỐNG OXY HÓA, BẢO VỆ GAN CỦA CAO CHIẾT TỪ CÂY RAU RỪNG Gynura sp., Asteraceae Chuyên ngành: Dược lý – Dược lâm sàng Mã số: 60720405 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thầy hướng dẫn: PGS.TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI Thành phố Hồ Chí Minh - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu trình bày luận văn trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu khoa học khác Tác giả luận văn Trần Thị Nguyệt Ánh LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc đến cô PGS.TS Đỗ Thị Hồng Tươi, người tạo điều kiện cho em có hội tham gia thực đề tài nghiên cứu Cám ơn tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành nghiên cứu cách tốt Em xin trân trọng cám ơn quý thầy cô Bộ môn Dược lý, Khoa Dược – Đại học Y Dược Tp HCM tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt mơi trường, trang thiết bị thí nghiệm để em hồn thành tốt đề tài Em xin cám ơn Bộ mơn Dược liệu, Bộ mơn Vi sinh, Bộ mơn Hóa lý, Bộ mơn Hóa Dược, Khoa Dược – Đại học Y Dược Tp HCM; phòng Dược lý, phòng Vi sinh – Viện kiểm nghiệm thuốc Tp HCM; Phòng Arbovirus – Viện Pasteur Tp HCM giúp đỡ, tạo điều kiện tốt trang thiết bị thí nghiệm để em hồn thành định tính, định lượng,… cần thiết cho đề tài Con xin cám ơn bố mẹ, gia đình ln chăm sóc, động viên để có thêm nhiều động lực phấn đấu, vượt qua giai đoạn khó khăn q trình học tập thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn đến tất bạn, em thực đề tài em monitor môn, đặc biệt Liên (lớp Cao học 2015), em Tuyết, em Giang, em Linh (lớp Dược 2012) bên cạnh nhiệt tình giúp đỡ q trình tơi thực đề tài Em xin chân thành cám ơn Trần Thị Nguyệt Ánh i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC PHỤ LỤC vii CHƯƠNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 2.1.1 Định nghĩa 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Biến chứng 2.1.4 Chẩn đoán 2.1.5 Điều trị 2.1.6 Các thuốc điều trị đái tháo đường 11 2.2 CÂY RAU RỪNG 16 2.2.1 Thực vật học 16 2.2.2 Thành phần hóa học 19 2.2.3 Tác dụng dược lý 21 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT 22 2.3.1 Nghiên cứu tác động hạ đường huyết in vitro .22 2.3.2 Nghiên cứu tác động hạ đường huyết ex vivo 22 ii 2.3.3 Nghiên cứu tác động hạ đường huyết in vivo 22 2.4 NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG CHỐNG OXY HĨA, BẢO VỆ GAN 25 2.4.1 Các mơ hình gây độc gan 25 2.4.2 Mơ hình gây độc gan in vivo paracetamol 26 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .28 3.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 28 3.1.1 Dược liệu 28 3.1.2 Động vật nghiên cứu .28 3.1.3 Hóa chất, thuốc thử 28 3.1.4 Thiết bị, dụng cụ .29 3.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 3.2.1 Chiết xuất dược liệu 30 3.2.2 Xác định hiệu suất chiết 30 3.2.3 Khảo sát chất lượng cao toàn phần tiềm 30 3.2.4 Xác định hoạt tính chống oxy hóa in vitro phương pháp DPPH .32 3.2.5 Khảo sát độc tính cấp đường uống cao tiềm chuột nhắt 32 3.2.6 Khảo sát tác động hạ đường huyết cao tiềm chuột nhắt 34 3.2.7 Khảo sát tác động chống oxy hóa, bảo vệ gan chuột nhắt .35 3.2.5 Phương pháp xử lý số liệu .38 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .39 4.1 CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 39 4.1.1 Khảo sát chọn dung môi tiềm .39 4.1.2 Chiết xuất cao toàn phần tiềm 40 iii 4.2 KHẢO SÁT CHẤT LƯỢNG CỦA CAO TOÀN PHẦN TIỀM NĂNG 41 4.2.1 Thử độ tinh khiết .41 4.2.2 Định tính polyphenol 41 4.2.3 Định lượng polyphenol 42 4.3 ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG TRÊN CHUỘT NHẮT 43 4.4 TÁC ĐỘNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT CỦA CAO CHIẾT RAU RỪNG .45 4.4.1 Trên chuột bình thường 45 4.4.2 Trên chuột bị đái tháo đường 46 4.5 TÁC ĐỘNG LÊN HOẠT TÍNH ENZYME GAN CỦA CAO RAU RỪNG .48 BÀN LUẬN 55 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO .61 PHỤ LỤC PL-1 iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt A Absorbance Độ hấp thu ADA American Diabetes Association Hiệp hội đái tháo đường Hoa Kỳ ĐTĐ FDA FPG Đái tháo đường U.S Food and Drug Cục quản lý thực phẩm Administration dược phẩm Hoa Kỳ Fasting plasma glucose Đường huyết đói Chất đồng vận GLP-1 GLP-1RA GSH Glutathione Huyết áp HA International Diabetes Liên đoàn đái tháo đường Federation quốc tế IFG Impaired fasting glucose Rối loạn đường huyết đói IGT Impaired glucose tolerance Rối loạn dung nạp glucose MDA Malonyl dialdehyde OGTT Oral glucose tolerance test IDF Rau rừng RR SEM Thử nghiệm dung nạp glucose Standard Error of Mean Sai số chuẩn giá trị trung bình SGLT2 Sodium-glucose linked transporter STZ Streptozocine SU Sulfonylure TZD Thazolidinedion UV-vis Ultraviolet–visible WHO World Health Organization Tổ chức y tế giới v DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ theo WHO cập nhật 2006 Bảng 2.2 Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ theo ADA (2016) Bảng 2.3 Tiêu chuẩn chẩn đoán tiền ĐTĐ theo ADA (2016) Bảng 2.4 Mục tiêu điều trị ĐTĐ theo ADA (2016) Bảng 3.1 Bảng nhập số liệu để xác định LD50 33 Bảng 4.1 Hiệu suất chiết cao toàn phần 39 Bảng 4.2 Kết hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) cao toàn phần 39 Bảng 4.3 Kết độ ẩm cao Rau rừng 41 Bảng 4.4 Kết độ tro cao Rau rừng 41 Bảng 4.5 Số lượng chuột chết/sống lô uống cao Rau rừng 43 Bảng 4.6 Trọng lượng trung bình chuột bình thường 45 Bảng 4.7 Đường huyết trung bình chuột bình thường .45 Bảng 4.8 Trọng lượng trung bình chuột bị đái tháo đường lô 46 Bảng 4.9 Đường huyết trung bình chuột bị đái tháo đường lơ thử nghiệm 47 Bảng 4.10 Kết hoạt tính enzym AST, ALT chuột bình thường 49 Bảng 4.11 Kết hoạt tính enzym AST, ALT chuột đái tháo đường .49 Bảng 4.12 Hoạt tính men gan AST, ALT lô chuột thử nghiệm .50 Bảng 4.13 Kết khảo sát MDA, GSH gan lô chuột thử nghiệm 53 vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Phác đồ điều trị ĐTĐ týp cho bệnh nhân lớn tuổi theo IDF (2013) Hình 2.2 Phác đồ điều trị ĐTĐ týp theo ADA (2016) 10 Hình 2.3 Vị trí phân loại Rau rừng theo hệ thống Takhtajan (2009) 17 Hình 2.4 Cấu trúc streptozotocin .24 Hình 3.1 Hình ảnh Kim thất láng Gynura nitida DC., Asteraceae 28 Hình 4.1 Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) cao tồn phần cồn 50% 40 Hình 4.2 Hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) acid ascorbic 40 Hình 4.3 Kết định tính polyphenol mẫu cao thử 42 Hình 4.4 Phương trình đường chuẩn theo nồng độ pyrogallol 42 Hình 4.5 Đồ thị biểu diễn tỷ lệ chết tích lũy (%) theo liều uống cao Rau rừng 44 Hình 4.6 Đại thể chuột lơ thử nghiệm 44 Hình 4.7 Liên quan tuyến tính nồng độ protein độ hấp thu 51 Hình 4.8 Liên quan tuyến tính nồng độ MDA độ hấp thu MDA chuẩn 52 Hình 4.9 Liên quan tuyến tính nồng độ độ hấp thu GSH chuẩn 52 ... 6,2 3 6,2 3 6,3 3 2,0 3 5,2 3 5,3 3 6,4 3 6,6 3 3,6 3 6,3 3 7,3 3 7,2 3 7,0 3 0,0 3 2,6 3 3,0 3 3,5 3 3,3 2 8,4 3 3,7 3 1,8 3 1,2 3 1,7 2 9,9 3 3,3 3 3,8 3 4,5 3 5,0 3 3,2 3 6,8 3 6,6 3 7,0 3 7,4 3 1,0 3 6,7 3 8,5 3 9,6 4 0,9 3 7,3 4... 1,5 4 2,5 4 2,0 4 2,6 3 3,9 3 6,0 3 5,4 3 6,7 3 7,4 3 7,0 3 7,9 3 8,5 3 9,2 3 9,0 3 7,3 3 9,7 4 1,4 4 2,0 4 3,2 2 9,7 3 0,5 3 0,4 3 1,7 3 2,6 3 2,5 3 3,3 3 3,5 3 4,6 3 3,6 3 1,6 3 4,1 3 5,6 3 6,4 3 6,9 3 1,8 3 2,1 3 3,2 3 3,2 3 2,2 3... 2,4 3 1,7 3 1,9 3 3,1 3 2,5 3 0,7 3 3,3 3 4,0 3 4,5 3 5,3 3 0,1 3 0,4 2 9,8 3 0,9 3 0,6 3 0,6 3 1,1 3 0,8 3 1,9 3 1,0 3 0,2 3 1,8 3 3,0 3 4,0 3 4,3 3 1,2 3 1,5 3 1,8 3 2,1 3 2,6 3 3,1 3 2,8 3 2,9 3 4,0 3 3,6 3 2,0 3 3,5 3 4,9 3 5,2 3