Nghiên cứu phân lập hợp chất β sitosterol glucoside từ phân đoạn dịch chiết chloroform và xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cao chiết nước của hoa đu đủ đực thu hái tại quảng nạm đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ KIM ÁNH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT β-SITOSTEROL GLUCOSIDE TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC Đà Nẵng- Năm 2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ KIM ÁNH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT β-SITOSTEROL GLUCOSIDE TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng-Năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Đà Nẵng, ngày tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Kim Ánh LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài luận văn cử nhân cách hoàn chỉnh, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân cịn có hƣớng dẫn nhiệt tình q Thầy Cơ, nhƣ động viên ủng hộ gia đình bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến Cô ThS Đỗ Thị Thúy Vân hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành luận văn Xin chân thành bày tỏ lịng biết ơn đến tồn thể q thầy khoa Hóa học – Trƣờng Đại học Sƣ Phạm – Đại học Đà Nẵng tận tình truyền đạt kiến thức quý báu nhƣ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn đến bạn đồng nghiệp nhóm Nghiên cứu khoa học đề tài hoa đu đủ đực hỗ trợ cho nhiều suốt trình học tập, nghiên cứu thực đề tài luận văn cử nhân cách hoàn chỉnh MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 hư ng pháp nghiên cứu l thuyết 4.2 Phư ng pháp nghiên cứu thực nghiệm Bố cục luận văn CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ TRONG NƢỚC 1.3 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ NGOÀI NƢỚC 1.4 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ 1.4.1 Tác dụng trị giun sán 1.4.2 Tác dụng hạ huyết áp 1.4.3 Tác dụng kháng sinh, kháng nấm 1.4.4 Tác dụng trị u bướu, ung thư 1.4.5 Tác dụng chống oxi hóa 10 1.4.6 Các tác dụng dược l khác 11 1.4.7 Công dụng dân gian 11 1.5 CÁC PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO 11 1.5.1 hư ng pháp MTT 12 1.5.2 hư ng pháp SRB 12 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 13 2.1.1 Nguyên liệu 13 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 13 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.2.1 hư ng pháp chiết mẫu thực vật 14 2.2.2 hư ng pháp tách tinh chế chất 14 2.2.3 hư ng pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 14 2.3 ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 14 2.3.1 Alkaloid 14 2.3.2 Flavonoid 15 2.3.3 Coumarin 15 2.3.4 Saponin 15 2.3.5 Đường khử 16 2.3.6 Polyphenol 16 2.3.7 Steroid 16 2.3.8 Acid hữu c 16 2.3.9 Chất béo 16 2.3.10 Carotene 16 2.3.11 Polysaccairid 17 2.3.12 Iridoid 17 2.4 SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC CAO CHIẾT 17 2.5 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA DỊCH CHIẾT CHLOROFORM 18 2.6 CHẠY CỘT SẮC KÝ PHẦN CAO CHLOROFORM 19 2.7 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC 21 2.7.1 Chiết xuất cao chế ph m 21 2.7.2 Mô tả 21 2.7.3 C n không tan nước 21 2.7.4 Mất khối lượng làm khô 21 2.7.5 Tro toàn phần 22 2.7.6 Kim loại nặng 22 2.7.8 Định tính lớp chất hóa học cao nước 22 2.7.9 Hoạt tính kháng vi sinh vật 22 2.7.10 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư cao chiết nước hoa đu đủ đực 23 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 24 3.2 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CỦA CÁC DỊCH CHIẾT CHLOROFORM TỪ HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 24 3.3 PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM 25 3.4 KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC 30 3.4.1 Chiết xuất cao dược liệu 30 3.4.2 Mô tả 30 3.4.3 C n không tan nước 30 3.4.4 Mất khối lượng làm khô 30 3.4.5 Tro toàn phần 31 3.4.6 Kim loại nặng 31 3.4.7 Độ pH 31 3.4.8 Định tính 32 3.4.9 Hoạt tính kháng vi sinh vật 33 3.4.10 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 KẾT LUẬN 35 KIẾN NGHỊ 35 TÀI LI U THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT d : Doublet (NMR) J(Hz) : Hằng số tƣơng tác (NMR) Rf : Retention factor s : Singlet (NMR) ppm : Parts per million δ : Độ chuyển dịch hóa học (NMR) BuOH : Butanol CD3OD : Methanol- D CHCl3 : Chloroform D : Dichlomethane DMSO : Dimethyl sunfoxide DEPT : Distortionless enhancement by polarisation transfer EtOAc : Ethyl acetate EtOH : Ethanol HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC : Heteronuclear Single Quantum Corelation MeOH : Methanol Me : Methyl MMT : 3-[4,5-dimetylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide NMR : Nuclear magnetic resonance SRB : Sulforhodamine B UV : Ultraviolet D : Tên hợp chất phân lập đƣợc DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu Tên bảng bảng Trang 3.1 Định tính lớp chất hoa Đu đủ đực 24 3.2 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết chloroform 25 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất D chất so sánh Kết cắn không tan nƣớc cao đặc hoa đu đủ đực Kết khối lƣợng làm khô cao đặc hoa đu đủ đực Kết tro toàn phần cao đặc hoa đu đủ đực Kết hàm lƣợng số kim loại nặng cao đặc hoa đu đủ đực Kết độ pH dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực nƣớc Kết định tính nhóm chất cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ cao đặc hoa đu đủ đực 29 30 31 31 31 32 32 33 34 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Hình ảnh Đu đủ 2.1 Hoa Đu đủ đực Bột hoa Đu đủ đực 13 2.2 Sơ đồ điều chế cao chiết 17 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn dịch chiết chloroform hoa Đu đủ đực 20 3.1 Phổ IR D 26 3.2 Phổ 1H-NMR D 26 3.3 Phổ 13C-NMR D 27 3.4 Phổ HSQC chất D 28 3.5 Phổ HMBC chất D 28 32 Bảng 3.8 Kết độ pH dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực nƣớc Lần đo Ph Trung bình 4,870 4,890 4,880 4,880 4,860 4,876 Nhận xét: Độ pH trung bình dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực nƣớc 4,876 3.4.8 Định tính Chế phẩm phải thể phép thử định tính nhóm hợp chất có khả gây độc tế bào ung thƣ từ hoa đu đủ đực Kết định tính nhóm hợp chất có khả gây độc tế bào ung thƣ từ cao đặc hoa đu đủ đực đƣợc thể Bảng 3.9 Bảng 3.9 Kết định tính nhóm chất cao đặc hoa đu đủ đực STT Nhóm chất Saponin Alkaloid Coumarin Flavonoid Thuốc thử đặc hiệu Phản ứng tạo bọt Mayer Dragendroff Wagner Phản ứng đóng mở vòng lacton Phản ứng Cyanidin Dung dịch NaOH 10% Dung dịch FeCl3 Đƣờng khử Polyphenol Steroid Chất béo Acid hữu 10 Carotenoid Fehling A Fehling B Dung dịch FeCl3 5% Thuốc thử Salkowski Phản ứng LiebermanBourchard Hơ nóng cho bay hết dung môi Phản ứng với Na2CO3 tinh thể Phản ứng với H2SO4 đậm đặc Hiện tƣợng Tạo cột bọt bền Kết tủa trắng Kết tủa cam Kết tủa nâu Tạo dung dịch đục Dung dịch chuyển sang màu tím đỏ Dung dịch chuyển sang màu vàng đậm Dung dịch chuyển sang màu xanh đen Kết tủa đỏ gạch Dung dịch chuyển sang màu xanh thẫm Dung dịch chuyển sang màu xanh Kết + +++ ++ ++ Kết luận sơ Có + Có Có + + Có + ++ Có +++ Có ++ Có Dung dịch chuyển sang màu xanh lục + Để lại vết mờ giấy lọc + Có Khơng tƣợng  Khơng có Dung dịch có màu xanh ++ Có 33 Nhận xét: Sơ kết luận cao đặc hoa đu đủ đực có chứa hoạt chất: Alkaloid, Flavonoid, saponin, đƣờng khử, polyphenol, steroid, coumarin, carotene, chất béo Ghi chú: Dấu (+) : Phản ứng dƣơng tính (++) : Phản ứng dƣơng tính rõ (+++) : Phản ứng dƣơng tính rõ () : Khơng có 3.4.9 Ho t tính h ng vi sinh v t Kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực đƣợc thể Bảng 3.10 Bảng 3.10 Kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực a Chất đối chứng cho chủng vi khuẩn b Chất đối chứng cho nấm Gram - Nấm men Escheri chia coli ATCC2 5922 Pseudo monas aerugino sa ATCC27 853 Salmone Candida lla albicans enterica ATCC10 ATCC13 231 076 Gram + Tên mẫu Enteroc occus faecalis ATCC29 9212 Staphyl ococcus aureus ATCC2 5923 Bacillus cereus ATCC1 3245 MIC Cao đặc hoa đu đủ đực 128 - - - - - 128 Steptomycina 256 256 128 32 256 128 - Tetramycina 16 64 256 256 - Kanamycina 128 128 64 16 Nistatinb - - - - - - Cyclohexamideb 32 Nhận xét: Kết Bảng 3.10 cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực biểu hoạt tính kháng vi khuẩn Enterococcus faecalis (ATCC299212) với giá trị MIC 128 µg/mL có khả ức chế phát triển nấm Candida albicans (ATCC10231) với giá trị MIC 128 µg/mL 34 3.4.10 Ho t tính g y ộ t ung thư Kết khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ cao đặc hoa đu đủ đực đƣợc thể Bảng 3.11 Bảng 3.11 Kết khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ cao đặc hoa đu đủ đực Mẫu Control Cao đặc hoa đu đủ đực Camptoth ecin* N.độ (µg/mL) TB sống sót CS %) A549 Hep3B MCF-7 % TB Sai % TB % TB Sai số Sai số sống số sống sống 100,00 2,40 100,00 1,89 100,00 3,76 30 78,50 2,18 75,28 1,40 70,25 1,77 100 95,71 3,24 57,12 1,75 60,28 2,87 0,5 µM 10 µM 76,00 41,77 2,27 1,25 48,73 28,27 1,35 2,64 62,82 42,66 2,10 2,08 Camptothecin*: Chất đối chứng dƣơng hoạt động ổn định thí nghiệm Nhận xét: Kết Bảng 3.11 cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực thể hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ dòng tế bào ung thƣ phổi A549, ung thƣ gan Hep3B, ung thƣ vú MCF-7 nồng độ 30 µg/mL 100 µg/mL với mức độ khác 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN - Đã định tính sơ lớp chất thƣờng gặp thực vật phản ứng hóa học cho kết quả: mẫu hoa đu đủ đực dùng nghiên cứu có lớp chất alkaloid, flavonoid, saponin steroid, đƣờng khử, polyphenol, sterol, coumarin, polysaccarid, carotene, chất béo - Từ nguyên liệu ban đầu, phƣơng pháp khác thu đƣợc loại dịch chiết chloroform Đã thử hoạt tính gây độc tế bào dịch chiết chloroform dòng tế bào ung thƣ phổi (A549), ung thƣ gan (Hep3B), ung thƣ vú (MCF-7), kết cho thấy phân đoạn dịch chiết chloroform thể hoạt tính tốt, cụ thể phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng ethanol có tác dụng mạnh tế bào ung thƣ gan (Hep3B); phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng nƣớc có tác dụng mạnh dịng tế bào ung thƣ phổi (A549) vú (MCF-7); phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng methanol (mẫu M/C) có tác dụng dịng tế bào ung thƣ (A549), gan (Hep3B) vú (MCF-7) - Từ cao chiết chloroform, phƣơng pháp sắc ký cột silicagel, kết hợp với sắc ký lớp mỏng phƣơng pháp phổ đại nhƣ IR, 1HNMR, 13 CNMR, HMBC, HSQC, phân lập xác định cấu trúc chất D β-sitosterol glucoside - Đã bào chế xây dựng tiêu chuẩn sở cao chiết nƣớc hoa đu đủ đực: Kết cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực thể hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ dòng tế bào ung thƣ phổi A549, ung thƣ gan Hep3B, ung thƣ vú MCF-7 nồng độ 30 µg/mL 100 µg/mL với mức độ khác Kết sở khoa học cho việc định hƣớng bào chế cao dƣợc liệu thử nghiệm in vitro hƣớng đến ứng dụng thực tế KIẾN NGHỊ - Tiếp tục phâp lập thêm xác định cấu trúc chất phân lập đƣợc từ phân đoạn lại dịch chiết chloroform hoa đu đủ đực - Thăm dị hoạt tính sinh học khác chất phân lập đƣợc nhƣ dịch chiết hợp chất phân lập đƣợc khác 36 TÀI LI U THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tập 1, pp 824-827 [2] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), hư ng pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [3] Đỗ Trung Đàm (1996), hư ng pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [4] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012) “Hai cycloratane triterpene lần phân lập từ Đu đủ (carica papaya L.) , Tạp chí hóa học tập 50 (4A), pp 166169 [5] Hồ Thị Hà (2014), Nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất chiết tách từ Đu đủ (Carica papaya Linn), Luận án tiến sĩ Đại học Bách khoa Hà nội [6] Giang Thị Kim Liên Đỗ Thị Lệ Uyên (2015), “Khảo sát thành phần hoá học số dịch chiết từ hoa Đu đủ đực thu hái Đà Nẵng , Tạp chí Khoa học Công nghệ ĐHĐN; Số 03(88); Trang 119 [7] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, Trang 360-362 [8] Phạm Kim Mãn cộng (2001),“Nghiên cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung thƣ , Tạp chí dược liệu, 6(2+3), pp 58-62 [9] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007) ‘‘Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam , Tạp chí khoa học ĐHQGHN, khoa học tự nhiên công nghệ, (23), pp 130-134 [10] Nguyễn Văn Rƣ, Vũ Quang Thái, (2013) "Tách chiết chymopapain từ nhựa Đu đủ xanh (Carica papaya) chế thử thành dạng bột để pha tiêm", Tạp chí HóaHọc 50(6): 767-771 [11] Trần Thế Tục, Đồn Thế Lƣ (2004), Cây Đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb lao động xã hội [12] Đỗ Thị Thảo (2006) Nghiên cứu xác định khả phòng chống ung thư chất hóa học số thuốc Việt Nam, Luận án tiến sĩ sinh học 37 [13] Nguyễn Tƣờng Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khôi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983) “Chiết xuất xác định carpaine alkaloid Đu đủ , Tạp chí dược học số [14] Viện Dƣợc liệu - Bộ Y tế (2006), hư ng pháp nghiên cứu tác dụng dược l thuốc từ dược thảo, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật - Hà Nội [15] Đỗ Quốc Việt, Nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học bầu đất (Gynura sarmentosa DC.), cải đồng (Grangea maderaspatana poir.) chuối hột (Musa balbisiana colla), Luận án tiến sĩ (2006) Tiếng Anh [16] Aravind G., Debjit Bhowmik, Duraivel S., Harish G (2013) “ Traditional and medicinal uses of carica papaya , Journal of medicinal plants studies, vol 1, Issue 1,pp 7-15 [17] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002) “Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines , Journal of Medical Sciences, vol 2.Isuae 2.page 55-58 [18] Abrham W.B., (1978), “Techniques of Animal and Clinical toxicology , Med Pub Chicago, p 55 – 68 [19] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (2007) “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from carica papaya L Leaf , Journal of food composition and analysis, vol 20, pp 584-590 [20] Beverly A Teicher, (1997), Anticancer drug development guide: Preclinical screening, clinical trials, and approval, Humana Press, Totowa, New Jersey [21] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and Ayodele O, Soladoye (2008) “Anti - inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave , Inflammopharmacology, 16 (2008), pp 168 – 173 [22] Chung-Shih Tang (1979) “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II , Phytochemistry, 1979, vol 18, pp 651652 38 [23] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002) “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya , Phytochemistry, vol 60, pp 873-882 [24] Eno AE, Owo OI, Itam EH, Konya RS, (2000), “Blood pressure depression by the fruit juice of Carica papaya (L.) in renal and DOCA-induced hypertension in the rat , Phytother Res, Jun;14(4):235-9 [25] Gopalakrishnan M, Rajasekharasetty MR., (1978 ), “Effect of papaya(Carica papaya Linn) on pregnancy and estrous cycle in albino rats of Wistar strain , Indian J Physiol Pharmacol, Jan-Mar;22(1):66-70 [26] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine on Candida albicans growth , Mycoses, 39, 103-110 [27] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965) “Carpaine and pseudocarpaine , Tetrahedron letters No 24, pp 1907-1916 [28] Hewitt H, Whittle S, Lopez S, Bailey E, Weaver S,(2000), “Topical use of papaya in chronic skin ulcer therapy in Jamaica , West Indian Med J Mar; 49(1):32-3 [29] John R., Van (1998), “ Mechanism of Action of Non Stervidal Anti inflammatory Drug , The American Jour of Med March 30, vol 104 (3A) p.2s -3s [30] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008) “Review on nutritional, medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.) , Natural product radiance, vol 7(4), pp 364-373 [31] Kermanshai R, McCarry BE, Rosenfeld J, Summers PS, Weretilnyk EA, Sorger GJ (2001), “Benzyl isothiocyanate is the chief or sole anthelmintic in papaya seed extracts”, Phytochemistry, Jun; 57(3):427-35 [32] Lohiya NK, Kothari LK, Manivannan B, Mishra PK, Pathak N, (2000), “Human sperm immobilization effect of Carica papaya seed extracts: an in vitro study”, Asian J Androl Jun;2(2):103-9 [33] Marline Nainggolan and Kasmirul“Cytotoxicity activity of male Carica papaya L flowers on MCF-7 breast cancer cells , Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 2015, 7(5):772-775 , ISSN : 0975-7384 39 [34] Mikhal'chik EV, Ivanova AV, Anurov MV, Titkova SM, Pen'kov LY, Kharaeva ZF, Korkina LG, (2004), “Wound-healing effect of papaya-based preparation in experimental thermal trauma , Bull Exp Biol Med, Jun;137(6):560-2 [35] Maisarah A.M., Nurul Amira B., Asmah R and Fauziah O (2013) “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya , International Food Research Journal,20(3), pp 1043-1048 [36] Pathak N, Mishra PK, Manivannan B, Loyhia NK, (2000), “Stertility due to inhibition of sperm motility by oral administration of benzene chromatographic fraction of the chloroform extract of the seeds of Carica papaya in rats , Phytomedicine, 7, 325-333 [37] Prawez Alam1,2, Mohammed Ali*1, Kamran Javed Naquvi1,3, Shahnaz Sultana, “New long chain fatty acids and steroidal glycosides from rhizomes of Smiiax chinaL , Asian Journal of Biochemical and Pharmaceutical ResearchIssue 3(Vol 5), ISSN: 2231-2560 (2015) [38] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011) “Antibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya , Journal of Medicinal Plants Research, vol 5(20), pp 5167-5171 [39] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006) “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl - in breast cancer cells line , Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170 – 176 [40] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against Ascaris suum in naturally infected pigs , J.Helminthol Dec; 68(4):343-6 [41] Scudiero D.A., Shoemaker R.H., Kenneth D.P., Monks A., Tierney S., Nofziger T.H., Currens M.J., Seniff D., Boyd M.R (1988), “Evaluation of a soluable tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines , Cancer Reseach.48: 4827 – 4833 [42] Somsak Nualkaew, Peerawit Padee and Chusri Talubmook, “Hypoglycemic activity in diabetic rats of stogmasterol and sitosterol-3-O-b-D-glucopyranoside isolated from Pseuderanthemum palatiferum(Nees), Radlk Leaf extract , Journal of Medicinal Plants Research, Vol 9(20), 629-635 (2015) 40 [43] Sripanidkulchai B, Wongpanich V, Laupattarakasem P, Suwansaksri J, Jirakulsomchok D, (2001), “Diuretic effects of selected Thai indigenous medicinal plants in rats , J Ethnopharmacol May;75(2-3):185-90 [44] Stephen Chinwendu Ukpabi Emmanuel O.Chukwu Henry C.Ezikpe Chizaram (2015) “Chemical Composition Of Carica Papaya Flower (Paw-Paw) , International Journal of Scientific Research and Engineering Studies (IJSRES), Volume Issue 3, ISSN: 2349-8862 [45] Tahehiko Fukunaga, Koichi Nishya, Ikuko Kạikawa, Yoshikuni Watanabe, Noubo Suzuki, Koichi Takeya and Hideji Itokawa (1988), “Chemical studies on the constituents of Hyphear Tanakae Hosokawa from different host treé , Chem.Pharm.Bull, 36(3) 1180-1184 PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR giãn rộng D Phụ lục Phổ 1H-NMR giãn rộng D Phụ lục Phổ 13C-NMR giãn rộng D Phụ lục Phổ 13C-NMR giãn rộng D Phụ lục Phổ HMBC D Phụ lục Phổ HMBC D Phụ lục Phổ HMBC D Phụ lục Phổ HMBC D Phụ lục Phổ HMBC D Phụ lục 10 Phổ HSQC D Phụ lục 11 Phổ HSQC D ... HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM NGUYỄN THỊ KIM ÁNH NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP HỢP CHẤT β- SITOSTEROL GLUCOSIDE TỪ PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC CỦA HOA ĐU. .. CHIẾT CHLOROFORM TỪ HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 24 3.3 PHÂN LẬP HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT CHLOROFORM 25 3.4 KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT NƢỚC 30 3.4.1 Chiết. .. : phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng ethanol N/C : phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng nƣớc M/C : phân đoạn cao chiết chloroform từ cao tổng methanol Kết luận: Các phân đoạn cao