Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn ethyl acetate và xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cao chiết ethanol của hoa đu đủ đực thu hái tại quảng nam – đà nẵng

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ĐINH THỊ LINH THẢO NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETATE VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ CỞ CAO CHIẾT ETHANOL CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG LUẬN VĂN CỬ NHÂN HOÁ HỌC Đà Nẵng- Năm 2019 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ĐINH THỊ LINH THẢO NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETATE VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ CỞ CAO CHIẾT ETHANOL CỦA HOA ĐU ĐỦ ĐỰC THU HÁI TẠI QUẢNG NAM-ĐÀ NẴNG Chuyên ngành : Hóa hữu LUẬN VĂN CỬ NHÂN HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS ĐỖ THỊ THÚY VÂN Đà Nẵng-Năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đinh Thị Linh Thảo MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu 3 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu 4.1 Ph ng ph p nghi n cứu l thuyết 4.2 Ph ng ph p nghi n cứu thực nghiệm Bố cục luận văn CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ TRONG NƯỚC 1.3 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ NGỒI NƯỚC 1.4 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY ĐU ĐỦ 13 1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO 25 1.5.1 Ph ng ph p MTT 26 1.5.2 Ph ng ph p SRB 26 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 27 2.1.1 Nguy n liệu 27 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghi n cứu 27 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.2.1 Ph ng ph p chiết mẫu thực vật 27 2.2.3 Ph ng ph p x c định thành phần hóa học dịch chiết 28 2.3 ĐỊNH TÍNH MỘT SỐ LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 29 2.3.1 Alkaloid 29 2.3.2 Flavonoid 29 2.3.3 Coumarin 29 2.3.4 Saponin 30 2.3.5 Đ ờng khử 30 2.3.6 Polyphenol 30 2.3.7 Steroid 30 2.3.8 Axit hữu c 31 2.3.9 Chất béo 31 2.3.10 Carotene 31 2.3.11 Polysaccarid 31 2.3.12 Iridoid 31 2.4 SƠ ĐỒ ĐIỀU CHẾ CÁC CAO CHIẾT 32 2.5 THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA DỊCH CHIẾT ETHYL ACETATE 33 2.5.1 Quy trình chiết xuất dịch chiết hoa Đu đủ đực để nghi n cứu t c dụng ức chế tế bào ung th 33 2.5.2 C c dòng tế bào 34 2.5.3 Ph ng ph p 34 2.5.4 Thử độc tế bào 34 2.6 ĐỊNH DANH SƠ BỘ MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG CAO CHIẾT ETHYL ACETATE 35 2.7 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT ETHANOL 35 2.7.1 Chiết uất cao chế ph m: 35 2.7.2 Mô tả: 35 2.7.3 C n không tan nư c: 36 2.7.4 Mất khối lượng làm khơ 2.7.5 Tro tồn ph n h l c 9.6-DĐVN IV): 36 h l c 9.8-DĐVN IV): 36 2.7.6 Kim loại nặng: 37 2.7.7 Đ p h l c 6.2-DĐVN IV): 37 2.7.8 Định tính l p chất hóa học: 37 2.7.9 oạt tính kháng vi sinh vật: 37 2.7.10 oạt tính gây đ c tế bào ung thư cao chiết ethanol hoa đu đủ đực: 38 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC LỚP CHẤT TRONG HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 39 3.2 THỬ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT ETHYL ACETATE TỪ HOA ĐU ĐỦ ĐỰC 40 3.3 KẾT QUẢ KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT ETHYL ACETATE BẰNG PHƯƠNG PHÁP GC-MS 41 3.4 KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT ETHANOL 44 3.4.1 Chiết xuất cao d ợc liệu: 44 3.4.2 Mô tả: 44 3.4.3 Cắn không tan n ớc: 44 3.4.4 Mất khối l ợng làm khô: 45 3.4.5 Tro toàn phần: 45 3.4.6 Kim loại nặng 46 3.4.7 Độ pH: 46 3.4.8 Định tính: 47 3.4.9 Hoạt tính kh ng vi sinh vật 49 3.4.10 Hoạt tính gây độc tế bào ung th 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 KẾT LUẬN 52 KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BuOH: Butanol CD3OD: Methanol- D CHCl3: Chloroform D: Dichlomethane DMSO: Dimethyl sunfoxide DEPT: Distortionless enhancement by polarisation transfer EtOAc: Etylacetate EtOH: Ethanol GC-MS: Gas chromatography-Mass spectrometry MeOH: Methanol Me: Methyl SRB: Sulforhodamine B UV: Ultraviolet DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Số hiệu bảng 1.1 1.2 1.3 T n bảng Trang Thành phần hóa học Đu đủ 12 T c dụng chất chiết từ Đu đủ l n c c dòng tế bào ung th kh c điều kiện in vitro Hoạt tính chống ung th glucosinolate, phenolic, flavonoid, carotenoid alcaloid Đu đủ 17 22 3.1 Định tính c c lớp chất hoa Đu đủ đực 39 3.2 Hoạt tính độc tế bào phân đoạn dịch chiết n-hexane 40 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 3.11 Thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetat hoa Đu đủ đực Kết khảo s t cắn không tan n ớc cao đặc hoa đu đủ Kết khảo s t khối l ợng làm khô cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo s t tro toàn phần cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo s t hàm l ợng số kim loại nặng cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo s t độ pH dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực n ớc Kết định tính c c nhóm chất cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo s t hoạt tính kh ng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực Kết khảo s t hoạt tính gây độc tế bào ung th cao 41 44 45 45 46 47 47 50 51 đặc hoa đu đủ đực Hình 3.4 Phổ MS 9,12-Octadecadienoic acid(Z,Z) 3.4 KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ CAO CHIẾT ETHANOL Từ nghi n cứu dựa theo DĐVN IV, đề xuất ti u chuẩn cao d ợc liệu hoa đu đủ đực với định h ớng làm nguy n liệu thuốc gây độc tế bào ung th từ hoa đu đủ đực nh sau: 3.4.1 Chiết xuất cao dƣợc liệu: Cao đặc hoa đu đủ đực đ ợc bào chế từ hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) theo ph ng ph p thích hợp, để chế phẩm có hàm l ợng hoạt chất ổn định 3.4.2 Mô tả: Cao hoa đu đủ đực cao đặc qu nh, mềm, đồng Màu nâu đậm Mùi nồng, đặc tr ng d ợc liệu Vị lợ, h i đắng 3.4.3 Cắn không tan nƣớc: Không 3% Kết khảo s t cắn không tan n ớc cao đặc hoa đu đủ đực thể Bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết khảo sát cắn không tan nƣớc cao đặc hoa đu đủ đực STT mmẫu (g) mcắn (g) C (%) 1,000 0,021 2,100 1,000 0,021 2,100 44 1,000 0,022 2,200 CTB (%) 2,133 Nhận xét: Cắn không tan n ớc trung bình cao đặc hoa đu đủ đực 2,133%, đạt y u cầu theo quy định DĐVN IV không qu 3% 3.4.4 Mất khối lƣợng làm khô: Không 20% Kết khảo s t khối l ợng làm khô cao đặc hoa đu đủ đực thể Bảng 3.5 Bảng 3.5 Kết khảo sát khối lƣợng làm khô cao đặc hoa đu đủ đực STT mmẫu (g) mmẫu sau làm khô (g) W (%) 1,000 0,853 14,700 1,000 0,853 14,700 1,000 0,852 14,800 WTB (%) 14,733 Nhận xét: Mất khối l ợng làm khơ trung bình cao đặc hoa đu đủ đực 14,733%, đạt y u cầu theo quy định DĐVN IV khơng qu 20% 3.4.5 Tro tồn phần: Không 35% Kết khảo s t tro toàn phần cao đặc hoa đu đủ đực thể Bảng 3.6 Bảng 3.6 Kết khảo sát tro toàn phần cao đặc hoa đu đủ đực STT mcốc (g) mmẫu (g) m cốc mẫu sau tro hóa T (%) (g) 34,452 1,000 34,559 45 10,700 32,365 1,000 32,472 10,700 36,283 1,000 36,389 10,600 TTB (%) 10,667 Nhận xét: Tro toàn phần trung bình cao đặc hoa đu đủ đực 10,667%, đạt y u cầu theo quy định DĐVN IV không qu 35% 3.4.6 Kim loại nặng Kết khảo s t hàm l ợng số kim loại nặng cao đặc hoa đu đủ đực thể Bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết khảo sát hàm lƣợng số kim loại nặng cao đặc hoa đu đủ đực Hàm lƣợng cao Kim loại nặng đặc hoa đu đủ đực (mg/kg) Hàm lƣợng cho phép (mg/kg) 5,273.10-4 ≤ 0,05 2+ 6,591.10-4 ≤ 30 2+ 4,502.10-3 ≤ 40 2+ Pb Cu Zn Nhận xét: Hàm l ợng số kim loại nặng khảo s t cao đặc hoa đu đủ đực d ới mức cho phép theo định số 46/2007/QĐ-BYT n n không ảnh h ởng đến sức khỏe ng ời 3.4.7 Độ pH: Dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực 1% (kl/tt) n ớc phải có pH từ 5,0 đến 6,0 Kết khảo s t độ pH dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực n ớc thể Bảng 3.8 46 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ pH dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực nƣớc Lần đo Trung bình pH 5,610 5,620 5,620 5,610 5,610 5,614 Nhận xét: Độ pH trung bình dung dịch cao đặc hoa đu đủ đực n ớc 5,614 3.4.8 Định tính: Chế phẩm phải thể phép thử định tính c c nhóm hợp chất có khả gây độc tế bào ung th từ hoa đu đủ đực Kết định tính c c nhóm hợp chất có khả gây độc tế bào ung th từ cao đặc hoa đu đủ đực đ ợc thể Bảng 3.9 Bảng 3.9 Kết định tính nhóm chất cao đặc hoa đu đủ đực STT Nhóm chất Saponin Alcaloid Coumarin Thuốc thử đặc hiệu Phản ứng tạo bọt Tạo cột bọt bền Kết Kết luận sơ + Có Mayer Kết tủa trắng +++ Dragendroff Kết tủa cam ++ Wagner Kết tủa nâu ++ Phản ứng đóng mở Tạo dung dịch đục vong lacton Phản ứng Cyanidin Hiện tƣợng Dung dịch chuyển sang + Dung dịch NaOH 10% Dung dịch chuyển sang màu vàng đậm 47 Có + màu tím đỏ Flavonoid Có Có + Dung dịch FeCl3 Dung dịch chuyển sang + màu xanh đen Đƣờng khử Polyphenol Fehling A Fehling Kết tủa đỏ gạch B Dung dịch FeCl3 5% Dung dịch chuyển sang màu xanh ++ Có +++ Có thẫm Dung Thuốc thử Salkowski chuyển dịch sang ++ màu xanh Steroid Phản Chất béo Acid hữu 10 Carotenoid ứng Dung Lieberman- chuyển Bourchard màu xanh lục sang H nóng cho bay h i Để lại vết mờ hết dung môi Phản tr n giấy lọc ứng với Không Na2CO3 tinh thể t ợng Phản ứng với H2SO4 Dung dịch có đậm đặc Có dịch màu xanh + + Có - Khơng có ++ Có Nhận xét: S kết luận cao đặc hoa đu đủ đực có chứa c c hoạt chất: Alcaloid, Flavonoid, saponin, đ ờng khử, polyphenol, steroid, coumarin, carotene, chất béo Ghi chú: Dấu (+) : Phản ứng d ng tính (++) : Phản ứng d ng tính rõ (+++) : Phản ứng d ng tính rõ (-) : Khơng có 48 3.4.9 Hoạt tính kháng vi sinh vật Kết khảo s t hoạt tính kh ng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực đ ợc thể Bảng 3.10 Bảng 3.10 Kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cao đặc hoa đu đủ đực 49 a b Chất đối chứng cho c c chủng vi khuẩn Chất đối chứng cho nấm Gram + Tên mẫu Nấm men Gram - Enteroc Staphylo Bacill Escher occus coccus us ichia faecalis aureus cereus coli ATCC2 ATCC25 ATCC ATCC 99212 923 13245 25922 Pseudo monas aerugin osa ATCC2 7853 Salmon ella enterica ATCC1 3076 Candida albicans ATCC10 231 MIC Cao đặc hoa đu đủ 256 - - - - - 128 256 256 128 32 256 128 - 16 64 256 256 - 128 128 64 16 - - - - - - đực Steptomyc ina Tetramyci na Kanamyci na Nistatinb Cyclohexa 32 mideb Nhận xét: Kết Bảng 3.10 cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực biểu hoạt tính kh ng vi khuẩn Enterococcus faecalis (ATCC299212) với gi trị MIC 256 µg/mL có khả ức chế ph t triển nấm Candida albicans (ATCC10231) với gi trị MIC 128 µg/mL 50 3.4.10 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ Kết khảo s t hoạt tính gây độc tế bào ung th cao đặc hoa đu đủ đực đ ợc thể Bảng 3.11 Bảng 3.11 Kết khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ cao đặc hoa đu đủ đực Mẫu TB sống sót (CS %) N.độ (µg/mL) A549 Hep3B % TB sống Sai số % TB sống Control MCF-7 Sai số % TB sống Sai số 100,00 2,40 100,00 1,89 100,00 3,76 Cao đặc hoa 30 58,67 3,12 88,31 2,53 74,04 1,25 đu đủ đực 100 66,47 2,05 63,27 1,71 57,25 3,12 Camptotheci 0,5 µM 76,00 2,27 48,73 1,35 62,82 2,10 n* 10 µM 41,77 1,25 28,27 2,64 42,66 2,08 Camptothecin *: Chất đối chứng d ng hoạt động ổn định thí nghiệm Nhận xét: Kết Bảng 3.11 cho thấy cao đặc hoa đu đủ đực thể hoạt tính gây độc tế bào ung th tr n dòng tế bào ung th phổi A549, ung th gan Hep3B, ung th vú MCF-7 nồng độ 30 µg/mL 100 µg/mL với c c mức độ kh c 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN -Đã định tính s c c lớp chất th ờng gặp thực vật phản ứng hóa học cho kết quả: mẫu hoa Đu đủ đực dùng nghi n cứu có c c lớp chất là: alkaloid, flavonoid, saponin steroid, đ ờng khử, polyphenol, sterol, coumarin, polysaccarid, carotene, chất béo - Từ nguy n liệu ban đầu, c c ph ng ph p kh c thu đ ợc dịch chiết ethyl acetate Đã thử hoạt độc tế bào dịch chiết ethyl acetate dòng tế bào ung th phổi (A549), ung th gan (Hep 3B), ung th vú (MCF-7), kết cho thấy phân đoạn dịch chiết ethyl acetate thể hoạt tính mức trung bình đến yếu với phần trăm tế bào sống sót từ 5,88±1,56 µg/mL đến 98,02±2,21 µg/mL - Đã định danh s thành phần hóa học cao ethyl acetate ph ng ph p phổ GC/MS có 10/10 cấu tử đ ợc định danh với hàm l ợng lớn bao gồm: – Sitosterol (34.83%); n-Hexadecanoic acid (15.53%); 9,12-Octadecadienoic acid(Z,Z) (14.33%); Campesterol (11.61%) - Đã xây dựng ti u chuẩn c sở cao chiết ethanol hoa đu đủ đực KIẾN NGHỊ - Phâp lập x c định cấu trúc chất phân lập đ ợc từ c c phân đoạn hoa Đu đủ đực - Thăm dị c c hoạt tính gây độc tế bào c c chất phân lập từ hoa đu đủ đực 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung (2006), Cây thuốc đ ng vật làm thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [2] Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, Nxb Y học, Hà Nội [3] Nguyễn Văn Đàm, Nguyễn Viết Tựu (1985), hương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nxb Y học, Hà Nội [4] Trần Thanh Hải (2016) Nghiên cứu thành ph n hóa học m t số tác d ng sinh học hoa Đu đủ đực, Luận văn Thạc sĩ D ợc học, Học viện Quân Y, Bộ Quốc phòng [5] Trần Thanh Hà, Trịnh Thị Điệp (2012), “Hai cycloratane triterpene lần đầu ti n phân lập từ l đu đủ (Carica papaya L.)”, Tạp chí hóa học, Tập 50 (4A), tr 166169 [6] Hồ Thị Hà (2014), Nghiên cứu hoạt tính sinh học m t số hợp chất chiết tách từ đu đủ Carica papaya Linn), Luận n Tiến sĩ Sinh học, Tr ờng Đại học B ch khoa Hà Nội [7] Giang Thị Kim Li n Đỗ Thị Lệ Uy n (2015), “Khảo s t thành phần ho học số dịch chiết từ hoa đu đủ đực thu h i Đà Nẵng”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đ ĐN, Số 03 (88), tr 119 [8] Đỗ Tất Lợi (1986), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [9] Phạm Kim Mãn cộng (2001), “Nghi n cứu thuốc Panacrin ức chế u dùng điều trị ung th ”, Tạp chí dược liệu, (2+3), tr 58-62 [10] Hà Thị Bích Ngọc, Trần Thị Huyền Nga, Nguyễn Văn Mùi (2007), “Điều tra hợp chất carotenoid số thực vật Việt Nam”, Tạp chí Khoa học Đ QG N, 23, tr 130-134 [11] L Thị Thanh Ph ng (2017) Nghiên cứu phân lập m t số hợp chất từ phân đoạn dịch chiết Chloroform hoa Đu đủ đực thu hái Quảng Nam-Đà Nẵng, Luận văn Thạc sĩ Hóa Hữu c , Tr ờng Đại học S phạm, Đại học Đà Nẵng 53 [12] Nguyễn Văn R , Vũ Quang Th i (2013), “T ch chiết chymopapain từ nhựa đu đủ xanh (Carica papaya L.) chế thử thành dạng bột để pha ti m” Tạp chí óa học, 50.6, tr 767-771 [13] Đỗ Thị Thảo (2006), Nghiên cứu ác định khả phòng chống ung thư chất hóa học m t số thuốc Việt Nam, Luận n Tiến sĩ Sinh học [14] Trần Thế Tục, Đoàn Thế L (2004), Cây đu đủ kỹ thuật trồng, Nxb Lao động Xã hội, Hà Nội [15] Nguyễn T ờng Vân, Đặng Hồng Vân, Phạm Gia Khơi, Trần Mạnh Bình, Phan Quốc Kinh (1983), “Chiết xuất x c định carpaine alkaloid l Đu đủ”, Tạp chí dược học, số Tiếng Anh [16] Okunola A., Alabi, Muyideen T Haruna, Chinedu P Anokwuru, Tomisin Jegede, Harrison Abia, Victor U Okegbe and Babatunde E Esan (2012), “Comparative studies on antimicrobial properties of extracts of fresh and dried leaves of Carica papaya (L) on clinical bacterial and fungal isolates, Pelagia Research Library”, Advances in Applied Science Research, 3(5), pp 3107-3114 [17] Maisarah A.M., Nurul Amira B., Asmah R and Fauziah O (2013), “Antioxidant analysis of different parts of Carica papaya L.”, International Food Research Journal, 20(3), pp 1043-1048 [18] Ikeyi Adachukwu, Ogbonna O and Eze Faith V (2013), “Phytochemical analysis of paw paw (Carica papaya) leaves”, International Journal of Life Sciences Biotechnology and Pharma Research, Vol 2(3), pp 346-351 [19] Eno AE, Owo OI, Itam EH, Konya RS (2000), “Blood pressure depression by the fruit juice of Carica papaya L in renal and DOCA-induced hypertension in the rat”, Phytother Res, Jun; 14(4):235-9 [20] Adlin Afzan, Noor Rain Abdullah, Siti Zaleha Halim, Badrul Amini Rashid (2012), “Repeated dose 28 days oral toxicity study of Carica papaya L leaf extract in Sprague dawley rats”, Molecules 2012, 17, pp 4326-4342 54 [21] Adeolu Alex, Adedapo and Vivian Eguonor, Orherhe (2013), “Antinociceptive and anti-inflammatory studies of the aqueous leaf extract of Carica papaya in laboratory animals” Asian J.EXP.BIOL.SCI, Vol 4(1), pp 89-96 [22] Moses Alo, Ukpai Agwu Eze, Chukwudi Anyim (2012), “Invitro antimicrobial activities of extracts of magnifera indica, carica papaya and psidium guajava leaves on salmonella typhi isolates”, World J Public Health Sciences, 1(1):1 [23] Antonella Canini, Daniela Alesiani, Giuseppe D’Arcangelo, Pietro Tagliatesta (2007), “Gas chromatography-mass spectrometry analysis of phenolic compounds from Carica papaya L leaf”, Journal of food composition and analysis, Vol 20, pp 584-590 [24] Stephen Chinwendu, Ukpabi Emmanuel O., Chukwu Henry C., Ezikpe Chizaram (2015), Chemical Composition Of Carica Papaya Flower (Paw-Paw), International Journal of Scientific Research and Engineering Studies (IJSRES), Volume 2, Issue [25] Sunday Ahamefula Ezekwe and Paul Chidoka Chikezie (2017), “GC-MS Analysis of Aqueous extract of Unripe fruit of Carica papaya”, Journal of Nutrion & Food Sciences, 7:3, pp 2-5 [26] Satrija F, Nansen P, Bjorn H, Murtini S, He S., (1994), “Effect of papaya latex against Ascaris suum in naturally infected pigs”, J Helminthol Dec, 68(4):343-6 [27] Sheikh Fauziya and R Krishnamurthy (2013), “Papaya (Carica papaya): Source material for anticancer”, CIB Tech Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 2(1), pp 25-34 [28] Aravind G., Debjit Bhowmik, Duraivel S., Harish G (2013), “Traditional and medicinal uses of carica papaya”, Journal of medicinal plants studies, Vol 1, Issue 1, pp 7-15 [29] Ayoola G.A., Coker H.A.B., Adesegun S.A., Adepoju-Bello A.A., Obaweya K., Ezennia E.C., Atangbayila T.O (2008), “Phytochemical screening and antioxidant activities of some selected medicinal plants used for malaria therapy in 55 southwestern Nigeria”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 7(3), pp 1019-1024 [30] Srikanth G.S., Manohar Babu S., Kavitha CH.N., Bhanoji Rao M.E., Vijaykumar N., Pradeep CH (2010), “Studies on in - vitro antioxidant activities of Carica papaya aqueous leaf extract”, Research journal of pharmaceutical, Biological and Chemical sciences, Vol 1, pp 59-65 [31] Krishna K.L., Paridhavi M and Jagruti A Patel (2008), “Review on nutritional, medicinal and pharmacological properties of papaya (Carica papaya Linn.)”, Natural product radiance, Vol 7(4), pp 364-373 [32] K Kayalvizhi, Dr L Cathrine K Sahira Banu (2015), “Phytochemical and antibacterial studies on the leaf extracts of female Carica papaya.linn”, International Journal of PharmTech Research, Vol 8(7), pp 166-170 [33] Marline Nainggolan and Kasmirul (2015), “Cytotoxicity activity of male Carica papaya L flowers on MCF-7 breast cancer cells” Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 7(5), pp 772-775 [34] Thao T T Nguyen, Paul N Shaw, Marie-Odile Parat and Amitha K Hewavitharana (2013), “Anticancer activity of Carica papaya: A review”, Mol.Nutr.Food Res, 57, pp 153-164 [35] T Oduola, T.O Idowu, I.S Bello, F.A Adeniyi, E.O Ogunyemi (2012), “Heamatological respone to intake of unpripe Carica papaya fruit extract and the isolation and characterization of Caricapinoside: A new antisickling agent from the extract”, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, Vol 5(3), pp 7781 [36] Noriko Otsuki, Nam H Dang, Emi Kumagai, Akira Kondo, Satoshi Iwata, Chikao Morimoto (2010), “Aqueous extract of Carica papaya leaves exhibits anti tumor activity and immunomodulatory effects”, Journal of Ethnopharmacology, 127, pp 760 - 767 56 [37] Aysun ozkan, Hamide gubbuk, Esma gunes, Ayse erdogan (2011), “Antioxidant capacity of juice from different papaya (Carica papaya L.) cultivars grown under greenhouse conditions in Turkey”, Turk J Biol, 35(2011), pp 619-625 [38] Giordani R., Cardenas M.L., Moulin-Traffort J., Regli P., (1996), “Fungicidal activity of latex sap from Carica papaya and antifungal effect of D(+)-glucosamine on Candida albicans growth” Mycoses, 39, pp 103-110 [39] John R., Van (1998), “Mechanism of Action of Non Stervidal Anti inflammatory Drug”, The American Jour of Med March 30, Vol 104 (3A), pp 2s3s [40] Kermanshai R, McCarry BE, Rosenfeld J, Summers PS, Weretilnyk EA, Sorger GJ (2001), “Benzyl isothiocyanate is the chief or sole anthelmintic in papaya seed extracts”, Phytochemistry, Jun; 57(3):427-35 [41] Asmah Rahmat, Rozita Rosli, Wan Nor I`zzah Wan Mohd Zain, Susi Endrini and Huzaimah Abdullah Sani (2002), “Antiproliferative Activity of Pure Lycopene Compared to Both Extracted Lycopene and Juices from Watermelon (Citrullus vulgaris) and Papaya (Caricapapaya) on Human Breast and Liver Cancer Cell Lines”, Journal of Medical Sciences, Vol 2, Issue 2, pp 55-58 [42] Rumiyati, Sismindari dan Ariyani (2006), “Effect of protein fraction of Carica papaya L leaves on the expressions of p53 and Bcl-2 in breast cancer cells line”, Majalah Farmasi Indonesia, 17(4), pp 170-176 [43] David S., Seigler, Guido F., Pauli, Adolf Nahrstedt, Rosemary Leen (2002), “Cyanogenic allosides and glucosides from passiflora edulis and carica papaya”, Phytochemistry, Vol 60, pp 873-882 [44] Rahman S., Imran M., Muhammad N., Hassan N., Chisthi A.K., Khan A.F., Sadozai K.S and Khan S.M (2011), “Antibacetial screening of leaves and stem of Carica papaya L.”, Journal of Medicinal Plants Research, Vol 5(20), pp 51675171 [45] Govindachari T.R., Naga rajan K and Viswanathan N (1965), “Carpaine and pseudocarpaine”, Tetrahedron letters, No 24, pp 1907-1916 57 [46] Chung-Shih Tang (1979), “New macrocyclic Δ1–piperideine alkaloids from papaya leaves: dehydrocarpaine I and II”, Phytochemistry, Vol 18, pp 651-652 [47] Ashok Kumar U., Manjunath C., Thaminzhmani T., Ravi Kiran Y., Brahmaiah Y (2012), “A review on immunomodulatory activity plants”, Indian Journal of Novel Drug delivery, 4(2), pp 93-103 [48] Bamidele V, Owoyele, Olubori M, Adebukola, Adeoye A, Funmilayo and Ayodele O, Soladoye (2008), “Anti-inflammatory activities of ethanolic extract of Carica papaya leave”, Inflammopharmacology, 16, pp 168-173 [49] Abrham W.B., (1978), Techniques of Animal and Clinical toxicology, Med Pub, Chicago [50] Vijay Yogiraj (2014), “Carica papaya Linn: An Overview ”, International Journal of Herbal Medicine, Vol 2(5), pp 1-8 58 ... c sở cao chiết ethanol hoa Đu đủ đực thu hái Quảng Nam – Đà Nẵng? ?? Mục tiêu nghiên cứu X c định thành phần hóa học, hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn ethyl acetate xây dựng ti u chuẩn c sở cao. .. HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ĐINH THỊ LINH THẢO NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETATE VÀ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ CỞ CAO CHIẾT ETHANOL CỦA HOA ĐU ĐỦ... TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƢ CỦA CAO CHIẾT ETHYL ACETATE TỪ HOA ĐU ĐỦ ĐỰC Cao chiết n-hexane đem thử hoạt tính gây độc tế bào tr n dòng tế bào ung th phổi (A549), gan (Hep3B) vú (MCF-7) Kết hoạt tính