Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng trong chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NGUYỄN THIỆN THỰC NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU NGOẠI KIỂM SỬ DỤNG TRONG CHƯƠNG TRÌNH NGOẠI KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM ĐỊNH NHĨM MÁU Chun ngành: Cơng Nghệ Sinh Học Mã số : 60420201 LUẬN VĂN THẠC SĨ Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 i CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BACH KHOA – ĐHQG TP.HCM Cán hướng dẫn khoa học: TS TRẦN HỮU TÂM Cán chấm nhận xét 1: TS LƯƠNG THỊ MỸ NGÂN Chữ ký: ……………………………………………………………………………… Cán chấm nhận xét 2: TS HOÀNG MỸ DUNG Chữ ký: ……………………………………………………………………………… Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh ngày 21 tháng năm 2018 Thành phần hội đồng đánh giá Luận văn thạc sĩ gồm: Chủ tịch: PGS.TS NUYỄN ĐỨC LƯỢNG Thư ký: PGS.TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG Phản biện 1: TS LƯƠNG THỊ MỸ NGÂN Phản biện 2: TS HOÀNG MỸ DUNG Ủy viên: TS PHẠM THỊ HUYỀN Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá Luận văn Trưởng khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS.TS Nguyễn Đức Lượng TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC GS.TS Phan Thanh Sơn Nam ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM ii CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: NGUYỄN THIỆN THỰC MSHV: 1570773 Ngày, tháng, năm sinh: 16/02/1968 Nơi sinh: BV Hùng Vương Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Mã số: 60420201 I TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu II.NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: − Nhiệm vụ: nghiên cứu sản xuất mẫu hồng cầu mẫu huyết có độ đồng nhất, độ ổn định phục vụ cơng tác kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu − Nội dung: Xác định số lượng mẫu sản xuất theo quy trình; xác định độ đồng nhất, độ ổn định loại mẫu hồng cầu, mẫu huyết thanh; xác định nhóm máu thời gian bảo quản; xây dựng quy trình sản xuất tổng quát triển khai chương trình ngoại kiểm tra định nhóm máu qui mô pilot III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: ngày 15/01/2018 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: ngày 17/6/2018 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : TS TRẦN HỮU TÂM Tp HCM, ngày 11 tháng năm 2018 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO TS TRẦN HỮU TÂM PGS.TS NGUYỄN THÚY HƯƠNG TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC iii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, xin cảm ơn sâu sắc đến Ban Giám đốc Trung tâm Kiểm Chuẩn Xét nghiệm TP HCM, đặc biệt Thầy TS Trần Hữu Tâm, Giám đốc Trung tâm Thầy quan tâm, dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm để thực nghiên cứu Thầy tạo điều kiện cho tham gia thực nghiên cứu đề tài phòng xét nghiệm Trung tâm với nhóm nghiên cứu Trung tâm Đề tài có ý nghĩa lớn việc nâng cao chất lượng xét nghiệm định nhóm máu sở y tế mà Trung tâm Kiểm chuẩn Xét nghiệm TP HCM đơn vị triển khai thực chương trình ngoại kiểm định nhóm máu Đồng thời, Tơi không quên cảm ơn đến tập thể khoa Sinh phẩm góp nhiều cơng sức, giúp tơi thực thí nghiệm để hồn thành tiến độ nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn q thầy, mơn Cơng nghệ Sinh học, khoa Kỹ thuật Hóa học, trường đại học Bách khoa TP HCM PGS TS Nguyễn Thúy Hương, cô quan tâm, chia nhiều kinh nghiệm, kiến thức, kỹ học tập sống Anh gửi lời cảm ơn vợ tạo điều kiện, động viên anh cố gắng, nỗ lực để hồn thành khóa học Trân trọng NGUYỄN THIỆN THỰC iv TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ Tiếng Việt: Nội dung kết đề tài bao gồm chuyên đề từ việc xác định độ đồng nhất, độ ổn định loại mẫu hồng cầu, mẫu huyết thanh; xác định nhóm máu thời gian bảo quản; xây dựng quy trình sản xuất tổng quát triển khai chương trình pilot ngoại kiểm tra định nhóm máu cho phịng xét nghiệm cở sở y tế Độ đồng mẫu hồng cầu đánh giá qua số tiêu huyết mẫu thử nghiệm Kết hệ số biến thiên (CV) trung bình từ 0,04 - 0,09% Độ ổn định mẫu hồng cầu đánh giá qua số tiêu huyết thời gian bảo quản 30 ngày nhiệt độ - 8oC Kết nhóm máu O tỉ lệ tiêu huyết trung bình 0,75%, nhóm máu A tỉ lệ tiêu huyết trung bình 0,73%, nhóm máu B tỉ lệ tiêu huyết trung bình 0,66%, nhóm máu AB, tỉ lệ tiêu huyết trung bình 0,77% Độ đồng mẫu huyết đánh giá qua nồng độ pha loãng phương pháp bán định lượng kháng thể Kết nhóm máu O tất ống kiểm tra có độ pha lỗng 128; nhóm máu A, ống kiểm tra có độ pha loãng 64128 với tỉ lệ tương ứng 25% 75% Nhóm máu B, ống kiểm tra có độ pha loãng 64-128 với tỉ lệ tương ứng 60% 40% Độ ổn định mẫu huyết đánh giá qua nồng độ pha loãng mà tượng ngưng kết quan sát mức 1+ 30 bảo quản Kết ống kiểm tra có nồng độ thấp gây tượng ngưng kết 1+ với nồng độ pha loãng 16 Trong thời gian bảo quản 30 ngày, mẫu hồng cầu huyết kiểm tra xác định nhóm máu tương ứng kháng huyết chuẩn hồng cầu mẫu Kết tất mẫu có kết trùng với kết đích ban đầu phương pháp kiểm tra (phương pháp lame kính, phương pháp ống nghiệm phương pháp cột ngưng kết) Chúng xây dựng quy trình sản xuất chi tiết gồm giai đoạn: giai đoạn tách thành phần máu (hồng cầu, huyết tương, huyết thanh); giai đoạn tinh sạch, đồng mẫu; giai đoạn phân phối mẫu giai đoạn đóng gói, gửi mẫu Quy v trình đạt tiêu chuẩn để sản xuất mẫu phục vụ cho chương trình ngoại kiểm tra định nhóm máu Từ kết nghiên cứu được, tiến hành triển khai đợt chương trình ngoại kiểm tra định nhóm máu quy mơ pilot cho 41 phòng xét nghiệm tham gia Kết thực định nhóm máu hệ ABO tỉ lệ đạt: đợt 95% (độ xác thực 95,96%); đợt 90% (độ xác thực 99,09%); đợt 92,68% (độ xác thực 99,25%); đợt 100% (độ xác thực 96,92%) Kết thực định nhóm máu hệ Rh (D) tỉ lệ đạt: đợt 97,37%, đợt 92,31%; đợt 92,31%; đợt 100% vi Tiếng Anh The content and results consist of all seminars from the determination of homogeneity and stability of red blood cells (RBCs) and serum samples; Determination of blood types in storage time; The general design of production, and execution of external pilot audit of blood type in hospital The homogeneity of RBCs samples is evaluated by the hemolysis index of replicates The coefficient of variation result was from 0,04 - 0,09% The stability of RBCs samples is evaluated by the hemolysis index in storage time of 30 days in 28oC The average hemolysis rates of type O, A, B and AB blood were 0,75% ; 0,73%; 0,66% and 0,77% The homogeneity of serum samples is evaluated by the diluted concentration and the semi quantitative method of antibody The O type blood had the dilution of 128; A type blood with the dilution 64-128 therefore with 25% and 75% The B type blood with the dilution 64-128 therefore with 60% and 40% The stability of serum samples is evaluated by the dilution factors that the condensation was observed at level 1+ All testing samples have lowest concentration that causing condensation 1+ had 16 times dilution In 30 days of storage time, the blood types were determined from the RBCs and serum samples by standard anti serum and standard RBCs All the result was similar initial testing We founded the detailed protocol for manufacture consists of steps: isolation of all components (RBCs, serum, plasma), samples purification, homogeneity, delivery, package The protocol was examined for external audit of blood type From the results, we execute programs of external audit for 41 laboratories The results from replicates were 95%, 90%, 92,68% and 100% with the reliability were 95,96%, 99,09%, 92,68%, and 96,92% The results of bloodtype determination by Rh (D) was 97,37% , 92,31% , 92,31% and 100% vii LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Nguyễn Thiện Thực, học viên cao học chuyên ngành Công Nghệ Sinh Học, Khoa Kỹ Thuật Hóa Học, Trường Đại Học Bách Khoa Tp HCM Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Trung Tâm Kiểm Chuẩn Xét Nghiệm tơi nhóm nghiên cứu Trung Tâm thực hướng dẫn TS Trần Hữu Tâm Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực Tôi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu NGUYỄN THIỆN THỰC viii MỤC LỤC NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ II TRƯỞNG KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC LỜI CẢM ƠN II LỜI CẢM ƠN III TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ IV Tiếng Việt: iv Tiếng Anh vi LỜI CAM ĐOAN VII MỤC LỤC VIII DANH MỤC BẢNG XIV Tính cấp thiết đề tài 17 Mục tiêu nghiên cứu 19 Nội dung nghiên cứu .19 Ý nghĩa khoa học thực tiễn tính đề tài 19 CHƯƠNG 21 TỔNG QUAN 21 1.1 Hệ nhóm máu ABO 21 1.1.1 Lịch sử phát .21 1.1.2 Đặc điểm hệ nhóm máu ABO 22 1.2 Hệ thống nhóm máu Rhesus (RH) .24 1.3 Các phương pháp xác định nhóm máu .26 1.4 Đảm bảo an toàn truyền máu .27 1.4.1 Các sai sót phịng xét nghiệm 28 1.4.2 Quy định đảm bảo chất lượng xét nghiệm 29 1.4.3 Nội kiểm tra định nhóm máu 31 ix 1.4.4 Chương trình ngoại kiểm tra nhóm máu 31 CHƯƠNG 33 VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 33 2.2 Vật Liệu 33 2.2.1 Thiết bị 33 2.2.2 Dụng cụ 33 2.2.3 Nguyên liệu .34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 2.3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 35 2.3.2 Thu nhận hồng cầu huyết từ máu toàn phần 36 2.3.3 Xác định nhóm máu ABO Rh 36 2.3.4 Phương pháp bán định lượng kháng thể 40 2.3.5 Phương pháp kiểm tra độ tiêu huyết hồng cầu 41 2.3.6 Phương pháp lấy mẫu kiểm tra .42 2.3.7 Kiểm tra độ đồng .42 2.3.8 Kiểm tra độ ổn định .43 2.3.9 Độ nhạy, độ đặc hiệu, độ xác thực 44 2.3.10 Phương pháp thống kê 44 CHƯƠNG 45 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 45 3.1 Số lượng mẫu sản xuất theo quy trình 45 3.1.1 Yêu cầu mẫu cho lần thực ngoại kiểm tra định nhóm máu .45 78 D Phiếu kiểm tra nguyên liệu Trung tâm Kiểm Chuẩn Xét nghiệm TP.HCM 75A Cao Thắng, Phường 3, Quận 3, Thành phố Hồ Chí Minh Tel: 028.38391090 Fax 028.39292890 Web: www.csql.gov.cn Email: kcxntp@csql.vn PHIẾU KIỂM TRA NGUYÊN LIỆU Mẫu ngoại kiểm tra: Định nhóm máu….(BS 01A) Đợt: Năm… 201….… Ngày kiểm tra: ……… STT Tên nguyên liệu ĐVT Quy cách Số Lượng Kết Tiêu chuẩn kiểm tra Đạt Không đạt Người kiểm tra 79 E Phiếu kiểm tra chất lượng Trung tâm Kiểm Chuẩn Xét nghiệm TP.HCM 75A Cao Thắng, Phường 3, Quận 3, Thành phố Hồ Chí Minh Tel: 028.38391090 Fax 028.39292890 Web: www.csql.gov.cn Email: kcxntp@csql.vn PHIẾU KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Giai đoạn kiểm tra: Trong sản xuất…… Đợt: … 1… Ngày kiểm tra: ……… Mẫu huyết ……………………………………… Mã số mẫu Danh mục kiểm tra Dương/âm Người kiểm tra Đánh giá Kết (kí, ghi rõ họ tên) Đạt Chưa Hồng cầu A   Hồng cầu B     Kết luận A, B, O, AB 80 Trung tâm Kiểm Chuẩn Xét nghiệm TP.HCM 75A Cao Thắng, Phường 3, Quận 3, Thành phố Hồ Chí Minh Tel: 028.38391090 Fax 028.39292890 Web: www.csql.gov.cn Email: kcxntp@csql.vn PHIẾU KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG Giai đoạn kiểm tra: Trong sản xuất…… Đợt: … 1… Ngày kiểm tra: ……… Mẫu hồng cầu ……………………………………… Mã số mẫu Danh mục kiểm tra Dương/âm Người kiểm tra Đánh giá Kết (kí, ghi rõ họ tên) Đạt Chưa Hồng cầu A   Hồng cầu B     Kết luận A, B, O, AB 81 F Phiếu kiểm tra đóng gói Trung tâm Kiểm Chuẩn Xét nghiệm TP.HCM 75A Cao Thắng, Phường 3, Quận 3, Thành phố Hồ Chí Minh Tel: 028.38391090 Fax 028.39292890 Web: www.csql.gov.cn Email: kcxntp@csql.vn PHIẾU KIỂM TRA ĐÓNG GÓI Mẫu ngoại kiểm tra: Trong sản xuất…… Đợt: … 1….Năm Ngày kiểm tra đóng gói: ……… Cơng đoạn bỏ mẫu vào hộp Số lượng STT Mẫu Mã số mẫu Ban đầu Còn lại Người đóng gói Người kiểm tra (kí tên) (kí tên) 2 Cơng đoạn đóng hộp STT Người thực Kí tên Cơng đoạn đóng màng co STT Người thực Kí tên Ngày … tháng……năm……… NGƯỜI KIỂM SOÁT ………………………………………… 82 G Kết kiểm tra phòng xét nghiệm đối chiếu – Bệnh viện Truyền máu Huyết học Tp.HCM 83 84 85 86 87 88 89 H Kết triển khai chương trình ngoại kiểm tra định nhóm máu qui mơ pilot Nhóm máu hệ ABO STT (đơn vị tham gia) đợt đợt đợt đợt cộng dồn đánh giá 150 0 150 Không đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 150 0 150 Không đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 10 100 0 100 Không đạt 11 0 150 150 Không đạt 12 0 0 Đạt 13 100 0 100 Không đạt 14 150 0 150 Không đạt 15 0 0 Đạt 16 0 0 Đạt 17 0 0 Đạt 18 0 0 Đạt 19 0 0 Đạt 20 0 0 Đạt 21 0 0 Đạt 22 0 0 Đạt 23 0 0 Đạt 24 0 0 Đạt 25 0 0 Đạt 26 0 0 Đạt 90 27 0 0 Đạt 28 0 150 150 Không đạt 29 0 0 Đạt 30 0 0 Đạt 31 0 0 Đạt 32 0 0 Đạt 33 0 0 Đạt 34 0 0 Đạt 35 0 50 50 Đạt 36 0 0 Đạt 37 150 0 150 Không đạt 38 0 150 150 Không đạt 39 0 0 Đạt 40 0 0 Đạt 0 0 Đạt đạt 32 Không đạt đạt 78,05 Khơng đạt 21,95 41 91 Nhóm máu hệ Rh (D) STT (đơn vị tham gia) đợt đợt đợt đợt cộng dồn đánh giá 150 0 150 Không đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 150 0 150 Không đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 0 0 Đạt 10 150 0 150 Không đạt 11 0 150 150 Không đạt 12 0 0 Đạt 13 0 0 Đạt 14 150 0 150 Không đạt 15 0 0 Đạt 16 0 0 Đạt 17 0 0 Đạt 18 0 0 Đạt 19 0 0 Đạt 20 0 0 Đạt 21 0 0 Đạt 22 0 0 Đạt 24 0 0 Đạt 25 0 0 Đạt 26 0 0 Đạt 27 0 0 Đạt 23 92 28 0 150 150 Không đạt 29 0 0 Đạt 30 0 0 Đạt 31 0 0 Đạt 32 0 0 Đạt 33 0 0 Đạt 34 0 0 Đạt 35 0 0 Đạt 36 0 0 Đạt 38 0 150 150 Không đạt 39 0 0 Đạt 40 0 0 Đạt 0 0 Đạt đạt 32 không đạt đạt 82,05 không đạt 17,95 37 41 ... ĐỀ TÀI: Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu II.NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: − Nhiệm vụ: nghiên cứu sản xuất mẫu hồng cầu mẫu huyết... ngoại kiểm sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu? ?? là: Kiểm tra lực giúp nâng cao chất lượng, khả xét nghiệm phòng xét nghiệm Nâng cao chất lượng phòng xét nghiệm, ... cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm tra phục vụ cho công tác kiểm tra chất lượng xét nghiệm định nhóm máu vơ cấp thiết để đảm bảo 19 chất truyền máu cở sở y tế Vì vậy, việc ? ?Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại