Nghiên cứu sản xuất mẫu huyết thanh chuẩn HBsAg sử dụng trong kiểm tra chất lượng xét nghiệm

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan virus B (HBV), bệnh diễn biến thầm lặng với triệu chứng mơ hồ để lại biến chứng nặng nề xơ gan, ung thư gan Theo Tổ chức Y tế giới (WHO) có khoảng tỷ người bị lây nhiễm HBV khoảng 400 triệu người bị nhiễm HBV mãn tính Ước tính năm có thêm từ 10-30 triệu ca nhiễm HBV có khoảng triệu người chết năm bệnh viêm gan B biến chứng Việt Nam nằm vùng lưu hành cao, tỷ lệ viêm gan B quần thể từ 10-15% đặc biệt có vùng lên đến 20% [1, 2] Được phát Blumberg vào năm 1965, kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B sử dụng dấu ấn nhiễm virus viêm gan B [3] Kháng nguyên phát phương pháp định tính, định lượng Xét nghiệm định tính định lượng HBV thực rộng rãi phòng xét nghiệm từ công lập đến tư nhân, với trang thiết bị máy móc hóa chất cung cấp đa dạng Tuy nhiên độ xác độ tin cậy kết xét nghiệm nói chung xét nghiệm HBV nói riêng vấn đề cần quan tâm Để đảm bảo vấn đề chất lượng xét nghiệm nói chung xét nghiệm HBV nói riêng, phòng xét nghiệm bắt buộc phải xây dựng cho quy trình kiểm soát chất lượng bao gồm nội kiểm tra chất lượng ngoại kiểm tra chất lượng [4] Nội kiểm tra chất lượng quy trình cán phòng xét nghiệm thực để giám sát liên tục nhanh chóng quy trình xét nghiệm Việc tiến hành thường quy hàng ngày, việc giám sát thường sử dụng dùng biểu đồ Levey-Jennings Thực tốt nội kiểm tra đánh giá chất lượng giúp phòng xét nghiệm có kết xét nghiệm xác Chương trình đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm từ bên giúp cho phòng thí nghiệm theo dõi chất lượng cách có hệ thống mức độ Quốc gia Giúp cho nhà quản lý biết thực trạng hệ thống có biện pháp hỗ trợ kịp thời Ngoài tham gia chương trình giúp cho phòng thí nghiệm phát lỗi thông thường, hạn chế sai sót khâu trình xét nghiệm, nâng cao chất lượng xét nghiệm Thông qua chương trình, phòng thí nghiệm tham gia tạo thành mạng lưới để trao đổi thông tin cập nhật thông tin vấn đề liên quan đến công tác xét nghiệm (cập nhật sinh phẩm, hướng dẫn, quy định ) Bên cạnh thông qua báo cáo tổng kết cho vòng chương trình giúp Bộ y tế xác định mức độ tin cậy công tác xét nghiệm phòng thí nghiệm từ có sách phát triển phù hợp [5] Các chương trình nội kiểm ngoại kiểm triển khai nhiều quốc gia giới với đơn vị cung cấp có uy tín cao RCPA (Úc), CLIA (Mỹ), BLQS (Thái Lan)… với đầy đủ chương trình ngoại kiểm tra chất lượng, đáp ứng đầy đủ nhu cầu phòng xét nghiệm Trong điều kiện Việt Nam, chương trình ngoại kiểm bước triển khai song bị hạn chế nhiều yếu tố Một yếu tố mẫu chuẩn, phải mua hoàn toàn nước nên giá thành cao Chính vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu sản xuất mẫu huyết chuẩn HBsAg sử dụng kiểm tra chất lượng xét nghiệm” với mục tiêu: Nghiên cứu sản xuất mẫu huyết chuẩn xét nghiệm HBsAg Đánh giá chất lượng mẫu huyết chuẩn sản xuất nhằm ứng dụng kiểm tra chất lượng xét nghiệm Chương TỔNG QUAN 1.1 Virus viêm gan B 1.1.1 Một số đặc điểm sinh học HBV HBV thuộc họ Hepadnaviridae, họ gây viêm gan cho nhiều loài động vật HBV virus DNA nhỏ với đặc điểm siêu cấu trúc, phân tử, kháng nguyên sinh học độc đáo, khác biệt với họ virus biết Các đặc điểm sinh học đáng ý tính hướng quan (tropism) bật tế bào gan có khuynh hướng gây nhiễm virus tồn (tình trạng người mang mạn tính) [6] HBV virus bền vững, sống gây nhiễm trùng vòng tháng điều kiện nhiệt độ phòng [7] 1.1.2 Hình thái học cấu trúc HBV  Hình thái học hạt virus hoàn chỉnh HBV có kiểu hạt máu người nhiễm virus Virus hoàn chỉnh (virion, hạt Dane) có hình cầu, đường kính 42-45nm; hạt cầu dạng sợi nhỏ có đường kính khoảng 22nm chứa protein lipit vỏ HBsAg [6] Hình 1.1: Các dạng HBV huyết kính hiển vi điện tử Nguồn: http://web.uct.ac.za/depts/mmi/stannard/hepb.html  Cấu trúc HBV virion [6] Dùng phương pháp nhuộm âm bản, virion hấp phụ vào rây kính hiển vi điện tử cấu trúc hai vỏ virion rõ Hình 1.2: Cấu trúc HBV virion Nguồn: www.yanengbio.com/en/Product_view.asp?cp_id=72 - Vỏ protein bên màng bao kích thước 7nm, tạo thành kháng nguyên bề mặt HBsAg, glycoprotein, lipid Các chi tiết cấu trúc bề mặt núm gai nhiều virus có màng bao khác không thấy có HBV - Bên hạt lõi hay gọi capsit có đường kính 28-34nm Vỏ bao gói HBV DNA, có thành phần kháng nguyên HBcAg số enzyme quan trọng polymerase, protein kinase… 1.1.3 Thành phần cấu trúc kháng nguyên  Hạt Dane: Huyết người bị nhiễm trùng chứa số lượng hạt kích thước khoảng 42nm Đó virus nguyên vẹn  có khả gây nhiễm [7] HBsAg: Sự hữu HBsAg chứng nhiễm HBV, xuất trước chứng sinh hóa bệnh gan [8] Huyết người mang virus nồng độ cao chứa lượng lớn hạt không gây nhiễm protein HBs dư thừa (HBsAg) Đó hạt hình cầu hình sợi Các hạt hình cầu có đường kính 17-25nm, chiếm đa số; chúng có dạng túi nhỏ với thành dày độ 4nm đường kính bên từ 1015nm Các hạt hình sợi (hoặc hình ống) hơn, đường kính độ 20nm có chiều dài thay đổi Huyết người mang HBV với nồng độ virus huyết thấp thường hạt cầu HBs sợi HBs Hai cấu trúc  virus phụ không chứa HBV DNA không gây nhiễm [6] HBcAg (các hạt lõi gan): Các hạt lõi HBV trống vỏ thường thấy nhân tế bào gan nơi chúng tổng hợp dự trữ (một số hạt lõi tổng hợp bào tương) Có hai loại hạt lõi: hạt  lõi trống không chứa DNA hạt lõi đầy có chứa DNA[6] HBeAg: Kháng nguyên đại diện cho dạng tiết HBcAg xuất trình ủ bệnh, giai đoạn tiền triệu nhiễm trùng cấp Xuất sau HBsAg 2-4 tuần, xuất kháng nguyên huyết lây nhiễm Sự tồn dai dẳng HBeAg huyết sau tháng dẫn đến tăng khả viêm gan B mạn tính[6, 8] 1.1.4 Dịch tễ học HBV Theo WHO (1997), có khoảng tỷ người nhiễm HBV giới, 350 triệu người mang HBV mạn, 60 triệu người chết ung thư tế bào gan 45 triệu người chết xơ gan Người ta ước tính giới có 50 triệu người nhiễm HBV xảy hàng năm [9] Trên đồ dịch tễ Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), tỷ lệ dân số Việt Nam mang kháng nguyên HBsAg (chứng tỏ nhiễm HBV) 8%, xếp vào hàng quốc gia có tỷ lệ nhiễm HBV cao giới, tỷ lệ có HBsAg cộng đồng nói chung vào khoảng 10-20% (Hoàng Thủy Nguyên, Nguyễn Thu Vân, 1992; Phạm Song cs, 1996) cho thấy nước ta nước có dịch HBV địa phương cao [1, 2] Căn vào tần suất nhiễm HBV, tỷ lệ nhiễm virus toàn bộ, độ tuổi nhiễm virus cách truyền bệnh chủ yếu, người ta chia thành khu vực với mức độ lưu hành rõ rệt: vùng nội dịch lưu hành cao, vùng nội dịch lưu hành trung bình vùng nội dịch lưu hành thấp [9] - Vùng nội dịch lưu hành cao (high endemic area) Trong vùng dịch lưu hành cao có ≥ 8% người nhiễm HBV mạn huyết đa số người lớn (> 70%) chứng tỏ có nhiễm virus trước Những vùng gồm đa số nước châu Á, có Việt Nam (trừ Nhật Ấn Độ), châu Phi, Trung Đông, vùng châu thổ Amazon Nam Mỹ… phơi nhiễm HBV vùng dịch lưu hành cao đạt đến 100% [9] - Vùng nội dịch lưu hành trung bình (intermediate endemic area) Trong vùng dịch lưu hành trung bình, tần suất người nhiễm HBV mạn từ 2-7% 20-50% người lớn nhiễm HBV Những vùng gồm Ấn Độ, phần Trung Đông, miền Tây Á, Nhật, Đông Nam châu Âu hầu hết miền Trung Nam Mỹ Trong vùng này, nguy sống trung bình người nhiễm HBV ước tính từ 20-60% [9] - Vùng nội dịch lưu hành thấp (low endemic area) Tần suất người mang HBV mạn 2% tần suất người lớn nhiễm virus 20% Những vùng bao gồm Mỹ, Canada, Tây Âu, Úc, New Zealand Tần suất HBsAg từ 0,1% Bắc Âu 1% đến 5% Nam châu Âu Ở Mỹ, có từ đến 1,25 triệu người mang HBV mạn tính, nhiều người số họ di cư từ vùng có tần suất cao trung bình [6] Hình 1.3: Sự phân bố HBV giới Nguồn: http://uscis.gov/graphics/shared/aboutus/statistics/yearbook/2002.pdf 1.1.5 Đặc điểm sinh bệnh học biện pháp phòng ngừa – điều trị HBV 1.1.5.1 Con đường lây nhiễm  Lây truyền qua đường tiêu hoá tiếp xúc với máu, vật phẩm máu (dịch nhiễm virus) Đây đường lây nhiễm thường gặp nhất, vùng dịch lưu hành cao thấp Việc sàng lọc máu chế phẩm máu để loại HBsAg không dùng dung môi huyết cho vacxin loại bỏ nguyên nhân nước phát triển Tuy nhiên, bệnh nhân nhận yếu tố đông máu đậm đặc nguy nhiễm virus HBsAg mức độ thấp, không phát được[6]  Lây truyền qua đường sinh dục Đây đường truyền nhiễm HBV chứng minh thường gặp nước phát triển nhóm đồng tính luyến Ở đường lây nhiễm nguy nhiễm HBV thường tỷ lệ thuận với số lượng bạn tình với tình trạng nhiễm giang mai trước Sự kết hợp chặt chẽ với giang mai tính chất gây loét giang mai, giúp nhiễm HBV hiệu [6]  Lây truyền từ mẹ sang (truyền nhiễm chu sinh) HBV lây truyền chủ yếu lúc sinh lúc lây qua thai Mức độ nặng tiên lượng tình trạng lây nhiễm tuỳ thuộc vào hai yếu tố: mức độ nhân đôi siêu vi thời gian bị nhiễm HBV cấp tính mẹ [6]  Các đường lây truyền khác Ngoài đường lây nhiễm trên, HBV lây nhiễm qua nước bọt, tinh dịch hay lây nhiễm qua da có tổn thương niêm mạc vùng tiếp xúc với HBV[6] 1.1.5.2 Chẩn đoán viêm gan B  Chẩn đoán viêm virus B cấp Các triệu chứng lâm sàng viêm gan B thường mơ hồ, không đặc hiệu mệt mỏi, chán ăn, đau cơ… dễ nhầm với bệnh lý khác Tuy nhiên có số điểm cần ý chẩn đoán: - Có tiền sử truyền máu hay chế phẩm máu, tiêm chích, quan hệ tình dục không an toàn khoảng từ tuần đến tháng [6] - Lâm sàng: có triệu chứng chán ăn, mệt mỏi, vàng da, tiểu sẫm màu, đau tức vùng gan, nôn, buồn nôn, phân bạc màu [6, 8] - Thể vàng da kéo dài: Có triệu chứng lâm sàng giống thể điển hình, kèm theo có ngứa Tình trạng vàng da thường kéo dài tuần, có 3-4 tháng [6, 8] - Thể viêm gan tối cấp: Người bệnh có biểu suy gan cấp kèm theo biểu bệnh lý não gan - Cận lâm sàng: + AST, ALT tăng cao (thường tăng lần so với bình thường) + Bilirubin tăng cao, chủ yếu Bilirubin trực tiếp + HBsAg (+) (-) anti-HBc IgM (+)  Chẩn đoán viêm virus B mạn - HBsAg (+) > tháng HBsAg (+) Anti HBc IgG (+) - AST, ALT tăng đợt liên tục tháng - Có chứng tổn thương mô bệnh học tiến triển, xơ gan (được xác định sinh thiết gan đo độ đàn hồi gan, số APRI) mà không nguyên khác 1.1.5.3 Chỉ định điều trị Chỉ định điều trị thuốc kháng virus khi: - ALT tăng lần giá trị bình thường có chứng xác nhận có xơ hóa gan tiến triển/xơ gan ALT mức - HBV-DNA ≥ 105 copies/ml (20.000 IU/ml) HBeAg (+) HBVDNA ≥ 104 copies/ml (2.000 IU/ml) HBeAg (-) 1.1.5.4 Theo dõi điều trị Cần tư vấn cho bệnh nhân nguy hiểm HBV giai đoạn điều trị nhằm đạt kết điều trị tốt Một số điểm cần lưu ý: - Tuân thủ điều trị: cần tư vấn cho bệnh nhân lợi ích việc tuân thủ điều trị biện pháp hỗ trợ tuân thủ điều trị - Tháng sau bắt đầu điều trị: theo dõi AST, ALT, creatinine máu 10 - Sau 3-6 tháng trình điều trị: theo dõi AST, ALT, creatinine máu, HBeAg, Anti-HBe, HBV-DNA, định lượng HBsAg - Nếu điều trị IFN Peg IFN: theo dõi công thức máu, glucose máu, ure máu, creatinin máu, chức tuyến giáp để phát tác dụng không mong muốn thuốc - Sau ngưng điều trị: Xét nghiệm sau - tháng: AST, ALT, HBsAg, HBeAg, anti-HBe, HBV DNA để đánh giá tái phát [6, 8] 1.1.5.5 Biện pháp phòng ngừa  Miễn dịch thụ động Globulin miễn dịch (Ig – Immunoglobulin) có kháng thể kháng HBs với hiệu giá cao (Hepatitis B immune globuline, HBIG) có khả gây miễn dịch thụ động giúp ngăn chặn viêm nhiễm cấp tính mạn tính sử dụng HBIG vòng ngày sau phơi nhiễm HBIG có khả bảo vệ bệnh nhân khỏi tình trạng tái nhiễm HBV sau trình cấy ghép gan HBIG định cho trẻ sơ sinh bà mẹ mang HBsAg dương tính [8]  Miễn dịch chủ động: Miễn dịch chủ động có khả tạo miễn dịch cao Vaccine VGB sản xuất từ huyết tương người mang HBsAg dương tính phương pháp tái tổ hợp sử dụng động vật có vú nấm men mang plasmid có chứa HBs chứa gen preS1 preS2 Gần đây, nghiên cứu dùng kết hợp tiêm chủng chủ động thụ động cho thấy hiệu lên tới 90% HBIG với vacxin khuyến cáo dùng tất trường hợp đứa trẻ bà mẹ mang HBsAg (+) [6] 1.1.5.6 Các xét nghiệm chẩn đoán HBV 11 Boyd A Maylin S, Martinot-Peignoux M, Delaugerre C (2013), "Quantification of hepatitis B e antigen between Elecsys HBeAg and Architect HBeAg assays among patients infected with hepatitis B virus", J Clin Virol, 56(4), tr 306-311 12 Atlas Link INC (2007), Introduction for use of Hepatitis B virus e antigen ELISA Kit, Atlas Link INC 13 Perry K (2009) Barlow K, "", , Report PER07003 (2009), Evaluation of the Roche HBsAg II assay, Microbiological Diagnostics Assessment Service 14 Jennifer Sturgis BS and George L Kumar PhD J Paul Robinson PhD ( | ), "Immunofluorescence" 15 Jaroszewicz J Wursthorn K, Zacher BJ, Darnedde M (2011), "Correlation between the Elecsys HBsAg II assay and the Architect assay for the quantification of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in the serum", J Clin Virol, 50(4), tr 292-306 16 WHO (2010), "Screening donated blood for transfusion- transmissible infection: Recommendations", World Health Organization, tr 25-29 17 WHO ( 2014), "Hepatitis B", Fact sheet N0 204 18 WHO (2014), "Blood safety and availability", Fact sheet No279 19 Thompson A Chan HL, Martinot-Peignoux M, et al (2011), "l Hepatitis B surface antigen quantification: why and how to use it in 2011 - a core group report", J Hepatol 55, tr 1121-1131 20 Wong VW Chan HL, Chim AM, et al (2010), "Serum HBsAg quantification to predict response to peginterferon therapy of e antigen positive chronic hepatitis B", Aliment Pharmacol Ther, 32, tr 1323-1331 21 Nguyễn Trần Hiển Đặng Đức Anh (2012), Thực hành quản lý phòng thí nghiệm, Nhà xuất Y học 22 Nguyễn Trần Hiển Đặng Đức Anh (2012), Thực hành đảm bảo chất lượng phòng thí nghiệm vi sinh, Nhà xuất y học 23 CLSI-USA(2004) (2004), "GP26-A3 Quality Management System: A Model for Laboratory Services; Approved Guideline - Third Edition", Clinical and Laboratory Standards Institute Guidelines 24 CLSI-USA(2011) (2011), "GP26-A4 Quality Management System: A Model for Laboratory Services; Approved Guideline - Fourth Edition ", Clinical and Laboratory Standards Institute Guidelines, 31 25 WHO/CLSI/CDC(2011) (2011), "WHO Laboratory quality management system: handbook", WHO Guidelines 26 C.R (2000) Jerry Js Snell M.F (2000), "Quality assuarance Principles and practice in the microbiology Laboratory", Jerry Js Snell M.F, Colin Robert, 46 27 D Burnett (2006), "ISO 15189:2003 Quality management, evaluation and continual improvement", Clin Chem Lab Med, 44(6), tr 733-739 28 Trần Hữu Tâm (2015), "Nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm", Nhà xuất Y dược TP Hồ Chí Minh 29 Westgard JO (2010), Basic QC Practices truy cập ngày, trang 30 Trường đại học Y Hà Nội (2003), "Thực tập Hóa Sinh", Nhà xuất Y học 31 Nguyễn Thanh Thủy, Trần Diệu Linh, Lê Lan Phương cộng (2013), "Tài liệu đào tạo quản lý chất lượng phòng thí nghiệm", Viện vệ sinh dịch tễ trung ương 32 Deom A., El Aouad R et al (1999), "WHO Requirements and guidance for external quality assessment schemes for health laboratories", WHO Technical Guidelines 33 WHO (2008), FINAL REPORT HBV Serology External Quality Assessment Scheme, HBVC4310, chủ biên, WHO 34 BỘ Y TẾ (2013), "Phụ lục 6: Đảm bảo chất lượng xét nghiệm máu", Thông tư số 26/2013/TT-BYT 35 Hancock J.S, Taylor R.N, Johnson C.A cộng (1993), "Quality of laboratory performance in testing for human immunodeficiency virus type antibody Identification of variables associated with laboratory performance", Arch Pathol Lab Med, 117(11), tr 11481155 36 WHO/UNAIDS (1996), "Guidelines for Organizing National External Quality Assessment Schemes for HIV Serology Testing", WHO/UNAIDS Guidelines 37 A.S Benzaken, Bazzo M.L., et al (2014), "External quality assurance with dried tube specimens (DTS) for point-of-care syphilis and HIV tests: experience in an indigenous populations screening programme in the Brazilian Amazon", Sex Transm Infect, 90, tr 14-18 38 J.J Snell, Supran E.M., and Tamashiro H (1992), "WHO international quality assessment scheme for HIV antibody testing: results from the second distribution of sera", Bull World Health Organ, 70, tr 605-613 39 J.S Wang, Kee M.K., Choi B.S., Kim C.W., and Kim S.S (2011), "Evaluation of external quality assessment results for HIV testing laboratories in Korea using current analytical methods", Clin Chim Acta, 412, tr 1127-1132 40 A.F Goguel (1991), "HBV and HIV serological markers: the National External Quality Assessment Scheme in France", Ann Ist Super Sanita, 27, tr 511-515 41 WHO/CLSI/CDC (2011), "WHO Laboratory quality management system: handbook", WHO Guidelines 42 J Snell, D Brown London Robert (2000), "Quality Assurance: Principle and Practice in the Microbiology Laboratory", Public Health Laboratory Service, 46, tr 77-90 43 Bộ KH&CN TCVN ISO/IEC 17043:2011 (2011), "Đánh giá phù hợp- Yêu cầu chung thử nghiệm thành thạo", Bộ KH&CN 44 Bộ KH&CN TCVN8245:2009 (2009), "Mẫu chuẩn - nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận", Bộ KH&CN 45 M GOVENDER, M BUBB J.D CONRADIE (1985), "RAPID PURIFICATION OF HBsAg FROM HUMAN PLASMA", Journal of Virological Methods, II, tr 225-230 46 Phan Văn Chi, Nguyễn Văn Cường, Đái Duy Ban cộng (1988), "Nghiên cứu tách chiết làm kháng thể chống kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B bẳng phương pháp sắc ký trao đổi ion DEAE Cellulose", Y học Việt Nam, 142, tr 9-11 47 Monica Einarsson , Lennart Kaplan, Hakan Pertofi cộng (1981), "A Two-Step Procedwe for the Purification of Hepatitis B Surface Antigen (HBsAg)", Vox Sang, 4, tr 91-97 48 SYLVIA E REE, PS GAR DNER, I I S SNELL cộng (1985), "United Kingdom scheme for external quality assessment in virology Part I General method of operation", Clin Pathol, 38, tr 534-541 49 Roche (2015), Hepatitis B surface antigen quantitative determination, Roche, chủ biên 50 Roche (2015), Nguyên lý xét nghiệm HBsAg II chủ biên 51 Joan C May Louis Rey (2010), "Freeze Drying/Lyophilizationof Pharmaceutical andBiological Products", DRUGS AND THE PHARMACEUTICAL SCIENCES Third EdiTion 206 52 BỘ Y TẾ (2008), "XÁC SUẤT THỐNG KÊ", Nhà xuất Giáo dục 53 Nguyễn Thị Hồng Hạnh (2008), "Nghiên cứu sản xuất kháng nguyên virut dại tinh chế từ nuôi tế bào VERO", Đề tài cấp BỘ Y TẾ 54 Hoàng Thị Thanh Hà (2014), "Xây dựng quy trình sản xuất mẫu ngoại kiểm đánh giá chất lượng phòng thí nghiệm huyết học HIV", Đại học quốc gia Hà Nội 55 Trần Hữu Tâm (2011), "Nghiên cứu sản xuất mẫu ngoại kiểm sử dụng chương trình ngoại kiểm tra chất lượng xét nghiệm PCR HBV HCV" 56 WHO/CLSI/CDC (2008), "External quality assessment schemes for HIV, HBsAg and HCV serology", WHO Guidelines 57 Mee-Kyung Kee Jin-Sook Wang, Byeong-Sun Choi , Chan-Wha Kim, Hyon-Suk Kim, and And Sung Soon Kim (2012), "Improvement in the performance of external quality assessment in Korean HIV clinical laboratories using unrecalcifi ed human plasma", Clin Leadersh Manag Rev, 18 (6), tr 335-341 58 López-Quesada Hernández-Velázquez, Ceballo-Cámara , Cabrera- Herrera (2015), "Tobacco seeds as efficient production platform for a biologically active anti-HBsAg monoclonal antibody", Transgenic Res, 24, tr 897-909 59 Hayden Shah , Fischer , Rao , Howard (2015), "Biochemical and biophysical characterization of maize-derived HBsAg for the development of an oral vaccine", Arch Biochem Biophys, 41, tr 588 60 Tang TY Piao YF, Niu JQ, Wang F (2004 ), "Construction of eukaryotic expression plasmids of hepatitis B surface antigen and helper T lymphocyte epitope", Hepatobiliary Pancreat Dis Int, 3(219-222) 61 TCVN8245:2009 (2009), "Mẫu chuẩn: Nguyên tắc chung nguyên tắc thống kê chứng nhận", TCVN 62 Inc Beckman Coulter, Brea, CA, USA (2015), Quantitative Detection of Hepatitis B Virus (HBV) on the VERIS MDx System, Inc Beckman Coulter, Brea, CA, USA, chủ biên 63 PhD Robert Christenson, Kevin Maggert, MT (ASCP), R.Mark Ruiz, Andrea Lehr, Heather Rebuck (2015), "Performance Evaluation of the Beckman Coulter VERIS Hepatitis B Assay on The VERIS MDX System", University of Maryland Medical Center 64 JOHN VNEK AND ALFRED M PRINCE (1976), "Large-Scale Purification of Hepatitis B Surface Antigen", JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, 3, tr 626-631 65 Abbott Laboratories (2008), ARCHITECT HBsAg, Abbott Diagnostics, chủ biên BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN QUANG HIẾU NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU HUYẾT THANH CHUẨN HBsAg SỬ DỤNG TRONG KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG XÉT NGHIỆM Chuyên ngành : Hóa sinh Mã số : 60720106 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS TẠ THÀNH VĂN PGS.TS ĐẶNG THỊ NGỌC DUNG HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung, người tận tình hướng dẫn, nâng đỡ truyền đạt kiến thức kinh nghiệm đồng hành suốt trình học tập Thầy Cô tận tâm hướng dẫn, góp ý, sửa chữa động viên hoàn thành tốt luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Đốc lãnh đạo Khoa Hóa sinh Bệnh viện Thanh Nhàn giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tham gia khóa học Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy, Cô cán bộ môn Hóa sinh trường Đại học Y Hà Nội tận tình dạy dỗ, truyền đạt cho kiến thức chuyên ngành kinh nghiệm quý giá Tôi xin chân thành cảm ơn cán Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng xét nghiệm Y học trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ trang thiết bị kinh nghiệm thực tế thực luận văn Xin cảm ơn bạn đồng nghiệp khoa Hóa sinh bệnh viện Thanh Nhàn, người động viên, giúp đỡ chia sẻ công việc cho thời gian học tập trường Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, đến Bố Mẹ hai bên vợ con, người thân yêu gia đình Gia đình điểm tựa nguồn động viên thiếu suốt đời Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2016 Nguyễn Quang Hiếu LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Quang Hiếu, học viên lớp Cao học khóa 23 Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung Công trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hoàn toàn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2016 Học viên Nguyễn Quang Hiếu BẢNG DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt ARN CLSI CRM CV DNA EIA ELISA EQA EQAS FHI HBV HIV HTQLCL IFN IQC ISO IUPAC OIML PegIFN PT QA QC QM RIA Nghĩa tiếng Anh Acid Ribonucleic Clinical and Laboratory Standards Institute Nghĩa tiếng Việt Viện tiêu chuẩn phòng thí nghiệm lâm sàng Vật liệu tham khảo chứng Certified Reference Materials nhận Hệ số biến thiên Coefficient of Variation Acid Desoxyribonucleic Kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch Enzym immuno Assay Enzyme-Linked Kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch Immunosorbent Assay liên kết enzym Đánh giá chất lượng từ bên External Quality Assessment External Quality Assessment Chương trình ngoại kiểm Scheme Tổ chức Sức khoẻ gia đình Family Health International Hepatitis B virus Virus viêm gan B Virus gây suy giảm miễn dịch Human Immunodeficiency Virus người Hệ thống quản lý chất lượng Interferon Nội kiểm tra chất lượng xét Internal Quality Control nghiệm International Organization Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế for Standardization Liên minh quốc tế hóa học International Union of Pure thúy hóa học ứng and Applied Chemistry dụng International Organization of Cơ quan đo lường hợp pháp Legal Metrology quốc tế PegInterferon Proficiency testing Thử nghiệm thành thạo Quality Assurance Đảm bảo chất lượng Quality Control Kiểm soát chất lượng Quản lý chất lượng Quality management Radioimmunoassay Miễn dịch phóng xạ SD SE TCVN WHO VGB Standard Deviation Standard Error World Health Organization Độ lệch chuẩn Sai số chuẩn Tiêu chuẩn Việt Nam Tổ chức y tế giới Viêm gan virus B MỤC LỤC PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH 3,4,7,16,17,54,58 1,2,5,6,8-15,18-53,55-57,59- ... hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu sản xuất mẫu huyết chuẩn HBsAg sử dụng kiểm tra chất lượng xét nghiệm với mục tiêu: Nghiên cứu sản xuất mẫu huyết chuẩn xét nghiệm HBsAg Đánh giá chất lượng mẫu. .. Nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm 1.2.6.1 Khái niệm nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm Nội kiểm tra chất lượng xét nghiệm (IQC – Internal Quality Control), gọi tắt nội kiểm tra, công cụ kiểm tra. .. phương pháp sản xuất mẫu ngoại kiểm HBV Hiện giới có nhiều phương pháp sản xuất mẫu ngoại kiểm HBV khác mẫu chuẩn sản xuất theo phương pháp mẫu huyết tương khô, mẫu huyết thông thường, mẫu huyết tương